מחקר זה מעריך את הטיפול ב-Qi-fu-yin (QFY) בעכברי 5xFAD. הממצאים מראים כי מתן QFY קשור לשיפור בביצועי הלמידה והזיכרון, להפחתה של שיקעי Aβ במוח והפחתת הזדקנות תאית, ולבלימה של נזק מבני סינפטי בקליפת המוח.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר מחקר
* These authors contributed equally
מחקר זה מעריך את הטיפול ב-Qi-fu-yin (QFY) בעכברי 5xFAD. הממצאים מראים כי מתן QFY קשור לשיפור בביצועי הלמידה והזיכרון, להפחתה של שיקעי Aβ במוח והפחתת הזדקנות תאית, ולבלימה של נזק מבני סינפטי בקליפת המוח.
על אף שהמנגנון של Qi-fu-yin (QFY), מרשם של רפואה סינית מסורתית, עדיין אינו מובן במלואו, הוא הפגין פוטנציאל טיפולי במחלת אלצהיימר (AD). מחקר זה נועד לבחון את הקשר בין טיפול ב-QFY לבין ליקוי קוגניטיבי בעכברי 5xFAD. השתמשנו במבחני כוח אחיזה, הליכה, בניית קן, תיבת מעבר (shuttle box), מבוך המים של מוריס ו-ELISA כדי להעריך את הרמות של חלבון Amyloid-β 1-42 (Aβ1-42), Aβ1-40, Growth-associated protein 43 (GAP-43), Synaptophysin (SYN), ו-Postsynaptic density protein 95 (PSD-95) במוחות של עכברי 5xFAD. ניתוח ציטוקינים בשיטת Luminex שימש לכימות רמות של פנוטיפ הפרשה הקשור להזדקנות (SASP) בקורטקס. כמות ה-Senescence-associated β-galactosidase (SA-β-Gal), שיקע Aβ וקוצים דנדריטיים במוחות בעלי החיים נמדדו באמצעות צביעת SA-β-Gal, אימונוהיסטוכימיה וצביעת Golgi-Cox, בהתאמה. טיפול ב-QFY הפחית באופן דרמטי את נטל פלאקי ה-Aβ בקורטקס והוריד את ביטוי p21 בעכברי 5xFAD, על פי בדיקות אימונופלואורסצנציה. בעכברי 5xFAD, טיפול ב-QFY שיפר באופן ניכר את ביצועי הלמידה והזיכרון, הקל את ההזדקנות, והעלה את כמויות החלבונים GAP-43, PSD-95 ו-SYN בקורטקס של העכברים. בעקבות הטיפול ב-QFY, נרשמה ירידה משמעותית בפלאקים של Aβ ובפעילות SA-β-Gal במוח, וכן ברמות Aβ1-42 וביחס Aβ1-42/Aβ1-40 בהיפוקמפוס. הרמות של IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-17A ו-IFN-γ פחתו במידה ניכרת בקורטקס של עכברי 5xFAD. ניתוחי PCA ומתאם פירסון הדגימו קשר שלילי חזק בין ציטוקיני SASP לבין רמות חלבוני סינפסה. ממצאים אלו מצביעים על קשר בין טיפול ב-QFY לבין שיפור בירידה קוגניטיבית הקשורה לגיל ובפנוטיפים של הזדקנות תאית בעכברי 5xFAD, לצד הפחתה של נזק מבני סינפטי. ממצאים אלו תומכים בבחינה נוספת של QFY כמועמד טיפולי פוטנציאלי למחלת אלצהיימר.
מחלת אלצהיימר (AD)1 היא הצורה השכיחה ביותר של דמנציה, והיא מאופיינת בחלבון עמילואיד-β (Aβ), בחלבון טאו היפר-פוספורילי (P-Tau), באובדן סינפטי ובדלקת כרונית. לתרופות הזמינות כיום לטיפול ב-AD יש מספר תופעות לוואי, והן אינן מסוגלות לעצור את התקדמות המחלה2,3,4,5.
הזדקנות תאית (Senescence), המתבטאת כשיבושים בכל רחבי האורגניזם בסביבות מיקרו-סלולריות ובינאישיות ולא כשינויים מקומיים הספציפיים לאיבר, היא גורם סיכון מרכזי בפתוגנזה של AD. דה-רגולציה סיסטמית זו מבדילה את התקדמות ה-AD ממודלים של פתולוגיה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ניסויי בעלי החיים אושרו על ידי ועדת האתיקה לרווחת בעלי חיים ניסויים של האוניברסיטה לרפואה סינית מסורתית בשאנדונג (SDUTCM20221101001).
תרופות
אבקת קרם יבש של גרנולת QFY הוכנה ונבדקה על ידי מרכז המחקר והפיתוח Houpu של Lunan Pharmaceutical. Donepezil ו-Memantine נרכשו מ-Shanghai Yuanye Technology. במחקר זה נעשה שימוש בעכברים זכרים מסוג 5xFAD עם טווח משקל גוף ראשוני של 19–27 g. מינון ה-QFY נגזר מהמינון הקליני האנושי של 43 g/d, המקביל ל-16.297 g/d לאחר התאמה לאבקת קרם יבש של גרנולת QFY. המינון הבינוני לניסוי הנוכחי חושב על בסיס המינון הקליני האנושי (16.297 g/70 kg x 9.1 = 2.11861 g/kg/d). המינון הגבו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מתן QFY משפר למידה וזיכרון בעכברי 5xFAD
לאחר מתן QFY, נערך מבחן תיבת מעבר (shuttle box test) כדי להעריך את תגובת ההימנעות האקטיבית המותנית של עכברים (איור 2A–C). התוצאות הראו כי מספר מקרי ההימנעות האקטיבית בימים 1-4 (איור 2A, p < 0.05), השטח תחת העקומה (AUC) של הימנעות אקטיבית (איור 2B, p < 0.01) במהלך תקופת הלמידה, ומספר מקרי ההימנעות האקטיבית (.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פלסטיקה סינפטית עצבית ממלאת תפקיד מרכזי בתפקוד קוגניטיבי. במוחם של חולי AD, משקעי Aβ מתפשטים באזורים שונים, וגורמים ישירות לנזק מבני סינפטי, לאובדן סינפסות מעוררות ולהידרדרות קוגניטיבית28. GAP-43 (חלבון ממברנה פרה-סינפטי)29, PSD-95 (חלבון פיגום הממוקם בממברנה הפוסט-סינפטית)30, ו-SYN (פוספו-חלבון הקשור לשקים סינפטיים)31 ממלאים תפקיד חשוב בפלסטיקה של המבנה הסינפטי ובפתוגנזה של AD32. המחקר הנוכחי מצא כי טי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעים טבעיים של סין (82205078, 82374062), הקרן למדעים טבעיים של מחוז שאנדונג (ZR2026MS1293, ZR2021QH157), פרויקט המדע והטכנולוגיה של הרפואה הסינית המסורתית של מחוז שאנדונג (M20251730), פרויקטים של מדע וטכנולוגיה של האזור האוטונומי טיבט, סין (XZ202601ZY0167), ותוכנית ההכוונה לחדשנות טכנולוגית של מחוז שאנדונג (קרן פיתוח מדע וטכנולוגיה מקומית בהנחיית הממשלה המרכזית) (YDZX2023137), במסגרת הפרויקט שכותרתו 'פיתוח ומחקר תעשייתי של קפסולות Tongli עם ציפוי מעי כתרופה סינית מסורתית חדשה מסוג Class 1'.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תרופות | |||
| דונפזיל | Shanghai Yuanye Technology | lot.J15HB188725 | |
| ממנטין | Shanghai Yuanye Technology | סדרה J21HB189391 | |
| צ'י-פו-ין (Qi-fu-yin) | מרכז המחקר והפיתוח Houpu של Lunan Pharmaceutical | סדרה 2209001 | |
| מבחנים התנהגותיים | |||
| CatWalk XT | Noldus | תוכנת CatWalkXT 10.0 | |
| מדד כוח לחיצת יד | Bileadbiosci | BLD-ZL-20 | |
| מבוך המים של מוריס | Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd | 120 ס"מ | |
| תיבת מעבר (Shuttle box) | Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd | XR-XC404 | |
| נוגדנים | |||
| Anti-Aβ1-42 נוגדן | Abcam | מספר קטלוגי ab201061# | |
| נוגדן Anti-p21/CIP1/CDKN1A | Novus Biologicals | מספר קטלוגי NBP3-15661 | |
| ערכות בדיקה | |||
| Aβ1-40 ערכה ל-ELISA | Thermo Fisher Scientific | מספר קטלוגי KHB3482 | |
| Aβ1-42 ערכת ELISA | Thermo Fisher Scientific | מספר קטלוגי KHB3442 | |
| ערכה לבדיקת Bio-Plex Pro Mouse Cytokine 23-plex | R&מערכות D | מספר קטלוגי LXLBM23-1 | |
| ערכה לביצוע ELISA עבור GAP-43 | תעשיית בדיקות סמיך-אנזים (ELISA) בגיאנגסו | מס' קH MM-47506M1 | |
| ערכת צביעת גולג'י-קוקס (Golgi-Cox staining kit) | BeiJing Biolead Biology Sci & טק קו (Tech Co) | מספר קטלוג PK401 | |
| ערכה לבדיקת ELISA ל-PSD-95 | תעשיית בדיקות סריקת אנזימים (Enzyme Immunoassay) בג'יאנגסו | קט"ל MM-45953M1 | |
| הזדקנות תאית β-ערכה לצביעת גלקטוסידאז | Beyotime | מספר קטלוגי C0602# | |
| ערכה לבדיקת ELISA של סינפטופיזין (SYN) | תעשיית הבדיקות האימונו-אנזימטיות של ג'יאנגסו | מספר קטלוגי MM-46504M1 | |
| כימיקלים & ריאגנטים | |||
| נוגדן משני אנטי-rabbit ואנטי-mouse IgG | סטרטר | מספר קטלוגי S0C1001# | |
| כרומוגן DAB | חומר התנעה | מספר קטלוגי S0C1001 | |
| תוכנה | |||
| CatWalk XT | Noldus Information Technology | גרסה 10.0 | |
| ImageJ | המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) | גרסה 1.53 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.