הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

ניתוח קוהורט קליני של miR-215-5p כסמן ביולוגי אבחנתי לאוסטיאוארתריטיס ולמנגנון שלה באמצעות EREG במודל כונדרוציטים מושרה IL-1β

96 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/72124

⸱

31 ביולי 2026

 ,  ,  , 
1Fujian University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Orthopedics, Xianyou County General Hospital, 3Department of Rehabilitation, Xianyou County General Hospital, 4Department of Orthopedics, Putian 95th Hospital

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מחקר זה נועד להעריך את miR-215-5p בסרום כביומרקר אבחנתי לאוסטיאוארתריטיס ולחקור את מנגנון הרגולציה שלו בכונדרוציטים המושרים על ידי IL-1β.

תקציר

אוסטיאוארתריטיס (OA) היא מחלת מפרקים ניוונית המאופיינת בהתדרדרות סחוס המפרק וחדירת דלקת סינוביאלית. מחקר זה נועד להעריך את miR-215-5p בסרום כביו-סמן אבחנתי ל-OA ולחקור את מנגנון הרגולציה שלו בכונדרוציטים המושרים על ידי IL-1β. גויסו 110 מטופלי OA ו-105 אנשים בריאה בביקורת. ביטוי miR-215-5p ו-EREG בסרום נקבעו באמצעות תגובת שרשרת פולימראז שעתוק הפוך כמותית. ערך האבחון של miR-215-5p עבור OA הוערך באמצעות עקומת מאפיין הפעלה של המקלט. כונדרוציטים של C28/I2 הוגרו עם IL-1β לבניית מודל תאי OA. קיום התאים, יכולת הנדידה ורמות הציטוקינים הדלקתיים הוערכו באמצעות Cell Counting Kit-8, בדיקת Transwell ובדיקת אימונוסורבנט מקושרת באנזים (ELISA). הקשר בין miR-215-5p ל-EREG אומת באמצעות בדיקת דיווח דו-לוסיפראז ובדיקת RNA אימונופרציפיטציה (RIP). אצל חולי OA, miR-215-5p בסרום הועלה בוויסות, בעוד ש-EREG היה מופחת. MiR-215-5p הציג ביצועים אבחנתיים טובים ל-OA (שטח מתחת לעקומה, AUC = 0.883). בתאי C28/I2 שטופלו באינטרלוקין-1β (IL-1β), עיכוב miR-215-5p הגביר את חיוניות ונדידת התאים, והחליש את רמות IL-1β, IL-6 ופקטור הנמק-α של הגידול (TNF-α). EREG אושר כמטרה ישירה של miR-215-5p. הפחתת EREG הפכה חלקית את ההשפעה המקדמת של ירידה ב-miR-215-5p על החיוניות ויכולת הנדידה של תאי C28/I2 שטופלו ב-IL-1β והחליש את ההשפעה המעכבת שלהם על גורמים דלקתיים. miR-215-5p תורם לפתוגנזה של OA על ידי ויסות EREG ומהווה סמן אבחנתי מבטיח ומטרה טיפולית פוטנציאלית ל-OA.

מבוא

אוסטיאוארתריטיס (OA) היא מחלת מפרקים ניוונית, והפתולוגיה שלה מתאפיינת בניוון הסחוס עם דלקת סינוביאלית 1,2. ברמה העולמית, שכיחות OA נשארת גבוהה, ומחקרים רלוונטיים דיווחו על מגמה של עלייה בשכיחות משנהלשנה 3,4. הוכח כי גורמים כמו השמנת יתר, הזדקנות, רגישות גנטית וצפיפות עצם קשורים להתפתחות OA5. מבחינת תסמינים קליניים, מטופלים עם OA מופיעים לעיתים קרובות עם כאבי מפרקים, נפיחות, תנועה מוגבלת ונוקשות, מה שמפחית משמעותית את איכות חייהם של המטופלים 6,7. ראוי לציין כי קיימים פנוטיפים שונים של OA, ופנוטיפים אלו משקפים באופן מתאים את מגוון הפתוגנזה של המחלה8. נכון להיום, הטיפול בדלקת מפרקים מפריעית עדיין מתמקד בשיפור התסמינים, והתרופות הקליניות הנפוצות כוללות משככי כאבים ותרופות אנטי-דלקתיות שאינן סטרואידיות, המסוגלות רק להקל על כאב ואינן יכולות להפוך את התקדמותהמחלה בצורה יעילה. לכן, חקר סמנים ביולוגיים חדשים של OA הפך לצורך דחוף למחקר עדכני.

מיקרו-RNA (miRNAs) הם קטגוריה של מולקולות RNA קצרות גדיליות שאינן מעורבות בקידוד חלבון10. הן משמשות כמולקולות ויסות גנים חשובות באורגניזמים רב-תאיים ויכולות להשפיע על תפוקת הביטוי של גנים מקודדי חלבונים רבים11. מחקרים רבים אישרו כי ל-miRNA יש השפעה ניכרת על התפתחות OA12. מחקר קודם הראה כי miR-215-5p היה מופרז ברעלת הריון והפחית את הנדידה והיכולת הפולשנית של טרופובלסטים על ידי ויסות ביטוי CDC613. ביטוי יתר של miR-215-5p הפחית את הפגיעה הדלקתית בתאי H9c2 בספסיס14. miR-215-5p עשוי להפעיל אפקט מגן בפתוגנזה של אוסטאופורוזיס על ידי עיכוב ביטוי XIAP וקידום ההבדלה של hBMSCs15. ראוי לציין כי miR-215-5p נמצא בוויסות מוגבר כאשר פרופילי ביטוי miRNA של רקמות סינוביאליות של מטופלי OA נבדקו16. עם זאת, ביטוי miR-215-5p בסרום והפוטנציאל שלו כסמן ביולוגי אבחנתי לדלקת OA טרם נחקרו. תפקידו של miR-215-5p בכונדרוציטים של OA, במיוחד השפעותיו על חיוניות התאים, הנדידה ותגובת הדלקת, נותר לא ברור. לא דיווחו על מחקרים האם miR-215-5p מפעיל את תפקידו הרגולטורי ב-OA דרך מטרות ספציפיות במורד הזרם. מילוי פערים אלו יספק תובנות חדשות על מנגנוני מולקולריה של OA ויזהה יעדים טיפוליים מועמדים חדשים.

EREG הוא חבר במשפחת גורמי הגדילה האפידרמליים והוכח כי מעורב בתיקון רקמות ותגובות דלקתיות17,18. המחקר של צ'ן ואח' דיווח כי ביטוי EREG ירד באופן משמעותי בסחוס וברקמות סינוביאלית אצל חולי OA בהשוואה לקבוצת הביקורת19. עם זאת, האם EREG משמש כמטרה במורד הזרם של miR-215-5p בכונדרוציטים OA ותפקיד ציר רגולטורי זה בפתוגנזה של OA נותרו כיום לא ברורים.

בהתבסס על הרקע לעיל, אנו משערים שהביטוי של miR-215-5p בסרום מווסת אצל חולי OA ומוביל לתפקוד דלקתי לקונדרוציטי על ידי מיקוד ישיר ב-EREG, בעוד שעיכוב miR-215-5p מקל על פגיעה בכונדרוציטים הנגרמת על ידי אינטרלוקין-1β (IL-1β). מחקר זה אימץ נקודות סיום מדידות וקריטריוני שיפוט אחידים לאימות קליני ותאי: קלינית, 110 מטופלי OA ו-105 ביקורת בריאים נרשמו; רמות miR-215-5p ו-EREG בסרום נמדדו באמצעות qRT-PCR, ועקומות ROC יושמו להערכת ביצועי האבחון (תקפים אם AUC ≥ 0.7, P < 0.05). הקורלציות נבדקו באמצעות בדיקות חי-ריבוע בין miR-215-5p לתכונות קליניות OA, ורגרסיה לוגיסטית רב-משתנית זיהתה גורמי סיכון בלתי תלויים ב-OA (P מותאם < 0.05). במבחנה, כונדרוציטים של C28/I2 טופלו ב-10 ng/mL IL-1β במשך 24 שעות ליצירת מודל OA, ולאחר מכן בוצעו טרנספקציה עם מעכב/mimic miR-215-5p ו-si-EREG. בדיקות CCK-8, Transwell ו-ELISA שימשו להערכת חיוניות התאים, נדידה ורמות ציטוקינים דלקתיות. קריטריונים לניסוי ההצלה: מעכב miR-215-5p החזיר את חיוניות ונדידת הכונדרוציטים (P < 0.05), והשתקת EREG ביטלה חלקית את אפקט ההגנה הזה (P < 0.05). חיזוי ביואינפורמטי TargetScan (Bioinformatic TargetStake), בדיקות דו-לוסיפראז ובדיקות RIP אישרו עוד יותר את הקשר הישיר שלהם: הפחתה משמעותית בפעילות לוסיפראז WT-EREG לאחר חיקוי miR-215-5p והעשרת miR-215-5p/EREG מוגברת משמעותית במשקעי Ago2 לעומת בקרת IgG (שני P < 0.05) הוגדרו כקריטריונים לאינטראקציה עם המטרות. ביחד, עבודה זו הבהירה באופן שיטתי את הערך האבחוני והמנגנון המולקולרי של miR-215-5p ב-OA, ובכך זיהתה מועמדים טיפוליים חדשים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

המחקר בוצע בהתאם לעקרונות הצהרת הלסינקי. ועדת האתיקה של בית החולים הכללי של מחוז שיאניו אישרה את המחקר לפני שהחל (אישור מס' 202514, ב-18 ביוני 2025).

סיכום הפרוטוקול מסופק באיור משלים 1.

דגימה

בסך הכול גויסו 110 חולי OA שטופלו בבית חולים זה ו-105 ביקורת בריאים גויסו למחקר זה. קריטריוני ההכללה לקבוצת OA היו כדלקמן: אבחנה של OA אושרה בהתאם לקריטריוני הסיווג שנקבעו על ידי הקולג' האמריקאי לראומטולוגיה20. כל המטופלים עברו הדמיה בצילום רנטגן ודימות קלגרן-לורנס (K-L); ללא טיפול אנטיביוטי בתוך 3 חודשים לפני האשפוז; נתונים קליניים מלאים; והתקבלה הסכמה בכתב מדעת מכל המטופלים. קריטריוני ההדרה לקבוצת OA כללו מטופלים שקיבלו טיפול רלוונטי או היו בשלבים הסופיים של המחלה; אלו הסובלים מסוגים אחרים של מחלות מפרקים כגון גאוט, דלקת מפרקים שגרונית ועוד; אלו עם שילוב של גידולים, אי ספיקת כבד וכלייתי חמורה, מחלות אוטואימוניות, מחלות זיהומיות, מחלות נוירולוגיות או מחלות לב-נשימה קשות; ואלו עם מצבים של מוגבלות פיזית שמנעו מהם לטפל בעצמם. בעת ההרשמה, נרשמו נתוני בסיס של כל המשתתפים, כולל גיל, מין, מדד מסת גוף (BMI), עישון, שתייה, היסטוריה משפחתית, מהלך המחלה, ציון K-L, ציון בסולם האנלוגי הוויזואלי (VAS), ציון מדד WOMAC של אוניברסיטת מערב אונטריו ומקמאסטר, ואתר נגע. הנתונים הרלוונטיים נותחו וסוכמו בטבלה 1. כל הנבדקים לקחו 8 מ"ל דם ורידי במצב צום, והושארו לעמוד במשך 3 שעות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, ואז צנטריפוגה ב-3000 × גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לבידוד הסרום. הסרום נקטף בעדינות ונשמר בטמפרטורה של −80°C עד לבדיקות נוספות.

דם/סרום אנושי (חומר ביולוגי זיהומי בקטגוריה B) מכיל נוזלי גוף אנושי שעשויים לשאת פתוגנים זיהומיים לא ידועים ועלולים לגרום לזיהומים דרך העור או ריריות באמצעות התזות, דקירות מחט או מגע עם עור פגוע. חובה ללבוש כפפות ניטריל חד פעמיות, חלוקי בידוד רפואיים חד פעמיים, משקפי מגן או מסכות פנים, ומסכות כירורגיות. לאחר שעבר עיקור בלחץ גבוה, הוא נאסף מרכזית ונשרף על ידי מוסדות מוסמכים לפינוי פסולת רפואית.

תרבית תאים ובניית מודל תאי OA

כונדרוציטים של C28/I2 בבני אדם נשמרו במדיום DMEM/F12 המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתוך אינקובטור לח מלא ב-5% CO₂. כל הניסויים בוצעו באמצעות תאים במעברים 3–6 לשמירה על פנוטיפ תאי יציב. מניפולציות ניסיוניות נוספות בוצעו כאשר המפגש התאים הגיע ל-80%. התאים בקבוצת הניסוי טופלו ב-10 ng/mL של IL-1β בטמפרטורה של 37 °C במשך 24 שעות כדי להקים מודל OA21 במבחנה, בעוד שתאי קבוצת הביקורת נותרו ללא טיפול.

טרנספקציה תאית

מעכב בקרה שלילי (מעכב NC), מעכב miR-215-5p, Mimic-NC, miR-215-5p מחקה, RNA קטן מתערב שלילי (si-NC) ו-si-EREG סונתזו מסחרית. בדיקות טרנספקציה בוצעו בלוחות בעלי 6 בארות באמצעות מגיב טרנספקציה במהלך שלב הצמיחה הלוגריתמי של התאים. באופן ספציפי, 50 ננומטר של המעכב/מחקה או בקרה שלילית דוללו ב-125 מיקרוליטר של מדיום Opti-MEM לכל באר, בשילוב עם 5 מיקרו-ליטר של תגובת טרנספקציה מומסת ב-125 מיקרו-ליטר של Opti-MEM, ונשמרו בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות ליצירת קומפלקס. התערובת נוספה לאחר מכן לתאים. התאים נקטפו 48 שעות לאחר ההעברה לניסויים הבאים.

תגובת שרשרת פולימראז עם שעתוק הפוך כמותי (בדיקת qRT-PCR)

סך ה-RNA בודד באמצעות תגובת טריזול בהתאם לפרוטוקולי היצרן, והדגימות כללו סרום ותאים. לשעתוק הפוך, נעשה שימוש ב-1 מיקרוגרם RNA כולל בכל תגובה, בהתאם לפרוטוקול היצרן של PrimeScript Reverse Transcriptase. לאחר סיום השעתוק ההפוך, בוצעו תגובות הגברה על מכשיר PCR בזמן אמת תוך שימוש בתערובת SYBR-Green Real Master כתגובת תגובה. פרמטרי המחזור התרמי היו כדלקמן: דנאטורציה ראשונית ב-95 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, לאחר מכן 40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס ל-5 שניות ו-60 מעלות צלזיוס ל-30 שניות. qRT-PCR בוצע בטריפלציה טכנית לכל הדגימות. לצורך גילוי כמותי של רמות miRNA ו-mRNA, ערכי סף המחזור (Ct) נורמלו באמצעות U6 ו-β-אקטין כהפניות אנדוגניות, והניתוח הסופי של הנתונים נמדד בשיטת 2-ΔΔCT . רצפי הפריימרים המשמשים ל-qRT-PCR מוצגים בטבלה משלימה 1.

תגובת טריזול היא חומר כימיקל מסוכן. הוא מאוד קורוזיבי; מגע ישיר עלול לגרום לכוויות חמורות בעור ובעיניים, והאדים הנדיפים שלו עלולים לגרות את דרכי הנשימה. יש צורך ללבוש כפפות ניטריל עמידות לכימיקלים, מעילי מעבדה ומשקפי מגן עמידים בפני כימיקלים; ניתן להשתמש בו רק במכסה אדים. נוזל הפסולת מאוחסן במיכלי פסולת כימית מפלסטיק אטומים עם תוויות ומוזר כראוי בהתאם לתקנות המקומיות.

בדיקת כחיות תאים

עמידות התאים הוערכה באמצעות ערכת ספירת התאים-8 (CCK-8). התאים חוברו ללוחות של 96 בארות ב-5 ×10 3 תאים לבאר. ב-0, 24, 48 ו-72 שעות של דגירה נוספו 10 מיקרוליטר תמיסת CCK-8 לכל באר. לאחר דגירה של התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה, נמדדה צפיפות האופט של כל באר ב-450 ננומטר.

בדיקת טרנסוול

קיבולת נדידת התאים הוערכה באמצעות תא טרנסוול עם ממברנות בגודל נקבוביות של 8 מיקרון. בקצרה, 5 ×-104 תאים לבאר הוכנסו לתוספות העליונות שהכילו מדיום ללא סרום, בעוד שההכנסות התחתונות הושלמו במדיום שלם. התאים דגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. תאים שלא נדדו ונשארו על פני הממברנה העליונה, נוקו בעדינות עם מטלית כותנה. תאים שהיגרו למשטח התחתון הוקבעו ב-4% פורמלדהיד למשך 10 דקות וצבועו ב-0.1% קריסטל סגול למשך 20 דקות. לבסוף, התאים שחדרו לממברנה נצפו ונספרו באמצעות מיקרוסקופ אופטי (×200). לכל מודל נבחרו באקראי חמישה שדות ראייה שאינם חופפים לספירה. מספר התאים הנודדים הממוצע בכל קבוצת ניסוי חושב ותועד.

פורמלדהיד (קרצינוגן, מגרה עור/נשימה, תרכובת אורגנית רעילה ונדיף). הגז הנדיף שלו עלול לגרום לגירוי רירי, דלקת עור ותגובות אלרגיות. כל הפעולות חייבות להתבצע במכסה אדים מאוורר היטב. לבש כפפות עמידות לכימיקלים, מעיל מעבדה, משקפי מגן נגד ערפל ומכונת נשימה פחם פעיל. פסולת המכילה PFA צריכה להיות מטופלת בהתאם לתקנות הפסולת המסוכנת. יש להשליך את הפסולת בהתאם לתקנות המקומיות.

קריסטל ויולט הוא כתם ביולוגי. הוא רעיל כאשר נספג דרך העור; יש לו השפעות מזיקות ארוכות טווח על הסביבה. הימנעו ממגע ישיר עם העור והפרשות אקראיות. לבש כפפות ניטריל חד-פעמיות ומעיל מעבדה.

מבחן אימונוסורבנט מקושר באנזימים (ELISA)

רמות IL-1β, IL-6 ופקטור נמק גידול-α (TNF-α) נמדדו באמצעות ערכות ELISA אנושיות בהתאם להנחיות התפעוליות המפורטות במדריך המוצר.

בדיקת גן דואל לוסיפראז דואל

מאגר הנתונים TargetScan שימש לחיזוי גנים מועמדים למטרה של miR-215-5p. האינטראקציה בין miR-215-5p לגן היעד EREG נותחה באמצעות ערכת בדיקת לוסיפראז כפולה: רצפי הסוג הפראי והמוטנטי של EREG הוגברו ושוכפלו לווקטור pGL3. בהמשך, פלסמידים רקומביננטיים שנבנו הועברו יחד לתאי C28/I2 עם mimic-NC או miR-215-5p מימיק, בהתאמה. פעילות הלוציפראז זוהתה לאחר 48 שעות של דגירות.

אימונופרציפיטציה של RNA (RIP)

האינטראקציה בין miR-215-5p ל-EREG אושרה באמצעות ערכת RIP של EZ-Magna. השלבים היו כדלקמן: תאים עברו תחילה ליזאט RIP. בהמשך, ליזטים של תאים הוצבו יחד עם חרוזי מגנטיות שמחוברים לנוגדנים אנטי-ארגונאוט 2 (Ago2) או אנטי-אימונוגלובולין G (IgG) (אנושי) בבופר RIP. לאחר מכן, ה-RNA טופל בחראונאז K וטוהר. לבסוף, רמות miR-215-5p ו-EREG נמדדו באמצעות qRT-PCR.

סטטיסטיקות

ניתוח נתונים וגרף תמונה בוצעו באמצעות SPSS ו-GraphPad Prism. מבחן שפירו-וילק יושם להערכת התקינות של התפלגות לפני ניתוח סטטיסטי. מדידות לאחר התפלגות נורמלית הובאו לידי ביטוי כסטיית תקן ממוצעת ± (SD). מבחן ה-t של הסטודנטים שימש להשוואות בין שתי קבוצות, בעוד שניתוח שונות (ANOVA) ואחריו מבחן הפוסט-הוק של טוקי שימש לניתוחים מרובי קבוצות. משתנים רציפים שאינם מתפלגים תקינה דווחו כחציון וטווחי בין-רבעוניים (IQR) והושוו באמצעות מבחן Mann-Whitney U. משתנים קטגוריים הוצגו באחוזים (n (%)), והבדלים בין קבוצות נבדקו באמצעות מבחן חי-ריבוע. היעילות האבחנתית של miR-215-5p ל-OA הוערכה באמצעות עקומות מאפיין פעולה של מקלט (ROC). הקשר בין miR-215-5p לבין המאפיינים הקליניים של מטופלי OA הוערך באמצעות מבחן חי-ריבוע. גורמי סיכון להתפתחות OA נבדקו באמצעות רגרסיה לוגיסטית רב-משתנית. הקשר בין miR-215-5p ל-EREG נבדק באמצעות ניתוח קורלציה של ספירמן. P < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מאפייני בסיס

105 מטופלים נכללו בקבוצת הביקורת, כולל 58 (55.24%) גברים ו-47 (44.76%) נשים, עם ממוצע גיל של 52.81 ± 12.57 שנים ו-BMI של 24.25 ± 2.71 ק"ג/מ"ר. קבוצת OA כללה 110 מטופלים, 69 (62.73%) גברים ו-41 (37.27%) נשים, עם ממוצע גיל 54.42 ±-12.33 שנים ו-BMI של 24.88 ±-3.51 ק"ג/מ"ר. מידע בסיסי נוסף לקבוצת ה-OA הוצג בטבלה 1.

מאפייני ביטוי וערך אבחוני של miR-215-5p בסרום ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

OA, הפרעה נפוצה במפרקים בסביבות קליניות, הפכה לסיבה השלישית בחשיבותה לנכות אורגנית אחרי סוכרת ודמנציה22,23. עם זאת, הפתוגנזה של OA היא מורכבת, ואבחנתה לעיתים דורשת שילוב של תסמינים קליניים, בדיקות הדמיה ואמצעים נוספים, והמחזור האבחוני הארוך מעכב משמעותית את הטיפול בזמן במטופלים24. לכן, חשוב קלינית לחקור סמנים ביולוגיים שיכולים לשמש לאבחון OA.

במחקר הנוכחי, miR-215-5p הראה ביטוי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין אינטרסים פיננסיים או קנייניים בכל חומר שנדון במאמר זה.

תודות

המחברים לא קיבלו מימון ספציפי לעבודה זו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
96-well platesCorning/USA3903
Anti-Ago2Abcam/USAAB_867543
RRID: ab186733
Anti-IgGAbcam/USAAB_10673832
RRID: ab133470
C28/I2 chondrocytesMerck Millipore/USASCC043
CCK-8 KitBeyotime/ChinaC0038ערכת בדיקת קיום תאים
Crystal violetSigma-Aldrich/USAV5265
DMEM/F12 mediumGibco/USA11320033
Dual-Luciferase Reporter Assay KitPromega/USAE1910
EZ-Magna RIP KitMerck Millipore/USA17701
FBSThermo Fisher Scientific/USA26010074
FormaldehydeSigma-Aldrich/USAF8775
Graphpad Prism 9.0GraphPad Software Inc. /USAhttps://www.graphpad.com/features
IL-1βSigma-Aldrich/USASRP3083
IL-1β  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH002-1-2
IL-6  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH007-1-2
IncubatorThermo Fisher Scientific/USABB150-2TCS-L
Inhibitor-NCGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Light Cycler 480Roche/Switzerlandhttps://lifescience.roche.com/global/en/article-listing/article/lightcycler-480-system-technology.htmlמכשיר PCR בזמן אמת
Lipofectamine 3000Invitrogen/USAL3000015חומר הטרנספקציה המשמש בטרנספקציה של תאים
Microplate readerThermo Fisher Scientific/USAVA000010C
MicroscopyNikon/Japanhttps://www.nikon.com.cn/sc_CN/
Mimic-NCGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p inhibitorGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
MiR-215-5p mimicGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Opti-MEMGibco/USA31985070
pGL3 vectorPromega/USAE1751
PrimeScript Reverse TranscriptaseTakara/Japan2680ערכת תעתוק הופכי
Si-EREGGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
Si-NCGenePharma (custom synthesis) /Chinahttps://www.genepharma.com/
SPSS 24.0IBM Corp/USAhttps://spssau.com/index.html
SYBR Green SupermixBio-Rad/USA1725121
TNF-α  ELISA kitNanjing Jiancheng/ChinaH052-1-2
Transwell chamberCorning/USA3422
TRIzol reagentThermo Fisher Scientific/USA15596026חומר בידוד RNA

מקורות

  1. Jiang Y. Osteoarthritis year in review 2021: biology. Osteoarthritis Cartilage. 2022;30(2):207–215.
  2. Choi WS, et al. The CH25H-CYP7B1-RORalpha axis of cholesterol metabolism regulates osteoarthritis. Nature. 2019;566(7743):254–258.
  3. Lankhorst NE, et al. Incidence, prevalence, natural course, and prognosis of patellofemoral osteoarthritis: the Cohort Hip and Cohort Knee study. Osteoarthritis Cartilage. 2017;25(5):647–653.
  4. Nelson AE. Osteoarthritis year in review 2017: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2018;26(3):319–325.
  5. Herrero-Beaumont G, et al. Systemic osteoarthritis: the difficulty of categorically naming a continuous condition. Aging Clin Exp Res. 2024;36(1):45.
  6. Abramoff B, Caldera FE. Osteoarthritis: Pathology, Diagnosis, and Treatment Options. Med Clin North Am. 2020;104(2):293–311.
  7. Han D, et al. The emerging role of fibroblast-like synoviocytes-mediated synovitis in osteoarthritis: An update. J Cell Mol Med. 2020;24(17):9518–9532.
  8. Maroun G, Fissoun C, Villaverde M, Brondello JM, Pers YM. Senescence-regulatory factors as novel circulating biomarkers and therapeutic targets in regenerative medicine for osteoarthritis. Joint Bone Spine. 2024;91(2):105640.
  9. Zhang Y, Zhao P, Li S, Mu X, Wang H. CircSCAPER knockdown attenuates IL-1beta-induced chondrocyte injury by miR-127-5p/TLR4 axis in osteoarthritis. Autoimmunity. 2022;55(8):577–586.
  10. Song AF, Kang L, Wang YF, Wang M. MiR-34a-5p inhibits fibroblast‑like synoviocytes proliferation via XBP1. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(22):11675–11682.
  11. Lu X, Lin J, Jin J, Qian W, Weng X. Hsa-miR-15a exerts protective effects against osteoarthritis by targeting aggrecanase-2 (ADAMTS5) in human chondrocytes. Int J Mol Med. 2016;37(2):509–16.
  12. Yin CM, et al. Dysregulation of both miR-140-3p and miR-140-5p in synovial fluid correlates with osteoarthritis severity. Bone Joint Res. 2017;6(11):612–618.
  13. Yang X, Meng T. miR-215-5p decreases migration and invasion of trophoblast cells through regulating CDC6 in preeclampsia. Cell Biochem Funct. 2020;38(4):472–479.
  14. Yao Y, et al. MiR-215-5p inhibits the inflammation injury in septic H9c2 by regulating ILF3 and LRRFIP1. Int Immunopharmacol. 2020;78:106000.
  15. Yin Z, et al. miR-215-5p regulates osteoporosis development and osteogenic differentiation by targeting XIAP. BMC Musculoskelet Disord. 2022;23(1):789.
  16. Zhou Y, et al. Identification of differentially expressed miRNAs and mRNAs in synovial of osteoarthritis via RNA-sequencing. BMC Med Genet. 2020;21(1):46.
  17. Zhao YC, et al. Epiregulin enhances periodontal tissue regeneration by promoting bone marrow mesenchymal stem cell functions under inflammatory niches. World J Stem Cells. 2026;18(2):114032.
  18. Li PL, et al. Multiomic identification of senescent stem cell populations critical for osteoarthritis progression and therapy in subchondral bones. Sci Adv. 2025;11(29):eadu2294.
  19. Chen YJ, et al. Systematic Analysis of Transcriptomic Profile of Chondrocytes in Osteoarthritic Knee Using Next-Generation Sequencing and Bioinformatics. J Clin Med. 2018;7(12):535.
  20. Altman R, et al. Development of criteria for the classification and reporting of osteoarthritis. Classification of osteoarthritis of the knee. Diagnostic and Therapeutic Criteria Committee of the American Rheumatism Association. Arthritis Rheum. 1986;29(8):1039–49.
  21. Gan K, et al. Positive feedback loop of lncRNA FAM201A/miR‑146a‑5p/POU2F1 regulates IL‑1beta‑induced chondrocyte injury in vitro. Mol Med Rep. 2022;25(1):20.
  22. GBD 2016 Disease and Injury Incidence and Prevalence Collaborators. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 2017;390(10100):1211–1259.
  23. Mandl LA. Osteoarthritis year in review 2018: clinical. Osteoarthritis Cartilage. 2019;27(3):359–364.
  24. Mobasheri A, et al. The role of metabolism in the pathogenesis of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2017;13(5):302–311.
  25. Xiong X, et al. MicroRNA miR-215-5p Regulates Doxorubicin-induced Cardiomyocyte Injury by Targeting ZEB2. J Cardiovasc Pharmacol. 2021;78(4):622-629.
  26. Cai C, Zhang R, Xu X, Li G, Gou H. Diagnostic values of NLR and miR-141 in patients with osteoarthritis and their association with severity of knee osteoarthritis. Exp Ther Med. 2021;21(1):74.
  27. Lai Z, Cao Y. Plasma miR-200c-3p, miR-100-5p, and miR-1826 serve as potential diagnostic biomarkers for knee osteoarthritis: Randomized controlled trials. Medicine (Baltimore). 2019;98(51):e18110.
  28. Qi K, et al. Long Non-Coding RNA (LncRNA) CAIF is Downregulated in Osteoarthritis and Inhibits LPS-Induced Interleukin 6 (IL-6) Upregulation by Downregulation of MiR-1246. Med Sci Monit. 2019;25:8019–8024.
  29. Platzer H, et al. The Impact of 45S5-Bioactive Glass on Synovial Cells in Knee Osteoarthritis-An In Vitro Study. Materials (Basel). 2023;16(24):7594.
  30. Ren T, et al. MiR-140-3p Ameliorates the Progression of Osteoarthritis via Targeting CXCR4. Biol Pharm Bull. 2020;43(5):810–816.
  31. Ying P, et al. Analysis of the regulatory role of miR-34a-5p/PLCD3 in the progression of osteoarthritis. Funct Integr Genomics. 2023;23(2):131.
  32. Fields JK, Gunther S, Sundberg EJ. Structural Basis of IL-1 Family Cytokine Signaling. Front Immunol. 2019;10:1412.
  33. Pratama DGK, Suyasa IK, Astawa P, Lestari AAW. High IL-6 level as a marker of lumbar osteoarthritis in patients older than 55 years with low back pain. Orthop Res Rev. 2019;11:17–21.
  34. Molnar V, et al. Cytokines and Chemokines Involved in Osteoarthritis Pathogenesis. Int J Mol Sci. 2021;22(17):9208.
  35. Ji W, Sun B, Su C. Targeting MicroRNAs in Cancer Gene Therapy. Genes (Basel). 2017;8(1):21.
  36. Chen X, et al. Cell membrane-camouflaged nanomedicines for enhanced thrombolysis and blood-brain barrier penetration in ischemic stroke therapy. Int J Pharm X. 2025;10:100404.
  37. Gupta T, et al. Enhancing Bioavailability and Stability of Curcumin Using Solid Lipid Nanoparticles (CLEN): A Covenant for Its Effectiveness. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:879.
  38. Liang Q, Cheng Z, Qin L. Advanced nanoparticles in osteoarthritis treatment. Biomater Transl. 2024;5(2):95–113.
  39. Shi Z, et al. Micro-nano integrated platforms for osteoarthritis therapy: From spatial manipulation to cellular reprogramming. Mater Today Bio. 2026;37:102963.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

אימונולוגיה וזיהוםגיליון 233גיליון 233ערך ריקגיליוןאבחנה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.