מאמר שיטה

למינקטומיה לומבלית ב-L5 בעכברים מזדקנים מסוג C57BL/6J לצורך מידול של דספונקציה קוגניטיבית פוסט-אופרטיבית

4 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/71733

⸱

22 בספטמבר 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Pharmacology, Zhejiang University School of Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר למינקטומיה סטנדרטית של חוליה L5 בעכברי C57BL/6J מזדקנים, במטרה להקים מודל של ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח תוך מזעור הפגיעה המוטורית, ובכך לתמוך במחקרים התנהגותיים, היסטולוגיים ומכניסטיים של הפרעות נוירו-קוגניטיביות סביב ניתוח.

תקציר

ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח (POCD) הוא סיבוך נוירולוגי שכיח לאחר ניתוח והרדמה, במיוחד בקרב מבוגרים, והוא קשור להחלמה מושהית, אשפוז ממושך וירידה באיכות החיים. פרוצדורות אורתופדיות ופרוצדורות בעמוד השדרה קשורות לסיכון גבוה יחסית ל-POCD; עם זאת, מודלים פרה-קליניים המשקפים באופן הדוק את המאפיינים הפרי-אופרטיביים של ניתוחי עמוד השדרה נותרים מוגבלים. מודלים נפוצים, כולל לפרוטומיה ושבר בטיביה, עלולים לגרום לפגיעה מוטורית מתמשכת ולדלקת פריפרית ממושכת שעלולות להטעות את פרשנות התוצאות ההתנהגותיות-קוגניטיביות. כאן, פרוטוקול זה מתאר פרוטוקול סטנדרטי וזול למידול POCD באמצעות למינקטומיה לומברית ב-L5 תחת הרדמת sevoflurane בעכברים זכרים מסוג C57BL/6J בני 18 חודשים. הפרוצדורה מבוצעת באמצעות מכשירים כירורגיים שגרתיים ומייצרת פגיעה כירורגית מבוקרת תוך מזעור של גירעונות מוטוריים מתמשכים. התפקוד הקוגניטיבי מוערך באמצעות מבחן זיהוי אובייקט חדש, מבוך Y עם זרוע חדשה ומבוך Barnes, בעוד שפגיעה נוירונלית בהיפוקמפוס ושינויים נוירו-דלקתיים מוערכים על ידי צביעת Nissl ואימונופלורסצנציית Iba1, בהתאמה. תוצאות מייצגות מדגימות פעילות מוטורית שנשמרה, ביצועים קוגניטיביים פגועים, ירידה בשלמות הנוירונלית של ההיפוקמפוס והגברת נוירו-דלקת בהיפוקמפוס לאחר הניתוח. מודל סטנדרטי ונגיש זה מספק פלטפורמה רלוונטית קלינית לחקירת המכניזמים העומדים בבסיס הליקוי הקוגניטיבי הקשור לניתוחי עמוד השדרה ולהערכת התערבויות נוירו-פרוטקטיביות פרי-אופרטיביות מועמדות.

מבוא

ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח (POCD) מוגדר כירידה בלמידה ובזיכרון, בקשב, במהירות העיבוד ובתפקודים ניהוליים לאחר הרדמה וניתוח1, ותופעה זו משפיעה בעיקר על חולים קשישים, כאשר השכיחות המדווחת שלה נראית כמשתנה בהתאם להקשר הניתוחי ולאוכלוסיית המטופלים2,3. דווח כי POCD מופיע בתדירות גבוהה בקרב מבוגרים העוברים ניתוח אורתופדי אלקטיבי4. מבחינה קלינית, POCD עשוי להימשך שבועות עד חודשים לאחר הניתוח והוא נקשר לאשפוז ממושך ולעלייה בתמותה5,6,7. עם הזדקנות האוכלוסייה המתמשכת והעלייה במספר הניתוחים ברחבי העולם, POCD הפך לסוגיה חשובה של בריאות הציבור ושל טיפול פרי-אופרטיבי.

מבחינה פתופיזיולוגית, POCD נחשב לתסמונת רב-גורמית המופעלת על ידי טראומה כירורגית וחשיפה לחומרי הרדמה, כאשר דלקת עצבית (neuroinflammation), עקה חמצונית (oxidative stress), הפרעה בבקרת האוטופגיה ותפקוד סינפטי לקוי הם בין המנגנונים המוצעים העומדים בבסיס התפקוד הנוירונלי הלקוי באזורים הרלוונטיים לקוגניציה, כגון ההיפוקמפוס8. כדי לנתח מנגנונים אלו ולהעריך התערבויות פוטנציאליות, פותחו מגוון פרדיגמות פרה-קליניות של POCD. פרדיגמות פרה-קליניות כוללות מודלים של הרדמה בלבד, מודלים המבוססים על ניתוח בטן, ומודלים של פגיעה אורתופדית כגון שבר בשוקה (tibial fracture)9. למרות שמודלים אלו קידמו את התחום, ייתכן שהם אינם משחזרים באופן מלא מאפיינים פרי-אופרטיביים הרלוונטיים לניתוחי עמוד השדרה, וחלקם עלולים להכניס גורמים מבלים כגון ליקויים מוטוריים מתמשכים ודלקת רקמות ממושכת, המסבכים את קריאת הנתונים הקוגניטיביים ואת הפרשנות המכניסטית.

מבין האסטרטגיות הכירורגיות הזמינות, בחרנו במודל של למינקטומיה מיתנית ב-L5 כדי לחקור ליקוי קוגניטיבי מוקדם לאחר ניתוח בהקשר כירורגי סטנדרטי הרלוונטי לעמוד השדרה. הליך זה מספק פגיעה כירורגית מקומית ומבוקרת תחת הרדמה בשאיפה, ומאפשר חקירה של תגובות נוירו-דלקתיות ותפקוד קוגניטיבי לקוי לאחר הניתוח מבלי לגרום לפגיעה ניכרת בתנועתיות. באמצעות עידון שלבי הניתוח המרכזיים, פרוטוקול זה מציע שיטה סטנדרטית, מעשית וחסכונית לחקירת ליקוי קוגניטיבי הקשור לניתוחי עמוד השדרה ולהערכת אסטרטגיות של הגנה נוירונית פרי-אופרטיבית.

פרוטוקול

כל ניסויי בעלי החיים בוצעו בהתאם למדריך לטיפול ובשימוש בבעלי חיים למעבדה ואושרו על ידי הוועדה לטיפול ובשימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת Zhejiang (מספר אישור אתי: ZJU20260153).

1. הכנה טרום-ניתוחית

  1. בעלי חיים ניסייים, הקצאה לקבוצות, אלגזיה וסינוור
    1. השתמש בעכברים זכרים בני 18 חודשים מסוג C57BL/6J במשקל 30–34 g. השכן את העכברים במחזור של 12 שעות אור/חושך עם גישה חופשית למזון ומים.
    2. אפשר לעכברים להסתגל לתנאי השכון למשך 7 ימים לפחות לפני הניתוח. הקצה את העכברים באופן אקראי לקבוצת ה-L5 laminectomy או לקבוצת הביקורת לאחר ההסתגלות.
    3. הקצה לכל עכבר מספר זיהוי מקודד לפני הפרוצדורות הניסייות. שמור על קוד ההקצאה לקבוצות כך שניתן יהיה לבצע את ההערכות ההתנהגותיות באופן מסונור (blinded) לטיפול.
    4. העבר את העכברים בקבוצת ה-L5 laminectomy הרדמה באמצעות sevoflurane ולאחריה L5 lumbar laminectomy. אל תחשוף את העכברים בקבוצת הביקורת להרדמה ב-sevoflurane, להכנה של אתר הניתוח או להתערבות כירורגית.
    5. תן meloxicam בהזרקה תת-עורית במינון של 2 mg/kg לעכברים בשתי הקבוצות. תן את המנה הראשונה לאחר השראת ההרדמה בקבוצת ה-L5 laminectomy ובנקודת הזמן התואמת לסיום הניתוח בקבוצת הביקורת.
    6. תן מנות המשך של meloxicam בהזרקה תת-עורית במינון של 2 mg/kg בכל 24 h למשך 48 h לעכברים בשתי הקבוצות. השכן, טפל ובקרה את שתי הקבוצות תחת תנאים זהים לאורך כל התקופה הניסיית.
    7. בצע את כל ההערכות ההתנהגותיות לפי אותו לוח זמנים ניסיי עבור שתי הקבוצות. ודא שהחוקר המבצע את ההערכות ההתנהגותיות נשאר מסונור להקצאת הקבוצות.
  2. סטריליז את כל כלי הניתוח וחטא את מרחב העבודה הכירורגי. חמם מראש פד חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף במהלך ההרדמה. הכן meloxicam למתן פרי-אופרטיבי.
  3. הפעל את מכונת הרדמת הגז והנח את העכבר בתא השראה. השרה הרדמה כללית עם 3–5% sevoflurane למשך 3–5 min תוך שמירה על קצב זרימת חמצן של 1 L/min.
  4. העבר את העכבר המורדם למשטח הניתוח. שמור על ההרדמה עם 1.5–3% sevoflurane המומס באמצעות מסכת הרדמה בקצב זרימת חמצן של 0.5–0.8 L/min. תן meloxicam בהזרקה תת-עורית במינון של 2 mg/kg. משך ההרדמה הכולל, שנמדד מתחילת השראת ה-sevoflurane, הוא כ-4 h. התאם את ריכוז ה-sevoflurane לפי הצורך כדי לשמור על מישור הרדמה כירורגי יציב.
  5. מקם את העכבר במצב שכיבה על הבטן כאשר עמוד השדרה המותני פונה כלפי מעלה. קבע בעדינות את הגפיים הקדמיות בעזרת סרט דביק כדי לייצב את החיה ולאפשר גישה ללא הפרעה לשדה הניתוח של L5.
  6. אשר עומק הרדמה מספק על ידי אימות היעדרו של רפלקס נסיגת כף הרגל. מרח משחה אופתלמית כדי למנוע התייבשות של הקרנית.
  7. הסר שיער מאזור קו האמצע המותני (בקירוב L3–S1) באמצעות תספורת לבעלי חיים קטנים. חטא את העור החשוף עם 75% ethanol, ולאחר מכן povidone-iodine, וחזור על הפעולה 2–3 פעמים כדי להבטיח תנאים אספטיים.

2. ניתוח למינקטומיה במקטע L5 של עמוד השדרה המותני

הערה: בפרוטוקול הנוכחי, כל השלבים הכירורגיים בוצעו תחת ויזואליזציה ישירה ללא שימוש במיקרוסקופ סטריאוסקופי או בעדשות הגדלה.

  1. הנח את העכבר המורדם במצב שכיבה על הבטן (prone) על פלטפורמה כירורגית שחוממה מראש. קבע את הגפיים הקדמיות באמצעות סרט דביק כדי לייצב את הגוף ולחשוף באופן מלא את אזור המותניים (איור 1).
  2. זהה את גובה חוליה L5 באמצעות נקודות ציון חיצוניות. בצע מישוש (פלפציה) של רכסי הכסל (iliac crests) משני הצדדים ושרטט קו רוחבי דמיוני המחבר את נקודות השיא שלהם.
  3. השתמש בקו הרוחבי כנקודת ציון מקורבת עבור המרווח הבין-חולייתי L5–L6. מרכז את החתך העורי המתוכנן מעט קראניאלית (לכיוון הראש) לקו זה כדי להתמקד בלאמינה (lamina) של L5.
  4. חטא את אזור הניתוח. בצע חתך עורי אורכי בקו האמצע, באורך של כ-1.5–2.0 cm מעל גובה L5 שנקבע מראש, כדי לחשוף את אזור L4–L6.
  5. הרחק את שולי העור באמצעות פינצטה סטרילית. חשוף את הפסציה הדורסלית וזהה את תפר הפסציה (fascial raphe) בקו האמצע.
  6. אשר את גובה החוליה לאחר חשיפת עמוד השדרה. זהה את המעבר הלומבו-סקרלי (lumbosacral junction) ואת החוליה המותנית הקודאלית (זנבית) ביותר.
  7. זהה את L5 כחוליה הנמצאת מיד קראניאלית ל-L6, כיוון שעכברי C57BL/6 הם בדרך כלל בעלי שש חוליות מותניות. אשר את הגובה על ידי ספירת שתי חוליות קראניאלית מהמעבר הלומבו-סקרלי.
  8. צור פתח קטן לאורך תפר הפסציה בקו האמצע. הרחק את השרירים הפארא-ספינליים משני הצדדים תחת ראייה ישירה.
  9. הפרד את השרירים הסמוכים לזיז הספינוס (spinous process) של L5 כדי לחשוף את הלאמינה שמתחתיהם. הרחב את החשיפה קראניאלית עד לזיז הספינוס של L4 וקודאלית עד לזיז הספינוס של L6, עד שכל שלושת הזיזים גלויים בבירור.
  10. בצע דיסקציה שאינה חודרנית (blunt dissection) סמוך לעצם באמצעות מקלוני צמר גפן או פינצטה עדינה. השתמש בדיסקציה חודרנית (sharp dissection) רק במידת הצורך לשחרור הידבקויות פסציאליות ולצמצום הדימום.
  11. שמור על הרחקה לטרלית באמצעות מקלוני צמר גפן כדי לחשוף את לאמינת L5 ואת המרווח הבין-לאמינרי L5–L6 באופן מלא. אשר שוב את גובה החוליה לפני ההמשך.
  12. אחוז בעדינות בזיז הספינוס של L5 באמצעות פינצטה והרם את זיז הספינוס ואת עמוד השדרה המותני הסמוך לו בזווית של כ-30° ביחס לפלטפורמה הכירורגית כדי להרחיב את המרווח הבין-לאמינרי L5–L6.
  13. החדר את קצוותיה הסגורים של מספרי עיניים לתוך המרווח הבין-לאמינרי L5–L6 תחת ראייה ישירה. הלהק את המספריים לאורך מישור רדוד מיד מתחת לקצה הקודאלי של לאמינת L5.
  14. פתח מעט את המספריים כדי ליצור את הפתח העצמי הראשוני. הגדל את חלון הלאמינקטומיה (laminectomy) על ידי הסרה רצפית של חלקי עצם קטנים לאורך שולי הלאמינה. הגבל את הסרת העצם ללאמינה הדורסלית של L5 ומנע הרחבה לטרלית של החלון העצמי אל תוך מפרקי הפצט (facet joints) משני הצדדים.
  15. הימנע מעומק החדרה מופרז ומכוח חיתוך מוגבר כדי למנוע פגיעה בדוורה (dura).
  16. המשך בהסרת הלאמינה באופן מדורג עד שהדוורה (dura mater) גלויה בבירור דרך החלון העצמי.
  17. בדוק את שדה הניתוח בקפידה. אשר את היעדר דימום פעיל וודא שהדורה נותרה שלמה.
  18. שטוף את אזור הניתוח בתמיסת סלין סטרילית חמימה. השג המוסטזה באמצעות לחיצה עדינה.
  19. סגור את הפצע בשכבות. סגור את העור באמצעות תפרי ניילון 6-0 וחטא את אתר החתך.
  20. לאחר סגירת הפצע, המשך בהרדמה בסבופלורן עד שמשך ההרדמה הכולל יגיע לכ-4 h. לאחר מכן הפסק את מתן הסבופלורן ועבור לטיפול פוסט-אופרטיבי.

3. טיפול לאחר ניתוח

  1. בנקודת הזמן התואמת לסיום הניתוח בקבוצת הלמינקטומיה (laminectomy), ניתן meloxicam תת-עורי במינון של 2 mg/kg לעכברים בקבוצת הביקורת. הניחו כל עכבר מקבוצת הלמינקטומיה על פד חימום עם בקרת טמפרטורה ושמרו על טמפרטורת הגוף עד שהעכבר יחזור להכרה ויפגין נשימה ספונטנית יציבה ופעילות מוטורית.
  2. החזירו כל עכבר מקבוצת הלמינקטומיה לכלובו לאחר התאוששות מלאה מההרדמה. לאחר מכן, עקבו אחר בעל החיים עד להשגת הליכה תקינה. ניתן מנות המשך של meloxicam תת-עורי במינון של 2 mg/kg בכל 24 h למשך 48 h לעכברים בשתי הקבוצות.
  3. בדקו מדי יום את החתך הניתוחי ואת תקינות התפרים עד ליום ה-3 לאחר הניתוח. הרדימו מחדש את העכבר והחליפו תפרים רפויים או קרועים במידת הצורך.
  4. בדקו מדי יום את החתך לאיתור נפיחות, דימום, הפרשה או סימנים לדלקת מקומית.
  5. עקבו אחר משקל הגוף, התנהגות טיפוח (grooming), פעילות ספונטנית וצריכת מזון ומים לאורך כל התקופה שלאחר הניתוח.
  6. בצעו הרדמה הומנית לעכבר לפני מועד סיום הניסוי המתוכנן אם מתקיים אחד מקריטריוני סיום הניסוי ההומניים שהוגדרו מראש: איבוד של ≥20% ממשקל הגוף שלפני הניתוח; אנורקסיה מלאה למשך 24 h או צריכת מזון הנמוכה מ-50% מהכמות הרגילה במשך 3 ימים רצופים; חוסר יכולת או רתיעה ניכרת לעמוד או לגשת למזון או למים הנמשכת 24 h לאחר ההתאוששות מההרדמה; או מצב גוסס המאופיין בדיכאון ניכר בליווי טמפרטורת גוף הנמוכה מ-37 °C.

4. הערכה התנהגותית של POCD

  1. מבחן שטח פתוח (Open Field test) (בקרת תנועה; היום השלישי לאחר הניתוח)
    1. בצע את מבחן השטח הפתוח (open-field test) בתוך שטח של 45 ס"מ × זירת בדיקה בקוטר 45 ס"מ עם דפנות בגובה 40 ס"מ תחת רמת תאורה של 20 לוקס. יש למקם את מצלמת הווידאו ישירות מעל מרכז הזירה כך שכל שטח הבדיקה ייכלל בשדה הראייה.
    2. הנח את העכבר במרכז הזירה והפעל את המעקב בווידאו מיד לאחר ההנחה. אפשר לעכבר לחקור את הסביבה בחופשיות במשך 5 דקות. נתח את מלוא הסשן בן ה-5 דקות וחשב את מרחק הנסיעה הכולל ואת מהירות התנועה הממוצעת באמצעות מערכת המעקב בווידאו.
  2. ניתוח הליכה
    1. בצע ניתוח הליכה ביום השלישי לאחר הניתוח באמצעות מערכת אוטומטית לניתוח הליכה.
    2. הניחו כל עכבר בקצה אחד של מסלול ההליכה ואפשרו לו לחצות את המסלול בחופשיות. רשמו את טביעות הכפות במהלך התנועה באמצעות המצלמה המהירה המשולבת במערכת לניתוח הליכה.
    3. הקליטו ניסויי הליכה עבור כל עכבר ואספו שלושה ריצות תקינות הכוללות תנועה קדימה רציפה לאורך מסלול ההליכה לצורך ניתוח בהמשך.
    4. נתחו את נתוני טביעות הכפות שהוקלטו באמצעות התוכנה לניתוח הליכה. סקרו את טביעות הכפות שזוהו באופן אוטומטי ותקנו ידנית את הסיווג של הכפה הקדמית הימנית, הכפה הקדמית השמאלית, הכפה האחורית הימנית והכפה האחורית השמאלית במידת הצורך, לפני הפקת פרמטרי ההליכה.
    5. כמת את אורך הפסע, זמן העמידה, מהירות התנופה ואת שטח הטביעה, וחשב את ערך הממוצע משלושת הניסיונות התקינים עבור כל עכבר לצורך ניתוח סטטיסטי.
  3. מבוך ברנס (למידה וזיכרון מרחביים; ימים 4–6 לאחר הניתוח)
    ​הערה: בצעו בדיקת מבוך בארנס פעם ביום במשך שלושה ימים רצופים, החל מהיום הרביעי לאחר הניתוח. בצעו את הבדיקות באותו חלון זמן יומי כדי למזער שונות צירקדית.
    1. מקמו את תיבת המילוט מתחת לחור המטרה הייעודי. שמרו על מיקום מטרה זה לאורך כל הניסוי.
    2. הנח את העכבר במרכז המבוך כדי להתחיל כל ניסוי. אפשר לעכבר לחפש את תיבת המפלט למשך עד 3 דקות. סיום הניסוי יתבצע כאשר העכבר ייכנס לתיבת המפלט.
    3. אם העכבר אינו מצליח לאתר את תיבת המילוט תוך 3 דקות, הנח אותו בעדינות אל חור היעד. אפשר לעכבר להישאר לזמן קצר בתוך תיבת המילוט כדי לחזק את למידת המשימה.
    4. רשמו את השהיית המילוט (escape latency) ואת מרחק הנסיעה באמצעות מערכת המעקב בווידאו. עבור ניסויים שבהם העכבר אינו נכנס לתיבת המילוט תוך 3 דקות, קבעו שהיית מילוט של 180 שניות. כללו בניתוח הסטטיסטי אך את שהיית המילוט ומרחק הנסיעה שנרשמו במהלך הסשן האחרון ביום השלישי.
  4. זיהוי חפץ חדש (זיכרון זיהוי; ימים 3–4 לאחר הניתוח)
    ​הערה: השתמש באותה זירה ובאותה מערכת למעקב וידאו כפי שתואר עבור מבחן השטח הפתוח. השתמש במפגש השטח הפתוח ביום השלישי לאחר הניתוח כדי להרגיל את העכברים לזירת הבדיקה לפני האימון לזיהוי חפץ חדש.
    1. הנח שני עצמים גליים זהים במיקומים סימטריים בזירה במהלך מפגש האימון. אפשר לעכבר לחקור את הסביבה בחופשיות במשך 5 דקות.
    2. לאחר מרווח שימור של שעה אחת, החליפו חפץ גלי מוכר בחפץ חדש בצורת קובייה. בצעו איזון (Counterbalance) של מיקום החפץ החדש בין העכברים כדי למזער העדפה פוטנציאלית לצד מסוים. אפשרו לעכבר לחקור את הסביבה במשך 5 דקות.
    3. רשמו את זמן החקירה של האובייקטים המוכרים והחדשים באמצעות מערכת מעקב וידאו. כללו בניתוח רק עכברים שזמן חקירת האובייקטים הכולל שלהם היה לפחות 3 שניות.
    4. חשבו את מדד ההעדפה (PI) באופן הבא:
      figure-protocol-1
      הגדרת Tחדש ו-Tמוכר כזמן שהוקדש לחקירת החפץ החדש והחפץ המוכר, בהתאמה, במהלך סשן הבדיקה.
  5. מבוך Y עם זרוע חדשה (זיכרון זיהוי מרחבי; היום ה-5 לאחר הניתוח)
    1. בצע את הבדיקה במבוך בצורת Y המורכב משלוש זרועות זהות המופרדות על ידי 120°חסמו באופן אקראי זרוע אחת באמצעות דלת אטומה והגדירו זרוע זו כזרוע החדשה.
    2. בחרו באקראי את אחת משתי הזרועות הפתוחות כזרוע ההתחלה. הגדירו את הזרוע הפתוחה שנותרה כזרוע המוכרת. מקמו את העכבר בקצה זרוע ההתחלה ואפשרו לו לחקור בחופשיות את שתי הזרועות הנגישות למשך 5 דקות.
    3. לאחר מרווח של שעה אחת בין הניסויים, הסר את הדלת האטומה והחזר את העכבר לקצה אותה זרוע התחלה.
    4. אפשרו לעכבר לחקור את כל שלושת הזרועות באופן חופשי במשך 5 דקות.
    5. הגדירו כניסה לזרוע כמרכז הגוף המעקב שנכנס מאזור המרכז לאזור זרוע שהוגדר מראש. רשמו את מספר הכניסות ואת הזמן ששהה החסום בכל זרוע באמצעות מערכת המעקב הווידאו.
    6. חשבו את מדד העדפת הזרוע החדשה מבוס הזמן באופן הבא:
      figure-protocol-2
      הגדר Tחדש, Tנא לספק את הטקסט למסמך שברצונך לתרגם., ו-Tמוכר כזמן שהוקדש לזרוע החדשה, לזרוע ההתחלה ולזרוע המוכרת, בהתאמה.
    7. חשב את מדד ההעדפה המבוס על רשומות באופן הבא:
      figure-protocol-3
      הגדר את Eחדש ככל שמספר הכניסות לזרוע החדשה, ו-Eסה"כ כמספר הכניסות הכולל לכל שלושת הזרועות במהלך ניסוי הבדיקה.

5. עיבוד רקמות, צביעת Nissl וצביעה אימונופלואורסצנטית

  1. עיבוד רקמות
    1. בנקודת הסיום הניסויית שנקבעה, הרדם את העכבר הרדמה עמוקה באמצעות 3% sevoflurane במעגל חמצן בקצב זרימה של 2 ל'/דקה.
    2. יש לאשר עומק הרדמה מספק על ידי היעדר רפלקס נסיגת כף הרגל. תוך שמירה על הרדמה עמוקה ולפני הפסקת פעילות הלב, יש לבצע פרפוזיה טרנס-קרדיאלית (transcardial perfusion) עם 20 מ"ל של תמיסת סליין עם בופר פוספטים (PBS) כדי להסיר דם תוך-כלי.
    3. בצעו מיד פרפוזיה לעכבר עם 20 מ"ל של פראפורמאלדהיד (PFA) בריכוז של 4%.
    4. בצעו דיסקציה של המוח השלם בזהירות. השקיעו את המוח ב-4% PFA למשך 24 שעות ב- 4 °C לצורך קיבוע לאחר (postfixation).
    5. העבירו את המוח לסוכרוז בריכוז 30% עד שהרקמה שוקעת לחלוטין.
    6. הטמיע את המוח בתרכובת OCT (optimal cutting temperature).
    7. הקפיאו את הרקמה המוטמעת במהירות ואחסנו אותה בטמפרטורה של −80 °C עד לחיתוך קריוסטטי.
  2. צביעת ניסל (Nissl staining)
    1. הבא 16 µm הבאת נתחי הקריו-סגמנטים (cryosections) לטמפרטורת החדר. ייבוש של השקופיות באוויר למשך 20 דקות.
    2. שטפו את השקופיות ב-PBS למשך 2 דקות.
      הערה: יש לוודא שחתכי הרקמה נותרים מודבקים היטב לסליידים לפני הצביעה.
    3. כסו את החתכים באופן מלא בתמיסת צביעה של toluidine blue. דגרו למשך 30 דקות ב- 55 °C.
      הערה: יש לבצע אופטימיזציה אמפירית של זמן הצביעה עבור 16 µm חתכים למניעת צביעת יתר.
    4. שטפו את השקופיות קצרות במים מזוקקים למשך 10–30 שניות.
    5. בצעו דהידרציה (Differentiate) של החתכים ברצף באתנול בריכוזים של 95%, 85% ו-75%, למשך 2 דקות בכל ריכוז.
      הערה: יש להתאים את זמן הדיפרנציאציה במידת הצורך כדי למקסם את עוצמת הצביעה.
    6. בצעו שקיפות של הנסכיים פעמיים ב-xylene טרי למשך 5 דקות בכל פעם.
      הערה: יש לבצע את כל השלבים הכוללים קסילן (xylene) תחת מzלול כימי.
    7. בצעו הרכבה של החתכים באמצעות בלסם ניטרלי. הניחו בעדינות זכוכית כיסוי מעל כל חתך.
    8. דמיינו את החתכים הצבועים באמצעות מיקרוסקופ אור עם עדשה פי 20× מטרה. זיהוי אזור ה-CA1 על בסיס שכבת התאים הפירמידליים הדחוסה והאופיינית שלו בחתך קורונלי של ההיפוקמפוס. עבור כל עכבר, ננתח חתך קורונלי אחד ונרכוש שני שדות ראייה שאינם חופפים מאזור ה-CA1 של כל המיספרה היפוקמפלית.
    9. ספרו ידנית נוירונים חיוביים ל-Nissl וגופי Nissl שלמים מבחינה מורפולוגית באמצעות תוסף ספירת תאים בתוכנה לניתוח תמונות. זהו נוירונים שלמים על פי סומה שלמה, גרעין עגול עם גרעינון גלוי וחומר Nissl ציטופלזמי שופע; זהו גופי Nissl כמבנים גרנולריים או גושיים בזיפופיליים באופן אינטנסיבי בתוך הציטופלזמה הנוירונלית.
    10. חשבו את ממוצע הערכים שהתקבלו מכל השדות שנותחו כדי להפיק ערך בודד לכל חיה. ודאו שהבודק המבצע את הספירות נשאר מסווג (blinded) להקצאת הקבוצות.
  3. צביעה אימונופלואורסצנטית ל-Iba1
    1. יש לאפשר לחתכי המוח להגיע לשיווי משקל בטמפרטורת החדר לפני הצביעה.
    2. טבול את השקופיות בתמיסת שחזור אנטיגן של נתרן ציטראט ובצע שחזור אנטיגן ב- 80 °C במקלח מים למשך 25 דקות. לאחר שלב החשפנה של האנטיגן (antigen retrieval), יש להניח לשקופיות ולתמיסת החשפנה להתקרר באופן טבעי לטמפרטורת החדר.
    3. שטפו את הסבכי הרקמה שלוש פעמים בתמיסת סליין עם בופר פוספט (PBS), למשך 3 דקות בכל פעם.
    4. בצעו פרמיביליזציה (Permeabilization) לחתכים באמצעות 0.2% Triton X-10 ב-PBS למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן בצעו שלושה שטיפות ב-PBS למשך 3 דקות כל אחת.
    5. חסמו קישור לא ספציפי על ידי דגירה של החתכים עם 3% אלבומין מסרום בקר (BSA) ב-PBS למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר בתוך תא לח.
    6. שטפו את החתכים שלוש פעמים ב-PBS למשך 3 דקות בכל פעם.
    7. דללו את הנוגדן הראשוני נגד molecule 1 binding ionized calcium-binding adaptor (Iba1; 1:10) בתמיסת חסימה (3% BSA ב-PBS) והדגירו את החתכים עם הנוגדן הראשוני המדולל למשך לילה בטמפרטורה של 4 °C בתא לחות.
    8. שטוף את החתכים שלוש פעמים עם PBS למשך 3 דקות בכל פעם.
    9. דגרו את החתכים עם נוגדן עז נגד IgG של ארנב (H+L) המסומן ב-48 (בדילול 1:10) למשך 90 דקות בטמפרטורת החדר, בחשיפה מינימלית לאור (בחושך).
    10. שטפו את החתכים שלוש פעמים ב-PBS למשך 3 דקות בכל פעם, בחושך.
    11. בצעו צביעה נגדית של הגרעינים באמצעות DAPI (בדילול 1:80) למשך 5 דקות בחושך.
    12. שטפו את הנתחים שלוש פעמים ב-PBS למשך 3 דקות בכל פעם, בחושך.
    13. הצמד את החתכים באמצעות תכשיר קיבוע למניעת דהייה (antifade mounting medium), הנח זכוכיות כיסוי, והגן על החתכים מפני אור עד להדמיה.
    14. רכוש תמונות פלואורסצנציה של אזור ה-CA1 בהיפוקמפוס באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה קונפוקאלי עם עדשה של 20× מטרה. השתמש בהגדרות רכישת תמונה זהות עבור כל החתכים הכלולים בהשוואות כמותיות. עבור כל עכבר, נתח חתך קורונלי אחד ורכוש שני שדות שאינם חופפים מאזור ה-CA1 של כל המיספרות של ההיפוקמפוס.
    15. כמת את עוצמת הפלואורסצנציה הממוצעת של Iba1 באזור CA1 של ההיפוקמפוס, תוך שימוש בהגדרות סף זהות בכל התמונות. חשב את ממוצע הערכים מכל השדות כדי לקבל ערך בודד לכל חיה.

6. ניתוח סטטיסטי

  1. בצע את כל הניתוחים הסטטיסטיים באמצעות תוכנה לניתוח סטטיסטי. הצג את הנתונים כממוצע ± סטיית תקן (SD).
  2. הער את נורמליות הנתונים באמצעות מבחן Shapiro–Wilk. הער את שוויון השונויות באמצעות מבחן F.
  3. השווה בין קבוצת הביקורת לקבוצת ה-L5 laminectomy באמצעות מבחן t של Student דו-זנבי למדגמים בלתי תלויים כאשר הנחת השונויות מתקיימת. השתמש במבחן t של Welch כאשר הנחת השונויות אינה מתקיימת.
  4. הגדר את n כמספר בעלי החיים שנכללו בכל ניתוח. ערך P < 0.05 ייחשב כמשמעותי סטטיסטית.

תוצאות

כל העכברים שרדו עד לסוף הניסוי המתוכנן, אף אחד מהם לא עמד בקריטריונים שהוגדרו מראש לסיום הומני של הניסוי, וכולם נכללו בניתוחים הסופיים. התפקוד המוטורי הוערך ביום ה-3 לאחר הניתוח באמצעות ניתוחי שטח פתוח (open-field) וניתוח הליכה. לא נמצא הבדל בין הקבוצות הן במרחק הכולל שעברו והן במהירות הממוצעת במבחן השטח הפתוח, מה שמעיד על פעילות לוקומטורית ספונטנית דומה (איור 2A). באופן דומה, ניתוח ההליכה לא הראה הבדלים מובהקים בין הקבוצות באורך הצעד, בזמן העמידה, במהירות התנופה או בשטח הטביעה (איור 2B). יחד, ממצאים אלו מעידים כי פרוצדורת הלמינקטומיה ב-L5 לא גרמה לליקוי מוטורי גלוי המספיק כדי להסביר את ההבדלים העוקבים בביצועים הקוגניטיביים-התנהגותיים.

הביצועים הקוגניטיביים הוערכו באמצעות מבחן זיהוי אובייקט חדש (NOR), מבוך Y עם זרוע חדשה, ומבוך בארנס (Barnes maze). במבחן ה-NOR, קבוצת הלמינקטומיה ב-L5 הראתה מדד העדפה לאובייקט חדש (PI) נמוך באופן משמעותי מקבוצת הביקורת (איור 3A). במבוך ה-Y עם הזרוע החדשה, קבוצת הלמינקטומיה ב-L5 הראתה מדדי PI נמוכים משמעותית הן עבור הזמן ששהתה והן עבור מספר הכניסות לזרוע החדשה (איור 3B). במבוך בארנס, קבוצת הלמינקטומיה ב-L5 הראתה זמן השהיה ארוך יותר עד למציאת מוצא ומרחק נסיעה גדול יותר ביום השלישי של בדיקות מבוך בארנס (איור 3C). יחד, ממצאים התנהגותיים אלו מעידים על פגיעה בביצועים הקוגניטיביים לאחר ניתוח למינקטומיה ב-L5.

באזור ה-CA1 של ההיפוקמפוס, קבוצת הלמינקטומיה ב-L5 הראתה מספר נמוך משמעותית של נוירונים חיוביים ל-Nissl ומספר נמוך משמעותית של גופי Nissl בהשוואה לקבוצת הביקורת, דבר המעיד על נזק מבני נוירונלי (איור 4A, B). בנוסף, עוצמת הפלואורסצנציה הממוצעת של Iba1 עלתה באופן משמעותי בקבוצת הלמינקטומיה ב-L5, בדומה לעלייה בהפעלת מיקרוגליה (איור 4C, D).

figure-results-1
איור 1הליך למינקטומיה של חוליה L5 במותניים לצורך מידול של תפקוד קוגניטיבי לקוי לאחר ניתוח (POCD) בעכברים. (A(איור של יעד הניתוח בלאמינה של L5 ושל טווח החשיפה המשתרע על פני מפלסי החוליות הסמוכים (L4–L6). (B) תמונות תוך-ניתוחיות הממחישות שלבים מרכזיים בהליך למינקטומיה של חוליה L5 במותניים. (a) אזור המותניים לאחר גילוח, כאשר קו האמצע של עמוד השדרה זוהה; החיצים מצביעים על כיוון החתך העורי המתוכנן. (b) חתך עורי בקו האמצע מעל עמוד השדרה המותני. (c) חיתוך של הפסציה עם הפרדה הדרגתית של השרירים הפאראספינליים כדי לחשוף את הזקיקים הספניאליים (spinous processes) וניקוי נוסף של הרקמה סביב הזקיק הספניאלי והלמינה של L5 כדי לחשוף את הלמינה של L5 באופן מלא. (d) למינקטומיה של L5 לאחר הסרת הלמינה של L5. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2הערכה של פעילות מוטורית ומכניקת הליכה לאחר למינקטומיה גבנית ב-L5. (A) מבחן שטח פתוח (Open-field test) המציג את סך המרחק שעבר ואת המהירות הממוצעת (n = 10). (B) ניתוח הליכה המראה את אורך הפסע, זמן העמידה, מהירות התנופה ושטח הטביעה (n = 6). הנתונים מייצגים את הממוצע ± SD. מובהקות סטטיסטית מסומנת כ-ns, לא מובהק. קיצורים: Control = קבוצת ביקורת; Laminectomy = קבוצת למינקטומיה ב-L5. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3הערכות קוגניטיביות-התנהגותיות לאחר למינקטומיה של חוליה L5 בעמוד השדרה המותני. (A) מבחן זיהוי חפץ חדש (n = 10). (B) מבחן מבוך Y עם זרוע חדשה (n = 10). (C) מבחן מבוך בארנס (n = 10). הנתונים מייצגים את הממוצע ± סטיית תקן (SD). מובהקות סטטיסטית מסומנת ב-*P < 0.05, **P < 0.01, ו-***P < 0.01. קיצורים: Control = קבוצת ביקורת; Laminectomy = קבוצת למינקטומיה של L5. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4הערכה היסטולוגית של אזור ה-CA1 בהיפוקמפוס לאחר למינקטומיה לומברית ב-L5. (A) תמונות נבחרות של צביעת ניסל (Nissl) באזור CA1 של ההיפוקמפוס. (B) כימות של נוירונים חיוביים ל-Nissl (שמאלה) וגופי Nissl (ימינה) (n = 5). (כ) תמונות מייצגות של אימונופלורסצנציית Iba1 באזור CA1 של ההיפוקמפוס. סרגל קנה מידה = 100 µm. (ד') כימות של עוצמת הפלואורסצנציה הממוצעת של Iba1 (n = 6). הנתונים מייצגים את הממוצע ± סטיות תקן (SD). מובהקות סטטיסטית מסומנת כ-**P < 0.01, ו-***P < 0.01. קיצורים: Control = קבוצת ביקורת; Laminectomy = קבוצת למינקטומיה ב-L5. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

דיון

דווח על ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח בקרב מבוגרים שעברו ניתוח בעמוד השדרה10. ראיות ניסיוניות מצביעות עוד על כך שהזדקנות מגבירה את הרגישות לפגיעה קוגניטיבית ותגובות דלקתיות עצביות הקשורות לניתוח1,12. הפרוטוקול הנוכחי משלב כ-4 h של הרדמה בסובופלורן (sevoflurane) עם למינקטומיה של L5 בעכברים מזדקנים כדי לדמות פגיעה קוגניטיבית מוקדמת לאחר ניתוח. ערכו המתודולוגי העיקרי טמון באספקת הליך מעשי ונגיש לבחינת שינויים התנהגותיים והיסטולוגיים בהיפוקמפוס בעקבות ניתוח בעמוד השדרה.

מודלים פרה-קליניים ל-POCD כוללים פרדיגמות של חשיפה להרדמה בלבד, ניתוח בטן ופגיעה אורתופדית13. פרדיגמות של הרדמה בלבד מאפשרות הערכה של השפעות חומרי ההרדמה בהיעדר טראומה כירורגית14, אך אינן משחזרות את החשיפה המשולבת להרדמה ולפגיעה ברקמות. מודלים של ניתוח בטן ושבר בשוקמה (tibia) משלבים פגיעה כירורגית ושימשו לחקר ליקוי קוגניטיבי הקשור לניתוח15,16. עם זאת, אתרי הניתוח ודפוסי הפגיעה ברקמות שונים מאלו של פרוצדורות בעמוד השדרה. מכיוון שסוגה ועצימותה של הטראומה הכירורגית עשויים להשפיע על תוצאות קוגניטיביות לאחר ניתוח ועל תגובות דלקתיות מרכזיות9, יש להתחשב בהקשר הכירורגי בעת בחירת מודל פרה-קליני. לפיכך, פרוטוקול הלמינקטומיה ב-L5 הנוכחי מספק פרדיגמה ניסוייית הקשורה לניתוח בעמוד השדרה לבחינת ליקוי קוגניטיבי מוקדם לאחר ניתוח בעכברים מזדקנים.

האתגר הטכני המרכזי בפרוטוקול זה הוא הסרת כמות מספקת של עצם מהלמינה של L5 כדי לחשוף את הדורה בבירור, תוך הימנעות מפגיעה בדורה. במהלך למינקטומיה תחת ויזואליזציה ישירה, נדרש בקרה קפדנית על עומק המכשיר, כוח החיתוך וזווית ההחדרה של המספריים האופתלמיים. יש להסיר את העצם בשלבים באמצעות חיתוכים קטנים ומבוקרים לאורך שולי הלמינה. תפיסת הזקיר הספינלי של L5 באמצעות פינצטה והרמת סגמנט המותניים המנותח לזווית של כ-30° ביחס למשטח הניתוח מרחיבות את המרווח הבין-למינרי של L5–L6. תמרון זה מאפשר החדרה רדודה של קצות המספריים מתחת לקצה העצם ומפחית את הסיכון למגע עם הדורה. הסרה חלקית של העצם עלולה להגביל את החשיפה הכירורגית, בעוד שחיתוך אגרסיבי מדי או עומק החדרה מוגזם עלולים לגרום לפגיעה בדורה. דימום לא מבוקר עלול להסתיר את שדה הניתוח, לפגוע בהחלמה לאחר הניתוח ולהגביר את השונות בתוצאות ההתנהגותיות. כאשר המרווח הבין-למינרי אינו מספיק להחדרה בטוחה של קצות המספריים, יש להתאים מחדש את המיקום ואת זווית ההרמה של סגמנט המותניים המנותח במקום להגדיל את עומק ההחדרה. אם דימום מסתיר את שדה הניתוח, יש להפסיק את הסרת העצם עד להשבת ויזואליזציה נאותה, ולאחר מכן יש להסיר כל שארית עצם באופן הדרגתי.

הפרדה של שרירי הפרה-ספינליים ולמינקטומיה של L5 עשויים לתרום לכאב פוסט-אופרטיבי חולף, ורגישות מכנית תועדה לאחר למינקטומיה ניסיונית בעכברים17. Meloxicam ניתן בהתאם למשטר אנלגזי שהוגדר מראש. דווח כי הבעות פנים הקשורות לכאב פוסט-אופרטיבי בעכברים נמשכות למשך כ-36–48 h18. משטר האנלגזיה למשך 48 h נועד לכסות תקופה פוסט-אופרטיבית מוקדמת זו, ובדיקות קוגניטיביות-התנהגותיות הוחלו ביום הפוסט-אופרטיבי השלישי, לאחר השלמת משטר האנלגזיה, כדי להפחית את ההשפעה הפוטנציאלית של כאב פוסט-אופרטיבי מיידי. מבחן השטח הפתוח (open-field test) שימש במחקרי POCD ניסיוניים להערכת פעילות לוקומטורית ספונטנית ולבדיקה האם ירידה בתנועה עלולה להטות את הביצועים הקוגניטיביים-התנהגותיים19,20. בהתאם לכך, בדיקת שטח פתוח וניתוח הליכה בוצעו ביום הפוסט-אופרטיבי השלישי, לפני ההערכה הקוגניטיבית. לא נצפו הבדלים משמעותיים בין הקבוצות בפעילות הלוקומטורית בשטח הפתוח או בפרמטרי ההליכה, מה שמרמז שההבדלים הקוגניטיביים-התנהגותיים העוקבים אינם סבירים להסבר בעיקר על ידי ליקוי מוטורי גלוי. עם זאת, מכיוון שכאב פוסט-אופרטיבי ספונטני ואי-נוחות מהפצע לא הוערכו באופן ישיר, לא ניתן לשלול לחלוטין את השפעותיהם השאריות על הביצועים ההתנהגותיים. מחקרים עתידיים יוכלו לשלב הערכות ישירות של כאב פוסט-אופרטיבי ספונטני.

באופן כללי, פרוטוקול זה מספק גישה ניסיונית מעשית לחקירת ליקוי קוגניטיבי מוקדם לאחר ניתוח בעכברים מזדקנים בעקבות למינקטומיה של L5. ניתן להשתמש בו כדי לחקור את התוצאים ההתנהגותיים ואת המכניזמים שבבסיס הליקוי הקוגניטיבי הקשור לניתוחי עמוד השדרה, וכן כדי להעריך התערבויות שמטרתן למנוע או להפחית ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח. תיקוף בקבוצות גדולות יותר ובמעבדות עצמאיות יבס עוד יותר את היציבות והשחזוריות של המודל.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין ניגודי אינטרסים.

תודות

אנו מודים ל-Sanhua Fang מפלטפורמת המתקן המרכזי של בית הספר לרפואה באוניברסיטת Zhejiang, ל-Yanhong Chen ול-Xuliang Zhang ממרכז החיות של אוניברסיטת Zhejiang על התמיכה הטכנית שלהם. מחקר זה מומן על ידי הקרנות הבאות: National Natural Science Foundation of China (מספרים 82575196, 82074535, ו-U23A20508).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עכברי זכרים C57BL/6JSuzhou Industrial Park Ai'er Maite Technology Co., Ltd.SYXK2023-05מודל בעלי חיים
ANY-maze Video Tracking SoftwareStoelting Co., USA60מעקב וניתוח וידאו התנהגותי
משחה עינית ErythromycinBeijing Twinluck Pharmaceutical Co,. Ltd.H1021270מניעת ייבוש העין
פינצטה עדינהNANAקיבוע העור
פד חימוםNANAבקרת טמפרטורה
Iba1/AIF-1 (E4O4W) Rabbit Monoclonal AntibodyCell Signaling Technology17198צביעת אימונופלואורסצנציה של Iba1
ציוד הרדמה בשאיפהRWD Life Science Co., Ltd.R581Sהרדמה
MGT-PRAnhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd., ChinaMJY202512704ניתוח הליכה
מספריים מיקרו-אופתלמייםNANAהסרת עצם
תמיסת צביעת NisslHaoke Biotechnology Co., Ltd.HK203צביעת Nissl
מספרייםShang Shou Jin Zhong Surgical Instruments Jiangsu ITD.,CorpY030חתך בעור
SevofluraneShanghai Hengrui Pharmaceutical Co,. Ltd.2506231הרדמה
סדין ניתוח לשימוש חד-פעמיJiangxi Zhizheng Medical Equipment Co., Ltd.2021214021משטח לביצוע ניתוח
מכונה לקיצוץ שיער לבעלי חיים קטניםYiwu Leiben Trading Co., Ltd.2504KFZB3592-0310הסרת שיער
מחטי תפירה כירורגיות עם חוטShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., LTD.F603תפירת עור
קרם להסרת שיער VeetRECKITT BENCKISER (India) LtdNAהסרת שיער

מקורות

  1. Zhao Q, Wan H, Pan H, Xu Y. Postoperative cognitive dysfunction-current research progress. Front Behav Neurosci. 2024;18:1328790.
  2. Kong H, Xu LM, Wang DX. Perioperative neurocognitive disorders: A narrative review focusing on diagnosis, prevention, and treatment. CNS Neurosci Ther. 2022;28(8):1147-1167.
  3. Monk TG, et al. Predictors of cognitive dysfunction after major noncardiac surgery. Anesthesiology. 2008;108(1):18-30.
  4. Li X, et al. Risk factors for postoperative cognitive decline after orthopedic surgery in elderly Chinese patients: A retrospective cohort study. Clin Interv Aging. 2024;19:491-502.
  5. Krenk L, et al. Cognitive dysfunction after fast-track hip and knee replacement. Anesth Analg. 2014;118(5):1034-1040.
  6. Yang X, et al. Identification of individuals at risk for postoperative cognitive dysfunction (POCD). Ther Adv Neurol Disord. 2022;15:17562864221114356.
  7. Suraarunsumrit P, et al. Outcomes associated with postoperative cognitive dysfunction: A systematic review and meta-analysis. Age Ageing. 2024;53(7):afae160.
  8. Lin X, et al. The potential mechanism of postoperative cognitive dysfunction in older people. Exp Gerontol. 2020;130:110791.
  9. Lu B, et al. Effects of different types of non-cardiac surgical trauma on hippocampus-dependent memory and neuroinflammation. Front Behav Neurosci. 2022;16:950093.
  10. Park S, et al. Preoperative mild cognitive impairment as a risk factor of postoperative cognitive dysfunction in elderly patients undergoing spine surgery. Front Aging Neurosci. 2024;16:1292942.
  11. Xu Z, et al. Age-dependent postoperative cognitive impairment and Alzheimer-related neuropathology in mice. Sci Rep. 2014;4:3766.
  12. Zhang ZJ, et al. Aging alters Hv1-mediated microglial polarization and enhances neuroinflammation after peripheral surgery. CNS Neurosci Ther. 2020;26(3):374-384.
  13. Eckenhoff RG, et al. Perioperative neurocognitive disorder: State of the preclinical science. Anesthesiology. 2020;132(1):55-68.
  14. Guo LY, et al. Cognitive deficits after general anaesthesia in animal models: A scoping review. Br J Anaesth. 2023;130(2):e351-e360.
  15. Qiu LL, et al. NADPH oxidase 2-derived reactive oxygen species in the hippocampus might contribute to microglial activation in postoperative cognitive dysfunction in aged mice. Brain Behav Immun. 2016;51:109-118.
  16. Cibelli M, et al. Role of interleukin-1beta in postoperative cognitive dysfunction. Ann Neurol. 2010;68(3):360-368.
  17. Yamamoto S, et al. Intraoperative spinal cord stimulation mitigates central sensitization after spine surgery in mice. Spine (Phila Pa 1976). 2023;48(11):E169-E176.
  18. Matsumiya LC, et al. Using the mouse grimace scale to reevaluate the efficacy of postoperative analgesics in laboratory mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 2012;51(1):42-49.
  19. Sun L, et al. Activation of cannabinoid receptor type 2 attenuates surgery-induced cognitive impairment in mice through anti-inflammatory activity. J Neuroinflammation. 2017;14(1):138.
  20. Zhan G, et al. Anesthesia and surgery induce cognitive dysfunction in elderly male mice: The role of gut microbiota. Aging (Albany NY). 2019;11(6):1778-1790.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל לניתוח עמוד השדרההרדמה בסבופלורןבדיקת תפקוד קוגניטיביפגיעה עצבית בהיפוקמפוסשינויים נוירו-דלקתייםצביעת ניסלאימונופלואורסצנציה של Iba1

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.