הקשר בין פולימורפיזם MIR30C rs928508 לבין תוצאות הקלה לידה אפידורלית בנשים פרימיפריות: מחקר תצפיתי

סיכום

מחקר תצפיתי זה חקר את הקשר בין פולימורפיזם rs928508 ב-MIR30C לבין תוצאות משכך כאבי לידה אפידורלית, ציוני כאב, משך הלידה ותגובות שליליות בנשים פרימיפריות העוברות לידה וגינלית.

תקציר

פולימורפיזמים גנטיים עשויים להשפיע על שונות אישית בתפיסת כאב הלידה וביעילות המשכך כאבים. MicroRNA-30c (MIR30C) משחק תפקיד במודולציה של כאב, אך הקשר שלו למשכוך כאבים בלידה נותר לא ברור. מחקר זה חקר את הקשר בין הפולימורפיזם rs928508 של MIR30C לבין הקלה לידה אפידורלית בנשים פרימיפריות. בסך הכול נרשמו 202 נשים פרימיפריות סיניות בריאות שקיבלו הקלה אפידורלית סטנדרטית עם רופיבאקאין וסופנטניל. rs928508 גנוטיפים (GG, GA ו-AA) זוהו באמצעות בדיקות TaqMan, ובוצע ניתוח שיווי משקל הארדי–ויינברג להערכת התפלגות גנטית של אוכלוסיות. עוצמת הכאב הוערכה באמצעות סולם האנלוגי הוויזואלי (VAS) בתחילת הטיפול לפני הקלה בכאבים, 30 דקות לאחר ההרדמה, שעה לאחר הקלה ואחרי הפסקת הטיפול בכאבים. הגורמים המשפיעים על תוצאות הקלה בכאבי לידה הוערכו באמצעות ניתוח רגרסיה רב-משתנית. נשאים של הגנוטיפ של GG הציגו ציוני VAS גבוהים משמעותית לפני שיכוך הכאבים, ב-30 דקות לאחר הקלה ואחרי הפסקת האנלגזיה, יחד עם משך לידה ממושך בשלב הראשון בהשוואה לנשאי GA ו-AA. ניתוח רגרסיה רב-משתנית זיהה את הגנוטיפ של GG כגורם עצמאי הקשור לציוני VAS גבוהים יותר לאחר הרדמת כאבים. תוצאות יילודים ורוב התגובות השליליות היו דומות בין הגנוטיפים, למעט שכיחות גבוהה יותר של כאב באתר הדקירה בקרב נשאי GG. האלל ה-G של MIR30C rs928508 היה קשור לעלייה בכאב בסיסי, פוטנציאל להפחתת יעילות משכך כאבי לידה אפידורלית, והארכת משך הלידה בשלב הראשון בנשים פרימיפריות. ממצאים אלו תומכים בחקירה נוספת של הרלוונטיות הפרמקוגנומית הפוטנציאלית של שונות גנטית ב-MIR30C בהקלה על כאבי לידה.

מבוא

כאב הלידה, המוכר כאחד הצורות העזות ביותר של כאב אנושי, לא רק גורם ללחץ פיזיולוגי חמור אצל לידה, אלא גם עלול להשפיע לרעה על תוצאות האימהות והילודות באמצעות מנגנונים נוירואנדוקריניים. זה עלול להוביל לסיבוכים כמו התכווצויות רחם לא תקינות, מצוקה עוברית ודיכאון לאחר לידה ^1,2. הקלה על כאבי לידה מקלה ביעילות על כאב ולחץ אימה, משפרת את חוויית הלידה, ומדגימה פרופיל בטיחות נוח הן לאם והן לתינוק כאשר ניתנת כראוי³. הוכח כי האנלגזה אפידורלית, השיטה המועדפת להקלה על כאבי לידה בפרקטיקה קלינית, הוכח כמפחית ביעילות את ציוני הכאב בסולם האנלוגי הוויזואלי (VAS). יתרה מזאת, חקר משטרי תרופות משולבים שיפר את יעילות משככי הכאבים תוך הפחתת תופעות לוואי⁴.

ראיות משמעותיות מצביעות על כך שפולימורפיזמים גנטיים, כצורה עיקרית של שונות גנטית, עשויים להשפיע על תוצאות משכך כאבי הלידה. מחקר אחד הראה כי לילדות הנושאות את האלל G של הפולימורפיזם של גן קולטני μ-אופיאטים (OPRM1) rs1799971 זקוקים למינונים גבוהים משמעותית של אופיאטים להקלה על כאבי לידה בהשוואה לאנשים עם גנוטיפ AA ודיווחו על שביעות רצון נמוכה יותר ממשכי כאבים. מוטציות במקום זה עשויות להפחית את ביטוי ממברנת הקולטן, ובכך להחליש את יעילות משכי הכאבים האופיואידיים⁵. יתרה מזאת, פולימורפיזמים בגן הקטכול-O-מתילטרנספראז (COMT) עשויים להשפיע על מידת הרגישות המרכזית לכאב על ידי ויסות חילוף החומרים של הדופמין, ובהמשך לשנות את סף הכאב של האם ואת התגובה לתרופות משככות כאבים^{במהלך הלידה}. פולימורפיזמים בגן הציטוכרום P450 3A4 (CYP3A4) דווחו גם כמווסתים תוצאות משככי כאבים על ידי השפעה על קצב חילוף החומרים של התרופות ^7,8. בנוסף, ג'אנג ואחרים דיווחו כי מטופלים עם הגנוטיפ MDR1 1236C>T TT דרשו באופן משמעותי יותר פנטניל לאחר ניתוח קיסרי לעומת אלו עם גנוטיפ CC או CT⁹. יחד, ממצאים אלו מספקים תובנה לבסיס הגנטי שמאחורי השונות הבין-אישית בתפיסת הכאב¹⁰.

עם ההתקדמות במחקר אפיגנטי, תפקידם של פולימורפיזמים של גני RNA שאינם מקודדים במודולציית הכאב הוכר יותר ויותר. מיקרו-RNA (miRNAs), כרגולטורים אפיגנטיים מרכזיים, מווסתים את ביטוי הגנים על ידי מיקוד ב-RNA שליח (mRNA) לדיכוי או התדרדרות תרגומית, ובכך ממלאים תפקיד מרכזי בהעברת אותות הכאב ובהתפתחות רגישות לכאב¹¹. מחקרים רבים הראו כי miRNA מתבטאים באופן שונה בכאב נוירופתי, כאב דלקתי ומצבים נוספים של כאב, ומשתתפים ברגישות מרכזית לכאב באמצעות ויסות מסלולי איתות מרובים^12,13. פולימורפיזמים במי-רנ"א עשויים להשפיע על רמות הביטוי שלהם או על יעילות הקשר שלהם לגנים היעדים, ובכך לווסת את מפלי האיתות הקשורים לכאב¹⁴. מחקרים קודמים קישרו פולימורפיזמים של miRNA להטרוגניות הפנוטיפית של תסמונת כאב אזורית מורכבת (CRPS) וכאב פתולוגי בסרטן השד^15,16. מבין רבים מה-miRNA הקשורים לכאב, משפחת miR-30 זכתה לתשומת לב גוברת בשל מעורבותו בוויסות כאב נוירופתי^17,18. במיוחד, התפקיד הרגולטורי של miR-30c-5p נחקר לעומק. מחקרים בבעלי חיים הראו כי ביטוי miR-30c-5p היה מווסת משמעותית במבנים עצביים הקשורים לכאב לאחר פגיעת עצב סיאטי, בעוד שמתן מעכב סינתטי הפך באופן עקבי את הרגישות ליתר כאב נוירופתי בעכברים. מחקרים מכניים נוספים גילו כי miR-30c-5p מכוון ל-RNA שליח של DNA מתילטרנספראז 3a (DNMT3a) ו-DNMT3b, ומשפיע על רמות המתילציה של DNA בתאי עצב באמצעות ויסות אפיגנטי ותורם לשמירה ארוכת טווח של הכאב¹⁹. מחקרים קליניים הצביעו גם על מתאם בין רמות miR-30c-5p לעוצמת כאב נוירופתי אצל מטופלים ^20,21. ראוי לציין כי מחקר עדכני דיווח כי האלל G ב-miR-30c rs928508 העלה את הסיכון לכאב אצל אנשים שנחשפו לבריונות במקום העבודה²². מחקר נוסף הראה כי האלל G מפחית את ביטוי miR-30c על ידי השפעה על עיבוד miR-30c ראשוני (pri-miR-30c) ל-miR-30c בוגר. עם זאת, עדיין לא ברור האם פולימורפיזמים miR-30c משפיעים על רגישות לכאבי לידה או על תוצאות משכך כאבי הלידה האפידורליים.

למרות שטכניקות משכך כאבי לידה עברו אופטימיזציה מתמשכת, מנגנוני הרגולציה של miRNA במודולציה של כאב הפכו לברורים יותר ויותר. בנוסף, miR-30c-5p זוהה כגורם רגולטורי חשוב בכאב נוירופתי, והפולימורפיזמים שלו נקשרו לפנוטיפים הקשורים לכאב. עם זאת, עדיין לא ברור האם פולימורפיזמים של miR-30c מעורבים בוויסות משכי כאבי הלידה. לכן, המחקר הנוכחי התמקד בפולימורפיזם של MIR30C rs928508 כדי לחקור את הקשר שלו לתוצאות הקלה על כאבי לידה אצל נשים פרימיפריות המקבלות הקלה אפידורלית. הממצאים עשויים לספק תמיכה תיאורטית למחקרים עתידיים בנוגע לתפקיד האפשרי של שונות גנטית באסטרטגיות הקלה אישית של כאבים בעבודה.

פרוטוקול

מחקר זה בוצע בהתאם לסטנדרטים האתיים של ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים השישי שיג'יאג'ואנג ואושר על ידי הוועדה תחת מזהה אישור מס' 2022111709. התקבלה הסכמה בכתב מדעת מכל המשתתפים לפני ההרשמה. סקירה סכמטית של עיצוב המחקר וזרימת העבודה הניסיונית מוצגת באיור 1.

איור 1. סכמת זרימת העבודה של עיצוב המחקר וממצאים מרכזיים. התרשים מסכם את זרימת העבודה הכוללת של המחקר הבודק את הקשר בין פולימורפיזם MIR30C rs928508 לבין תוצאות הקלה על כאבי עבודה אפידורלית בנשים פרימיפריות. תהליך העבודה כולל גיוס משתתפים, גנוטיפינג לפי MIR30C rs928508, סטרטיפיקציה מבוססת גנוטיפ, מתן הקלה סטנדרטית לאפידורל לעבודה, הערכת תוצאות וניתוח סטטיסטי. התוצאות שהוערכו כללו ציוני כאב בסולם האנלוגי הוויזואלי (VAS), משך הלידה, תוצאות יילודים ותגובות לוואי הקשורות להקלה על כאבים. הסכמת מדגישה גם את הממצאים המרכזיים, כולל ציוני כאב גבוהים יותר, לידה ממושכת בשלב הראשון, ועלייה בשכיחות כאב באתר הדקירה בקרב נשאי הגנוטיפ של GG. VAS, סולם אנלוגי חזותי; SNP, פולימורפיזם נוקלאוטיד יחיד. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

נתונים קליניים
בבית החולים השישי שיג'יאג'ואנג, נשים ללא ילדות שילדו בין ינואר 2022 לינואר 2025 נרשמו ברצף כנבדקות מחקר דרך מערכת הרשומות הרפואיות האלקטרונית של בית החולים, עם סך של 202 מקרים. במהלך ביקורים טרום-לידתיים בין שבועות 28 ל-36 להריון, נשים זכאיות ללא פריות הוצגו למחקר וקיבלו הסכמה כתובה מראש. המטופלות שנכללו בסופו של דבר בניתוח היו אלו שילדו בשבוע 37–41 להריון, עברו הריון חד-פעמי, והופיעו עם הצגה ראשית.

קריטריוני ההכללה היו כדלקמן: 1) נשים פרימיפריות בריאות בגילאי 20–35; 2) אתניות האן הסינית; 3) הריון יחיד בהצגה ראשית עם גיל הריון בין 37 ל-41 שבועות; ו-4) לידה וגינלית ספונטנית או מסייעת מתוכננת עם סימנים להקלה אפידורלית. הסימנים לאנלגזה אפידורלית היו: (א) בקשה אימהית עם הסכמה מדעת חתומה; (ב) לידה פעילה (הרחבת צוואר הרחם ≥2 ס"מ עם התכווצויות רחם סדירות); ו-(ג) הערכה מיילדת המאשרת התאמה ללידה וגינלית.

קריטריוני החרגה כללו: 1) מחלות נלוות להריון כגון יתר לחץ דם בהריון, סוכרת או מחלות לב קשות; 2) הריון מרובה; 3) המרה לניתוח קיסרי לאחר תחילת משכך כאבי הלידה; 4) חריגות מבניות בעמוד השדרה; ו-5) התוויות נגד למשכי כאבים בלידה. התוויות המניעות להקלה על כאבי לידה כללו: (א) סירוב או חוסר יכולת של האם לשתף פעולה; (ב) עלייה בלחץ תוך-גולגולתי, עיוות בעמוד השדרה או זיהום מקומי באתר הניקוב; (ג) הפרעות קרישה (ספירת טסיות <70 × 10⁹/L או חריגות ידועות בגורם קרישה); (ד) היפווולמיה או שוק לא מתוקן; (ה) אלרגיה לחומרי הרדמה מקומיים או אופיאטים; ו-(ו) מצבי חירום מיילדות (למשל, מצוקה עוברית הדורשת לידה קיסרית מיידית, צניחת חבל הטבור, או שליה פרוויה עם דימום פעיל).

הכוח הסטטיסטי הפוסט-הוק חושב כ-0.91, מה שמעיד שגודל המדגם מספיק כדי לזהות הבדלים בתדירות הגנוטיפ והאללים בין אוכלוסיית המחקר לאוכלוסיית הייחוס.

הרדמה ומשכך כאבים
לפני ההרדמה האפידורלית, כל הנשים הפרימיפריות עברו ניטור רציף של סימני החיים. דיכוי נשימתי הוגדר כקצב נשימה <10 נשימות לדקה או רוויית חמצן (SpO₂) <90%, לחץ דם נמוך כלחץ דם סיסטולי <90 מ"מ כספית או ירידה של >20% מהמצב הבסיסי, ואצירת שתן כחוסר יכולת להתפנות ספונטנית בתוך 6 שעות לאחר הלידה שדורש קטטריזציה. הרחבת צוואר הרחם הוערכה באמצעות בדיקה וגינלית דיגיטלית שבוצעה על ידי הרופא המיילד המטפל או מיילדת מוסמכת בתפקיד. כל הבוחנים עברו הכשרה סטנדרטית בהערכת הרחבת צוואר הרחם באמצעות סימולטור בדיקת צוואר הרחם, עם הערכות בקרת איכות קבועות להבטחת עקביות בין המערכים. בדיקות צוואר הרחם בוצעו באופן שגרתי כל שעתיים במהלך הלידה הפעילה או בתדירות גבוהה יותר כאשר חשדו לחריגות בהתקדמות הלידה. הקלה אפידורלית החלה כאשר הרחבת צוואר הרחם המתועדת הגיעה ל-≥2 ס"מ, כפי שנרשם על ידי רופא המיילדות האחראי.

נוהל פרוטוקול סטנדרטי להמשכת כאבים אפידורלית. כאשר הלידה הונחה במיקום הדקוביטוס הצידי השמאלי, החלל האפידורלי נגיש דרך המרחב הבין-חולייתי L3–L4 באמצעות טכניקת אובדן ההתנגדות למלח. קטטר אפידורלי הוקדם 3–4 ס"מ לתוך מרחב האפידורל. לפני מתן כל תרופה, בוצעה שאיבה עדינה דרך הקטטר. היעדר נוזל מוח-שדרה או דם אישר את מיקום הקטטר הנכון והוציא מיקום תוך-תוך-כלי או תוך-וסקולרי. לאחר מכן ניתנה מינון בדיקה של 5 מ"ל של 1% לידוקאין הידרוכלוריד באפידורלית.

לאחר מכן התקיימה תקופת תצפית של 10 דקות, שבמהלכה נבדק הילד בהתאם לקריטריוני בטיחות מוגדרים מראש. קריטריונים אלו כללו היעדר סימנים לרעילות מערכתית מקומית בהרדמה (למשל, נימול סביב הפה, טעם מתכתי, טינטון או חריצות), היעדר סימנים לחסימה גבוהה או מלאה של חסימת עמוד שדרה (למשל, התקדמות מהירה של חסימה מוטורית, קוצר נשימה, דיספוניה או שינוי במצב הנפשי), ושמירה על יציבות המודינמית, המוגדרת כקצב הלב ולחץ הדם שנשארים בטווח של 20% מערכי הבסיס. לאחר אישור שכל קריטריוני הבטיחות התקיימו, ניתנה מינון טעינה של 10 מ"ל המכיל 0.1% רופיבאקאין הידרוכלוריד ו-0.4 מיקרוגרם/מ"ל סופנטניל ציטראט.

מדדי תוצאה
נרשמו מאפיינים דמוגרפיים ומיילדותיים בסיסיים של נשים פרימיפריות, כולל גיל, מדד מסת גוף (BMI), גיל הריון, טמפרטורת גוף בזמן הפסקת האנלגזיה, משך השלבים הראשון, השני והשלישי של הלידה, ומשך הלידה הכולל. טמפרטורת הגוף נמדדה באמצעות מדחום אקסילרי דיגיטלי סטנדרטי שהונח באקסילה הימנית למשך 5 דקות על ידי צוות סיעודי מיומן בעת הפסקת הטיפול בכאבים. משכי שלב הלידה נרשמו באופן פרוספקטיבי על ידי המיילדת או המיילדת המטפלת בהתאם לקריטריונים מיילדות סטנדרטיים מוגדרים מראש. השלב הראשון של הלידה הוגדר כמרווח מהתכווצויות הרחם הסדירות עם הרחבת צוואר הרחם ≥4 ס"מ ועד להרחבת צוואר הרחם המלאה (10 ס"מ); השלב השני השתרע מהרחבה מלאה של צוואר הרחם ועד ללידה עוברית; והשלב השלישי נמשך מלידה עוברית ועד ללידה מלאה בשליה. משך העבודה הכולל חושב כסכום שלושת השלבים. כל המדידות נרשמו בזמן אמת בפרטוגרמה ובתיעוד הרפואי האלקטרוני. כל הצוות הקליני המעורב בניהול העבודה קיבל הכשרה אחידה על הגדרות אלו לפני תחילת המחקר.

עוצמת הכאב הוערכה באמצעות סולם אנלוגי חזותי (VAS). כל יולדת דיווחה בעצמה על רמת הכאב שלה על ידי סימון קו באורך 10 ס"מ, ולאחר מכן צוותי מחקר מיומנים מדדו ותיעדו את הניקוד. המעריכים היו עיוורים למידע גנוטיפ מכיוון שגנוטיפינג בוצע לאחר איסוף כל נתוני התוצאה הקלינית, כולל ציוני VAS. ציוני הכאב נרשמו בארבע נקודות זמן: לפני התחלת האנלגזה (כאשר הרחבת צוואר הרחם הגיעה ל-2 ס"מ), 30 דקות לאחר תחילת האנלגזיה, שעה לאחר תחילת האנלגזיה, ו-30 דקות לאחר הלידה (המקביל לזמן הפסקת האנלגזיה). כדי להתחשב בקורלציות בתוך הנבדקים הנובעות ממדידות VAS חוזרות, בוצע ניתוח שונות דו-כיווני (ANOVA) על פני ארבע נקודות הזמן של ההערכה. ציוני VAS נעו בין 0 ל-10, כאשר ציונים של 0–3 מצביעים על כאב קל, 4–6 מצביעים על כאב בינוני, ו-7–10 מצביעים על כאב חמור²³.

התוצאה הראשונית של משככי הכאבים הוערכה 30 דקות לאחר תחילת הטיפול במשכי כאבים. עוצמת הכאב נמדדה באמצעות ה-VAS, כאשר 0 סימן חוסר כאב ו-10 הצביע על הכאב החמור ביותר שניתן לדמיין. בהתבסס על הגדרה מראשית, ציון VAS >3 סווג כהשפעה משכך כאבים גרועה (משתנה בינארי תלוי בקוד 1), בעוד שציון VAS ≤3 סווג כאפקט משכך כאבים מספק (מקודד כ-0). הגדרה זו יושמה בעקביות לאורך כל הניתוח, ומודל הרגרסיה הלוגיסטית הראשי השתמש בתוצאה הבינארית הזו כמשתנה התלוי.

תוצאות יילודות הוערכו באמצעות ציוני אפגר בדקה ו-5 דקות לאחר הלידה. ציונים של 8–10 נחשבו לנורמליים, ציונים של 5–7 הצביעו על חנק קל, וציונים של 0–4 הצביעו על חנק חמור²⁴. הערכות אפגר בוצעו בהתאם לתוכנית החייאת יילודים (מהדורה 7) שפורסמה במשותף על ידי האקדמיה האמריקאית לרפואת ילדים והמכללה האמריקאית למיילדות וגינקולוגים, וכן בהתאם להנחיות הערכה סטנדרטיות שנקבעו על ידי מחלקת הניאונטולוגיה של בית החולים. כל ההערכות בוצעו על ידי אחיות יילודים מיומנות או רופאים מתמחים שהיו עיוורים להקצאת קבוצות המחקר.

נרשמה שכיחות תופעות לוואי לאחר תחילת הקלה בכאבים. התגובות השליליות כללו דיכוי נשימתי, לחץ דם נמוך, אגירת שתן, כאב באתר הניקוב, סחרחורת, בחילה או הקאה, וגרדת. דיכוי נשימתי הוגדר כקצב נשימה של <10 נשימות לדקה או SpO₂ של <90%; לחץ דם נמוך כלחץ דם סיסטולי <90 מ"מ כספית או ירידה של >20% מהקו הבסיסי; אגירת שתן ככישלון בהפרשה ספונטנית בתוך 6 שעות לאחר הלידה שדורשת קטטריזציה; כאב באתר הדקירה כאב שדווח על ידי מטופל באתר הדקירה עם ציון סולם דירוג מספרי (NRS) ≥4; בחילה והקאה כנוכחות של בחילה או לפחות פרק אחד של הקאות; וגרד כגרד עור שדווח על ידי מטופל ללא סיבה מזוהה אחרת. תופעות לוואי נבדקו מהתחלת האנלגזה האפידורלית ועד לשחרור מבית החולים ונרשמו באופן פרוספקטיבי על ידי הצוות הקליני המטפל.

איסוף דגימות דם וגנוטיפינג
במהלך בדיקות טרום-לידתיות, נאסף דם ורידי פריפרי (2 מ"ל) מכל אישה פרימיפרית שגויסה בתנאי צום (תקופת צום מינימלית של 8 שעות) ובזמן איסוף סטנדרטי בין 08:00 ל-10:00 לתוך צינורות נוגדי קרישה בחומצה אתילנדיאמינית טטראצטית (EDTA) לצורך חילוץ חומצה גרעין לאחר מכן. כל הדגימות נשמרו מיד בטמפרטורה של −80°C עד לניתוח. תקופת האחסון לפני חילוץ ה-DNA נעה בין חודש לשישה חודשים. כדי למזער את התדרדרות ה-DNA, הדגימות נלקחו לפני האחסון, ומחזורי ההקפאה–הפשרה צומצמו לאורך כל המחקר. דגימות קפואות הופשרו באיטיות על קרח לפני העיבוד.

ה-DNA הופק מדם מלא באמצעות ערכת טיהור DNA גנומית. לפני הגנוטיפינג, ריכוז ה-DNA וטוהרו הוערכו באמצעות ספקטרופוטומטריה אולטרה-סגולה באמצעות יחס A260/A280, ושלמות ה-DNA הוערכה באמצעות אלקטרופורזה בג'ל אגרוז. רק מדגמים שעמדו בקריטריוני בקרת איכות מוגדרים מראש נכללו בניתוחים הבאים.

הגנוטיפינג של הפולימורפיזם rs928508 בוצע באמצעות בדיקות גנוטיפינג של TaqMan לפולימורפיזם נוקלאוטידי יחיד (SNP) (Cat. מס' 4351379). גשושים מסומנים על ידי VIC שימשו לזיהוי אלל A (5′-CAGGCCTGAGAGGCATGATGTGTGG-3′), וגשושים מסומנים על ידי FAM שימשו לזיהוי אלל G (5′-TAGCATCTTCCCAACACTTGCAATT-3′). נפח השרשרת הכולל של תגובת הפולימראז (PCR) היה 10 מיקרוליטר וכלל 5.0 מיקרוליטר של 2× תערובת גנוטיפינג TaqMan, 0.25 מיקרוליטר של מבחן גנוטיפינג TaqMan SNP (תערובת פריימר-פרוב), 10–20 נגרם של תבנית DNA גנומית, ומים נטולי נוקלאז לנפח התגובה הסופי.

ההגברה בוצעה באמצעות מכשיר PCR כמותי בהתאם לשיטות הבדיקה הסטנדרטיות של TaqMan. תנאי המחזור התרמי כללו שלב ראשוני של הפעלת אנזימים ב-95°C למשך 10 דקות, ואחריו 40 מחזורי דהנאטורציה ב-95°C למשך 15 שניות ואנילינג/הרחבה ב-60°C למשך 60 שניות. לאחר ההגברה, בוצעו אוטומטית רכישת אותות פלואורסצנציה וניתוח הבחנה אללית באמצעות תוכנת המכשיר לקביעת גנוטיפים של הדגימה.

כל הדגימות נותחו בשכפול. לתוצאות דיסוננטיות, בוצע ניתוח עצמאי שלישי, ואומץ התוצאה התואמת. שיעור השיחות ב-SNP היה ≥95%, ו-10% מהדגימות שנבחרו באקראי הראו התאמה של 100% בבדיקות חוזרות. בקרות חיוביות, ביקורות שליליות ובקרות ללא תבנית נכללו בכל לוח מבחן. הקצאת הגנוטיפ בוצעה באופן עיוור, וכל אנשי המעבדה המעורבים בגנוטיפינג נשארו עיוורים לנתוני תוצאות קליניות לאורך כל המחקר.

ניתוח סטטיסטי
שיווי המשקל הארדי–ויינברג (HWE) של האלל rs928508 הוערך באוכלוסיית המחקר. הנורמליות של משתנים רציפים הוערכה באמצעות מבחן שפירו–וילק. נתונים מבוזרים נורמלית הוצגו כסטיית תקן ממוצעת ± (SD), בעוד שנתונים שאינם מבוזרים נורמלית דווחו כטווח החציון והטווח הבין-רבעוני (IQR).

בהשוואות בין שלוש קבוצות, הוחל ניתוח שונות חד-כיווני (ANOVA) או ANOVA דו-כיווני במדידות חוזרות כאשר הנחות הנורמליות התקיימו, ואחריו בוצעה בדיקת ההבדל האמיתי (HSD) של טוקי להשוואות מרובות לאחר הוק. כאשר הנחות הנורמליות לא התקיימו, נעשה שימוש במבחן Kruskal–Wallis H, ואחריו מבחן הפוסט-הוק של דאן עם תיקון בונפרוני. משתנים קטגוריים סוכמו כתדירויות ואחוזים ונותחו באמצעות מבחן חי-ריבוע (χ²). ספירת התאים הצפויה הוערכה לפני הניתוח, והמבחן המדויק של פישר שימש כאשר תדירות התאים הצפויה הייתה <5.

מדידות VAS חוזרות שנאספו בנקודות זמן שונות נותחו באמצעות ANOVA דו-כיווני עם מדידות חוזרות כדי להתחשב בקורלציות בתוך הנבדק. השוואות לאחר מכן בוצעו באמצעות בדיקות מותאמות בונפרוני לצורך בקרה על השוואות מרובות.

בוצע ניתוח רגרסיה לוגיסטית בינארית כדי לזהות גורמים הקשורים לתוצאות לקויות של הקלה בכאבי עבודה. משתנה התוצאה העיקרי הוגדר כיעילות משכך כאבים בדקה 30 לאחר התחלת משכך כאבים אפידורליים. ציוני VAS חולקו לפי סף מוגדר מראש של 3, כאשר VAS >3 סווג כהשפעה משכך כאבים גרועה ו-VAS של ≤3 כהשפעה משכך כאבים מספקת. משתנים הוזנו למודל הרב-משתני בהתבסס על רלוונטיות קלינית. מולטיקולינאריות הוערכה באמצעות גורם אינפלציית השונות (VIF), ונבדקו אינטראקציות פוטנציאליות בין משתנים. ערכי ה-VIF עבור כל המשתנים הכלולים במודל הרב-משתני מסופקים בטבלה המשלימים 1. כיול המודל הוערך באמצעות מבחן ההתאמה של הוסמר–למשואו.

ערך P דו-צדדי <0.05 נחשב מובהק סטטיסטית. ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנת SPSS (גרסה 23.0).

תוצאות

נתונים קליניים

ניתוח הפולימורפיזם של MIR30C rs928508 בקרב 202 נשים פרימיפריות נרשמו גילה כי הגנוטיפ של GA היה הנפוץ ביותר (49.51%, n = 100), אחריו GG (26.73%, n = 54) ו-AA (23.76%, n = 48). תדרי האללים התואמים היו 51.49% עבור G ו-48.51% עבור A. כפי שמוצג בטבלה 1, התפלגויות הגנוטיפ והאללים היו בדרך כלל תואמות לתדירויות המדווחות של אוכלוסיית מזרח אסיה במסד הנתונים של Ensembl (Ensembl Release 116, יוני ...

דיון

מחקר זה חקר את הקשר בין פולימורפיזם miR-30c rs928508 לבין תוצאות הקלה בכאבי לידה אפידורלית בקרב קבוצה של 202 נשים בריאות מהאן פרימיפריות. הממצאים הראו שגנוטיפ rs928508 של האם היה קשור להבדלים בתפיסת הכאב במהלך הקלה בלידה ולמשך השלב הראשון של הלידה. בנוסף, משטר ה-epidoral analgesia ששימש במחקר זה הראה פרופיל בטיחות דומה בדרך כלל בין קבוצות גנוטיפ ביחס לתוצאות יילודים ולרוב התגובות השליליות של האימהות. התפלגות הגנוטיפ בקבוצת המחקר התאימה לשיווי משקל הארדי–ויינברג והייתה בדרך כלל תואמת לתדי...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Agarose	Sigma-Aldrich	A2929-250G	הערכת שלמות ה-DNA
סימולטור לבדיקת צוואר הרחם	Erler-Zimmer	R16160	אימון בודקים ובקרת איכות
מד חום צירית דיגיטלי	Terumo	ETC207S	מדידת טמפרטורת גוף
צבע ג'ל DNA	Biotium	41020	ויזואליזציה של חומצות גרעין
צינורות לאיסוף דם EDTA	Greiner Bio-One	22040161	איסוף דם ורידי היקפי
מערכת רשומות רפואיות אלקטרוניות	בית החולים השישי בשיג'יאז'ואנג	N/A	איסוף נתונים קליניים
ערכת צנתר אפידורלי	Teleflex (Arrow)	FlexTip Plus	מיקום צנתר אפידורלי
מכשיר עירוי אפידורלי / משאבת PCEA	איתן מדיקל	17000-031-0035	מתן הרדמה אפידורלית
מחט אפידורלית (Tuohy)	Medline	N/A	מחט טוהי 17G × 3.5 אינץ' המשמשת לגישה אפידורלית ב-L3–L4
מערכת הדמיית ג'ל	Thermo Fisher Scientific	iBright FL1500	ויזואליזציה של רצועות DNA
ערכת טיהור DNA גנומי	Thermo Fisher Scientific	K0512	מיצוי DNA מדגימות דם שלם היקפיות
מערכת אלקטרופורזה ג'ל אופקית	Labmate	LMHES-A201	בקרת איכות DNA
דלי קרח ומים קפואים	Corning	N/A	הפשרה וטיפול בדגימות
זריקת לידקאין הידרוכלוריד (1%)	Pfizer	0409-4713-65	מינון בדיקה אפידורלית
צינורות מיקרוצנטריפוגה (1.5 מ"ל / 2 מ"ל)	Corning	430909 (1.5 מ"ל); 430915 (2 מ"ל)	איחסון ועיבוד דגימות
מיקרופיפטות (נפח משתנה)	Eppendorf	3125000044	PCR והכנת דגימות
מד פרמטרים מרובים למטופל	Lepu Creative Medical	PC-3000	מעקב אחר לחץ דם, קצב לב ורוויה בחמצן
מים נטולי נקלאז	Promega	P1195	הכנת תגובת PCR
טפסים לפרטוגרם או מערכת פרטוגרם אלקטרונית	GrowthXP (PC PAL)	N/A	תיעוד שלבי הלידה
תחנת עבודה מחשבית אישית	Lenovo (ThinkStation)	P2	עיבוד וניתוח נתונים
תוכנת PLINK	מעבדת Purcell	גרסה 1.9	ניתוח שיווי משקל Hardy–Weinberg
אוקסימטר דופק	Microlife	OXY 500 BT	מעקב אחר רוויה בחמצן
מכשיר PCR כמותי	Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems)	QuantStudio Dx (4470660)	אפליקציית פלואורוסצנציה וזיהוי אללים
מקרר מיקרוצנטריפוגה	Thermo Fisher Scientific (Heraeus)	Fresco 21 (75002425)	הכנת דגימות
זריקת רופיווקאין הידרוכלוריד	Hikma Pharmaceuticals (Naropin)	0143-9265-10	חומר הרדמה אפידורלי
תוכנת סטטיסטיקה SPSS	IBM Corp.	גרסה 23.0	ניתוח סטטיסטי
קצות פיפטה עקרות עמידים לאירוסול	Thermo Fisher Scientific (ART)	2149P-05	יישומים בביולוגיה מולקולרית
תמיסת מלח סטרילית	Baxter Healthcare Corporation	2B1301X	טכניקת אובדן התנגדות
מזרקים עקרים (5 מ"ל, 10 מ"ל)	Becton, Dickinson and Company (BD)	309646; 309695	הכנת תרופות ומתן תרופות
זריקת סופנטניל ציטראט	Hospira, Inc. (Pfizer)	0409-3382-11	מרכיב הרדמה אופיואידית
תערובת Master Mix לגנוטיפציה TaqMan (2×)	Thermo Fisher Scientific (Applied Biosystems)	4371353	חומר מגביר PCR
מבחן גנוטיפציה SNP TaqMan (rs928508)	Thermo Fisher Scientific	4351379	גנוטיפציה של פולימורפיזם MIR30C rs928508
מקפיא טמפרטורה נמוכה במיוחד (-80 °C)	Thermo Fisher Scientific	FDE30086FV	איחסון דגימות לטווח ארוך
ספקטרופוטומטר UV / ספקטרופוטומטר NanoDrop	Thermo Fisher Scientific (NanoDrop)	ND-1000	הערכת ריכוז וטוהר ה-DNA
טופס הערכת סולם אנלוגי חזותי (VAS)	N/A	N/A	טופס סולם אנלוגי חזותי סטנדרטי בגודל 10 ס"מ המשמש להערכת כאב