מאמר שיטה

פרוטוקול סטנדרטי של ציטומטריית זרימה רב-צבעונית להערכת מחלה שאריתית מדידה בלוקמיה חריפה

DOI:

10.3791/71756

⸱

7 באוגוסט 2026

1Department of Clinical Laboratory, The Second People's Hospital of Neijiang

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר זרימת עבודה סטנדרטית של ציטומטריה בזרימה רב-צבעונית להערכת מחלה שאריתית מדידה בלוקמיה חריפה, תוך שילוב עיבוד דגימות מבוקר, פרמטרי רכישה מאוזנים, אסטרטגיות גייטינג סדרתיות ופרשנות מותאמת לפי מכנה לשיפור השחזור האנליטי במעבדות קליניות שגרתיות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלה שאריתית מדידה (MRD) היא אינדיקטור פרוגנוסטי חשוב בניהול לוקמיה חריפה. עם זאת, הערכת ציטומטריית זרימה רב-צבעונית (MFC) שגרתית נשארת פגיעה לשונות טרום-אנליטית ואנליטית, כולל דילול, עומק רכישה לא עקבי ופרשנות סובייקטיבית. מאמר זה מציג תהליך תפעולי סטנדרטי להערכת MRD שגרתית בלוקמיה לימפובלסטית חריפה בתאי B (B-ALL) ובלוקמיה מיאלואידית חריפה (AML). הפרוטוקול משלב קריטריונים מחמירים לקבלת דגימה, עם הערכת המודילציה משולבת, ומשתמש בשיטת פירוק תאי דם אדומים בכמויות גדולות לדגימות מח עצם ודם היקפי. תקנון אנליטי מושג באמצעות פאנלים של נוגדנים בעלי שני צינורות ושמונה צבעים ספציפיים למחלה, מטרות רכישה מתואמות הדורשות לפחות 500,000 אירועים חיוביים ל-CD45, ואסטרטגיות שער קבועות ברצף. בנוסף, זרימת העבודה מיישמת גבולות זיהוי מותאמים לפי מכנה (LOD) וכימות (LOQ) כדי לתמוך במערכת דיווח אובייקטיבית בת שלוש שכבות. אימות על פני 197 דגימות קליניות הראה חזרתיות חזקה, ליניאריות דילול חזקה והתאמה גבוהה עם בדיקות מולקולריות אורתוגונליות משולבות. ביחד, פרוטוקול זה מספק מסגרת מעשית לניטור סטנדרטי של MRD. לניטור MRD סטנדרטי במעבדות קליניות שגרתיות על ידי שילוב טיפול טרום-אנליטי מבוקר ופרמטרים אנליטיים מאוזנים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גם לאחר השגת הפוגה מורפולוגית, חולים עם לוקמיה חריפה זקוקים למעקב מתמשך אחר מחלה שאריתית מדידה (MRD) כדי להעריך את הסיכון להישנות במדויק. בדיקות מורפולוגיות וציטופתולוגיות קונבנציונליות חסרות את הרגישות הנדרשת לזיהוי אוכלוסיות לוקמיות שאריתיות ברמה נמוכה. כתוצאה מכך, הערכת MRD הפכה לרכיב חיוני במעקב אחר מחלות הן בלוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) והן בלוקמיה לימפובלסטית חריפה בתאי B (B-ALL). המלצות אחרונות של ה-European LeukemiaNet מדגישות כי הערכת MRD אמינה ב-AML תלויה בסטנדרטיזציה טכנית ויכולת שחזור בין צופים ולא בזמינות בדיקותפשוטות 1,2. ב-B-ALL, ציטומטריית זרימה רב-צבעונית (MFC) נשארת חשובה במיוחד למטופלים ללא מטרות מולקולריות יציבות. מחקרים קודמים הראו כי גישות ציטומטריות זרימה רב-צבעוניות סטנדרטיות המשתמשות בעיצובים של פאנלים מובנים של נוגדנים יכולות לספק גילוי מחלות שאריתי רגיש וניתן לשחזור3. ציטומטריית זרימה משמשת באופן נרחב בשל היישום הרחב שלה, זמן התגובה המהיר והחסכוניות שלה. ביצועי הבדיקה נשארים תלויים מאוד בהכנת דגימות סטנדרטיות, פרמטרי רכישה ופרשנות נתונים4.

אחד האתגרים הטכניים המרכזיים בהערכת MRD ציטומטרי זרימה הוא גילוי אירועים נדירים, המושפע מאוד מעומק רכישה וספירת אירועים כוללת. פאנלים זהים של נוגדנים עשויים לייצר רגישויות אנליטיות שונות אם נרכשים דגימות עם גודל מכנה לא עקבי5. לכן, הסטנדרטיזציה חורגת מעבר לבחירת נוגדנים ודורשת עיבוד דגימה הרמוני, פירוק תאי דם אדומים בכמויות גדולות, פיצוי מכשירים, מטרות רכישה ואסטרטגיות גייטינג. בדגימות מח עצם, המודילוציה מהווה גם משתנה קדם-אנליטי משמעותי, שכן זיהום דם היקפי עשוי להפחית באופן מלאכותי את העומס הלוקמי שנותר לכאורה 6,7. בנוסף, פרשנות של אירועים בתדירות נמוכה דורשת ספי דיווח מוגדרים בבירור המבוססים על עומק רכישה ספציפי לדגימה. מחקרים עדכניים הדגישו את חשיבות הגבולות המותאמים למכנה (LOD) וכימות (LOQ) לשיפור העקביות של פרשנות MRD ציטומטרית זרימה8.

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לספק זרימת עבודה סטנדרטית להערכת MRD שגרתית מבוססת MFC ב-B-ALL וב-AML. הפרוטוקול משלב קריטריוני קבלת דגימה, הערכת המודילולציה, עיצוב פאנל נוגדנים ספציפי למחלה, הכנת דגימת ניתוק בכמויות גדולות, מטרות רכישה מתואמות, אסטרטגיות שער סדרתיות קבועות, וקריטריוני דיווח מותאמים לפי מכנה למסגרת תפעולית אחת 9,10. באמצעות שילוב פרוצדורות פרה-אנליטיות ואנליטיות סטנדרטיות, שיטה זו מספקת גישה מעשית וניתנת לשחזור ליישום שגרתי במעבדה קלינית של ניטור MRD. איור 1 ממחיש את זרימת העבודה הסטנדרטית הכוללת של קדם-אנליטי ואנליטי שיושם במחקר זה. טבלה 1 מסכמת את מאפייני הקוהורט והדגימה של החולים עם לוקמיה לימפובלסטית חריפה בתאי B (B-ALL) ולוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) שנרשמו במהלך תקופת האימות דרך חלונות ניטור מוגדרים מראש (סוף אינדוקציה, קונסולידציה ולפני HSCT).

figure-introduction-1
איור 1: זרימת עבודה סטנדרטית להערכת MRD ציטומטרית זרימה רב-צבעונית שגרתית. (א) תהליך עבודה טרום-אנליטי המציג סינון דגימות והערכת איכות לאורך תקופות ניטור מוגדרות מראש. (ב) תהליך אנליטי מניתוח של פירוק תאי דם אדומים בכמויות גדולות וצביעה של נוגדנים, דרך גייטינג סדרתי, פרשנות מותאמת לפי מכנה, ודיווח סופי של MRD. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

טבלה 1: דמוגרפיה מאוחדת של מטופלים, מאפייני דגימות קליניים ומדדי רכישה שגרתיים. טבלה אחת מתוקנת זו מסכמת את התכונות הקליניות הבסיסיות של הקבוצה הרשומה הכוללת מקרים של לוקמיה לימפובלסטית חריפה בתאי B (B-ALL) ולוקמיה מיאלואידית חריפה (AML), ומשלבת דמוגרפיה ברמת המטופל עם מאפיינים ברמת הדגימה, מרווחי ניטור טיפול, חיות, ציוני דילול, עומק רכישה, וסיווגי מחלה שאריתית מדידים מותאמים לפי מכנה. אנא לחצו כאן להורדת הטבלה הזו.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים שכללו דגימות אנושיות בוצעו בהתאם להנחיות מוסדיות ואושרו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העממי השני של נייג'יאנג (אישור מס' PXTS887192). המחקר השתמש בדגימות קליניות שנותרו שלא מזוהו לאחר בדיקות אבחון שגרתיות. הסכמה מדעת בוטלה משום שהמחקר לא השפיע על טיפול במטופל, בהקצאת הטיפול או בהליכי איסוף הדגימות. הכימיקלים, המגיבים והציוד המשמשים בפרוטוקול מופיעים בטבלת החומרים.

1. איסוף דגימות והערכה טרום-אנליטית

  1. אסוף שאיפי מח עצם כסוג הדגימה המועדף להערכת מחלה שאריתית מדידה (MRD). יש להשתמש בדגימות דם היקפיות רק כאשר שאיבת מח עצם אינה אסורה קלינית או במהלך ניתוחי ניטור והשוואה נבחרים.
  2. אסוף את דגימת מח העצם במהלך המשיכה הראשונה לנשיפה ככל האפשר. הימנעו ממשיכות שאיפה נוספות כדי למזער זיהום דם היקפי והערכת חסר של מחלה שאריתית ברמה נמוכה.
  3. העבר דגימות לצינורות נוגדי קרישה די-אשלגן אתילנדיאמינטרטראאצטית (K2-EDTA) או נתרן-הפארין מיד לאחר האיסוף. אחסון והובילו את הדגימות בטמפרטורת החדר (18–25 מעלות צלזיוס) והגנו עליהן מאור שמש ישיר.
    אזהרה: אל תשמור את הדגימות במקרר.
  4. עבדו את כל הדגימות בתוך 24 שעות מהאיסוף. למחקרי יציבות, יש לשמור על אליקווטים לניתוח חוזר ב-24 ו-48 שעות תוך שמירה על תנאי אחסון בטמפרטורת החדר.
  5. אמת את מזהה המטופל, סוג נוגד הקרישה, שלמות הדגימה וזמן האיסוף בעת קבלת הדגימה. דגימות דחויות המציגות קרישה נרחבת, המוליזה חמורה או ניוון תאי מסומן
  6. הערכו דגימות מח עצם לדידול לפני פירוש סופי. חישבו ציון דילול חצי-כמותי הנע בין 0.00 ל-1.00 כדי להעריך זיהום דם פריפרי.
  7. קבעו ערך זה על ידי חלוקת החלק של לימפוציטים בוגרים בסכום של אבות חיוביים ל-CD34, גרנולוציטים לא בוגרים ולימפוציטים בוגרים, כאשר מנה גבוהה יותר מצביעה על השפעה דילול גדולה יותר.
    הערה: חשב את הניקוד באמצעות הנוסחה הבאה:
      figure-protocol-1
    כאשר ציון גבוה יותר מצביע על זיהום דם היקפי גבוה יותר.
  8. סווג ציוני דילול כך כך: <0.20, מקובל; 0.20–0.39, עם הומודילוט קל; ו-≥0.40, במידה רבה עם המודילוט.
    הערה: אין להקצות פרשנויות מוחלטות שליליות ל-MRD לדגימות עם המודוליוטציה הבולטת אלא אם כן אושרו גודל מכנה מספק וארכיטקטורת קדם-מח עצם משומרת.

2. הכנת פאנל נוגדנים ספציפי למחלה

  1. הכינו פאנלים סטנדרטיים למחלה עם שני צינורות ושמונה צבעים לניתוח B-ALL ו-AML. השגת תקנון פאנל על ידי הקפדה על סמני עמוד שדרה קבועים בכל הצינורות לשיפור יציבות של האוכלוסייה.
  2. השתמשו בקונוגטים פלואורוכרום עקביים לאנטיגנים השושלת המתאימים ועקוב בקפדנות אחר נפחי טיטרציה שהומלצו על ידי היצרן כדי למזער שונות פלואורסצנציונית מצד לאט.
  3. עיין בטבלה משלימה 1 לשילובי סמנים, הקצאות פלואורוכרום, שיבוטי נוגדנים, נפחי צביעה ופרמטרי רכישה.
  4. להערכת B-ALL, השתמשו ב-CD19, CD45, CD34, CD10 ו-CD20 כסמניות עמוד שדרה בשתי הצינורות להגדרת אוכלוסיות מקדים ודפוסי הבגרות. הוסף את CD38, CD58 ו-CD81 לצינור 1.
  5. הוסף את CD66c, CD123, ואחד או CD73 או CD304 לצינור 2 בהתאם לאימונופנוטיפ האבחוני הקשור ללוקמיה שנקבע בהערכת הבסיס.
  6. להערכת AML, השתמשו ב-CD45, CD34, CD117, CD13, CD33 ו-HLA-DR כסמן עמוד שדרה בשתי החצוצרות להגדרת אוכלוסיות מיאלואידים בלאסט ובלתי בשלים.
  7. הוסף את CD7 ו-CD56 לצינור 1 להערכת ביטוי אנטיגן חוצה שושלת. הוסף את CD11b ו-CD15 לצינור 2 כדי להעריך חריגות בבשלת המיאלואידים.

3. הכנה וצביעה בבלק-ליזיס

  1. העבר 2.0 מ"ל של מח עצם מעורבב היטב או דגימת דם היקפית לצינור פוליפרופילן בנפח 15 מ"ל. אם נפח הדגימה מוגבל, השתמש בנפח קלט מינימלי של 1.0 מ"ל.
  2. הוסיפו לדגימה 10 מ"ל של בופר פירוק כלוריד אמוניום מחומם מראש. דגרו את הספנסיין למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר כדי לפרק תאי דם אדומים.
  3. צנטריפוגה את הדגימה ב-500 × גרם למשך 5 דקות. השליך את הסופרנטנט בזהירות מבלי להפריע לכדור התא הגרעיני.
  4. החזירו את הכדור לתלות ב-2 מ"ל של מי מלח מפוספטים (PBS) המכיל 0.5% אלבומין סרום בקר (BSA) ו-2 מ"מ אתילנדיאמינטרטראאצטית (EDTA). חזור על שלב השטיפה פעם אחת אם זיהום ההמוגלובין נשאר גלוי.
  5. קבעו ריכוז תאים גרעיניים באמצעות אנליז המטולוגיה אוטומטי או ספירת המוציטומטר ידנית עם החרגת טריפאן בלו. יש לשקול ריכוז תאים גרעיניים מינימלי של 5 × 106 תאים למ"ל כאופטימלי לרכישה סטנדרטית.
    הערה: אם התפוקה התאית יורדת מתחת לסף זה, רכזו את הדגימה באמצעות צנטריפוגה נוספת ב-500 × גרם למשך 5 דקות, והקטינו בזהירות את נפח בופר התלייה מחדש כדי למקסם צפיפות תאים.
  6. Aliquot 5 × 106 תאים גרעיניים בכל צינור לצביעה שגרתית. הגדלת הקלט למקסימום של 1 ×10 7 תאים לכל צינור לניתוח רגישות גבוהה כאשר שחזור הדגימה מאפשר 6,7.
  7. הוסף את קוקטייל הנוגדנים המותאם בנפרד ואת צבע החיוניות שניתן לתיקון שמצוין בטבלת החומרים לכל צינור בהתאם לתצורת לוח הצביעה המאומת. הפאנל המאומת השגרתי משתמש ב-5 מיקרוליטר לכל נוגדן מצומד פלואורוכרום, אלא אם כן הטיטרציה המומלצת על ידי היצרן מצביעה על נפח שונה ספציפי לנוגדנים.
  8. ודאו שנפח התגובה הסופי של הצביעה נשמר בקפדנות על 100 מיקרוליטר בכל בדיקה כדי לשמור על סטוכיומטריה מיטבית בין נוגדנים לאנטיגן. דגרו את הדגימות במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר בחושך.
  9. שטפו את התאים המוצבעים פעם אחת באמצעות בופר ושתלו את הכדור האחרון ב-500 מיקרולטר של בופר רכישה.
  10. הכינו בקרות פיצוי עם צביעה בודדת באמצעות חרוזי פיצוי באותו יום של רכישת דגימה.

4. הקמת מכשירים ואיסוף נתונים

  1. בצע בקרת איכות הפעלה יומית על ציטומטר הזרימה לפני רכישת דגימות מטופלים. בדוק ערכי פלואורסצנציה של נוזלים, יישור לייזר, ביצועי גלאי ויעדי פלואורסצנציה באמצעות חרוזי כיול, בהתאם להוראות היצרן.
  2. הכינו בקרות פיצוי עם צביעה בודדת באמצעות אותם פלואורוכרומים הכלולים בפאנלים של נוגדנים. כוון את מטריצת הפיצוי לפני רכישת המטופל וודא שסמני עמוד השדרה נשארים בטווחי היעד המוגדרים מראש.
  3. השתמש באותה תבנית רכישה, הגדרות גלאי, אסטרטגיית פיצוי והיררכיית שער עבור כל הדגימות שנותחו במהלך תקופת האימות.
    הערה: להבטיח הרמוניזציה נכונה בין המכשירים על ידי קביעת ערכי עוצמת פלואורסצנציה חציונית סטנדרטיים לכל הגלאים המשתמשים בחרוזי כיול מיוחדים, ולוודא שמדגמים זהים מניבים פרופילי פלואורסצנציה דומים בפלטפורמות שונות לפני איסוף נתונים קליניים.
  4. איסוף נתונים בקצב זרימה נמוך עד בינוני כדי להפחית אירועים מקפים ולשמור על דיוק זיהוי אירועים נדירים. עקבו אחרי קצב האירועים באופן רציף במהלך הרכישה.
  5. רכשו לפחות 500,000 אירועים גרעיניים חיוביים ל-CD45 עבור כל תוצאה מדווחת של MRD. כאשר איכות הדגימה ויציבות האירועים מאפשרות, הארכי את הרכישה ל-1.0–1.5 מיליון אירועים בסך הכל, במיוחד כאשר יש חשד למחלה שאריתית ברמה נמוכה.
  6. עצרו או עצרו את הרכישה אם מתרחשים חוסר יציבות נוזלית, סתימות דגימה, שינויים פתאומיים בקצב האירועים, או הידרדרות נראית לעין באיכות הפיזור. מסננים מחדש או מערבבים מחדש את הדגימה כאשר זה מתאים, ומקבלים מחדש את הדגימה רק לאחר שהזרימה היציבה שוחזרה.

5. סגירת סדרה ופרשנות מותאמת לפי מכנה

  1. נתחו את נתוני ציטומטריית הזרימה באמצעות תוכנת ניתוח ציטומטריית זרימה מאומתת. השתמש באותה אסטרטגיית שער סדרתית לכל הדגימות כדי להפחית שונות בין אופרטורים.
  2. לקבוע דפוסי בגרות נורמליים ומתחדשים על ידי רכישה וניתוח עצמאי של מאגר ייחוס של לפחות 20 דגימות מח עצם תקינות או מתחדשות, שישמשו כתבניות ביטוי בסיס.
  3. להוציא פסולת באמצעות פרמטרים של פיזור קדמי ופיזור צדדי. בודד תאים בודדים על ידי יישום אזור פיזור קדמי לעומת פיזור קדמי-גובה.
  4. החריגו תאים לא ברי קיימא באמצעות שער צבע הקיימות המופיע בטבלת החומרים. חסל באופן שגרתי תאים לא חיוניים אלה כי הם מציגים קישור נוגדנים לא ספציפי ויכולים להעלות באופן מלאכותי רעש רקע או לחקות אוכלוסיות חריגות נדירות.
    הערה: נדרש סף כדאיות מינימלי של 75% לניתוח מיטבי במורד הזרם, תוך ציון שדגימות היורדות מתחת לערך זה דורשות פרשנות זהירה לגבי ממצאים פוטנציאליים של אירועים נדירים. הגדר את מכנה הלויקוציטים על ידי גייטינג על אירועים חיוביים ל-CD45 עם מאפייני פיזור צדדיים מתאימים.
  5. עבור דגימות B-ALL, יש להגביל את הניתוח לתא הקדם-חיובי ל-CD19. יישמו מסגרת גייטינג חלופית למטופלים המקבלים טיפולים ממוקדים נגד CD19.
  6. העבר את ההערכה הראשונית למחלקות חיוביות ל-CD22, CD24 או CD34 כדי ללכוד את אוכלוסיית הלוקמיה באופן עצמאי מהביטוי של CD19. העריכו דפוסי הבשלה של CD34, CD10 ו-CD20 וזיהו אוכלוסיות חריגות באמצעות דפוסי ביטוי CD38, CD58, CD81, CD66c, CD123 ו-CD73 או CD304.
  7. לדגימות AML, הגדירו את אזור הפיצוץ או המקדים באמצעות CD45, פיזור צדדי, ביטוי CD34 ו-CD117.
  8. הערכו ביטוי חריג או אסינכרוני של סמנים מיאלואידיים וחוצי-שושלת, כולל CD13, CD33, HLA-DR, CD7, CD56, CD11b ו-CD15.
  9. חשב את גבול הגילוי הספציפי לדגימה (LOD) ואת גבול הכימות (LOQ) תוך שימוש במספר האירועים החיוביים שנרכשו ב-CD45 כמכנה:
     figure-protocol-2
      figure-protocol-3
  10. סווג את הפרשנות הסופית של MRD לאחת משלוש קטגוריות: MRD חיובי, מתחת ל-LOD, או מוגבל אנליטית.
    1. יש להגדיר את התוצאה כחיובית ל-MRD כאשר אשכול ברור ורציף של אירועים חריגים חורג מה-LOD הספציפי לדגימה ומדגים אימונופנוטיפ עקבי פנימית השונה מאוכלוסיות המטופואטיות רגילות או מתחדשות.
      הערה: אין לסווג אירועים מפוזרים ולא מקובצים כחיוביים ל-MRD. השתמש בגישה משולבת של ניתוח המשלב הן את האימונופנוטיפ הקשור ללוקמיה (LAIP) שנעקב מדגימת האבחון הבסיסית ואסטרטגיות זיהוי דפוסי שונה מהנורמה (DfN).
    2. הקצה את התוצאה כמתחת ל-LOD כאשר קיימים אירועים חשודים נדירים אך אינם מגיעים לסף הדיווח הספציפי לדגימה.
    3. יש להקצות את התוצאה כמוגבלת אנליטית כאשר גודל המכנה אינו מספיק, הדילול משמעותי, איכות הדגימה ירודה, או מגבלות טרום-אנליטיות או אנליטיות מונעות פרשנות שלילית בטוחה.
  11. בדוק את כל המקרים החיוביים ל-MRD ומקרים ברמה גבולית ברמה נמוכה באופן עצמאי על ידי אנליסט מוסמך נוסף.
  12. לסיים את פרשנות ציטומטריית הזרימה לפני סקירת נתוני משוואה מולקולרית זוגית, כולל תגובת שרשרת פולימראז כמותית או תוצאות ריצוף מהדור הבא.

6. מתודולוגיית אימות אנליטי

  1. הערכת חזרתיות אנליטית על ידי הכנת אליקווטים כפולים מאותו תליון תא לאחר הליזה. לרכוש ולנתח לפחות 30 דגימות זוגיות באופן עצמאי.
  2. הערכת ליניאריות מדוללת על ידי הכנת דילול סדרתי בשש רמות בטווח העומס הנמוך הצפוי. השווה ערכי MRD שנצפו לערכי MRD צפויים לאורך סדרת הדילול.
  3. הערכת שחזוריות בין מפעילים ובין מכשירים על ידי ניתוח דגימות ייחוס בין מספר מפעילים מוסמכים וציטומוטרי זרימה הרמוניים.
  4. זרימת הטרנספורם ציטומטרית ואחוזי MRD מולקולרית מזווגים באמצעות טרנספורמציה log10 לפני השוואה סטטיסטית. הערכת התאמה כמותית באמצעות ניתוח קורלציה וניתוח בלנד-אלטמן.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאפייני מאגר הנתונים של היישום השגרתי

במהלך תקופת המחקר, 197 דגימות רצופות עברו את בדיקת הזכאות והערכת איכות טרום-אנליטית ונכנסו לתהליך העבודה שניתן לדווח. קבוצת המחקר כללה 98 מטופלים, 62 (63.3%) עם לוקמיה לימפובלסטית חריפה בתאי B (B-ALL) ו-36 (36.7%) עם לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML). הקבוצה כללה 64 גברים (65.3%) ו-34 נשים (34.7%), עם גיל חציוני של 32 שנים (טווח בין-רבעוני [IQR], 13–49 שנים; טווח: 2–73 שנים). אחוז הפיצוץ החציוני היה 67.2% (IQR, 56.9% – 80.2%).

רוב הדגימות שנבדקו היו שאיפות מח עצם (174/197, 88.3%), בעוד שדגימות דם היקפיות היוו 23 מתוך 197 (11.7%). לפי מרווחי הניטור שהוגדרו מראש, 86 דגימות (43.7%) נאספו בסיום טיפול ההשראה, 65 (33.0%) במהלך טיפול קונסולידציה, ו-46 (23.4%) לפני השתלת תאי גזע המטופואטיים (HSCT) (טבלה 1).

החיוניות החציונית של הדגימה הייתה 88.3% (IQR, 84.4% – 92.6%). תהליך הרכישה הניב חציון של 1,116,901 אירועים בסך הכל (IQR, 908,521–1,258,946) לפני ניקוי הנתונים. לאחר ההסרה האנליטית הסדרתית של פסולת, כפילים חופפים ותאים לא ברי קיימא, אסטרטגיית השער השיגה חציון של 907,325 אירועי יעד יחידים חיוביים ל-CD45 (IQR, 690,112–1,095,836), עם זמן רכישה חציוני של 11.9 דקות. ציון ההמודילולציה החציוני היה 0.20 (IQR, 0.14–0.28). לאחר הפרשנות המתאמת לפי מכנה, 41 דגימות (20.8%) סווגו כחיוביות ל-MRD, ו-156 דגימות (79.2%) סווגו כמתחת לגבול הגילוי הספציפי לדגימה (LOD) (טבלה 1).

אימות אנליטי: חזרתיות, ליניאריות ויציבות

הביצועים האנליטיים של זרימת העבודה הסטנדרטית הוערכו באמצעות חזרתיות, ליניאריות מדיללת ומחקרי יציבות לטווח קצר (איור 2). אליקווטים כפולים שהוכנו מאותם דגימות שנבדקו בנפח הראו חזרתיות חזקה, עם מקדם שונות כפול חציוני (CV) של 0.101% ו-CV באחוזון ה-95 של 0.222%.

figure-results-1
איור 2: אימות אנליטי של זרימת העבודה הסטנדרטית של זרימת ציטומטריית זרימה רב-צבעונית MRD. (א) התפלגות החיוניות של הדגימה בין דגימות שנבדקו. (ב) מתאם בין ערכי MRD צפויים ונצפו בניסויי דילול סדרתיים בניתוח לוגריתמי. (ג) הסכמה בין ניתוחי שכפול עצמאיים במהלך הערכת חזרתיות. (D) יציבות מדידות MRD לאחר אחסון בטמפרטורת החדר ב-0 שעות, 24 שעות ו-48 שעות. אנא לחצו כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

כדי להעריך התנהגות גילוי ברמה נמוכה, נותחו 12 ניסויי דילול סדרתי שכללו 72 תצפיות בסך הכל בטווח ה-MRD הנמוך הצפוי. ערכי MRD שנצפו הראו התאמה חזקה לערכים הצפויים בניתוח לוגריתמי (r = 0.999, R2 = 0.998 מותאם, שיפוע = 1.009, יירוט = 0.018), מה שמעיד על שמירה על ליניאריות בטווחי אירועים בתדירות נמוכה.

בדיקות יציבות קצרות טווח הראו ירידה הדרגתית בחיוניות הדגימה לאורך זמן, כאשר החיוניות החציונית ירדה מ-89.1% ב-0 שעות ל-84.9% ב-24 שעות ו-80.6% ב-48 שעות. לעומת זאת, השינוי היחסי האבסולוטי החציוני בנטל ה-MRD נותר מוגבל ב-24 שעות (6.2%) ו-48 שעות (12.0%), מה שתומך בעיבוד שגרתי במרווח של 24 שעות לאחר האיסוף.

שכפול בין אופרטורים ובין מכשירים

שחזוריות בין מפעילים ובין מכשירים הוערכה באמצעות 24 דגימות ייחוס שנותחו על פני מספר אופרטורים וציטומטרי זרימה מתואמים, והניבו בסך הכל 96 הערכות. הסטייה היחסית החציונית מהערכים הייחוס הייתה 13.7%. ממצאים אלו מראים ביצועים אנליטיים עקביים לאחר סטנדרטיזציה של הכנת דגימה, הגדרות רכישה ואסטרטגיות שער סדרתיות (טבלה 2).

טבלה 2: מדדי ביצוע של אימות אנליטי והשוואת שיטות עבור זרימת העבודה הסטנדרטית המדידה של מחלה שאריתית. טבלה זו מוגבלת לתוצאות אימות, כולל חזרתיות תוך-מבחנת, ליניאריות מדוללת, יציבות לטווח קצר, שחזוריות בין אופרטורים ובין מכשירים, ומדדי השוואת שיטות מולקולריות אורתוגונליות; הוא אינו משכפל את הדמוגרפיה של המטופלים או מאפייני הדגימות שדווחו בטבלה 1. אנא לחצו כאן להורדת הטבלה הזו.

יישום קליני והשוואת שיטות אורתוגונליות

בוצעה השוואה אורתוגונלית עם 117 דגימות זוגיות, כולל 75 שנותחו על ידי תגובת שרשרת פולימראז כמותית (qPCR) ו-42 באמצעות ריצוף מהדור הבא (NGS). הערכות qPCR עקבו בעיקר אחר תמלילי איחוי ספציפיים למחלה שנקבעו בעת האבחון, כולל BCR::ABL1, RUNX1::RUNX1T1 ו-PML::RARA. גישות ה-NGS העריכו סידורי גנים של אימונוגלובולין קלונלי או קולטני תאי T ללוקמיה לימפובלסטית ועקבו אחר מוטציות סומטיות חוזרות באמצעות פאנלים מיאלואידיים ממוקדים ללוקמיה מיאלואידית חריפה. ערכי MRD בזרימה, ציטומטריים, הראו מתאם חזק עם תוצאות מולקולריות משולבות ברמות מחלה מדידות (r = 0.893 בניתוח לוגריתמי).

ניתוח בלנד-אלטמן הראה הפרש לוגריתמי ממוצע של −0.093 עם גבולות התאמה הנעים בין −0.848 ל-0.663 (איור 3). מבין מקרים דיסוננטיים, זוהתה תוצאה שלילית שגויה אחת מתוך 25 דגימות חיוביות מולקולרית. זרימת העבודה הראתה אחוז הסכמה חיובי של 78.1%, הסכמה שלילית של 97.6%, ושיעור התאמה כולל של 92.3%.

figure-results-2
איור 3: יישום קליני ואימות אורתוגונלי של הערכת MRD סטנדרטית. (א) התפלגות מקרים חיוביים ל-MRD בין קבוצות מחלה ותקופות ניטור. (B) מתאם בין ערכי MRD ציטומטריים זרימה לתוצאות משווים מולקולריים זוגיים בניתוח לוגריתמי. (ג) ניתוח בלנד-אלטמן השוואה בין מדידות ציטומטריות זרימה ומדידות MRD מולקולריות זוגיות, כאשר קווים אופקיים מציינים את ההטיה הממוצעת ואת גבולות ההתאמה של 95% בטווח האנליטי. (ד) התפלגות תוצאות חיוביות ל-MRD בין תקופות ניטור טיפוליות. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

ממצאים אלו מראים כי תהליך העבודה הסטנדרטי של ציטומטריית זרימה רב-צבעונית הגיע להתאמה חזקה עם בדיקות MRD מולקולריות אורתוגונליות בדגימות קליניות שגרתיות.

טבלה משלימה 1: פרמטרים תפעוליים מקיפים לזרימת העבודה הסטנדרטית של מחלה שאריתית מדידה של זרימת ציטומטריה רב-צבעית. טבלה מאוחדת זו מפרטת את המרכיבים המתודולוגיים החיוניים המחולקים לחלקים נפרדים. סעיף א' מפרט את תצורות פאנל הנוגדנים הספציפיים למחלה, כאשר בחירת CD73 או CD304 מבוססת על אימונופנוטיפ אבחנתי בסיסי הקשור ללוקמיה. סעיף ב' מפרט את מטרות עיבוד הדגימות הקדם-אנליטיות הסטנדרטיות ורכישת הזרימה הציטומטרית. סעיף C מגדיר את ספי הדיווח המותאמים למכנה לצד קריטריוני פרשנות סופית. אנא לחצו כאן להורדת הקובץ הזה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המטרה העיקרית של מחקר זה הייתה לקבוע זרימת עבודה סטנדרטית להערכת ציטומטריה בזרימה רב-צבעונית של מחלה שאריתית מדידה (MRD) בלוקמיה חריפה. הערכת MRD אמינה תלויה לא רק בבחירת פאנל נוגדנים, אלא גם בטיפול עקבי בדגימה, פרמטרי רכישה ופרשנות נתונים11. תוצאות מחקר זה מראות כי עיבוד דגימות מאוזן, עומק רכישה מבוקר, וקריטריוני דיווח מותאמים לפי מכנה יכולים לשפר את השחזור האנליטי במעבדות קליניות שגרתיות. ממצאים אלו תואמים למאמצים האחרונים לתקן את הערכת MRD ציטומטרית זרימה בין מוסדות ומפעילים שונים12.

מרכיב חשוב בזרימת העבודה הזו הוא הליזת תאי דם אדומים המבוססת על כלוריד אמוניום בכמויות גדולות. זיהוי MRD באירועים נדירים דורש רכישת מכנה תאים גדולים כדי להשיג רגישות אנליטית מספקת. הכנת פירוק נפח סטנדרטית אפשרה שיקום עקבי של מספיק תאים גרעיניים, לעיתים קרובות מעל 1.0–1.5 מיליון אירועים שנרכשו, תוך שמירה על חיוניות הדגימה המקובלת. מחקרים קודמים של קונסורציום EuroFlow הדגישו באופן דומה כי רכישת אירועים גבוהים היא הכרחית לתמיכה בזיהוי MRD רגיש וניתן לשחזור13. בדגימות עם רגישות אנליטית תת-מיטבית, פתרון תקלות צריך לכלול הערכת נפח הדגימה, התאוששות תאית ועומק רכישה.

פרוטוקול זה כולל גם הערכת המודילולציה שגרתית לפני פירוש תוצאות MRD שליליות ברמה נמוכה. דילול דם נותר מגבלה מרכזית לפני הניתוח בבדיקות MRD מבוססות מח עצם, שכן זיהום דם היקפי יכול להפחית באופן מלאכותי את העומס הלוקמי לכאורה. שילוב ציון דילול חצי-כמותי ישירות בתהליך הדיווח מספק הגנה נוספת מפני פרשנות שגויה כשלילית שגויה. מחקרים קודמים דיווחו כי דילול משפיע באופן משמעותי על אמינות ניתוח MRD ציטומטרי זרימה בלוקמיה מיאלואידיתחריפה 7. לכן יש לפרש בזהירות דגימות המראגות דילול משמעותי (≥0.40), במיוחד כאשר עומק רכישה או שימור קדמי מח עצם אינם מספקים.

ההשוואה האורתוגונלית שבוצעה במחקר זה הראתה הסכמה כוללת חזקה בין שיטות הערכת MRD ציטומטרית זרימה ומולקולרית. עם זאת, המקרים הדיסוננטיים מדגישים גם כי ציטומטריית זרימה ובדיקות מולקולריות מעריכות היבטים ביולוגיים מובחנים של מחלה שאריתית. מחקרים קודמים הראו כי שינויים פנוטיפיים, אבולוציה קלונית והמטופואזיס רגנרטיבי עשויים לתרום לפערים בין פלטפורמות אנליטיות14. ב-B-ALL, הבחנה בין מקדימים שאריתיים ללוקמיים מהמטוגונים רגילים נותרת מאתגרת במיוחד בעומס מחלה נמוך ודורשת פרשנות משולבת של דפוסי אימונופנוטיפים רב-ממדיים במקום חריגות אנטיגן מבודדות15. מסיבה זו, כל מקרים של MRD גבולי וברמה נמוכה בתהליך עבודה זה נבדקו באופן עצמאי על ידי אנליסט שני.

למחקר זה יש מספר מגבלות. ראשית, האימות בוצע במוסד יחיד תוך שימוש במספר מוגבל של כלים מאוזנים. שנית, דגימות דם פריפריאליות נכללו רק במצבים קליניים נבחרים, משום שאינן יכולות להחליף את מח העצם להערכת MRD שגרתית לאחר הטיפול ברוב ההקשרים של לוקמיה חריפה. בנוסף, חלק מהפרמטרים האנליטיים, כולל ניקוד המודילוטציה ופרשנות אירועים ברמה נמוכה, עדיין דורשים סקירת מפעיל מנוסה למרות זרימת העבודה הסטנדרטית. עם זאת, הפרוטוקול מספק מסגרת מעשית ליישום קליני שגרתי של הערכת MRD זרימה ציטומטרית רב-צבעונית סטנדרטית16,17. על ידי שילוב הערכת איכות טרום-אנליטית, אסטרטגיות רכישה מתואמות וקריטריוני פרשנות מותאמים לפי מכנה, תהליך עבודה זה תומך בדיווח MRD שכפול ועקבי קלינית יותר בפרקטיקה המעבדתית השגרתית.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחבר מודה למחלקת המעבדה הקלינית בבית החולים העממי השני של נייג'יאנג על מתן מתקני מעבדה ותמיכה טכנית למחקר זה. המחבר גם מודה לצוות המעבדה ולצוות הקליני על סיועו בעיבוד הדגימות ואיסוף הנתונים. לבסוף, המחבר מודה למטופלים שדגימותיהם הקליניות שנותרו תרמו לעבודה זו. מחקר זה לא קיבל מימון ספציפי מסוכנויות מימון ציבוריות, מסחריות או ללא מטרות רווח.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Acquisition bufferLaboratory-preparedPBS containing 0.5% BSA and 2 mM EDTA; final resuspension volume 500 µLFinal resuspension before flow cytometric acquisition
AML Tube 1 anti-CD117-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 104D2; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsEarly myeloid/blast identification
AML Tube 1 anti-CD13-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L138; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 1 anti-CD33-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: P67.6; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 1 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsImmaturity marker
AML Tube 1 anti-CD45-APC-H7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 2D1; fluorochrome: APC-H7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsLeukocyte backbone marker and denominator definition
AML Tube 1 anti-CD56-V500 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: NCAM16.2; fluorochrome: V500; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsAberrant blast-associated phenotyping
AML Tube 1 anti-CD7-V450 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: M-T701; fluorochrome: V450; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsCross-lineage aberrancy detection
AML Tube 1 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: G46-6; fluorochrome: PE-Cy7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation and subtype discrimination
AML Tube 2 anti-CD117-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 104D2; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsEarly myeloid/blast identification
AML Tube 2 anti-CD11b-V450 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: ICRF44; fluorochrome: V450; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation-discordance assessment
AML Tube 2 anti-CD13-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L138; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 2 anti-CD15-V500 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: HI98; fluorochrome: V500; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsDifferent-from-normal myeloid pattern assessment
AML Tube 2 anti-CD33-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: P67.6; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMyeloid lineage anchor
AML Tube 2 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsImmaturity marker
AML Tube 2 anti-CD45-APC-H7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 2D1; fluorochrome: APC-H7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsLeukocyte backbone marker and denominator definition
AML Tube 2 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: G46-6; fluorochrome: PE-Cy7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation and subtype discrimination
Ammonium chloride-based red blood cell lysis bufferLaboratory-prepared / commercial supplierAmmonium chloride-based lysis buffer; 10 mL/test; 10 min at room temperatureBulk red blood cell lysis
Analysis softwareBeckman Coulter (Brea, CA, USA)Kaluza 2.1Data analysis and sequential gating
Automated hematology analyzerCommercial supplierAutomated hematology analyzer used for nucleated cell concentration and viability assessmentNucleated cell concentration and viability assessment
B-ALL Tube 1 anti-CD10-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: HI10a; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsPrecursor B-cell definition
B-ALL Tube 1 anti-CD19-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: SJ25C1; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsB-lineage identification and entry into precursor compartment
B-ALL Tube 1 anti-CD20-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L27; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsMaturation pattern assessment
B-ALL Tube 1 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Heuser M, et al. 2021 update on measurable residual disease in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2021;138(26):2753–67.
  2. Cloos J, Heuser M, Freeman SD. 2025 update on MRD in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2025;147(11):1147–64.
  3. Verbeek MWC, Lucio P, Szczepański T. Minimal residual disease assessment in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia by standardized next-generation flow cytometry. eJHaem. 2024;5(2):110–20.
  4. Virk H, Jain P, Sengar M. Flow cytometric MRD assessment in acute lymphoblastic leukemia: Practical advantages and interpretive considerations. Indian J Hematol Blood Transfus. 2023;39(3):350–62.
  5. Brando B. Rules in rare event acquisition: An overview. Cytometry B Clin Cytom. 2019;96(6):448–53.
  6. EuroFlow Consortium. Standardized EuroFlow Protocols [Internet]. EuroFlow; 2025. Available from: https://euroflow.org/protocols/ (accessed 2026 Jan 15).
  7. Tettero JM, Heidinga ME, Mocking TR. Impact of hemodilution on flow cytometry-based measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia. Leukemia. 2024;38(2):297–305.
  8. Buccisano F, et al. Prognostic and therapeutic implications of measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Blood. 2012;119(2):332–41.
  9. Schuurhuis GJ, Heuser M, Freeman S. Minimal/measurable residual disease in AML: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2018;131(12):1275–91.
  10. Terwijn M, van Putten WLJ, Kelder A. High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: Data from the HOVON/SAKK AML 42A study. J Clin Oncol. 2013;31(31):3889–97.
  11. Smith AB, Jones CD. Computational models, and tools for future development in flow cytometry. Cancer Metastasis Rev. 2026;45(1):88–102.
  12. Jum’ah HA, Ali S, Hwang Y. Measurable residual disease analysis by flow cytometry: Assay validation and characterization of 385 consecutive cases of acute myeloid leukemia. Cancers. 2025;17(7):1155.
  13. Theunissen P, et al. Standardized EuroFlow flow cytometric method for B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia (BCP-ALL) MRD assessment. Blood. 2017;129(3):347–57.
  14. Haaksma LH, Mocking TR, Kelder A. Flow cytometric and molecular measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2025;66(1):45–55.
  15. Das N, Yadav P, Seth T. Analytical appraisal of hematogones in B-ALL MRD assessment using multidimensional dot-plots by multiparametric flow cytometry: A critical review and update. Indian J Hematol Blood Transfus. 2024;40(1):12–24.
  16. Korkina YS, Popov AM, Tserenov DG. False-positive flow cytometric measurable residual disease in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Cytometry B Clin Cytom. 2024;106(2):120–31.
  17. Mocking TR, et al. Computational measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia: a retrospective validation in the HOVON-SAKK-132 trial. Leukemia. 2025;39(10):2559–62.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

234234B ALLAML

מאמרים קשורים