הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

מחקר אסוציאציה של Mir-146a Rs2910164 עם רגישות לנזלת אלרגית

54 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/72136

⸱

15 בספטמבר 2026

 ,  ,  , 
1Department of Otolaryngological, Longyan First Affiliated Hospital of Fujian Medical University

במאמר זה

סיכום

המחקר הנוכחי נועד להבהיר את הקשר בין הפולימורפיזם rs2910164 של miR-146a לבין הפגיעות לנזלת אלרגית (AR). רמות נמוכות יותר של miR-146a בפלזמה והגנוטיפ GG של rs2910164 קשורים לסיכון מוגבר ל-AR, לתגובות דלקתיות מוגברות ולביטויים קליניים חמורים יותר בחולי AR.

תקציר

נזלת אלרגית (AR) אינה מהווה איום על חיי המטופלים, אך היא פוגעת קשות באיכות חייהם. MicroRNA-146a (miR-146a) חיוני לוויסות חיסוני ולתגובות דלקתיות; עם זאת, הקשר בין הפולימורפיזם rs2910164 של miR-146a לבין הרגישות ל-AR נותר לא מובן באופן מלא. מחקר מקרי-ביקורת זה תוכנן כדי לבחון את השפעת הפולימורפיזם rs2910164 של miR-146a על הרגישות ל-AR. מחקר זה כלל סך של 180 מתנדבים ללא AR ו-211 מטופלים עם AR. ביטוי ה-miR-146a בפלזמה נמדד באמצעות RT-qPCR; הגנוטיפ rs2910164 זוהה באמצעות שיטת TaqMan-qPCR. ELISA שימשה לזיהוי רמות של IgE, IL-4, IL-6 ו-IL-10 בסרום. ניתוח מתאם פירסון העריך את המתאמים הליניאריים בין ביטוי miR-146a לבין מדד TNSS, מדד RQLQ, וכן ריכוז גורמי סרום. גורמי הסיכון ל-AR זוהו באמצעות רגרסיה לוגיסטית. הגנוטיפ GG והאלל G של miR-146a rs2910164 היו שכיחים באופן משמעותי יותר במטופלי AR מאשר בביקורות בריאות. רמת ה-miR-146a בפלזמה הייתה מופחתת במטופלי AR. רמת ה-miR-146a בפלזמה הייתה נמוכה יותר במטופלי AR הנושאים את הגנוטיפ GG, שהפגינו תגובות אלרגית ודלקתיות פעילות יותר. ביטוי ה-miR-146a היה קשור קשר הדוק לתסמינים אלרגיים ולחומרת הביטויים הקליניים. רגרסיה לוגיסטית מעידה כי רמות IgE ו-IL-4 בסרום היו גורמי סיכון עצמאיים ל-AR, בעוד ש-IL-10 וביטוי miR-146a היו גורמים מגנים עצמאיים. רמות נמוכות של miR-146a בפלזמה נצפו במטופלי AR, והגנוטיפ GG של miR-146a rs2910164 מגביר את הרגישות ל-AR.

מבוא

נזלה אלרגית (Allergic rhinitis - AR) היא הפרעה דלקתית לא זיהומית של רירית האף המתווכת על ידי אלרגנים. התסמינים הקליניים האופייניים ל-AR כוללים גרד באף, גודש באף, הפרשה נזלית שקופה ועיטותים תכופים1. במקרים חמורים יותר, מטופלים עשויים לחוות גם ירידה בחוש הריח, ואף פגיעה באיכות השינה. נתונים אפידמיולוגיים מצביעים על כך ששיעור השכיחות העולמי של AR עולה מדי שנה, ומגיע ל-10% עד 25%2. למרות ש-AR אינו מסכן את חיי המטופלים, הוא משבש באופן משמעותי את השינה, הלמידה והעבודה, מפחית במידה ניכרת את איכות החיים ומטיל נטל כלכלי כבד על הפרט ועל החברה3. המחקר אישר ש-AR מהווה גורם סיכון לאסתמה, וככל שהמחלה מתקדמת, גובר הסיכוי למטופלים לפתח סינוסיטיס או פוליפסים באף, דבר המגביר עוד יותר את נטל המחלה4,5. לפיכך, מניעה ובקרה של AR הופכות למשימה מרכזית בתחום מחלות דרכי הנשימה. עם זאת, הפתוגנזה של AR טרם הובהרה במלואה. לחקר מעמיק של המנגנון הפתופיזיולוגי של AR ופיתוח אסטרטגיות טיפול ממוקדות יש חשיבות מכרעת. אלו הן הסוגיות המדעיות הנוכחיות הדורשות מענה דחוף.

הופעת AR קשורה לגורמים סביבתיים וגנטיים6. מחקרים עכשוויים גורסים בדרך כלל כי ההשפעה הסינרגית של רגישות גנטית אינדיבידואלית וסביבת חשיפה לאלרגנים היא הגורם המניע המרכזי להופעת AR. צוות Brozek אישש עוד כי הגומלין בין הרגישות הגנטית של הגוף לבין חשיפות סביבתיות הוא הגורם היסודי ל-AR2. בתחום המחקר של המנגנונים הגנטיים של AR, פולימורפיזם גנטי הפך בהדרגה למוקד תשומת לב של חוקרים. פולימורפיזם של נוקלאיד בודד (SNPs), כצורה השכיחה של פולימורפיזם גנטי, הוא הגורם העיקרי לשונות במידע הגנטי באורגניזמים7. ראיות מצטברות מצביעות על כך שגנוטיפ TT ב-IL-33 rs7044343 עשוי לשמש כמטרה פוטנציאלית למניעה וטיפול ב-AR8. בנוסף, גנוטיפ TT באתר C-159T של מקדם CD14 משמש כסמן חיזוי לסיכון ל-AR9. הדבר מעיד כי SNPs של גנים מרכזיים יכולים לשמש כמטרות מולקולריות חשובות להערכת הסיכון ל-AR, למתן אזהרות מוקדמות ולהשגת מניעה וטיפול מדויקים. הדבר מספק רמאיים מכריעים להבנה מעמיקה יותר של מנגנון הרגישות הגנטית של AR.

מחקרים רבים חשפו כי ביטוי חריג של microRNAs (miRNAs) הוא אחד מגורמי ההנעה המרכזיים להתרחשות ולהתפתחות של קשת רחבה של מחלות10. ל-miRNAs מאפיין של קיום יציב בנוזלי גוף, מה שהופך אותם לסממנים מולקולריים רגישים מאוד לאבחון מחלות. miR-146a הוא סוג של מולקולת RNA לא מקודד בעלת תפקודים ביולוגיים נרחבים11. הפולימורפיזם rs2910164 ממוקם בתוך אזור הלולאה-גבעול (stem-loop) של רצף ה-precursor miR-146a. וריאציה באתר זה יכולה להשפיע על יעילות העיבוד וההבשלה של pre-miR-146a, ובכך לשנות את רמת הביטוי של miR-146a בוגר ולהשפיע על תגובות חיסוניות ודלקתיות במורד הזרם. מחקרים קודמים אישרו כי ביטוי יתר של miR-146a יכול להפחית באופן משמעותי את התגובתיות העודפת של דרכי הנשימה במודלים של עכברי אסתמה ולעכב את הפעלתם של לימפוציטים רגישים12. על ידי מיקוד ועכבה של פעילות הקולטן לגורם גדילה אפידרמלי (EGFR), miR-146a יכול להקל ביעילות על הנזק הדלקתי של סינוסיטיס13. יתרה מכך, ביטוי יתר של miR-146a יכול להקל גם על התסמינים הפתולוגיים של מודל עכברי AR על ידי חסימת נתיב השליחה של קולטן דמוי-טול 4 (TLR4)14. תצפיות אלו מדגישות את התפקיד החיוני של miR-146a בוויסות מחלות של מערכת הנשימה.

ראיות קיימות ממחקרי פולימורפיזם גנטי מצביעות על כך ששכיחות האלל G בלוקוס miR-146a rs2910164 קשורה קשר הדוק לתגובתיות יתר של דרכי הנשימה15. SNP זה נחשב גם כסמן ביולוגי פוטנציאלי לסיכון לאסתמה באוכלוסייה הקוריאנית15. בנוסף, צוותו של Jimenez-Morales חשף כי הגנוטיפ CC בלוקוס miR-146a rs2910164 מעניק הגנה מפני אסתמה16. עם זאת, לא היו מחקרים רלוונטיים שדיווחו על קשר בין הפולימורפיזם miR-146a rs2910164 לבין רגישות ל-AR. לכן, מחקר זה נועד לאמת את השפעתו של הפולימורפיזם miR-146a rs2910164 על AR, ובכך לספק בסיס תיאורטי חדש לפתוגנזה, לאבחון הקליני ולהטיפול ב-AR.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הצהרה אתית:
כל המשתתפים קיבלו מידע מלא על מטרת הניסוי שלנו וחתמו על טופס הסכמה מדעת. מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים Longyan First Affiliated Hospital של אוניברסיטת Fujian Medical University (מספר אישור LYREC2023-k007-01). כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות הרלוונטיות, לתקנות ולהצהרת הלסינקי.

גיוס משתתפים, קריטריוני כשירות ואיסוף דגימות
סה"כ 211 אנשים המאובחנים עם AR ו-180 משתתפים בריאים (non-AR) גויסו מהמרפאה החיצונית לאוזן, גרון ואף של בית החולים Longyan First Affiliated Hospital of Fujian Medical University בין ינואר 2023 למאי 2025. קריטריוני האבחנה ל-AR נלקחו מההנחיות של האיגוד הסיני לאלרגיה לאבחון וטיפול בנזלת אלרגית17. המטופלים נדרשו להפגין לא פחות משני תסמינים קליניים של AR, כולל גרד באף, עיטות, גודש באף או נזלת. בנוסף, בדיקת רירית האף הייתה נדרשת להראות חיוורון ובצקת, ואחד מתוצאות מבחן דקירת העור (SPT) או תוצאת בדיקת ה-IgE בנסיב הייתה חייבת להיות חיובית. ה-SPT בוצע על ידי צוות ייעודי בחדר בדיקות האלרגנים במרפאה החיצונית כדי להבטיח דיוק ותוצאות עקביות. כל המטופלים עם AR עברו הערכות של שאלון איכות החיים של נזלת ודלקת לחומות (RQLQ) ומדד תסמיני אף כולל (TNSS) בסיוע צוות רפואי, והציונים נרשמו לצורך ניתוח מאוחר יותר.

מתנדבים בריאים שעברו בדיקות גופניות שגרתיות בבית החולים גויסו כקבוצת הלא-AR. משתתפים מתאימים היו כאלה ללא היסטוריה אישית או משפחתית של AR, ללא היסטוריה של אסתמה או מחלות אלרגיות אחרות, ללא סינוסיטיס כרוני או מחלות דלקתיות אחרות של חלל האף, וללא זיהום בדרכי הנשימה במהלך החודש האחרון. בנוסף, אנשים עם היסטוריה של מחלות לב, כבד, ריאות או כליות חמורות, או כל גידול ממאיר, הוצאו מהמחקר.

נדגמי דם ורידי פריפריאליים נאספו משתי קבוצות המתנדבים. חלק מהדם הוורידי עם נוגדי קרישה שימש להפקת DNA ולהפקת RNA מפלזמה. חלק אחר של הדם הוורידי הופרד להשגת סרום, המשמש לזיהוי גורמים הקשורים לסרום (immunoglobulin E (IgE), interleukin-4 (IL-4), IL-6, ו-IL-10).

מיצוי DNA:
200 µL של דגימות דם ורידי פריפריאליות עוברו למיצוי DNA באמצעות ערכה למיצוי genomic DNA מדם מלא (ראו טבלת חומרים). דגימות הדם נאספו למבחנות עם נוגדי קרישה מסוג lithium heparin, ולאחר מכן חולקו לאליקוטות והוקפאו בטמפרטורה של -20 °C לאחסון. יש להקפיד על נהלי העבודה הספציפיים בהתאם להוראות המצורפות לערכה. לבסוף, נעשה שימוש ב-100 µL של elution buffer לצורך אלוטיית ה-DNA. טוהר דגימת ה-DNA הממוצית נקבע באמצעות מנתח חומצות גרעין/חלבון (Spectrophotometer) (יחס OD₂₆₀/OD₂₈₀ היה בין 1.8 ל-2.0). דגימות ה-DNA, לאחר הבדיקה, אוחסנו בטמפרטורה של -20 °C לשימוש עתידי בניסויי הגנוטיפיקה העוקבים.

זיהוי הגנוטיפ
ערכת TaqMan SNP genotyping שימשה לזיהוי התהלוּת של הגנוטיפים של miR-146a rs2910164. פרטי הערכה הוזנו לרשימת חומרי הצריכה. הנפח הכולל של תגובת ה-PCR היה 10 µL, וכלל 5 µL של Master Mix, 0.5 µL של תערובת ראשוניים ופרובות טיפוס (typing probe primer mixture), 10 ng של DNA תבנית ומים נקיים מ-RNase. הגברת ה-DNA בוצעה באמצעות מכשיר PCR כמותי פלואורסצנטי בזמן אמת מסוג Roche LightCycler 480 II. תנאי התגובה: פרה-דנטורציה ב-95 °C למשך 10 דקות; 40 מחזורים (95 °C למשך 15 שניות, 60 °C למשך 1 דקה), וקריאת פלואורסצנציית FAM/VIC בוצעה ב-60 °C. לאחר השלמת ההגברה, אותות הפלואורסצנציה הכפולים של FAM/VIC שנספקו נותחו באמצעות תוכנת LightCycler 480, ונתוני הגנוטיפ עובדו סטטיסטית. אות FAM בודד מייצג גנוטיפ הומוזיגוט, אות VIC בודד מייצג גנוטיפ הומוזיגוט אחר, ונוכחות של שני האותים מעידה על גנוטיפ הטרוזיגוט. דגימות עם אותות חריגים או תוצאות שאינן עקביות לאחר חזרה על הבדיקה ייבחנו מחדש. כל ניסוי בוצע עם בקרת תבנית ריקה (template-free control) ובקרת חיובית לצורך בקרת איכות. כל הדגימות הועברו לשלוש חזרות טכניות.

RT-qPCR
ביצוע מיצוי miRNA כולל מ-100 µL פלסמה בוצע באמצעות ערכה ייעודית למיצוי miRNA. פרטי הערכה הוזנו לרשימת consumables. ריכוז ה-RNA נקבע באמצעות ספקטרופוטומטר. יחס ה-OD₂₆₀/OD₂₈₀ של דגימות miRNA איכותיות שמוצאו נע בין 1.8 ל-2.0. כמות של 200 ng של RNA שימשה לתסבוב הפוך (reverse transcription) לצורך סינתזה של cDNA, ופרוצדורת התגובה בוצעה בהתאם להוראות הסטנדרטיות של הערכה. התסבוב ההפוך בוצע בנפח כולל של 20 µL, כולל אינקובציה ב-42 °C למשך 60 min ואינאקטיבציה ב-85 °C למשך 5 min. תגובת ה-qPCR הוכנה לפי הפרוטוקול המקובל, בנפח כולל של 20 µL. תערובת התגובה הורכבה באופן הבא: 10 µL של qPCR pre-mix, ‏0.4 µL של forward primer, ‏0.4 µL של reverse primer, ‏1 µL של תבנית cDNA, ו-8.2 µL של RNase-free water. נעשה שימוש בפריימרים ספציפיים עבור miR-146a ועבור הגן הייחוס הפנימי U6. ההגברה הושלמה באמצעות מכשיר Roche LightCycler 480 II real-time fluorescence quantitative PCR. תנאי המחזוריות התרמית של ה-qPCR היו: 95 °C לדנטורציה ראשונית למשך 30 s, ולאחר מכן 40 מחזורים של דנטורציה ב-95 °C למשך 5 s והתתוך (annealing) והארכה ב-60 °C למשך 30 s. כל הדגימות עברו שלושה חזרות טכניות. הנתונים הניסיוניים נותחו באמצעות תוכנת LightCycler 480 Software. תוך שימוש ב-U6 כייחוס פנימי לתיקון השונות בין הדגימות, חושב תחילה ה-ΔCt (ערך ה-Ct של miR-146a פחות ערך ה-Ct של U6), לאחר מכן חושב ה-ΔΔCt (ה-ΔCt של קבוצת הניסוי פחות ה-ΔCt של קבוצת הביקורת), ולבסוף נקבעה רמת הביטוי היחסית של miR-146a באמצעות 2⁻ΔΔCt.

ELISA
רמות הסרום של IgE, IL-4, IL-6 ו-IL-10 נמדדו באמצעות ערכות ELISA. הפרוטוקולים הניסיוניים בוצעו בהתאם להוראות המופיעות במדריך למשתמש. השלבים הספציפיים היו כדלקמן: ראשית, התמיסה הרכזת של תמיסת השטיפה דוללה, והסטנדרטים דוללו במדרגות להכנת תמיסות עבודה עבור עקומת הסטנדרט. שנית, 50 µL של תמיסת דילול, תמיסת סטנדרט והדגימה לבדיקה הוספו לבארות ודגרו ב-37 °C למשך 60 דקות. לאחר הדגירה, הבארות נשטפו שלוש פעמים עם בופר שטיפה. לאחר מכן, הוספו 50 µL של תמיסת עבודה של נוגדן מצומד לאנזים, והפלטות דגרו ב-37 °C למשך 30 דקות. עם סיום הדגירה, הנוזל נשפך והבארות נשטפו שוב, ולאחר מכן הוספה תמיסה כרומוגנית לדגירה של 15 דקות ב-37 °C בחשכה. לאחר הוספת תמיסת העצירה, נמדדה הבליעה ב-450 nm באמצעות קורא מיקרופלט (microplate reader). ריכוזי הדגימות חושבו לפי עקומת הסטנדרט. כל דגימה נבדקה שלוש פעמים. נתונים עם מקדם וריאציה (coefficient of variation) נמוך מ-10% נחשבו לתקפים. בארות ריקות (blank) ובארות ביקורת הוכשרו במהלך הניסוי לצורך בקרת איכות. טווח הגילוי והרגישות של הערכה תאמו את ההנחיות המפורטות במדריך היצרן.

סטטיסטיקת נתונים
הנתונים הניסויים נותחו באמצעות תוכנות SPSS ו-GraphPad Prism 9. הנתונים הוצגו כממוצע ± סטיית תקן (mean ± SD). מבחן Shapiro-Wilk שימש להערכת הנורמליות של משתנים רציפים, ומבחן Levene הוחל להערכת הומוגניות השונות. השוואה של משתנים רציפים בין שתי הקבוצות נותחה באמצעות מבחן t למדגמים בלתי תלויים. מבחן ANOVA חד-כיווני ולאחריו מבחן post-hoc של Tukey בוצעו להשוואות בין קבוצות מרובות, ומבחן ANOVA דו-כיווני הוחל להערכת ההשפעות הראשיות של שני גורמים בלתי תלויים והשפעת האינטראקציה ביניהם. ערכים חריגים זוהו והוצאו על סמך כלל 3 סטיות התקן. לא נמצאו נתונים חסרים במחקר זה. עקומת מאפייני תפעול המקלט (ROC) שימשה לניתוח היעילות האבחנתית של miR-146a עבור AR. פרמטרי ROC רלוונטיים ומרווחי סמך של 95% חושבו באמצעות אלגוריתמים סטטיסטיים מובנים. ניתוח מתאם פירסון (Pearson correlation) שימש למדידת המתאם הליניארי בין ביטוי miR-146a לבין רמות של גורמים הקשורים לסרום. ניתוחי רגרסיה לוגיסטית חד-משתנית ורב-משתנית בוצעו כדי לסנן גורמי סיכון ל-AR. משתנים עם p < 0.05 בניתוח החד-משתני נכללו במודל הרגרסיה הלוגיסטית הרב-משתנית. p < 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מאפייני המשתתפים והתפלגות הגנוטיפ
הנתונים הקליניים בקו הבסיס של שתי קבוצות הנבדקים נותחו סטטיסטית. התוצאות הצביעו על כך שרמות הסרום של IgE, IL-4, IL-6 ו-IL-10 הראו הבדלים משמעותיים. בהשוואה לקבוצת המתנדבים ללא AR, ריכוז ה-IgE, IL-4 ו-IL-6 בסרום בקבוצת חולי ה-AR היה מוגבר, בעוד שרמת ה-IL-10 הייתה מופחתת (Table 1). התפלגות הגנוטיפ של miR-146a rs2910164 זוהתה באמצעות שיטת TaqMan-qPCR. תוצאות הניתוח הראו כי הגנוטיפ GG (χ2=7.018, OR (95% CI) = 0.471 (0.269-0.825), p=0....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

AR היא מחלה דלקתית אלרגית כרונית של דרכי הנשימה. המנגנון המרכזי של AR הוא שלאחר חשיפת הגוף לאלרגנים, נגעי דלקת ברירית האף מתווכים על ידי IgE17,18. התסמינים הקליניים כוללים בעיקר גרד באף, גודש באף, עיטושים והפרשה נזלית שקופה, הפוגעים קשות באיכות חיי המטופלים. מחקרים אפידמיולוגיים וגנטיים אישרו כי לרגישות גנטית יש השפעה חיונית ובלתי הריעה על הופעתה והתפתחותה של AR19. מחקר זה חשף עוד כי פולימורפיזם של miR-146a rs2910164 קשור קשר הדוק לרגישות ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין הצהרת ניגוד עניינים במאמר זה.

זמינות נתונים:
כל הנתונים שהופקו או נותחו במהלך מחקר זה כלולים במאמר זה כקובץ נלווה. פניות נוספות ניתן להפנות למחבר המקשר.

תרומת המחברים:
YMY תרם תרומה משמעותית להגייה ולתכנון, לאיסוף הנתונים או לניתוח ולפירוש הנתונים, והיה מעורב בניסוח כתב היד. YYH סייע באיסוף הנתונים, בניתוח הנתונים ובניתוח הסטטיסטי. GML ו-JCW תרמו לפירוש התוצאות ועברו ביקורת ביקורתית של כתב היד. כל המחברים קראו ואישרו את כתב היד הסופי.

תודות

לא רלוונטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מבחנה לצנטריפוגה בנפח 15 מ"לCorning430791להפרדת פלזמה, לחלוקת דגימות לתת-אריזות ולביצוע מיצוי חומצות גרעין
Applied Biosystems TaqMan Genotyping Master MixThermo Fisher Scientific43713552× תערובת מאסטר (master mix) מרוכזת שעברה אופטימיזציה לגנוטיפיקציה של SNP, המכילה Taq polymerase מסוג hot-start, dNTPs, יוני מגנזיום, בופר תגובה וצבע ייחוס ROX. אין צורך בהכנה ידנית של המערכת. התערובת תואמת לבדיקת הגנוטיפיקציה של TaqMan SNP שהוזכרה לעיל, ומספקת מערכת תגובה אנזימטית יציבה להגברה של SNP ולגנוטיפיקציה פלואורסצנטית עם שחזוריות טובה ותוצאות אשכול (clustering) ברורות.
ערכה לבדיקת גנוטיפ של SNP מסוג TaqMan מבית Applied Biosystems (rs2910164, miR-146a)Thermo Fisher ScientificC__15946974_10תערובת פריימרים ופרובים מוכנה מראש לטיפוס גנטי (genotyping) של SNP באתר miR-146a rs2910164 אנושי. התערובת מכילה פריימרים ספציפיים ל-PCR ושני פרובים פלואורסצנטיים מסוג MGB. סימון VIC עבור אלל C וסימון FAM עבור אלל G. התערובת מאפשרת הבחנה מדויקת בין שלושה גנוטיפים (CC, CG, GG) בתוך מבחנה אחת, והיא מתאימה להבחנה אללית בנקודת סיום (end-point allelic discrimination) במכשירי qPCR.
מבחנות לאיסוף דם עם נוגד קרישה ליתיום הפרין של BDBD Vacutainer367884ביוכימיה קלינית, בדיקות דחופות ומחקר המטולוגי
Graphpad ארה"ב/גרפיקה מדעית מקצועית & תוכנה לסטטיסטיקה, תקן לתחומי הביולוגיה והרפואה, אינה דורשת כתיבת קוד. נקודות חוזק מרכזיות: מבחני t, ANOVA, ניתוח הישרדות, רגרסיה לא ליניארית (למשל, עקומות תגובה למינון); יוצרת גרפים המוכנים לפרסום (גרשי עמודות, גרפי פיזור, עקומות הישרדות) עבור qPCR, Western Blot ובדיקות תאים.
ערכה לבדיקת ELISA של אימונוגלובולין E (IgE)ג'יאנצ'נגH108-1-2יישום: תגובה חיסונית, מחקר מחלות אלרגיה
ערכה לבדיקת ELISA של אינטרלוקין-10 (IL-10)ג'יאנצ'נגH010-1-2יישום: דלקת, ויסות חיסוני, מחקר סממנים ביולוגיים קליניים
ערכה ל-ELISA עבור אינטרלוקין-4 (IL-4)ג'יאנצ'נגH005-1-2תחום מחקר: דלקת, תגובה חיסונית מסוג Th2, תגובה אלרגית
ערכה לביצוע ELISA עבור Interleukin-6 (IL-6)ג'יאנצ'נגH007-1-2יישום: דלקת, ויסות חיסוני, מחקר של סמנים ביולוגיים קליניים
תוכנת LightCycler 480 (גרסה 1.5 / 1.6)Roche Diagnostics/תוכנה רשמית של Roche המאפשרת רכישת נתוני qPCR בלחיצה אחת, ניתוח כמותי, ניתוח עקומת המסה וטיפוס גנטי של SNP (שיטת TaqMan end-point + HRM).
ערכה לסנתזה משופרת של הגדיל הראשון של cDNA מ-miRNA מסוג miRcuteTIANGENKR211-02מתאים לכל תעתוק הפוך של miRNA בוגר
ערכה להפקה ובידוד של miRNA מסרום/פלזמה miRcuteTIANGENDP503דגימה ישימה: סרום אנושי, פלסמה, תגלית תאית (cell supernatant)
מכשיר Roche LightCycler 480 Instrument II (מערכת PCR בזמן אמת)Roche Diagnostics05015278001כימות באמצעות qPCR + תיפוס גנטי של SNP (כולל TaqMan) + ניתוח עקומות התכה ברזולוציה גבוהה (HRM)
SPSS 27.0ארה"ב/תוכנה סטטיסטית רב-תכליתית למדעי החברה ולרפואה, מונחית-תפריט (ללא כתיבת קוד), אידיאלית למדגמים גדולים & מערכי מחקר מורכבים. תכונות ליבה: סטטיסטיקה תיאורית, ANOVA, רגרסיה, חי-ריבוע, ניתוח הישרדות, מהימנות, חישוב גודל מדגם; תומך בניקוי נתונים & ייבוא מרובה פורמטים (Excel/CSV) עבור נתונים קליניים, נתוני סקרים ונתונים אפידמיולוגיים.
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)TIANGENFP205-02תערובת מאסטר (master mix) משופרת בעלת סגוליות גבוהה; בופר מותאם המכיל גורם H-Bond הממזער היווצרות של דימרים של פריימרים & בלתי ספציפיים; hot-start Taq + ROX עבור LightCycler 480 II; רגישות גבוהה & שחזוריות; אידיאלי עבור גנים בריכוז נמוך, דגימות מורכבות, ותבדיג גנטי ברמת תפוקה גבוהה.
פוטומטר למיקרו-פלטה Thermo Scientific Multiskan FCThermo51119180קורא פלטות רב-מצב (multimode) מתקדם; בליעה (כולל 450 ננומטר) + פלואורסצנציה + לומינסצנציה; ליניאריות 0–4 ספיגות (Abs)±(2%) באורך גל של 450 nm, סטיית תקן (SD) של הדיוק&ספיגות <0.001; תואם ללוחיות עם 96/384 בארות, טווח דינמי אוטומטי; אידיאלי עבור ELISA, בדיקות חיוניות תאים, בדיקות אימונולוגיות ואינטראקציות מולקולריות.
ספקטרופוטומטר UV-Vis מדגם Thermo Scientific NanoDrop OneThermo/ספקטרופוטומטר UV-Vis לנפחים זעירים בסטנדרט הזהב; 1–2 μL דגימה, ללא צורך בקובית; מודד ישירות חומצות גרעיניות (260 ננומטר), חלבונים (280 ננומטר), OD600 עם ריכוז & יחסי טוהר (A260/A280, A260/A230); סריקת ספקטרום מלא 190–850 ננומטר, כיול אוטומטי, מסך מגע; אידיאלי עבור qPCR, NGS ובקרת איכות (QC) של טיהור חלבונים.
ערכה למיצוי DNA גנומי מדם מלאTIANGENDP304-03דגימות מתאימות: דם פריפריאלי מלא, תאי דם, דגימות רקמה

מקורות

  1. Bernstein, J. A., Bernstein, J. S., Makol, R. & Ward, S. Allergic Rhinitis: A Review. JAMA. 331 (10), 866-877, (2024).
  2. Brozek, J. L. et al. Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma (ARIA) guidelines-2016 revision. J Allergy Clin Immunol. 140 (4), 950-958, (2017).
  3. Pagel, J. M. L. & Mattos, J. L. Allergic Rhinitis and Its Effect on Sleep. Otolaryngol Clin North Am. 57 (2), 319-328, (2024).
  4. Nappi, E. et al. Comorbid allergic rhinitis and asthma: important clinical considerations. Expert Rev Clin Immunol. 18 (7), 747-758, (2022).
  5. Grimm, D., Hwang, P. H. & Lin, Y. T. The link between allergic rhinitis and chronic rhinosinusitis. Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 31 (1), 3-10, (2023).
  6. Wise, S. K. et al. International consensus statement on allergy and rhinology: Allergic rhinitis - 2023. Int Forum Allergy Rhinol. 13 (4), 293-859, (2023).
  7. Vignal, A., Milan, D., SanCristobal, M. & Eggen, A. A review on SNP and other types of molecular markers and their use in animal genetics. Genet Sel Evol. 34 (3), 275-305, (2002).
  8. Falahi, S. et al. Association between IL-33 Gene Polymorphism (Rs7044343) and Risk of Allergic Rhinitis. Immunol Invest. 51 (1), 29-39, (2022).
  9. Kamel, M. A. et al. Association of serum CD14 level and functional polymorphism C-159T in the promoter region of CD14 gene with allergic rhinitis. Clin Exp Med. 23 (8), 4861-4869, (2023).
  10. Vishnoi, A. & Rani, S. miRNA Biogenesis and Regulation of Diseases: An Updated Overview. Methods Mol Biol. 2595 1-12, (2023).
  11. Vijayakumar, S., Yesudhason, B. V., Anandharaj, J. L., Kalaivanan, L. & Selvan Christyraj, J. R. S. Exosomes and Their miRNA as a Potential Biomarker in the Diagnosis of Parkinson's Disease. ACS Chem Neurosci. 16 (15), 2756-2766, (2025).
  12. Han, S., Ma, C., Bao, L., Lv, L. & Huang, M. miR-146a Mimics Attenuate Allergic Airway Inflammation by Impacted Group 2 Innate Lymphoid Cells in an Ovalbumin-Induced Asthma Mouse Model. Int Arch Allergy Immunol. 177 (4), 302-310, (2018).
  13. Yan, D. et al. Human Neutrophil Elastase Induces MUC5AC Overexpression in Chronic Rhinosinusitis Through miR-146a. Am J Rhinol Allergy. 34 (1), 59-69, (2020).
  14. Wang, J. et al. MiR-146a mimic attenuates murine allergic rhinitis by downregulating TLR4/TRAF6/NF-kappaB pathway. Immunotherapy. 11 (13), 1095-1105, (2019).
  15. Trinh, H. K. T. et al. Association of the miR-196a2, miR-146a, and miR-499 Polymorphisms with Asthma Phenotypes in a Korean Population. Mol Diagn Ther. 21 (5), 547-554, (2017).
  16. Jimenez-Morales, S. et al. MiR-146a polymorphism is associated with asthma but not with systemic lupus erythematosus and juvenile rheumatoid arthritis in Mexican patients. Tissue Antigens. 80 (4), 317-321, (2012).
  17. Bayar Muluk, N., Bafaqeeh, S. A. & Cingi, C. Anti-IgE treatment in allergic rhinitis. Int J Pediatr Otorhinolaryngol. 127 109674, (2019).
  18. Lv, R. et al. Research progress of anti-IGE treatment for allergic rhinitis. Am J Otolaryngol. 46 (3), 104646, (2025).
  19. Davila, I. et al. Genetic aspects of allergic rhinitis. J Investig Allergol Clin Immunol. 19 Suppl 1 25-31, (2009).
  20. Bogunia-Kubik, K. et al. Significance of Polymorphism and Expression of miR-146a and NFkB1 Genetic Variants in Patients with Rheumatoid Arthritis. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 64 (Suppl 1), 131-136, (2016).
  21. El-Akhras, B. A. et al. mir-146a genetic polymorphisms in systemic lupus erythematosus patients: Correlation with disease manifestations. Noncoding RNA Res. 7 (3), 142-149, (2022).
  22. Ghorab, R. A. et al. MiR-146a (rs2910164) Gene Polymorphism and Its Impact on Circulating MiR-146a Levels in Patients with Inflammatory Bowel Diseases. Inflammation. 48 (3), 1193-1205, (2025).
  23. Gong, H. B., Zhang, S. L., Wu, X. J., Pu, X. M. & Kang, X. J. Association of rs2910164 polymorphism in MiR-146a gene with psoriasis susceptibility: A meta-analysis. Medicine (Baltimore). 98 (6), e14401, (2019).
  24. Dong, J., Sun, D. & Lu, F. Association of two polymorphisms of miRNA-146a rs2910164 (G > C) and miRNA-499 rs3746444 (T > C) with asthma: a meta-analysis. J Asthma. 58 (8), 995-1002, (2021).
  25. Zhou, Z., Zhu, Y., Gao, G. & Zhang, Y. Long noncoding RNA SNHG16 targets miR-146a-5p/CCL5 to regulate LPS-induced WI-38 cell apoptosis and inflammation in acute pneumonia. Life Sci. 228 189-197, (2019).
  26. Olivieri, F. et al. miR-21 and miR-146a: The microRNAs of inflammaging and age-related diseases. Ageing Res Rev. 70 101374, (2021).
  27. Xiong, J. R. et al. miR-146a Regulates Neuroinflammation and Immune Cell Function in Neurodegenerative Diseases. Curr Med Sci. 45 (4), 725-744, (2025).
  28. Guo, H. et al. MiR-146a upregulates FOXP3 and suppresses inflammation by targeting HIPK3/STAT3 in allergic conjunctivitis. Ann Transl Med. 10 (6), 344, (2022).
  29. Yoshikawa, H. et al. miR-146a regulates emphysema formation and abnormal inflammation in the lungs of two mouse models. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 326 (1), L98-L110, (2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

פולימורפיזם של miR-146aגנוטיפ rs2910164ויסות חיסוניתגובה דלקתיתRT-qPCRTaqMan-qPCRIgE בנסיוברגרסיה לוגיסטיתרמות ציטוקינים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.