מאמר שיטה

למינקטומיה לומבלית ב-L5 בעכברים מזדקנים מסוג C57BL/6J לצורך מידול של דספונקציה קוגניטיבית פוסט-אופרטיבית

48 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/71733

⸱

22 בספטמבר 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Pharmacology, Zhejiang University School of Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר למינקטומיה סטנדרטית של חוליה L5 בעכברי C57BL/6J מזדקנים, במטרה להקים מודל של ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח תוך מזעור הפגיעה המוטורית, ובכך לתמוך במחקרים התנהגותיים, היסטולוגיים ומכניסטיים של הפרעות נוירו-קוגניטיביות סביב ניתוח.

תקציר

ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח (POCD) הוא סיבוך נוירולוגי שכיח לאחר ניתוח והרדמה, במיוחד בקרב מבוגרים, והוא קשור להחלמה מושהית, אשפוז ממושך וירידה באיכות החיים. פרוצדורות אורתופדיות ופרוצדורות בעמוד השדרה קשורות לסיכון גבוה יחסית ל-POCD; עם זאת, מודלים פרה-קליניים המשקפים באופן הדוק את המאפיינים הפרי-אופרטיביים של ניתוחי עמוד השדרה נותרים מוגבלים. מודלים נפוצים, כולל לפרוטומיה ושבר בטיביה, עלולים לגרום לפגיעה מוטורית מתמשכת ולדלקת פריפרית ממושכת שעלולות להטעות את פרשנות התוצאות ההתנהגותיות-קוגניטיביות. כאן, פרוטוקול זה מתאר פרוטוקול סטנדרטי וזול למידול POCD באמצעות למינקטומיה לומברית ב-L5 תחת הרדמת sevoflurane בעכברים זכרים מסוג C57BL/6J בני 18 חודשים. הפרוצדורה מבוצעת באמצעות מכשירים כירורגיים שגרתיים ומייצרת פגיעה כירורגית מבוקרת תוך מזעור של גירעונות מוטוריים מתמשכים. התפקוד הקוגניטיבי מוערך באמצעות מבחן זיהוי אובייקט חדש, מבוך Y עם זרוע חדשה ומבוך Barnes, בעוד שפגיעה נוירונלית בהיפוקמפוס ושינויים נוירו-דלקתיים מוערכים על ידי צביעת Nissl ואימונופלורסצנציית Iba1, בהתאמה. תוצאות מייצגות מדגימות פעילות מוטורית שנשמרה, ביצועים קוגניטיביים פגועים, ירידה בשלמות הנוירונלית של ההיפוקמפוס והגברת נוירו-דלקת בהיפוקמפוס לאחר הניתוח. מודל סטנדרטי ונגיש זה מספק פלטפורמה רלוונטית קלינית לחקירת המכניזמים העומדים בבסיס הליקוי הקוגניטיבי הקשור לניתוחי עמוד השדרה ולהערכת התערבויות נוירו-פרוטקטיביות פרי-אופרטיביות מועמדות.

מבוא

ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח (POCD) מוגדר כירידה בלמידה ובזיכרון, בקשב, במהירות העיבוד ובתפקודים ניהוליים לאחר הרדמה וניתוח1, ותופעה זו משפיעה בעיקר על חולים קשישים, כאשר השכיחות המדווחת שלה נראית כמשתנה בהתאם להקשר הניתוחי ולאוכלוסיית המטופלים2,3. דווח כי POCD מופיע בתדירות גבוהה בקרב מבוגרים העוברים ניתוח אורתופדי אלקטיבי4. מבחינה קלינית, POCD עשוי להימשך שבועות עד חודשים לאחר הניתוח והוא נקשר לאשפוז ממושך ולעלייה בתמותה5,6,7. עם הזדקנות האוכלוסייה המתמשכת והעלייה במספר הניתוחים ברחבי העולם, POCD הפך לסוגיה חשובה של בריאות הציבור ושל טיפול פרי-אופרטיבי.

מבחינה פתופיזיולוגית, POCD נחשב לתסמונת רב-גורמית המופעלת על ידי טראומה כירורגית וחשיפה לחומרי הרדמה, כאשר דלקת עצבית (neuroinflammation), עקה חמצונית (oxidative stress), הפרעה בבקרת האוטופגיה ותפקוד סינפטי לקוי הם בין המנגנונים המוצעים העומדים בבסיס התפקוד הנוירונלי הלקוי באזורים הרלוונטיים לקוגניציה, כגון ההיפוקמפוס8. כדי לנתח מנגנונים אלו ולהעריך התערבויות פוטנציאליות, פותחו מגוון פרדיגמות פרה-קליניות של POCD. פרדיגמות פרה-קליניות כוללות מודלים של הרדמה בלבד, מודלים המבוססים על ניתוח בטן, ומודלים של פגיעה אורתופדית כגון שבר בשוקה (tibial fracture)9. למרות שמודלים אלו קידמו את התחום, ייתכן שהם אינם משחזרים באופן מלא מאפיינים פרי-אופרטיביים הרלוונטיים לניתוחי עמוד השדרה, וחלקם עלולים להכניס גורמים מבלים כגון ליקויים מוטוריים מתמשכים ודלקת רקמות ממושכת, המסבכים את קריאת הנתונים הקוגניטיביים ואת הפרשנות המכניסטית.

מבין האסטרטגיות הכירורגיות הזמינות, בחרנו במודל של למינקטומיה מיתנית ב-L5 כדי לחקור ליקוי קוגניטיבי מוקדם לאחר ניתוח בהקשר כירורגי סטנדרטי הרלוונטי לעמוד השדרה. הליך זה מספק פגיעה כירורגית מקומית ומבוקרת תחת הרדמה בשאיפה, ומאפשר חקירה של תגובות נוירו-דלקתיות ותפקוד קוגניטיבי לקוי לאחר הניתוח מבלי לגרום לפגיעה ניכרת בתנועתיות. באמצעות עידון שלבי הניתוח המרכזיים, פרוטוקול זה מציע שיטה סטנדרטית, מעשית וחסכונית לחקירת ליקוי קוגניטיבי הקשור לניתוחי עמוד השדרה ולהערכת אסטרטגיות של הגנה נוירונית פרי-אופרטיבית.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה ואושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת Zhejiang (מספר אישור אתי: ZJU20260153).

1. הכנה לפני הניתוח

  1. בעלי חיים ניסויים, הקצאה לקבוצות, אלגזיה וסמיות
    1. השתמש בעכברי C57BL/6J זכרים בני 18 חודשים השוקלים 30–34 g. שמור את העכברים במחזור של 12 שעות אור/חושך עם גישה חופשית למזון ומים.
    2. אפשר לעכברים להתרגל לתנאי הדיור למשך 7 ימים לפחות לפני הניתוח. לאחר ההסתגלות, הקצה את העכברים באופן אקראי לקבוצת הלמינקטומיה של L5 או לקבוצת הביקורת.
    3. הקצה לכל עכבר מספר זיהוי מקודד לפני הפרוצדורות הניסוייות. שמור על קוד ההקצאה לקבוצות כדי שניתן יהיה לבצע את ההערכות ההתנהגותיות באופן סמיות לטיפול.
    4. העמד את העכברים בקבוצת הלמינקטומיה של L5 תחת הרדמה של sevoflurane, ולאחריה למינקטומיה מיתנית ב-L5. אל תחשף את העכברים בקבוצת הביקורת להרדמה ב-sevoflurane, להכנת אזור הניתוח או להתערבות כירורגית.
    5. תן meloxicam תת-עורית במינון של 2 mg/kg לעכברים בשתי הקבוצות. תן את המנה הראשונה לאחר השראת ההרדמה בקבוצת הלמינקטומיה של L5 ובנקודת הזמן המקבילה לסיום הניתוח בקבוצת הביקורת.
    6. תן מנות המשך של meloxicam תת-עורית במינון של 2 mg/kg בכל 24 h למשך 48 h לעכברים בשתי הקבוצות. שמור, טפל ונטר את שתי הקבוצות תחת אותם תנאים לאורך כל התקופה הניסויית.
    7. בצע את כל ההערכות ההתנהגותיות על פי אותו לוח זמנים ניסויי עבור שתי הקבוצות. ודא שהחוקר המבצע את ההערכות ההתנהגותיות נשאר סמיות להקצאה לקבוצות.
  2. סטריל את כל כלי הניתוח וחטא את מרחב העבודה הכירורגי. חמם מראש פד חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף במהלך ההרדמה. הכן meloxicam למתן פרי-אופרטיבית.
  3. הפעל את מכונת הרדמת הגז והנח את העכבר בתא השראה. השרה של הרדמה כללית עם 3–5% sevoflurane למשך 3–5 min תוך שמירה על קצב זרימת חמצן של 1 L/min.
  4. העבר את העכבר המורדם לפלטפורמת הניתוח. שמור על ההרדמה עם 1.5–3% sevoflurane המועבר דרך מסכת הרדמה בקצב זרימת חמצן של 0.5–0.8 L/min. תן meloxicam תת-עורית במינון של 2 mg/kg. משך ההרדמה הכולל, שנמדד מתחילת השראת ה-sevoflurane, הוא כ-4 h. התאם את ריכוז ה-sevoflurane לפי הצורך כדי לשמור על מישור הרדמה כירורגי יציב.
  5. מקם את העכבר במצב שכיבה על הבטן עם עמוד השדרה המיתני הפונה כלפי מעלה. קבע בעדינות את הגפיים הקדמיות בעזרת סרט הדבקה כדי לייצב את בעל החיים ולאפשר גישה ללא הפרעות לשדה הניתוחי של L5.
  6. אשר עומק הרדמה מספק על ידי וידוא היעדר רפלקס נסיגת כף הרגל. מרח משחה עינית למניעת התייבשות של הקרנית.
  7. הסר שיער מאזור קו האמצע המיתני (בערך L3–S1) באמצעות תספורת לבעלי חיים קטנים. חטא את העור החשוף עם 75% ethanol, ולאחר מכן povidone-iodine, וחזור על הפעולה 2–3 פעמים כדי להבטיח תנאים אספטיים.

2. ניתוח למינקטומיה גבנית ב-L5

הערה: בפרוטוקול הנוכחי, כל השלבים הכירורגיים בוצעו תחת ראייה ישירה, ללא שימוש בסטראאו-מיקרוסקופ או בעדשות הגדלה.

  1. הנח את העכבר המורדם במצב שכיבה על הבטן (prone) על פלטפורמה כירורגית שחוממה מראש. קבע את הגפיים הקדמיות באמצעות סרט הדבקה כדי לייצב את הגוף ולחשוף באופן מלא את אזור המותניים (איור 1).
  2. זהה את גובה חוליה L5 באמצעות נקודות ציון חיצוניות. בצע מישוש (palpation) של רכסי הכסית (iliac crests) משני הצדדים ושרטט קו רוחבי דמיוני המחבר את הנקודות הגבוהות ביותר שלהם.
  3. השתמש בקו הרוחבי כנקודת ציון מקורבת למרווח הבין-חולייתי L5–L6. מרכז את החתך המתוכנן בעור מעט קראניאלית (לכיוון הראש) לקו זה כדי להתמקד בלאמינה (lamina) של L5.
  4. חטא את אזור הניתוח. בצע חתך עורי אורכי בקו האמצע, באורך של כ-1.5–2.0 cm מעל גובה L5 שנקבע מראש, כדי לחשוף את אזור L4–L6.
  5. הרחק את קצוות העור באמצעות פינסטה סטרילית. חשוף את הפסציה הדורסלית וזהה את תפר הפסציה (fascial raphe) בקו האמצע.
  6. אשש את גובה החוליה לאחר חשיפת עמוד השדרה. זהה את המפרק הלומבסקרלי (lumbosacral junction) ואת החוליה המותנית הקודאלית (זנבית) ביותר.
  7. זהה את L5 כחוליה הנמצאת מיד קראניאלית ל-L6, כיוון שעכברי C57BL/6 הם בדרך כלל בעלי שש חוליות מותניות. אשש את הגובה על ידי ספירה של שתי חוליות קראניאלית מהמפרק הלומבסקרלי.
  8. צור פתח קטן לאורך תפר הפסציה בקו האמצע. הרחק את השרירים הפאראספינליים משני הצדדים תחת ראייה ישירה.
  9. הפרד את השרירים הסמוכים לזיז הספין של L5 כדי לחשוף את הלאמינה שמתחתיו. הרחב את החשיפה קראניאלית עד לזיז הספין של L4 וקודאלית עד לזיז הספין של L6, עד שכל שלושת זיזי הספין נראים בבירור.
  10. בצע דיסקציה קהה בעיקרה, סמוך לעצם, באמצעות מקלוני צמר גפן או פינסטה עדינה. השתמש בדיסקציה חדה רק במידת הצורך לשחרור הידבקויות פסציאליות ולצמצום הדימום.
  11. שמור על הרחקה לטרלית באמצעות מקלוני צמר גפן כדי לחשוף לחלוטין את לאמינה L5 ואת המרווח הבין-לאמינרי L5–L6. אשש שוב את גובה החוליה לפני ההמשך.
  12. אחז בעדינות את זיז הספין של L5 באמצעות פינסטה והרם את זיז הספין ואת עמוד השדרה המותני הסמוך לזווית של כ-30° ביחס לפלטפורמה הכירורגית כדי להרחיב את המרווח הבין-לאמינרי L5–L6.
  13. הכנס את קצותיה הסגורות של מספרי האופתלמיקה אל תוך המרווח הבין-לאמינרי L5–L6 תחת ראייה ישירה. התקדם עם המספריים לאורך מישור רדוד מיד מתחת לקצה הקודאלי של לאמינה L5.
  14. פתח מעט את המספריים כדי ליצור את הפתח העצמי הראשוני. הגדל את חלון הלמינקטומיה על ידי הסרה רצפית של שברי עצם קטנים לאורך שולי הלאמינה. הגבל את הסרת העצם ללאמינה הדורסלית של L5 והימנע מהרחבת החלון העצמי לטרלית אל תוך המפרקים הפצטליים (facet joints) משני הצדדים.
  15. הימנע מעומק הכנסה מוגזם ומכוח חיתוך רב מדי כדי למנוע פגיעה בדורה (dura).
  16. המשך בהסרת הלאמינה באופן מדורג עד שהדורה מטר (dura mater) נראית בבירור דרך החלון העצמי.
  17. בדוק את שדה הניתוח בקפידה. אשש את היעדר דימום פעיל וודא שהדורה מטר נותרה שלמה.
  18. שטוף את אזור הניתוח בתמיסת סליין סטרילית חמימה. השג המוסטזה באמצעות לחיצה עדינה.
  19. סגור את הפצע בשכבות. סגור את העור באמצעות תפרי נילון 6-0 וחטא את אתר החתך.
  20. לאחר סגירת הפצע, המשך בהרדמה בסבופלורן עד שמשך ההרדמה הכולל יגיע לכ-4 h. לאחר מכן הפסק את מתן הסבופלורן ועבור לטיפול פוסט-אופרטיבי.

3. טיפול לאחר ניתוח

  1. בנקודת הזמן התואמת לסיום הניתוח בקבוצת הלמינקטומיה, ניתן meloxicam תת-עורי במינון של 2 mg/kg לעכברים בקבוצת הביקורת. הניחו כל עכבר מקבוצת הלמינקטומיה על פד חימום בבקרה תרמית ושמרו על טמפרטורת הגוף עד שהעכבר יתעורר מההרדמה ויפגין נשימה ספונטנית יציבה ופעילות מוטורית.
  2. החזירו כל עכבר מקבוצת הלמינקטומיה לכלובו לאחר התאוששות מלאה מההרדמה. לאחר מכן, עקבו אחר בעל החיים עד להבחנה בהליכה תקינה. ניתן מנות המשך של meloxicam תת-עורי במינון של 2 mg/kg מדי 24 שעות למשך 48 שעות לעכברים בשתי הקבוצות.
  3. בדקו מדי יום את חתך הניתוח ואת תקינות התפרים עד היום השלישי לאחר הניתוח. הרדימו מחדש את העכבר והחליפו תפרים רפופים או קרועים במידת הצורך.
  4. בדקו את החתך מדי יום כדי לזהות נפיחות, דימום, הפרשה או סימנים לדלקת מקומית.
  5. עקבו אחר משקל הגוף, התנהגות הטיפוח, פעילות ספונטנית וצריכת מזון ומים לאורך כל התקופה שלאחר הניתוח.
  6. בצעו הריקה הומנית לכל עכבר לפני נקודת הסיום המתוכננת של הניסוי, אם מתקיים אחד מקריטריוני סיום ההומניים שהוגדרו מראש: איבוד של ≥20% ממשקל הגוף לפני הניתוח; אנורקסיה מלאה למשך 24 שעות או צריכת מזון הנמוכה מ-50% מהכמות הרגילה למשך 3 ימים רצופים; חוסר יכולת או רתיעה ניכרת לעמוד או להגיע למזון או למים שנמשכת 24 שעות לאחר ההתאוששות מההרדמה; או מצב גוסי המאופיין בדיכאון ניכר הנלווה לטמפרטורת גוף הנמוכה מ-37 °C.

4. הערכה התנהגותית של POCD

  1. מבחן שדה פתוח (בקרת מוטוריקה; היום השלישי לאחר הניתוח)
    1. בצע את מבחן השדה הפתוח בזירה של 45 cm × 45 cm עם דפנות בגובה 40 cm תחת רמת תאורה של 20 lux. מקם את מצלמת הווידאו ישירות מעל מרכז הזירה כך שכל אזור הבדיקה יהיה בטווח הראייה.
    2. הנח את העכבר במרכז הזירה והפעל את מעקב הווידאו מיד לאחר ההנחה. אפשר לעכבר לחקור את הסביבה בחופשיות במשך 5 min. נתח את כל הסשן של 5 min וחשב את סך המרחק שעבר ואת מהירות התנועה הממוצעת באמצעות מערכת מעקב הווידאו.
  2. ניתוח הליכה (Gait analysis)
    1. בצע ניתוח הליכה ביום השלישי לאחר הניתוח באמצעות מערכת אוטומטית לניתוח הליכה.
    2. מקם כל עכבר בקצה אחד של מסלול ההליכה ואפשר לו לחצות את המסלול בחופשיות. הקלט את טביעות הכפיים במהלך התנועה באמצעות מצלמת המהירות הגבוהה המוטמעת במערכת ניתוח ההליכה.
    3. הקלט ניסיונות הליכה עבור כל עכבר ואסוף שלושה ריצות תקינות עם תנועה קדימה רציפה לאורך המסלול לצורך ניתוח לאחר מכן.
    4. נתח את נתוני טביעות הכפיים שהוקלטו באמצעות התוכנה לניתוח הליכה. סקור את טביעות הכפיים שזוהו באופן אוטומטי ותקן ידנית את הסיווג של הכף הקדמית הימנית, הכף הקדמית השמאלית, הכף האחורית הימנית והכף האחורית השמאלית במידת הצורך לפני הפקת פרמטרי ההליכה.
    5. כמת את אורך הצעד, זמן העמידה, מהירות התנופה ושטח הטביעה, וחשב את ערך הממוצע משלוש הריצות התקינות עבור כל עכבר לצורך ניתוח סטטיסטי.
  3. מבוך בארנס (Barnes maze) (למידה וזיכרון מרחבי; ימים 4–6 לאחר הניתוח)
    ​הערה: בצע את בדיקת מבוך בארנס פעם ביום במשך שלושה ימים רצופים החל מהיום הרביעי לאחר הניתוח. בצע את הבדיקה באותו חלון זמן יומי כדי לצמצם שונות צירקדית.
    1. מקם את תיבת המפלט מתחת לחור היעד שהוגדר. שמור על אותו מיקום יעד לאורך כל הניסוי.
    2. מקם את העכבר במרכז המבוך כדי להתחיל בכל ניסיון. אפשר לעכבר לחפש את תיבת המפלט למשך עד 3 min. סיים את הניסיון כאשר העכבר נכנס לתיבת המפלט.
    3. הנח את העכבר בעדינות אל חור היעד אם לא הצליח לאתר את תיבת המפלט תוך 3 min. אפשר לעכבר להישאר לזמן קצר בתיבת המפלט כדי לחזק את הלמידה של המשימה.
    4. הקלט את זמן ההגעה למפלט (escape latency) ואת מרחק הנסיעה באמצעות מערכת מעקב הווידאו. עבור ניסיונות שבהם העכבר לא הצליח להיכנס לתיבת המפלט תוך 3 min, הגדר זמן הגעה למפלט של 180 s. כלול בניתוח הסטטיסטי רק את זמן ההגעה למפלט ומרחק הנסיעה שהוקלטו במהלך הסשן האחרון ביום השלישי.
  4. זיהוי חפץ חדש (Novel object recognition) (זיכרון זיהוי; ימים 3–4 לאחר הניתוח)
    ​הערה: השתמש באותה זירה ובאותה מערכת מעקב וידאו כפי שמתואר במבחן השדה הפתוח. השתמש בסשן השדה הפתוח ביום השלישי לאחר הניתוח כדי להרגיל את העכברים לזירת הבדיקה לפני האימון לזיהוי חפץ חדש.
    1. מקם שני חפצים גליליים זהים במיקומים סימטריים בזירה במהלך סשן האימון. אפשר לעכבר לחקור את הסביבה בחופשיות במשך 5 min.
    2. לאחר מרווח שימור של 1 h, החלף חפץ גלילי מוכר אחד בחפץ חדש בצורת קובייה. בצע איזון (counterbalance) למיקום החפץ החדש בין העכברים כדי לצמצם העדפה פוטנציאלית לצד מסוים. אפשר לעכבר לחקור במשך 5 min.
    3. הקלט את זמן החקירה של החפצים המוכרים והחדשים באמצעות מערכת מעקב הווידאו. כלול בניתוח רק עכברים עם זמן חקירת חפצים כולל של לפחות 3 s.
    4. חשב את מדד ההעדפה (PI) כך:
      נוסחה למדד העדפה: PI = T_novel / (T_novel + T_familiar) × 100%.
      הגדר את Tnovel ואת Tfamiliar כזמנים שהוקדשו לחקירת החפצים החדשים והמוכרים, בהתאמה, במהלך סשן הבדיקה.
  5. מבוך Y עם זרוע חדשה (Novel arm Y-maze) (זיכרון זיהוי מרחבי; היום החמישי לאחר הניתוח)
    1. בצע את הבדיקה במבוך בצורת Y הכולל שלוש זרועות זהות המופרדות ב-120°. חסום באופן אקראי זרוע אחת באמצעות דלת אטומה והגדר זרוע זו כזרוע החדשה.
    2. בחר באופן אקראי אחת משתי הזרועות הפתוחות כזרוע ההתחלה. הגדר את הזרוע הפתוחה הנותרת כזרוע המוכרת. מקם את העכבר בקצה זרוע ההתחלה ואפשר לו לחקור את שתי הזרועות הנגישות בחופשיות במשך 5 min.
    3. לאחר מרווח של 1 h בין ניסיונות, הסר את הדלת האטומה והחזר את העכבר לקצה אותה זרוע התחלה.
    4. אפשר לעכבר לחקור את כל שלוש הזרועות בחופשיות במשך 5 min.
    5. הגדר כניסה לזרוע כאשר מרכז הגוף המעקוב נכנס מאזור המרכז לאזור זרוע שהוגדר מראש. הקלט את מספר הכניסות ואת הזמן שהוקדש בכל זרוע באמצעות מערכת מעקב הווידאו.
    6. חשב את מדד ההעדפה לזרוע החדשה המבוסס על זמן כך:
      נוסחה לחישוב זמן עבור מחקר התנהגותי; משוואה המראה את אחוז הזמן בזרוע החדשה.
      הגדר את Tnovel, Tstart, ו-Tfamiliar כזמן שהוקדש לזרוע החדשה, זרוע ההתחלה והזרוע המוכרת, בהתאמה.
    7. חשב את מדד ההעדפה המבוסס על כניסות כך:
      נוסחה לכניסות לזרוע החדשה, E_novel/E_total, משוואת ניתוח לניסוי התנהגותי.
      הגדר את Enovel כמספר הכניסות לזרוע החדשה, ואת Etotal כמספר הכניסות הכולל לכל שלוש הזרועות במהלך ניסוי הבדיקה.

5. עיבוד רקמות, צביעת ניסל (Nissl) וצביעה אימונופלואורסצנטית

  1. עיבוד רקמה
    1. בנקודת הסיום הניסויית שנקבעה, הרדמה את העכבר הרדמה עמוקה באמצעות 3% sevoflurane המוגש בקצב זרימת חמצן של 2 L/min.
    2. אשש עומק הרדמה הולם על ידי היעדר רפלקס נסיגה של הכף (pedal withdrawal reflex). תוך שמירה על הרדמה עמוקה ולפני עצירה של הלב, בצע פרפוזיה טרנסקרדיאלית עם 20 mL של phosphate-buffered saline (PBS) כדי להסיר דם מכלי הדם.
    3. בצע פרפוזיה מיידית של העכבר עם 20 mL של 4% paraformaldehyde (PFA).
    4. בצע דיסקציה של המוח השלם בזהירות. טבול את המוח ב-4% PFA למשך 24 h בטמפרטורה של 4 °C לצורך פוסט-פיקסציה.
    5. העבר את המוח ל-30% sucrose עד שהרקמה שוקעת לחלוטין.
    6. טמיין את המוח בתרכובת optimal cutting temperature (OCT).
    7. הקפא את הרקמה המטומנת במהירות ואחסן אותה ב-−80 °C עד לביצוע קריו-חתכים.
  2. צביעת ניסל (Nissl staining)
    1. הבאת קריו-חתכים בעובי 16 µm לטמפרטורת החדר. ייבש את השקופיות באוויר למשך 20 min.
    2. שטוף את השקופיות ב-PBS למשך 2 min.
      הערה: ודא שחתכי הרקמה נותרים מקובעים היטב לשקופיות לפני הצביעה.
    3. כסה את החתכים לחלוטין בתמיסת צביעה של toluidine blue. דגירה למשך 30 min ב-55 °C.
      הערה: בצע אופטימיזציה של זמן הצביעה באופן אמפירי עבור חתכים של 16 µm כדי למנוע צביעת יתר.
    4. שטוף את השקופיות קצרות במים מזוקקים למשך 10–30 s.
    5. בצע דיפרנציאציה של החתכים באופן רצופי ב-95%, 85% ו-75% ethanol למשך 2 min כל אחד.
      הערה: התאם את זמן הדיפרנציאציה במידת הצורך כדי למטב את עוצמת הצביעה.
    6. בצע שקיפות (clearing) של השקופיות פעמיים ב-xylene טרי למשך 5 min כל פעם.
      הערה: בצע את כל שלבי ה-xylene בתוך מ 빠르게 מנדף כימיים.
    7. קבע את החתכים באמצעות neutral balsam. הנח זכוכית כיסוי בעדינות על כל חתך.
    8. דמה את החתכים הצבועים באמצעות מיקרוסקופ אור עם עדשה אובייקטיבית של 20×. זהה את אזור ה-CA1 על בסיס שכבת התאים הפירמידליים הדחוסה האופיינית לו בחתך קורונלי של ההיפוקמפוס. עבור כל עכבר, נתח חתך קורונלי אחד ודגום שני שדות שאינם חופפים מאזור ה-CA1 של כל המיספרות של ההיפוקמפוס.
    9. ספור ידנית נוירונים חיוביים לצביעת ניסל שהם שלמים מורפולוגית וגופי ניסל באמצעות תוסף ספירת תאים בתוכנת ניתוח תמונות. זהה נוירונים שלמים לפי סומה שלמה, גרעין עגול עם גרעינון (nucleolus) נראה, וחומר ניסל ציטופלזמי שופע; זהה גופי ניסל כמבנים גרנולריים או גושים בסיפילים עזים בתוך הציטופלזמה הנוירונלית.
    10. חשב ממוצע של הערכים שהתקבלו מכל השדות שנותחו כדי להפיק ערך יחיד לכל בעל חיים. ודא שהצופה המבצע את הספירות נשאר עיוור להקצאת הקבוצות.
  3. צביעת אימונופלורסנציה ל-Iba1
    1. המתן עד שחתכי המוח יגיעו לטמפרטורת החדר לפני הצביעה.
    2. טבול את השקופיות בתמיסת שחזור אנטיגן של sodium citrate ובצע שחזור אנטיגן באמבט מים של 80 °C למשך 25 min. לאחר שחזור האנטיגן, אפשר לשקופיות ולתמיסת שחזור האנטיגן להתקרר באופן טבעי לטמפרטורת החדר.
    3. שטוף את החתכים שלוש פעמים ב-phosphate-buffered saline (PBS) למשך 3 min כל פעם.
    4. בצע פרמיאביליזציה של החתכים עם 0.2% Triton X-100 ב-PBS למשך 30 min בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שלוש שטיפות ב-PBS למשך 3 min כל פעם.
    5. חסום קישור לא ספציפי על ידי דגירה של החתכים עם 3% bovine serum albumin (BSA) ב-PBS למשך 1 h בטמפרטורת החדר בתא לחות.
    6. שטוף את החתכים שלוש פעמים ב-PBS למשך 3 min כל פעם.
    7. דלל את הנוגדן הראשוני נגד ionized calcium-binding adaptor molecule 1 (Iba1; 1:100) בתמיסת חסימה (3% BSA ב-PBS) ודגירה את החתכים עם הנוגדן הראשוני המדולל למשך הלילה ב-4 °C בתא לחות.
    8. שטוף את החתכים שלוש פעמים ב-PBS למשך 3 min כל פעם.
    9. דגירה את החתכים עם 488-conjugated goat anti-rabbit IgG (H+L) (1:1000) למשך 90 min בטמפרטורת החדר בחושך.
    10. שטוף את החתכים שלוש פעמים ב-PBS למשך 3 min כל פעם בחושך.
    11. בצע צביעת נגדית לגרעינים עם DAPI (1:8000) למשך 5 min בחושך.
    12. שטוף את החתכים שלוש פעמים ב-PBS למשך 3 min כל פעם בחושך.
    13. קבע את החתכים עם מדיום קיבוע antifade, הנח זכוכית כיסוי, והגן על החתכים מאור עד לצילום.
    14. רכוש תמונות פלואורסצנציה של אזור ה-CA1 בהיפוקמפוס באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה קונפוקלי עם עדשה אובייקטיבית של 20×. השתמש בהגדרות רכישת תמונה זהות לכל החתכים הנכללים בהשוואות כמותיות. עבור כל עכבר, נתח חתך קורונלי אחד ודגום שני שדות שאינם חופפים מאזור ה-CA1 של כל המיספרות של ההיפוקמפוס.
    15. כמת את עוצמת הפלואורסצנציה הממוצעת של Iba1 באזור ה-CA1 של ההיפוקמפוס עם הגדרות סף (threshold) זהות בכל התמונות. חשב ממוצע של הערכים מכל השדות כדי לקבל ערך יחיד לכל בעל חיים.

6. ניתוח סטטיסטי

  1. בצע את כל הניתוחים הסטטיסטיים באמצעות תוכנה לניתוח סטטיסטי. הצג את הנתונים כממוצע ± סטיית תקן (SD).
  2. הער את נורמליות הנתונים באמצעות מבחן Shapiro–Wilk. הער את שוויון השונויות באמצעות מבחן F.
  3. השווה בין קבוצת הביקורת לקבוצת הלאמינקטומיה של L5 באמצעות מבחן t של Student דו-זנבי למדגמים בלתי תלויים כאשר הנחת השונות מתקיימת. השתמש במבחן t של Welch כאשר הנחת השונות אינה מתקיימת.
  4. הגדר את n כמספר בעלי החיים שנכללו בכל ניתוח. התייחס לערך P < 0.05 כבעל מובהקות סטטיסטית.

תוצאות

כל העכברים שרדו עד לסיום הניסוי המתוכנן, אף אחד מהם לא עמד בקריטריונים שהוגדרו מראש לסיום הומני, וכולם נכללו בניתוחים הסופיים. התפקוד המוטורי הוערך ביום השלישי לאחר הניתוח באמצעות ניתוחי שטח פתוח (open-field) והליכה. לא נמצא הבדל בין הקבוצות הן במרחק הכולל שעברו והן במהירות הממוצעת במבחן השטח הפתוח, מה שמעיד על פעילות מוטורית ספונטנית דומה (איור 2A). ניתוח ההליכה הראה באופן דומה כי אין הבדלים מובהקים בין הקבוצות באורך הצעד, זמן העמידה, מהירות התנופה או שטח ההדפסה (איור 2B). יחד, ממצאים אלו מעידים כי פרוצדורת הלמינקטומיה ב-L5 לא גרמה לפגיעה מוטורית גלויה מספיקה כדי להסביר את ההבדלים העוקבים בביצועים קוגניטיביים-התנהגותיים.

הביצועים הקוגניטיביים הוערכו באמצעות מבחן זיהוי אובייקט חדש (NOR), מבוך Y בעל זרוע חדשה ומבוך בארנס (Barnes maze). במבחן ה-NOR, קבוצת הלימנקטומיה ב-L5 הראתה מדד העדפה לאובייקט חדש (PI) נמוך משמעותית מקבוצת הביקורת (איור 3A). במבוך Y בעל זרוע חדשה, קבוצת הלימנקטומיה ב-L5 הראתה מדדי PI נמוכים משמעותית הן עבור הזמן ששהתה והן עבור מספר הכניסות לזרוע החדשה (איור 3B). במבוך בארנס, קבוצת הלימנקטומיה ב-L5 הראתה זמן בריחה (escape latency) ארוך יותר ומרחק נסיעה גדול יותר ביום השלישי של הבדיקה במבוך בארנס (איור 3C). יחד, ממצאים התנהגותיים אלו מעידים על פגיעה בביצועים הקוגניטיביים לאחר ניתוח לימנקטומיה ב-L5.

באזור CA1 של ההיפוקמפוס, קבוצת הלמינקטומיה ב-L5 הראתה מספר נמוך משמעותית של נוירונים חיוביים ל-Nissl ומספר נמוך משמעותית של גופי Nissl בהשוואה לקבוצת הביקורת, דבר המעיד על נזק מבני נוירונלי (איור 4A, B). בנוסף, עוצמת הפלואורסצנציה הממוצעת של Iba1 הייתה גבוהה משמעותית בקבוצת הלמינקטומיה ב-L5, ממצא העולה בקנה אחד עם עלייה באקטיבציה של מיקרוגליה (איור 4C, D).

תרשים ותהליך של נתיחה של עמוד השדרה המותני בעכבר המראים זיהוי של חוליות L4, L5, L6.
איור 1: הליך למינקטומיה (laminectomy) של L5 לצורך מידול של תפקוד קוגניטיבי לקוי לאחר ניתוח (POCD) בעכברים. (A) איור של יעד הניתוח בלמינה של L5 וטווח החשיפה המקיף את רמות החוליות הסמוכות (L4–L6). (B) תמונות תוך-ניתוחיות הממחישות שלבים מרכזיים בהליך הלמינקטומיה של L5. (a) האזור המותני לאחר גילוח, כאשר קו האמצע של עמוד השדרה זוהה; החיצים מצביעים על כיוון החתך המתוכנן בעור. (b) חתך עור בקו האמצע מעל עמוד השדרה המותני. (c) חתך של הפסציה עם הפרדה מדורגת של השרירים הפרא-ספינליים כדי לחשוף את הזקיקים הספינליים (spinous processes) וניקוי נוסף של הרקמה סביב הזקיק הספינלי והלמינה של L5 כדי לחשוף באופן מלא את למינה של L5. (d) למינקטומיה של L5 לאחר הסרת הלמינה של L5. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

מחקר השוואה בין למניקטומי לביקורת; נתיב תנועה, תרשים עמודות, השוואת נתוני הליכה, תוצאות הניסוי.
איור 2: הערכת פעילות מוטורית והליכה לאחר למניקטומי מותנית ב-L5. (A>) מבחן שטח פתוח המראה את סך המרחק שעבר והמהירות הממוצעת (n = 10). (B>) ניתוח הליכה המראה אורך צעד, זמן עמידה, מהירות תנופה ושטח טביעת רגל (n = 6). הנתונים מייצגים ממוצע ± SD. מובהקות סטטיסטית מסומנת כ-ns, לא מובהק. קיצורים: Control = קבוצת ביקורת; Laminectomy = קבוצת למניקטומי L5. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

דיאגרמות של מבוכים ותרשימי עמודות המנתחים את ההשפעות של קבוצת הביקורת לעומת למינקטומיה בביצועי משימה קוגניטיבית.
איור 3: הערכות התנהגות קוגניטיבית לאחר למינקטומיה מיתנית ב-L5. (A) מבחן זיהוי חפץ חדש (n = 10). (B) מבחן מבוך Y עם זרוע חדשה (n = 10). (C) מבחן מבוך בארנס (n = 10). הנתונים מייצגים את הממוצע ± SD. מובהקות סטטיסטית מסומנת כ-*P < 0.05, **P < 0.01, ו-***P < 0.001. קיצורים: Control = קבוצת ביקורת; Laminectomy = קבוצת למינקטומיה ב-L5. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

תוצאות למינקטומיה; תמונות היסטולוגיות ותרשימי עמודות של עוצמת IBA1 בקבוצת הביקורת ובקבוצת הלמינקטומיה.
איור 4: הערכה היסטולוגית של אזור ה-CA1 בהיפוקמפוס לאחר למינקטומיה מיתנית ב-L5. (A) תמונות מייצגות של צביעת Nissl באזור ה-CA1 בהיפוקמפוס. (B) כימות של נוירונים חיוביים ל-Nissl (שמאל) וגופי Nissl (ימין) (n = 5). (C) תמונות מייצגות של אימונופלואורסנציה של Iba1 באזור ה-CA1 בהיפוקמפוס. סרגל קנה מידה = 100 µm. (D) כימות של עוצמת הפלואורסנציה הממוצעת של Iba1 (n = 6). הנתונים מייצגים ממוצע ± SD. מובהקות סטטיסטית מסומנת כ-**P < 0.01, ו-***P < 0.001. קיצורים: Control = קבוצת ביקורת; Laminectomy = קבוצת למינקטומיה ב-L5. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

דיון

דווח על ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח בקרב מבוגרים שעברו ניתוח בעמוד השדרה10. ראיות ניסיוניות מצביעות עוד על כך שהזדקנות מגבירה את הרגישות לפגיעה קוגניטיבית ותגובות דלקתיות עצביות הקשורות לניתוח1,12. הפרוטוקול הנוכחי משלב כ-4 h של הרדמה בסובופלורן (sevoflurane) עם למינקטומיה של L5 בעכברים מזדקנים כדי לדמות פגיעה קוגניטיבית מוקדמת לאחר ניתוח. ערכו המתודולוגי העיקרי טמון באספקת הליך מעשי ונגיש לבחינת שינויים התנהגותיים והיסטולוגיים בהיפוקמפוס בעקבות ניתוח בעמוד השדרה.

מודלים פרה-קליניים ל-POCD כוללים פרדיגמות של חשיפה להרדמה בלבד, ניתוח בטן ופגיעה אורתופדית13. פרדיגמות של הרדמה בלבד מאפשרות הערכה של השפעות חומרי ההרדמה בהיעדר טראומה כירורגית14, אך אינן משחזרות את החשיפה המשולבת להרדמה ולפגיעה ברקמות. מודלים של ניתוח בטן ושבר בשוקמה (tibia) משלבים פגיעה כירורגית ושימשו לחקר ליקוי קוגניטיבי הקשור לניתוח15,16. עם זאת, אתרי הניתוח ודפוסי הפגיעה ברקמות שונים מאלו של פרוצדורות בעמוד השדרה. מכיוון שסוגה ועצימותה של הטראומה הכירורגית עשויים להשפיע על תוצאות קוגניטיביות לאחר ניתוח ועל תגובות דלקתיות מרכזיות9, יש להתחשב בהקשר הכירורגי בעת בחירת מודל פרה-קליני. לפיכך, פרוטוקול הלמינקטומיה ב-L5 הנוכחי מספק פרדיגמה ניסוייית הקשורה לניתוח בעמוד השדרה לבחינת ליקוי קוגניטיבי מוקדם לאחר ניתוח בעכברים מזדקנים.

האתגר הטכני המרכזי בפרוטוקול זה הוא הסרת כמות מספקת של עצם מהלמינה של L5 כדי לחשוף את הדורה בבירור, תוך הימנעות מפגיעה בדורה. במהלך למינקטומיה תחת ויזואליזציה ישירה, נדרש בקרה קפדנית על עומק המכשיר, כוח החיתוך וזווית ההחדרה של המספריים האופתלמיים. יש להסיר את העצם בשלבים באמצעות חיתוכים קטנים ומבוקרים לאורך שולי הלמינה. תפיסת הזקיר הספינלי של L5 באמצעות פינצטה והרמת סגמנט המותניים המנותח לזווית של כ-30° ביחס למשטח הניתוח מרחיבות את המרווח הבין-למינרי של L5–L6. תמרון זה מאפשר החדרה רדודה של קצות המספריים מתחת לקצה העצם ומפחית את הסיכון למגע עם הדורה. הסרה חלקית של העצם עלולה להגביל את החשיפה הכירורגית, בעוד שחיתוך אגרסיבי מדי או עומק החדרה מוגזם עלולים לגרום לפגיעה בדורה. דימום לא מבוקר עלול להסתיר את שדה הניתוח, לפגוע בהחלמה לאחר הניתוח ולהגביר את השונות בתוצאות ההתנהגותיות. כאשר המרווח הבין-למינרי אינו מספיק להחדרה בטוחה של קצות המספריים, יש להתאים מחדש את המיקום ואת זווית ההרמה של סגמנט המותניים המנותח במקום להגדיל את עומק ההחדרה. אם דימום מסתיר את שדה הניתוח, יש להפסיק את הסרת העצם עד להשבת ויזואליזציה נאותה, ולאחר מכן יש להסיר כל שארית עצם באופן הדרגתי.

הפרדה של שרירי הפרה-ספינליים ולמינקטומיה של L5 עשויים לתרום לכאב פוסט-אופרטיבי חולף, ורגישות מכנית תועדה לאחר למינקטומיה ניסיונית בעכברים17. Meloxicam ניתן בהתאם למשטר אנלגזי שהוגדר מראש. דווח כי הבעות פנים הקשורות לכאב פוסט-אופרטיבי בעכברים נמשכות למשך כ-36–48 h18. משטר האנלגזיה למשך 48 h נועד לכסות תקופה פוסט-אופרטיבית מוקדמת זו, ובדיקות קוגניטיביות-התנהגותיות הוחלו ביום הפוסט-אופרטיבי השלישי, לאחר השלמת משטר האנלגזיה, כדי להפחית את ההשפעה הפוטנציאלית של כאב פוסט-אופרטיבי מיידי. מבחן השטח הפתוח (open-field test) שימש במחקרי POCD ניסיוניים להערכת פעילות לוקומטורית ספונטנית ולבדיקה האם ירידה בתנועה עלולה להטות את הביצועים הקוגניטיביים-התנהגותיים19,20. בהתאם לכך, בדיקת שטח פתוח וניתוח הליכה בוצעו ביום הפוסט-אופרטיבי השלישי, לפני ההערכה הקוגניטיבית. לא נצפו הבדלים משמעותיים בין הקבוצות בפעילות הלוקומטורית בשטח הפתוח או בפרמטרי ההליכה, מה שמרמז שההבדלים הקוגניטיביים-התנהגותיים העוקבים אינם סבירים להסבר בעיקר על ידי ליקוי מוטורי גלוי. עם זאת, מכיוון שכאב פוסט-אופרטיבי ספונטני ואי-נוחות מהפצע לא הוערכו באופן ישיר, לא ניתן לשלול לחלוטין את השפעותיהם השאריות על הביצועים ההתנהגותיים. מחקרים עתידיים יוכלו לשלב הערכות ישירות של כאב פוסט-אופרטיבי ספונטני.

באופן כללי, פרוטוקול זה מספק גישה ניסיונית מעשית לחקירת ליקוי קוגניטיבי מוקדם לאחר ניתוח בעכברים מזדקנים בעקבות למינקטומיה של L5. ניתן להשתמש בו כדי לחקור את התוצאים ההתנהגותיים ואת המכניזמים שבבסיס הליקוי הקוגניטיבי הקשור לניתוחי עמוד השדרה, וכן כדי להעריך התערבויות שמטרתן למנוע או להפחית ליקוי קוגניטיבי לאחר ניתוח. תיקוף בקבוצות גדולות יותר ובמעבדות עצמאיות יבס עוד יותר את היציבות והשחזוריות של המודל.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין ניגודי אינטרסים.

תודות

אנו מודים ל-Sanhua Fang מפלטפורמת המתקן המרכזי של בית הספר לרפואה באוניברסיטת Zhejiang, ל-Yanhong Chen ול-Xuliang Zhang ממרכז החיות של אוניברסיטת Zhejiang על התמיכה הטכנית שלהם. מחקר זה מומן על ידי הקרנות הבאות: National Natural Science Foundation of China (מספרים 82575196, 82074535, ו-U23A20508).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עכברי זכרים C57BL/6JSuzhou Industrial Park Ai'er Maite Technology Co., Ltd.SYXK2023-05מודל בעלי חיים
ANY-maze Video Tracking SoftwareStoelting Co., USA60מעקב וניתוח וידאו התנהגותי
משחה עינית ErythromycinBeijing Twinluck Pharmaceutical Co,. Ltd.H1021270מניעת ייבוש העין
פינצטה עדינהNANAקיבוע העור
פד חימוםNANAבקרת טמפרטורה
Iba1/AIF-1 (E4O4W) Rabbit Monoclonal AntibodyCell Signaling Technology17198צביעת אימונופלואורסצנציה של Iba1
ציוד הרדמה בשאיפהRWD Life Science Co., Ltd.R581Sהרדמה
MGT-PRAnhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd., ChinaMJY202512704ניתוח הליכה
מספריים מיקרו-אופתלמייםNANAהסרת עצם
תמיסת צביעת NisslHaoke Biotechnology Co., Ltd.HK203צביעת Nissl
מספרייםShang Shou Jin Zhong Surgical Instruments Jiangsu ITD.,CorpY030חתך בעור
SevofluraneShanghai Hengrui Pharmaceutical Co,. Ltd.2506231הרדמה
סדין ניתוח לשימוש חד-פעמיJiangxi Zhizheng Medical Equipment Co., Ltd.2021214021משטח לביצוע ניתוח
מכונה לקיצוץ שיער לבעלי חיים קטניםYiwu Leiben Trading Co., Ltd.2504KFZB3592-0310הסרת שיער
מחטי תפירה כירורגיות עם חוטShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., LTD.F603תפירת עור
קרם להסרת שיער VeetRECKITT BENCKISER (India) LtdNAהסרת שיער

מקורות

  1. Zhao Q, Wan H, Pan H, Xu Y. Postoperative cognitive dysfunction-current research progress. Front Behav Neurosci. 2024;18:1328790.
  2. Kong H, Xu LM, Wang DX. Perioperative neurocognitive disorders: A narrative review focusing on diagnosis, prevention, and treatment. CNS Neurosci Ther. 2022;28(8):1147-1167.
  3. Monk TG, et al. Predictors of cognitive dysfunction after major noncardiac surgery. Anesthesiology. 2008;108(1):18-30.
  4. Li X, et al. Risk factors for postoperative cognitive decline after orthopedic surgery in elderly Chinese patients: A retrospective cohort study. Clin Interv Aging. 2024;19:491-502.
  5. Krenk L, et al. Cognitive dysfunction after fast-track hip and knee replacement. Anesth Analg. 2014;118(5):1034-1040.
  6. Yang X, et al. Identification of individuals at risk for postoperative cognitive dysfunction (POCD). Ther Adv Neurol Disord. 2022;15:17562864221114356.
  7. Suraarunsumrit P, et al. Outcomes associated with postoperative cognitive dysfunction: A systematic review and meta-analysis. Age Ageing. 2024;53(7):afae160.
  8. Lin X, et al. The potential mechanism of postoperative cognitive dysfunction in older people. Exp Gerontol. 2020;130:110791.
  9. Lu B, et al. Effects of different types of non-cardiac surgical trauma on hippocampus-dependent memory and neuroinflammation. Front Behav Neurosci. 2022;16:950093.
  10. Park S, et al. Preoperative mild cognitive impairment as a risk factor of postoperative cognitive dysfunction in elderly patients undergoing spine surgery. Front Aging Neurosci. 2024;16:1292942.
  11. Xu Z, et al. Age-dependent postoperative cognitive impairment and Alzheimer-related neuropathology in mice. Sci Rep. 2014;4:3766.
  12. Zhang ZJ, et al. Aging alters Hv1-mediated microglial polarization and enhances neuroinflammation after peripheral surgery. CNS Neurosci Ther. 2020;26(3):374-384.
  13. Eckenhoff RG, et al. Perioperative neurocognitive disorder: State of the preclinical science. Anesthesiology. 2020;132(1):55-68.
  14. Guo LY, et al. Cognitive deficits after general anaesthesia in animal models: A scoping review. Br J Anaesth. 2023;130(2):e351-e360.
  15. Qiu LL, et al. NADPH oxidase 2-derived reactive oxygen species in the hippocampus might contribute to microglial activation in postoperative cognitive dysfunction in aged mice. Brain Behav Immun. 2016;51:109-118.
  16. Cibelli M, et al. Role of interleukin-1beta in postoperative cognitive dysfunction. Ann Neurol. 2010;68(3):360-368.
  17. Yamamoto S, et al. Intraoperative spinal cord stimulation mitigates central sensitization after spine surgery in mice. Spine (Phila Pa 1976). 2023;48(11):E169-E176.
  18. Matsumiya LC, et al. Using the mouse grimace scale to reevaluate the efficacy of postoperative analgesics in laboratory mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 2012;51(1):42-49.
  19. Sun L, et al. Activation of cannabinoid receptor type 2 attenuates surgery-induced cognitive impairment in mice through anti-inflammatory activity. J Neuroinflammation. 2017;14(1):138.
  20. Zhan G, et al. Anesthesia and surgery induce cognitive dysfunction in elderly male mice: The role of gut microbiota. Aging (Albany NY). 2019;11(6):1778-1790.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

מודל לניתוח עמוד השדרההרדמה בסבופלורןבדיקת תפקוד קוגניטיביפגיעה עצבית בהיפוקמפוסשינויים נוירו-דלקתייםצביעת ניסלאימונופלואורסצנציה של Iba1

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.