הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל של אנטרוקוליטיס מואצת בפירוקסיקאם בעכברי הדחיפה אינטרלוקין-10 לצורך חקר שינויים מטבוליים הנגרמים מדלקת

74 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/71448

⸱

11 באוגוסט 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה עושה שימוש בפירוקסיקאם כדי להאיץ את התפתחות הקוליטיס במודל העכבר הנוקאאוט אינטרלוקין (IL-10). הפרוטוקול מבטיח סנכרון של קוליטיס, מה שמוביל לתוצאות קפדניות וניתנות לשחזור, ללא תלות במין, במאמץ רקע או בתנאי ויווריום. הוא משמש מודל שימושי לחקר שינויים מטבוליים במהלך דלקת במעי.

תקציר

מחלת מעי דלקתי (IBD) היא הפרעה דלקתית כרונית במערכת העיכול המשפיעה על למעלה מ-10 מיליון אנשים ברחבי העולם. בעוד שמחקרים נרחבים התמקדו במנגנונים ובהשלכות האימונולוגיות שמאחורי מחלת המעי הדלקתי, פחות ידוע על האופן שבו דלקת רירית תורמת לדיסרגולציה מטבולית, כולל ירידה במשקל וירידה בתיאבון. כאן, המחברים מתארים מודל עכבר של אנטרוקוליטיס מואצת בפירוקסיקאם בעכברים מסוג IL-10-KO, במטרה לחקור דיסרגולציה מטבולית הנגרמת מדלקת. עכברי IL-10-KO ידועים כמפתחים דלקת מעיים ספונטנית ויש להם רגישות מוגברת לדלקת מעיים הנגרמת על ידי זיהומים או תרופות. עם זאת, תנאי ויווריום ורקע מתח דווחו כמבלבלים בהתפתחות הקוליטיס במודל זה. פירוקסיקאם, תרופה אנטי-דלקתית לא-סטרואידית (NSAID), הוכחה כמפעילה או מאיצה אנטרוקוליטיס במודלים של בעלי חיים על ידי הגברת החשיפה לרירית לחיידקים לומינליים. בפרוטוקול זה, עכברי IL-10-KO הזכרים והנקבות קיבלו תזונה מועשרת בפירוקסיקאם במקום דיאטת אוכל רגילה. צריכת המזון ומשקל הגוף נמדדו מדי יום כדי לשקף שינויים מטבוליים בכל הגוף, יחד עם תופעות קליניות של דלקת מעיים כמו שלשול ודימום רקטלי. הפרוטוקול יעיל וניתן לשחזור, וגורם לדלקת מעיים בו-זמנית במספר עכברים, ומאפשר הערכה של חוסר ויסות מטבולי במודל מחלת מעי דלקתית. מחקרים נוספים המשתמשים בפרוטוקול זה עשויים לחקור את השפעות אנטרוקוליטיס על רכיבים אחרים של חוסר ויסות מטבולית, כגון הוצאת אנרגיה והרכב הגוף, ולחשוף קשרים רחבים יותר בין מחלת מעי דלקתית למטבוליזם של המארח.

מבוא

מחלת קרוהן וקוליטיס כיבית, הידועים יחד כמחלת מעי דלקתית (IBD), הם מחלות אוטואימוניות כרוניות במערכת העיכול המתאפיינות בדלקת רירית עם תופעות קליניות הכוללות כאבי בטן, ירידה במשקל, המטוכזיה ושלשול. מחלת מעי משפיעה על מיליוני אנשים ברחבי העולם, כאשר השכיחות הגבוהה ביותר היא בחברות מערביות1. בארה"ב, מעריכים כי מעל 3 מיליון אנשים מושפעים 2,3, עם עלייה בשכיחות ובשכיחות, במיוחד בקרב ילדים ובני נוער 4.5.

המנגנונים המדויקים שמאחורי פתוגנזה של IBD עדיין אינם מובנים במלואם, אך המחלה נחשבת לנובעת מתגובה חיסונית מוגזמת למיקרוביום המעי אצל אנשים רגישים גנטית. ציטוקינים שמווסתים תגובות דלקתיות ממלאים תפקידים קריטיים בשמירה על הומאוסטזיס המעי ובהתפתחות מחלת המעי הדלקתית. מתוכם, אינטרלוקין-10 (IL-10) הוא ציטוקין אנטי-דלקתי שנחקר היטב, המסייע בשמירה על הומאוסטזיס אימונולוגי בבני אדם על ידי ויסות זרועות התגובה החיסונית המולדת והאדפטיבית 6,7. ראוי לציין כי פולימורפיזמים ב-IL-10 ובקולטן שלו (IL-10RA/B) זוהו בתינוקות עם דלקת מעי פנימית מוקדמת מאוד (VEO-IBD), שהציגו באופן קלאסי מחלות פריאנליות בחודשים הראשוניםלחיים. קשר זה נתמך עוד יותר על ידי ריצוף אקסום בקנה מידה גדול של חולים בוגרים עם מחלת קרוהן, שזיהה את IL-10RA כמוקד רגישות למחלה ב-IBD9 שאינו מונוגני. יתרה מזאת, תואר מסלול לא גנטי הכולל נוגדנים מנטרלים של IL-10 בחולי VEO-IBD, מה שמדגיש עוד יותר את חשיבות מסלול זה בשמירה על הומאוסטזיס חיסוני רירית10.

בהתבסס על מחקרים אנושיים המעורבים ב-IL-10 במחלות מעי דלקתיות, פותחו עכברים מסוג אינטרלוקין-10-נוקאאוט (IL-10-KO) כמודל לחקר תפקידו של IL-10 במחלת מעי דלקתית. עכברי IL-10-KO ידועים כמפתחים דלקת מעיים ספונטנית עם תגובה מוגזמת של CD4+ Th1 לגירויים, בדרך כלל מתחילה בשבועות 8–12 לגיל11. עם זאת, התפתחות אנטרוקוליטיס ספונטנית בעכברי IL-10-KO יכולה להיות בלתי צפויה בהיעדר סוכן מאיץ 12,13,14, בהתאם לזן הגנטי, להרכב המיקרוביום ולתנאי המגורים 15,16. השימוש בפרוטוקול אמין לגרימת קוליטיס הוא קריטי כדי שמודל IL-10-KO יהיה שימושי מעשית. מחקרים קודמים השתמשו בתרופות אנטי-דלקתיות לא סטרואידיות (NSAIDs) כמו פירוקסיקאם כדי לגרום לאנטרוקוליטיס בעכברי IL-10-KO17,18. עם זאת, מחקרים אלו התמקדו בעיקר בשינויים אימונולוגיים, עם דגש מועט יחסית על השפעות אנטרוקוליטיס על חילוף החומרים או על תפקיד המין בחומרת הקוליטיס19. המחברים כאן מתארים את השימוש בדיאטה מועשרת בפירוקסיקאם כדי לגרום לאנטרוקוליטיס בעכברי IL-10-KO ולאפיין דיסרגולציה מטבולית ותגובות דלקתיות ריריות במודל זה באמצעות עכברים זכרים ונקבות. פרוטוקול זה מודד משקל גוף וצריכת מזון כדי לשקף שינויים מטבוליים בכל הגוף, וכן תופעות קליניות של קוליטיס ושינויים היסטולוגיים וטרנסקריפטומיים המשקפים דלקת רירית. מודל יעיל וניתן לשחזור זה מספק כלי חשוב לחקירת הקשר בין IBD למטבוליזם של המארח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם לפרוטוקול שאושר על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים המוסדיים (IACUC) במרכז הרפואי סאות'ווסטרן של אוניברסיטת טקסס, בהתאם ל"מדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה" [מספר אישור: 2017-102011]. המתת חסד בוצעה בהתאם להנחיות המוסדיות. לא נדרשה הרדמה לביצוע ההליכים. פרטים ספציפיים לחומרים מתוארים בטבלת החומרים.

1. הקמת מודל דלקת מעי מואצת בפירוקסיקאם בעכברי IL-10-KO

  1. לשמור על עכברי IL-10-KO במתקן ספציפי ללא פתוגנים (SPF) במחזור אור של 12 שעות עם גישה חופשית לאוכל ולמים.
  2. מאכלסים עכברים בני 7–8 שבועות, בגיל ובמין בכלובים מיקרואיזולטורים. אפשר לעכברים להסתגל למגורים בודדים ולטיפול יומיומי לפחות שבוע לפני תחילת הניסוי.
    הערה: ודא שמשקל הגוף הוא >20 גרם לזכרים או >17 גרם לנקבות, ושהעכברים נקיים מפצעי קרב.
  3. הקצו עכברים לקבוצת ניסוי ולקבוצת ביקורת. לקבוצת הניסוי, החליפו את הצ'או הסטנדרטי בצ'או מחוזק בפירוקסיקאם. לקבוצת הביקורת, תספק אוכל סטנדרטי חדש. הוסף 50 גרם אוכל לכל קופר כלוב.
    הערה: הקצה לפחות חמישה עכברים לכל מין לכל קבוצה. הצ'או המחוזק בפירוקסיקאם (200 ppm) הוכן על ידי טקלאד באמצעות פירוקסיקאם שסופקה על ידי החוקרים לייצור תזונה מותאמת אישית לבעלי חיים במעבדה. כדי למזער שונות בין אצווה, מומלץ שכל בעלי החיים בניסוי מסוים יקבלו אוכל מאותה אצווה ייצור. כאשר הדבר אפשרי, יש להשתמש באותה אצווה גם בניסויים שונים כדי לשפר את השחזור.

2. ניטור משקל גוף והתנהגות האכלה

  1. באמצעות סולם אנליטי, רשמו את משקל הגוף של כל עכבר. שקלו כל עכבר בנפרד באותו זמן בכל יום, יומי במשך 7 ימים רצופים. דווח על משקל גוף יומי כאחוז מהמשקל הבסיסי ביום 0 (נקבע כ-100%).
    הערה: ירידה במשקל מעל 20% מצביעה על לחץ מופרז וסיכון למוות קרוב. עכברים צריכים להיות מוותרים אם מגיעים לסף זה.
  2. באמצעות סולם אנליטי, ניתן לרשום את המשקל ההתחלתי של האוכל המגוזן בפירוקסיקאם ואת האוכל הסטנדרטי בכל כלוב.
  3. לאחר מכן, מדדו את האוכל שנותר בכל קופר כלוב באותו זמן בכל יום, מדי יום במשך 7 ימים רצופים.
  4. חשב את צריכת הצ'או היומית על ידי הפחתת משקל הצ'או היומי מהצ'או שנותר מהיום הקודם.
    הערה: בדוק באופן שגרתי את כמות האוכל וממלא אם היא מתחת ל-10 גרם. הטעם של אוכל פירוקסיקאם אינו משפיע על הצריכה וצריך להיות דומה מאוד לאוכל סטנדרטי.

3. ניטור פעילות מחלה

  1. בימים 0 ו-7, בדקו ויזואלית כדורי צואה מעכברים בודדים וקבעו את נוכחות הדם בצואה.
  2. אם אין דם נראה, בצע בדיקת דם אוקולטית בצואה על ידי מריחת כדור על כרטיס הבדיקה, ואז הוספת המגיב המפתח שסופק. תוצאות לפי טבלה 1.
  3. בימים 0 ו-7, בדקו ויזואלית כדורי צואה שהתרוקנו זה עתה כדי להעריך את עקביות הצואה. השתמש במלקחיים שטוחים כדי לסייע בקביעת עקביות. תוצאות לפי טבלה 1.
  4. בימים 0 ו-7, קבעו את דרגת צניחת הרקטום על ידי בדיקת אזור הפריאנל. תוצאות לפי טבלה 1.
  5. מדדו את משקל הגוף כפי שתואר למעלה. תוצאות לפי טבלה 1.
    הערה: יש לבצע את מדד פעילות המחלה (DAI) באופן עיוור על ידי אותו חוקר לאורך כל הניסוי, כדי להבטיח עקביות, למזער הטיית צופה ולשפר את אמינות ההערכה.

4. כריתת רקמת המעי הגס

  1. המתת חסד לעכברים באמצעות חנקCO2 ופריקה צווארית כפי שדווח במקום אחר20.
  2. הניחו את העכבר בשכיבה ורססו 70% אתנול על הבטן התחתונה.
  3. הרימו את העור עם מלקחיים והשתמשו במספריים כירורגיים כדי לחתוך לאורך קו האמצע. חשפו את חלל הפריטונאל ואתרו את המעי הגס.
  4. חשפו את המעי הגס והצקום באמצעות דיסקציה קהה. הסר את המעי הגס בבלוק, כולל הצקום והשרוול האנאלי.
  5. הנח את המעי הגס על משטח שטוח והסר כל רקמת חיבור.
  6. מדוד ורשם את אורך המעי הגס.
  7. לאחר מדידת אורך המעי הגס, יש להסיר את הסקום על ידי חיתוך במפגש הצו-קולוני.
  8. הכינו מזרק בנפח 10 מ"ל מלא במי מלח מפוזרים (PBS) עם מחט פלדה רב-פעמית בקצה כדורי 22 גייג'. השחיל את המחט למעי הגס ושטוף את תוכן המעיים.
  9. הניחו את המעי הגס המושטף בצלחת פטרי המכילה PBS ושוטפים כדי להסיר את התכולה שנותרה. לאחר האישור, השתמש בזה לבדיקות בהמשך.

5. ניתוח היסטולוגיה

  1. הנח את המעי על מגלש זכוכית. השתמשו במלקחיים כדי לעטוף את הרקמה סביב עצמה, החל מהקצה המרוחק, כדי ליצור "גליל שוויצרי". בדרך זו, הקצה הדיסטלי/אנאלי יישאר בגליל הפנימי כאשר האזורים הקרובים יותר יתפרסו אל הגליל החיצוני.
  2. באמצעות מחט 27 גייג', הצמיד את המעי המגולגל לשמירת הגליל ומניחים אותו בתוך קלטת טישו מוטמעת.
  3. כדי לקבע רקמות, טבלו את קלטות הרקמה בתמיסת פורמלין עם בופר של 10% למשך 16 שעות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
    אזהרה: 10% פורמלין מזיק במגע עם העור ועלול לגרום לכוויות קשות ולנזק לעיניים. לטפל בזהירות עם כפפות מגן ומשקפי מגן מדעיים. יש לטפל בפורמלין שנותר כראוי בהתאם להנחיות המוסדיות.
  4. לאחר קיבוע פורמלין, מעבדים רקמות להטמעת פרפין וחתכו אותן להתקנה על שקופיות זכוכית.
    הערה: יש להגיש דגימות למעבדה היסטולוגית עם הציוד הנדרש לעיבוד קלטות רקמה בפרפין, חתך גליל, התקנת שקופית וצביעת המטוקסילין ואאוזין.
  5. רקמת הצבע מחליקה עם המטוקסילין ואאוזין (HE), בהתאם לפרוטוקולים21 שנקבעו.
  6. באמצעות מערכת הניקוד ההיסטולוגית המתוארת בטבלה 2, העריכו את המאפיינים ההיסטולוגיים הבאים בכל חלק: נזק לרקמה כתוצאה מאנטרוקוליטיס, חדירת תאי דלקת של למינה פרופריה, ואחוז השטח המעורב. משלבים את הציונים בכל חלק כדי ליצור ציון כולל (טבלה 2).
    ציון כולל = תכונות × מעורבות (נזק לרקמות) + תכונות × מעורבות (Lamina Propria Infilteration Inflammatory Cell Infilteration) (1)
  7. תמונות היסטופתולוגיות מייצגות של נזק לרקמות וחדירת תאים ניתן למצוא בפרסום של ארבן ואח'22.
    הערה: יש לבצע ניקוד היסטולוגי בצורה עיוורת, רצוי על ידי פתולוג מוסמך, כדי להבטיח עקביות ואמינות של ההערכה.

6. צביעת אימונופלואורסצנטי ברקמה מוטמעת בפרפין עם פורמלין מקובע

  1. הניחו מחסניות טישו במתקן שקופיות ובמייבש בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס למשך שעה כדי להמיס את הפרפין.
  2. הניחו את הסליידס במתקן צביעה וטבול את המתקן ברצף למשך 3 דקות בצנצנות צביעה עם קסילן. חזור על השלב הזה בשלוש הזדמנויות.
  3. טבלו את מתקן הצביעה למשך 3 דקות בצנצנות צביעה עם 100% אתנול. חזור על השלב הזה בשלוש הזדמנויות.
  4. טבלו את מתקן הצביעה למשך 3 דקות בצנצנת הצביעה עם 95% אתנול.
  5. טבלו את מתקן הצביעה במשך 3 דקות בצנצנת הצביעה עם 80% אתנול.
  6. טבלו את מתקן הצביעה במשך 5 דקות בצנצנות צביעה עם מים דה-יוניים (DI).
    הערה: כל השלבים הקודמים חייבים להתבצע במכסה מאוורר בגלל אדי הקסילן. לטפל בזהירות עם כפפות מגן ומשקפי מגן מדעיים. שאריות הקסילן יש להיפטר כראוי בהתאם להנחיות המוסדיות.
  7. העבר את המחסניות למתקן שקופיות וטבול בצנצנת צביעה עם תמיסת שאיבה של 1× ציטראט.
  8. הניחו את צנצנת הצבעה בתמיכה של הצלחת.
  9. הניחו את תומכת התבנית בסיר לחץ.
  10. בשלו 15 דקות בסיר לחץ.
  11. החזר את הסליידס מסיר הלחץ ותן להן להתקרר לטמפרטורת החדר.
  12. דגירה עם בופר חוסם של 300 מיקרוליטר (3.5% סרום עזים מדולל ב-PBS) למשך שעה בתא לח. ודא שהרקמה מכוסה לחלוטין על ידי בופר החסימה.
  13. חשפו שקופיות ל-300 מיקרוליטר של נוגדן ראשוני מדולל בבופר חוסם למשך 16 שעות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, בתוך תא לח. ודא שהרקמה מכוסה לחלוטין בנוגדן הראשי. נעשה שימוש בנוגדן ראשוני הבא: אנטי-S100A8/S100A9 (1:500).
    הערה: דילול נוגדנים יהיה ספציפי לראגנט וצריך לעמוד בהמלצות הספק.
  14. שטיפת סלייד על ידי טבילה סדרתית ב-PBS למשך 5 דקות בשלוש הזדמנויות בצנצנת צביעה.
  15. חשפו שקופיות ל-300 מיקרוליטר של נוגדן משני פלואורסצנטי מדולל בבופר חסימה למשך שעה בטמפרטורת החדר, בתא לח. ודא שהרקמה מכוסה לחלוטין בנוגדן המשני. נעשה שימוש בנוגדן משני פלואורסצנטי הבא: אנטי-ארנב עזים אלקסה פלור 555 (דילול 1:150).
    הערה: מהנקודה הזו ואילך, יש להגן על המחסניות מאור כדי למנוע הלבנת פוטואורופורים. דילול נוגדנים משניים יהיה ספציפי לראגנט וצריך לעמוד בהמלצות הספק.
  16. שטיפת סלייד על ידי טבילה סדרתית ב-PBS למשך 5 דקות בשלוש הזדמנויות בצנצנת צביעה.
  17. חשפו שקופיות לצביעה גרעינית על ידי טבילה בתמיסת Hoechst מדוללת ב-1:5000 ב-PBS למשך 20 דקות בצנצנת צביעה.
  18. שטיפת סלייד על ידי טבילה סדרתית ב-PBS למשך 5 דקות בשלוש הזדמנויות בצנצנת צביעה.
  19. נגב בזהירות כל PBS מהשקופיות באמצעות טישו שאינו שוחק. הוסיפו 50 מיקרו ליטר של מדיום הרכבה נגד פייד וכיסוי מכסה.

7. חילוץ RNA

  1. הקפיאו במהירות את כל המעי הגס או חתיכה בחנקן נוזלי ואז אחסן בטמפרטורה של מינוס 80°C. לחילופין, טבלו ב-1.5 מ"ל של תמיסת שימור RNALater ואחסנו לפי הוראות היצרן.
  2. הפשיר את המעי הגס שהוקפא קודם והנח על משטח שטוח. הפר והומוגני את הרקמה עם הומוגניזר ידני.
  3. בודד RNA באמצעות הערכה, בהתאם להוראות היצרן.
  4. למדוד ריכוז RNA באמצעות ספקטרופוטומטר. יחס260/A280 > 1.8 ויחס A260/A230 של 2.0–2.2 מצביעים על טוהר RNA מקובל.
  5. המשיכו עם שעתוק הפוך, ואחריהם qPCR עם צבע אינטרקלציה ירוק SYBR.
  6. נתח תוצאות באמצעות פלטפורמת הכימות או כלי דומה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

עכברים זכרים ונקבות מסוג IL-10-KO מפתחים דלקת מעי לאחר חשיפה קצרה לתזונה מועשרת בפירוקסיקאם (איור 1A–E). עד היום השני, עכברים שנחשפו לפירוקסיקאם הראו ירידה במשקל מובהקת יותר סטטיסטית לעומת עכברים שקיבלו אוכל קבוע מאותו מין, וירידה דומה במשקל נצפתה בין המינים (איור 1B). צריכת המזון היומית לכאורה נותרה ללא שינוי לאורך כל החשיפה לפירוקסיקאם והתפתחות דלקת המעיים, ודמה לצריכת אוכל סטנדרטי, מה שמעיד שהירידה במשקל במוד...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחלת מעי דלקתית היא הפרעה פוליגנית מורכבת שבה מודלים פרה-קליניים משמשים כלים יקרי ערך לניתוח מסלולים התורמים לפתוגנזה של IBD ולפיתוח אסטרטגיות אבחנתיות וטיפוליות חדשות. נכון להיום, מודלים פרה-קליניים רבים של IBD מסתמכים על חשיפה כימית, כגון דקסטרן סולפט נתרן (DSS), אוקסזולון וחומצה סולפונית טריניטרובנזן (TNBS), בשל קלות השימוש בהם. קיימים גם מודלים גנטיים שמפתחים קוליטיס ספונטני. מבין אלה, מודל IL-10-KO בעל ערך מיוחד משום ששינויים גנטיים במסלול IL-10 ידועים כגורמים לדלקת מעיים בבני אדם, ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אינם מצהירים גילויים רלוונטיים.

תודות

אנו רוצים להודות למתקנים המרכזיים ב-UTSW שתרמו לעבודה המוצגת כאן. עבודה זו נתמכה על ידי מקורות המימון הבאים: NIH עד K08DK127197 (LS-D), T32DK007745 (JW), וקרן Southwestern דרך פרס Docstars (LS-D).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

מקורות

  1. Hracs L, Windsor JW, Gorospe J, et al. Global evolution of inflammatory bowel disease across epidemiologic stages. Nature. 2025;642(8067):458-466.
  2. Dahlhamer JM, Zammitti EP, Ward BW, Wheaton AG, Croft JB. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease Among Adults Aged ≥18 Years - United States, 2015. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2016;65(42):1166-1169.
  3. Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies. Lancet. 2017;390(10114):2769-2778.
  4. Caron B, Honap S, Peyrin-Biroulet L. Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease across the Ages in the Era of Advanced Therapies. J Crohns Colitis. 2024;18(Supplement_2):ii3-ii15.
  5. Ye Y, Manne S, Treem WR, Bennett D. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease in Pediatric and Adult Populations: Recent Estimates From Large National Databases in the United States, 2007-2016. Inflamm Bowel Dis. 2020;26(4):619-625.
  6. Rubtsov YP, Rasmussen JP, Chi EY, et al. Regulatory T cell-derived interleukin-10 limits inflammation at environmental interfaces. Immunity. 2008;28(4):546-558.
  7. Shouval DS, Biswas A, Goettel JA, et al. Interleukin-10 receptor signaling in innate immune cells regulates mucosal immune tolerance and anti-inflammatory macrophage function. Immunity. 2014;40(5):706-719.
  8. Glocker EO, Kotlarz D, Boztug K, et al. Inflammatory bowel disease and mutations affecting the interleukin-10 receptor. N Engl J Med. 2009;361(21):2033-2045.
  9. Sazonovs A, Stevens CR, Venkataraman GR, et al. Large-scale sequencing identifies multiple genes and rare variants associated with Crohn’s disease susceptibility. Nat Genet. 2022;54(9):1275-1283.
  10. Griffin H, Ceron-Gutierrez L, Gharahdaghi N, et al. Neutralizing Autoantibodies against Interleukin-10 in Inflammatory Bowel Disease. N Engl J Med. 2024;391(5):434-441.
  11. Kühn R, Löhler J, Rennick D, Rajewsky K, Müller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 1993;75(2):263-274.
  12. Berg DJ, Davidson N, Kühn R, et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest. 1996;98(4):1010-1020.
  13. Mizoguchi A. Animal models of inflammatory bowel disease. Prog Mol Biol Transl Sci. 2012;105:263-320.
  14. Hart ML, Ericsson AC, Franklin CL. Differing Complex Microbiota Alter Disease Severity of the IL-10-/- Mouse Model of Inflammatory Bowel Disease. Front Microbiol. 2017;8:792.
  15. Keubler LM, Buettner M, Häger C, Bleich A. A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse. Inflamm Bowel Dis. 2015;21(8):1967-1975.
  16. Büchler G, Wos-Oxley ML, Smoczek A, et al. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 2012;18(5):943-954.
  17. Berg DJ, Zhang J, Weinstock JV, et al. Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice. Gastroenterology. 2002;123(5):1527-1542.
  18. Hale LP, Gottfried MR, Swidsinski A. Piroxicam treatment of IL-10-deficient mice enhances colonic epithelial apoptosis and mucosal exposure to intestinal bacteria. Inflamm Bowel Dis. 2005;11(12):1060-1069.
  19. Holgersen K, Kvist PH, Markholst H, Hansen AK, Holm TL. Characterization of enterocolitis in the piroxicam-accelerated interleukin-10 knock-out mouse--a model mimicking inflammatory bowel disease. J Crohns Colitis. 2014;8(2):147-160.
  20. B C, K B, V B, et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. DGXT of the European Commission. Laboratory animals. 1997;31(1).
  21. Ellis JL, Yin C. Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish. J Vis Exp. 2017;(123):55630.
  22. Erben U, Loddenkemper C, Doerfel K, et al. A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7(8):4557-4576.
  23. Holgersen K, Kutlu B, Fox B, et al. High-resolution gene expression profiling using RNA sequencing in patients with inflammatory bowel disease and in mouse models of colitis. J Crohns Colitis. 2015;9(6):492-506.
  24. Ananthakrishnan AN, Adler J, Chachu KA, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Crohn’s Disease. Gastroenterology. 2023;165(6):1367-1399.
  25. Singh S, Ananthakrishnan AN, Nguyen NH, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Ulcerative Colitis. Gastroenterology. 2023;164(3):344-372.
  26. Sifuentes-Dominguez LF, Li H, Llano E, et al. SCGN deficiency results in colitis susceptibility. eLife. 2019;8:e49910.
  27. Sellon RK, Tonkonogy S, Schultz M, et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 1998;66(11):5224-5231.
  28. Bábíčková J, Tóthová Ľ, Lengyelová E, et al. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 2015;38(5):1996-2006.
  29. Wagnerova A, Babickova J, Liptak R, Vlkova B, Celec P, Gardlik R. Sex Differences in the Effect of Resveratrol on DSS-Induced Colitis in Mice. Gastroenterol Res Pract. 2017;2017:8051870.
  30. Maite CB, Roy M, Emilie V. The Effect of Sex-Specific Differences on IL-10-/- Mouse Colitis Phenotype and Microbiota. Int J Mol Sci. 2023;24(12):10364.
  31. Dokoshi T, Seidman JS, Cavagnero KJ, et al. Skin inflammation activates intestinal stromal fibroblasts and promotes colitis. J Clin Invest. 2021;131(21):e147614.
  32. Dokoshi T, Chen Y, Cavagnero KJ, et al. Dermal injury drives a skin-to-gut axis that disrupts the intestinal microbiome and intestinal immune homeostasis in mice. Nat Commun. 2024;15(1):3009.
  33. Allard C, Zizzari P, Quarta C, Cota D. Food intake and body weight in rodent studies: the devil is in the details. Nat Metab. 2022;4(11):1424-1426.
  34. M W, R L, S S, et al. Combination therapy using intestinal organoids and their extracellular vesicles for inflammatory bowel disease complicated with osteoporosis. Journal of Orthopedic Translation. 2025;53.
  35. Y G, H Z, Y Y, et al. Injectable body temperature-responsive hydrogel for encephalitis treatment via sustained release of nano-anti-inflammatory agents. Biomaterials translational. 2024;5(3).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

iroxicamNSAID

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.