ניתוח ובידוד של גנגליוני שורש גבי בעכבר

סיכום

גנגליוני שורש גביים (DRG) מכילים גופי תאי נוירון חישה ראשוניים ומעבירים אותות חושיים היקפיים לחוט השדרה. פרוטוקול זה מתאר שיטה לפירוק DRG בעכברים התומכת בבידוד סטנדרטי של גנגליונים שלמים מבניים, זיהוי סגמנטלי אנטומי, הכוונה אינטואיטיבית למשתמשים מתחילים, והפחתת פגיעות ברקמה פרוצדורלית.

תקציר

גנגליוני שורש גבי (DRG), המכילים את גופי התאים של נוירונים חושיים ראשוניים, משמשים כמבני ממסר קריטיים להעברת אותות חושיים מרקמות היקפיות אל חוט השדרה. הם ממלאים תפקידים חיוניים במחקרים על כאב, פגיעות עצביות ומחלות ניווניות עצביות. רכישת רקמת DRG שלמה היא קריטית לחקירת התכונות התפקודיות, הביטוי המולקולרי והשינויים הפתולוגיים של נוירונים חושיים. עם זאת, בשל גודלם הקטן ומיקומם העמוק בתוך תעלת החוליות, זיהוי ובידוד מדויקים של DRG מציבים אתגרים טכניים משמעותיים. במחקר זה פיתחנו פרוטוקול סטנדרטי לבידוד DRG בעכברים. שיטה זו מספקת תיאור מפורט של המיקום האנטומי של DRG, חשיפת תעלת החוליות, והשלבים המרכזיים בבידוד הגנגליונים. כל התהליך מאויר בתמונות מייצגות והקלטות וידאו. גישה זו תומכת ברכישת DRG שלם מבנית עם הנחיות אנטומיות לזיהוי סגמנטים ומתאימה לצביעת H&E וניתוח אימונופלואורסצנציה. בהשוואה לשיטות DRG קודמות, שיטה זו מאפשרת התאוששות סטנדרטית של גנגליונים מזוהים סגמנטרית, מספקת הדרכה אנטומית אינטואיטיבית למשתמשים מתחילים, ומפחיתה פגיעות ברקמה פרוצדורלית.

מבוא

גנגליונים שורשי גב (DRG), המכילים את גופי התאים של נוירונים חושיים ראשוניים, הם מבנים חיוניים להעברת אותות חושיים היקפיים — כולל גירויים מכניים, תרמיים ונוציספטיביים — לחוט השדרה ^1,2,3. למרות שיש כיום משאבים איכותיים המתארים DRG, עדיין נדרשות הנחיות פרוצדורליות מפורטות כדי לתמוך בזיהוי מדויק ובבידוד DRG מקטעי החזה ועד הסקרל בתוך דגימה אחת, תוך מזעור הסיכון לנזק DRG במהלך איסוף רקמות.

נוירוני DRG הם רכיבים מרכזיים במסלול החישה ההיקפי. האקסונים שלהם מתפצלים, כאשר ענף אחד מתפרש לרקמות היקפיות והשני בולט לקרן הגבית של חוט השדרה, ובכך ממלאים תפקידים קריטיים בהעברת כאב, פגיעה עצבית, תגובות דלקתיות ופתוגנזה של הפרעות נוירולוגיות^שונות. בנוסף, DRG זכה לתשומת לב רבה בתחומי מחקר כגון תיקון פגיעות עצביות, מנגנוני כאב כרוני, פלסטיות נוירונים חושיים וויסות נוירואימוני ^5,6. מגוון רחב של מחקרים ניסיוניים דורשים רקמת DRG שלמה ליישומים, כולל צביעת אימונוהיסטוכימיה, ניתוח ריצוף RNA, תרבית נוירונית ראשונית ומחקרים אלקטרופיזיולוגיים⁷. לכן, רכישת רקמת DRG שלמה מבנית ומזוהה במדויק במקטעים היא חיונית למחקר מעגלים עצביים חושיים, תכונות מולקולריות עצביות ושינויים פתולוגיים.

DRG ממוקמים סמוך לפורמינה הבין-חולייתית ומחוברים לחוט השדרה דרך שורשי הגב. בשל גודלם הקטן, הכליאה בתוך מבנים גרמיים ומורכבות האנטומיה הסובבת, בידוד שלם מציב אתגרים טכניים משמעותיים. בנוסף, היעדר סימני אנטומיה ברורים ונהלים סטנדרטיים מעלה את הסיכון לנזק מבני או לזיהוי שגוי סגמנטלי במהלך איסוף רקמות.

בהשוואה לשיטות DRG עכברים קיימות, השיטה שנקבעה במחקר זה מציעה מספר יתרונות. ראשית, שיטות בידוד DRG בעכברים שדווחו בעבר דורשות בדרך כלל הסרת עמוד השדרה מהחיה, לאחר מכן סגמנטציה ופתיחת קו האמצע של עמוד השדרה המבודד, ולאחר מכן ניתוח ה-DRG מהפורמינה הבין-חוליתית. במהלך תהליך זה, חיתוך עמוד השדרה וחיתוך חוזר עלולים לגרום בקלות לנזק מכני ל-DRG ואף לגרום להשמטת מקטעים מסוימים או לזיהוי סגמנטל לא ברור⁸. לעומת זאת, השיטה שלנו מתבצעת ישירות במקום בעכבר, ללא בידוד או חתך מוקדם של עמוד השדרה, ובכך מפחית את הסיכון לאובדן DRG במהלך איסוף הרקמות. במהלך כל ההליך, הכלים מיושמים בעיקר על המבנים העצמות ורקמות החיבור שמקיפות את ה-DRG ולא על אחיזה ישירה או מושכת את הגנגליון עצמו, ובכך נשמרים על שלמותו.

שנית, השיטות הקיימות לעיתים קרובות חסרות סימנים אנטומיים ברורים ויציבים לזיהוי מקטעי DRG שונים. מכיוון שהעצבים המחוברים ל-DRG נחתכים לעיתים קרובות במהלך הסרת עמוד השדרה, קשה לקבוע במדויק את המקור הסגמנטלי של DRG בודד בהתבסס על מסלול העצבים ודפוסי הסתעפויות. לעומת זאת, השיטה שלנו מתבצעת ישירות במקום בעכבר ולכן שומרת על הקשרים האנטומיים הטבעיים בין ה-DRG, העצבים המחוברים והמבנים הסובבים, ומאפשרת זיהוי מקטעי DRG שונים בהתאם לחיבורים עצביים ולסימנים אנטומיים מקומיים. אנו מציעים להשתמש במאפיינים המורפולוגיים של L2 ו-L3 כנקודות ייחוס אנטומיות מרכזיות, יחד עם הקשר האנטומי בין L3–L5 לעצב הסיאטי, ולאחר מכן זיהוי רציף של מקטעים סמוכים בשני הכיוונים הרוסטרליים והזנביים.

יתרה מזאת, שיטה זו מספקת תיאור שיטתי יחסית של השלבים המרכזיים, כולל חשיפת עמוד השדרה ותעלת החוליות, פתיחת תעלת החוליות עם חשיפה מאוחרת של חוט השדרה, חשיפה ל-DRG, ומיקום וניתוח מונחה סטריאומיקרוסקופ. תהליך העבודה ברור והנקודות האנטומיות מוגדרות היטב, מה שעשוי לשפר את הסטנדרטיזציה הפרוצדורלית ואת השחזור, במיוחד למתחילים. ה-DRG שהושג בשיטה זו שומר על שלמות רקמה טובה ולכן מתאים מאוד לניתוחים במורד הזרם, כולל אימונופלואורסצנציה וצביעת H&E.

במחקר זה, קבענו שיטת ניתוח ובידוד סטנדרטית ל-DRG של עכברים וסיפקנו איורים סכמטיים למיקום אנטומי, יחד עם תמונות מייצגות ותיעוד וידאו של הליך הדגימה. שיטה זו תומכת בבידוד ה-DRG מרמות בית החזה ועד רמות הסקרל בדגימה אחת, תוך הפחתת הסיכון לנזק DRG במהלך איסוף הרקמות.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם בקפדנות לפרוטוקול שאושר על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של בית החולים שנגחאי מזרח. הליכי הדיסקציה שתוארו במחקר זה בוצעו על עכברים בוגרים C57BL/6 (זכרים או נקבות, גיל 12 שבועות, 25–30 גרם). איור 1 מציג את מכשירי החיתוך המשמשים בפרוטוקול זה.

1. הכנה

הערה: לדגימות מקובעות בפרפוזיה, יש לנקוט אמצעי הגנה מתאימים כדי להימנע מחשיפה לקיבוץ. בצע את הדיסקציה באמצעות מכסה אדים או על ספסל מאוורר היטב, ולבוש ציוד מגן אישי מתאים לאורך כל ההליך, כולל כפפות, בגדי מגן ומשקפי מגן.

1. שמור על העכברים במחזור של 12 שעות אור ו-12 שעות חושך בטמפרטורת סביבה של כ-24 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 55%, עם גישה אד לביטום למזון ולמים.
2. לפני תחילת הניתוח, יש להמתים את העכבר בתא פחמן דו-חמצני עד שהנשימה מפסיקה לחלוטין. אשר את המוות, ואז הנח את החיה בשכיבה על לוח חיתוך ואבטח את הגפיים עם סיכות לשמירה על יציבות.
3. רססו את הפרווה על אזור החזה הבטן עם 70% אתנול כדי להפחית זיהום שיער ולשמור על שדה פעולה נקי.
4. השתמש במספריים כדי לפתוח את העור לאורך קו האמצע של החזה והבטן. הארכי את החתך מהגולגולת לאורך קו האמצע התחתוני כדי לחשוף במלואו את כלוב החזה. הרימו את הקצה התחתון של עצם החזה וחתכו את דופן החזה משני צידי הקשת הצלעית כדי לפתוח את חלל החזה ולחשוף את הלב. הסר חלק מהעצם החזה והצלעות במידת הצורך כדי לקבל מבט ברור על הלב.
5. בצע חתך קטן באטריום הימני עם מספריים כדי ליצור מוצא לדם ופרפוזאט. מלאו מזרק של 20 מ"ל ב-PBS מקורר מראש (4 מעלות צלזיוס), והכניסו לאט את המחט לחדר השמאלי ליד קצה הלב. ייצוב את המחט והימנע מניקוב בדופן החדר.
6. PBS מקורר מראש בפרפיוז לאט ובאחידות עד שהכבד הופך לחיוור, הזרימה יוצאת נקייה ורוב הדם נשטף. לאחר מכן, החלף את ה-PBS ב-20 מ"ל של 4% פאראפורמלדהיד מקורר מראש (4 מעלות צלזיוס) וממשיך בפרפוזיה בקצב איטי ויציב עד שהגפיים מתקשות, הזנב מתעקל והרקמות משתנות מאדום לחיוור, מה שמעיד שהקיבוע כמעט הושלם.
7. לאחר הפרפוזיה, משכו את המחט, הסירו כל נוזל שנותר מחלל החזה, וממשיכים מיד לאיסוף רקמות. אם נדרש רקמה לא קבועה לניתוחים במורד הזרם, יש לבצע פרפיוז רק עם PBS מקורר מראש ולהשמיט את שלב קיבוע הפרפורמלדהיד של 4%.
   הערה: שמרו על קצב פרפוזיה איטי, יציב ואחיד לאורך כל ההליך כדי למנוע קרע לבבי או נפיחות רקמה הנגרמת מלחץ יתר. בצע את כל ההליכים הנ״ל בטמפרטורת החדר.

2. DRG ועצבים סמוכים (איור 2)

1. חשיפה של עמוד השדרה ותעלת החוליות (3–5 דקות)
   1. הנח את העכבר במצב שכיבה וקבע אותו על לוח הניתוח. בצע חתך אורכי לאורך קו האמצע של העור הגבי עם מספריים, תוך הארכת החתך מהזנב לכיוון הצוואר.
   2. השתמשו במספריים כדי להפריד את העור הגבי מהרקמה המחברת שמתחת, ולהחזיר את העור לרוחב משני הצדדים כדי לחשוף במלואו את השרירים הגביים. נגבו את השיער הדבוק לפני השטח של רקמת החיבור בנייר סופג, או שטפו את שדה הניתוח במי מלח כדי לשמור על ניקיון אזור הניתוח.
   3. חתך את השרירים הגביים והרקמה המחברת לאורך שני צידי עמוד השדרה כדי לחשוף במלואו את המבנים החוליותיים.
      הערה: יש למנוע מהמספריים לחדור עמוק מדי לחלל החזה או הבטן במהלך חתך הרקמות הגביות, שכן הדבר עלול להשפיע על הליכי הניתוח הבאים.
   4. נקה בזהירות את רקמת החיבור ואת השריר שנותר שמכסה את עמוד השדרה עם רונג'ר עצם. אם רקמה שאריתית מפריעה להמחשה, גזום אותה במספריים לפי הצורך כדי לקבל חשיפה מלאה של עמוד השדריה. לאחר מכן, חתכו דרך החוליות הצוואריות מהצד הגבי עם מספריים כדי לנתק את קצה הגולגולת של עמוד השדרה מהראש ולהקל על השלבים הבאים.
2. פתח את תעלת החוליות וחשוף את חוט השדרה (איור 3; 8–10 דקות).
   1. הכנס מספריים מיקרו-מעוקלים לתעלת החוליות בגובה צוואר הרחם, וחתוך לאורך שני צידי הלמינאות כדי לפתוח את התעלה.
      הערה: יש להימנע מפגיעה בחוט השדרה במהלך ההליך.
   2. הסרת הלמינות הגביות כדי לחשוף בהדרגה את החלק הגבי של חוט השדרה.
   3. המשך לחתוך את הלמינאות הגביות לאורך הציר האורכי של עמוד השדרה באמצעות מספריים מיקרו-מעוקלים, המתארכים בהדרגה מהאזור החזה לאזור הסקרלי כדי לחשוף במלואו את החלק הגבי של חוט השדרה.
3. חשיפה של DRG (איור 4; 8–10 דקות)
   1. לאחר חשיפת המשטח הגבי של חוט השדרה, השתמשו ברונג'ור עצם כדי לפתוח בעדינות את מבני תעלת החוליות משני הצדדים, ולהחליף בין הצד השמאלי לימין.
   2. לאחר שתעלת החוליות נפרדה לחלוטין משני הצדדים, יש לצפות ב-DRG הממוקם בתוך הפורמינה הבין-חולייתית תחת מיקרוסקופ סטריאו.
4. זיהוי DRG (איור 5; 8–10 דקות)
   1. לאחר שתעלת החוליות השתקפה במלואה דו-צדדית וחוט השדרה נחשף במלואו, בדקו את חבילות עצב השורש הגבי הנובעים מהמשטח הגבי של חוט השדרה תחת מיקרוסקופ סטריאו. עקבו אחרי שורשי הגב לרוחב וזיהו את ה-DRG ליד הפורמינה הבין-חוליתית כמבנים אליפטיים או ביצתיים.
   2. אשר במהלך הזיהוי כי ה-DRG נמצא בממשק בין השורש הגבי של עצב השדרה לבין הפורמן הבין-חולייתי, ושים לב שהוא מסודר כזוג דו-צדדי בכל מקטע עמוד שדרה. זהה את ה-DRG כגנגליון שנוצר על ידי גופי התאים של נוירונים חושיים, כאשר צד אחד נכנס לקרן הגבית של חוט השדרה והצד השני מתפרש לרקמות היקפיות.
   3. השתמש במיקרוסקופ סטריאומיקרוסקופ כדי לזהות את ה-DRG כמבנה צהוב או אפור-לבן, מעט נפוח, עם צורה מלאה יותר וגבולות מובחנים יחסית.
5. ביצוע זיהוי וניתוח סגמנטלי של ה-DRG (איור 6; 8–10 דקות)
   1. השתמש במלקחיים מיקרוכירורגיים תחת מיקרומיקרוסקופ כדי להרים בעדינות את חבילת עצב השורש הגבי וכך להשיג חשיפה מלאה של ה-DRG המחובר.
   2. השתמש בתכונות הבאות כדי לקבוע את הזהות הסגמנטלית של ה-DRG: סמנו DRG המחוברים לסיבי עצב מסועפים מרובי (>2 ענפים) כ-DRG L2 ו-DRG גולגולתי יותר, וסמנו DRG המחוברים לסיבי עצב מפוצלים (רק שני ענפים) כ-L3 ועוד DRG זנביים. לאחר מכן, זהה את מקטעי ה-DRG הנותרים ברצף מעל ומטה בהתאם למיקומי הפורמינה הבין-חוליתית.
      הערה: סיבי העצב הנובעים מ-L3–L5 DRG מתאחדים ליצירת עצב הסיאטי.
   3. השתמשו במספריים מעוקלים מיקרוכירורגיים או מלקחיים מיקרוכירורגיים כדי להפריד בזהירות את רקמת החיבור וסיבי העצב סביב ה-DRG, ולשחרר בהדרגה את הגנגליון מההיקשרות שלו לרקמות סביב הפורמן הבין-חולייתי.
   4. חתך את סיבי עצב השורש הגבי שמחברים את ה-DRG לחוט השדרה, ובמקביל חתך את חבילת העצבים המתארכת לכיוון ההיקפי כדי לבודד את הגנגליון.
   5. בודד בזהירות את ה-DRG באמצעות מלקחיים מיקרוכירורגיים. אם נדרש שימור ארוך טווח וניתוח אימונופלואורסצנציה לאחר מכן, הניחו מיד את ה-DRG המבודד בצינור צנטריפוגה בנפח 0.5 מ"ל המכיל 4% פאראפורמלדהיד וקבע את הרקמה למשך 3 שעות. לאחר הקיבוע שוטפים את הרקמה במשך 3 ×-5 דקות עם 0.1 M PBS (רכיבים עיקריים: NaCl, KCl, Na2HPO4 ו-KH2PO4), והעבירו את הרקמה לתמיסת סוכרוז של 30% לייבוש עד שהיא שוקעת לתחתית. לבסוף, הטמיעו את הרקמה ב-OCT ואחסנו אותה בטמפרטורה של −80 מעלות צלזיוס לשימור ארוך טווח.

3. אשר את רכיבי הגנגליון.

1. תוצאות צביעת H&E (איור 7)
   1. קיבעו מיד את ה-DRG המבודד בקיבוע היסטולוגי קונבנציונלי, לדוגמה, פאראפורמלדהיד 4%. לאחר הקיבוע, שוטפים את הרקמה בבופר פוספט של 0.1 מטר, מבצעים ייבוש, ניקוי והטמעת פרפינים לפי נהלים היסטולוגיים סטנדרטיים, ומכינים חתכי רקמה בגודל 4–6 מיקרון לניתוח צביעה במורד הזרם.
   2. לבצע צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E) על החתכים כדי להעריך את המבנה הכולל והמורפולוגיה התאית של ה-DRG. השתמשו בחתכים המוצבעים כדי לזהות את רכיבי התאים וארגון הרקמות של הגנגליון ולקבוע את איכות ה-DRG שנקטף.
   3. בדקו את החלקים המוצבעים ב-H&E תחת מיקרוסקופ, וודאו שה-DRG מורכב בעיקר ממספר גופי תאי עצב חושיים. זהה נוירונים עם סומטה גדולה, עגולה עד ביצתית, וצפה בגרעינים הברורים שלהם וכן בנוקלאולים הבולטים הנמצאים בחלק מהנוירונים. כמו כן, מאשרים נוכחות של תאי גליה לווייניים צמודים המקיפים את הנוירונים בסידור טבעתי אופייני.
   4. בדקו את פנים הגנגליון וזיהו את חבילות סיבי העצב ומחיצת הרקמה המחברת כדי לוודא שמבנה הרקמה הכולל שלם ומאורגנת בבירור. ודאו שהגבולות התאים מוגדרים היטב ושאין הפרעה ברקמה או בלבול מבני ברור.
   5. לאשר בידוד DRG מוצלח על צביעת H&E על ידי נוכחות מבנה כללי ששמור, מורפולוגיה תאית מוגדרת היטב, וללא פגיעה מכנית נראית לעין. לזהות נזק לדגימה על ידי התבוננות בארכיטקטורה תאית מופרעת, שולי רקמה לא ברורים או הרס רקמתי מקומי המתרחש במהלך ניתוח או עיבוד. השתמש בממצאי H&E אלו כבסיס מעשי להערכת איכות איסוף ה-DRG ושלמות הרקמה.
2. תוצאות צביעת אימונופלואורסצנציה של TUBB3 (איור 8)
   1. תקבע את ה-DRG המבודד מיד ב-4% פרפורמלדהיד למשך 3 שעות. לאחר שהקיבוע מושלם, שטוף את הרקמה שלוש פעמים ב-0.1 מטר PBS, תוך מתן 5 דקות לכל שטיפה. לאחר מכן, הניחו את הרקמה בתמיסת סוכרוז של 30% עד שהיא מתיישבת בתחתית, הטמיעו אותה ב-OCT, וחתכו חתכים קפואים ב-8–12 מיקרון לצביעת אימונופלואורסצנציה במורד הזרם.
   2. חממו את החלקים לטמפרטורת החדר, שטפו אותם 3 ×-5 דקות ב-PBS, ובצעו שליפת אנטיגנים עם תמיסת טריס-אדטה לאיסוף אנטיגן. תן לחלקים להתקרר באופן טבעי לטמפרטורת החדר, שטוף אותם שוב 3 × 5 דקות עם PBS, וחסום עם 5% BSA למשך 30–60 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר שלב החסימה, יש להחיל את הנוגדן הראשי המסומן בפלואורופור TUBB3 ולדגור את החתכים למשך הלילה בטמפרטורה של 4°C. למחרת, שטפו את החתכים שלוש פעמים עם PBS, צבעו את הגרעינים ב-DAPI, התקינו את החתכים וצילמו תמונות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה.
   3. בדקו את חלקי DRG וודאו שדגימות שמורים היטב מציגות קווי מתאר גנגליונים מובחנים, מבנה רקמה שלם וסידור תאי מסודר. צפו באימונופלואורסצנציה של TUBB3 בעיקר בגופי תאי עצב סנסוריים ובסיבי עצב כדי להגדיר את התפלגות הנוירונים הכוללת בתוך הגנגליון. השתמשו בנגד-צביעה DAPI כדי לזהות את התאים הגדולים החיוביים ל-TUBB3 כנירונים חושיים, ושימו לב שהגרעינים הקטנים-חיוביים ל-DAPI הפזורים סביב תאים אלו מראים דפוס מורפולוגי התואם לגרעיני תאי גליאלי לוויניים. לזהות נזק שקשור לדיסקציה או לעיבוד עקב הפרעה ברציפות הרקמה, מיקום לא סדיר של אות TUBB3, מורפולוגיה נוירונית לא מוגדרת היטב, או עלייה מוקדית באות הרקע.
   4. יש להחיל צביעת TUBB3 באימונופלואורסצנציה כאינדיקטור משלים לשלמות רקמת DRG. לזהות בידוד DRG מוצלח באמצעות נוכחות קווי מתאר גנגליונים משומרים, אותות פלואורסצנציה מובחנים בגופי תאי עצב סנסוריים וסיבי עצב, מורפולוגיה תאית ברורה וצביעת רקע מינימלית.

תוצאות

בידוד DRG מוצלח דורש שמירה על שלמות הגנגליון, ללא דחיסה, ריסוק או קריעה ברורים. הרימו בעדינות את סיבי העצב המחוברים לצדדים, שחררו בהדרגה את הגנגליון מהרקמות הסובבות, וחתכו את סיבי העצב המחוברים רק לאחר שהגנגליון הונע במלואו, כדי שניתן יהיה להוציא אותו בשלמותו. הימנעו מאחיזה ישירה בגוף הגנגליון באמצעות כלים במהלך ההליך. לאחר הבידוד, שמרו על המורפולוגיה הטבעית של ה-DRG בתוך הפורמן הבין-חולייתי ככל האפשר. לאחר הסרת הרקמות הדבוקות הסובבות, הגנגליון המבודד אמור להיראות שטוח, אליפטי וחצי-שקוף ...

דיון

DRG, כרכיבים מרכזיים במערכת החישה ההיקפית, ממלאת תפקיד קריטי בהעברת מידע חושי מכני, תרמי ונוציספטיבי למערכת העצבים המרכזית ^9,10,11. נוירוני DRG מציגים מורפולוגיה פסאודו-אוניפולרית אופיינית, כאשר תהליך אחד מתפרש לרקמות היקפי והשני בולט לקרן הגבית של חוט השדרה, ובכך ממלאים תפקידים קריטיים בהעברת אותות חושיים, תיקון פגיעות עצביות וכאב כרוני במצבים פיזיולוגיים ופתולוגיים^...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
0.5 mL centrifuge tube	לא צוין	לא צוין	משמש לאחסון DRG קבוע
מזרק 20 mL	לא צוין	לא צוין	משמש להשקיה לבבית
תמיסת סוכרוז 30%	לא צוין	לא צוין	משמש להתייבשות רקמות לפני הטמעה ב-OCT
פאראפורמלדהיד 4%	Servicebio	G1101
5% BSA	Solarbio	SW3015
70% אתנול	לא צוין	לא צוין	משמש להפחתת זיהום שיער לפני ניתוח
נייר סופג	לא צוין	לא צוין	משמש להסרת שיער מרקמה חיבורית
עכברי C57BL/6 בוגרים	Vital River	לא צוין	זכר או נקבה; בני 12 שבועות; 25–30 גרם
אלפא פלואו 488-conjugated עכברי פרה נגד IgG	Servicebio	GB25303
נוגדן נגד TUBB3	Proteintech	CL488-66375	משמש להדמיה אימונופלואורסצנטית של TUBB3
תא פחמן דו-חמצני	לא צוין	לא צוין	משמש להמתה
DAPI	Servicebio	G1012
לוח ניתוח	לא צוין	לא צוין	משמש לביטחון העכבר במהלך הניתוח
מיקרוסקופ פלואורסצנטי	לא צוין	לא צוין	משמש להדמיה של חלקים מצופים בפלואורסצנציה
מלקחיים קמורים לניתוח מיקרוכירורגי	RWD	S21022-14	מופק ממאמר: מלקחיים קמורים לעצם (RWD, S21022-14)
מספריים קמורים לניתוח מיקרוכירורגי	ASSI	SDCT16R8	מופק ממאמר: מספריים קמורים לניתוח מיקרוכירורגי (ASSI, SDCT16R8)
מלקחיים לניתוח מיקרוכירורגי	Fine Science Tools	11254-20	מופק ממאמר: מלקחיים לניתוח מיקרוכירורגי (FST, 11254-20)
תרכובת OCT	Sakura Finetek	No. 4583
PBS	Servicebio	G2156
סיכות	לא צוין	לא צוין	משמשות לביטחון הגפיים על לוח הניתוח
מלח פיזיולוגי	לא צוין	לא צוין	משמש לשטיפת שדה הניתוח
מספריים	Fine Science Tools	14060-09	מופק ממאמר: מספריים (FST, 14060-09)
מיקרוסקופ סטריאו	Leica Microsystems, Wetzlar, גרמניה	10447197	מופק ממאמר: מיקרוסקופ סטריאו (Leica, 10447197)
תמיסת שחזור אנטיגן Tris-EDTA	Solarbio	C1038