חומרים ועיצוב ניסוי
באגאס קנה סוכר שימש כמקור הפסולת הליגנוצלולוזית להכנת ננוצלולוז. הבגאס הטרי נשטף במי ברז ומים דה-יוניים, יובש בטמפרטורה של 60°C במשך 24 שעות, נחתך לחתיכות של 1–2 ס"מ, טחן ועבר דרך מסננת של 40 רשתות. האבקה המיובשת אוחסנה בשקיות פוליאתילן אטומות עם ג'ל סיליקה בטמפרטורת החדר ושימשה תוך חודש. כל החומרים והחומרים ששימשו במחקר זה מופיעים בקובץ טבלת החומרים .
אלא אם צוין אחרת, כל הכימיקלים היו בדרגת אנליטית ושימשו כפי שהתקבלו. נתרן הידרוקסיד, מי חמצן, חומצה אצטית, כסף ניטראט, נתרן בורוהידריד, 4-ניטרופנול, מתילן כחול, עופרת ניטראט, חומצה כלורית, חומצה חנקתית, נתרן כלוריד, סידן כלוריד, מגנזיום כלוריד, אתנול, תגובת פולין-צ'יוקלטאו, נתרן פחמתי וחומצה גאלית שימשו לטיפול מוקדם, טעינת חקלאות, בדיקות קטליטיות, ספיחה, התחדשות וכיול אנליטי. ניטראט כסף (תגובת ACS, ≥99.0%), נתרן בורוהידריד (≥98.0%), תגובת פולין-צ'יוקלטאו (1.9–2.1 ניוטון) ומפרטים תקניים לחומצה גאלית מפורטים בטבלת החומרים. צ'יטוזן עם דרגת דה-אצטילציה של 85%–90% שימש כביופולימר משני. עלי תה ירוק שימשו להכנת תמצית מחזרת מימית ליצירת ננו-חלקיקי חקלאות, שכן פוליפנולים של תה יכולים לשמש כסוכנים מפחיתים ומייצבים במהלך סינתזת AgNP13. תהליך העבודה הכולל כלל חילוץ תאית, הכנת ננו-צלולוזה, ייצור אירוג'ל, טעינת AgNP, אפיון מבני ובדיקות פונקציונליות, כפי שמוצג באיור 1. קומפוזיציות הדגימה ופרמטרי ההכנה מפורטים בטבלה 1.
באגאס קנה הסוכר טופל מראש על ידי שטיפה, ייבוש, טחינה, טיפול בסיסי והלבנת מי חמצן כדי לקבל עיסת עיסה עשירה בתאית. העיסה הוסבה לננוצלולוז שמקורו בפסולת באמצעות הומוגניזציה וסוניקה בלחץ גבוה, ולאחר מכן שולבה עם כיטוזן לייצור אירוג'לים של ננו-צלולוז/כיטוזן באמצעות הקפאה וייבוש בהקפאה. ננו-חלקיקי החקלאות נטענו במקום באמצעות AgNO₃ ותמצית תה ירוק סטנדרטית כמדיום הפחתה. האירוג'לים שהתקבלו הוערכו באמצעות אפיון מבניים, כימיים, תרמיים ומכניים רב-מודליים, ואחריהם הערכות אנטיבקטריאליות, קטליטיות, ספיחה, התחדשות ושחרור חקלאי. Ag-WNC/CS-A-3 נבחר כפורמולציה רב-תכליתית אופטימלית לאירוג'ל.
הכנת עיסת עיסת תאית עשירה
אבקת בגאס מיובשת טופלה ב-4% משקל של NaOH ביחס מוצק לנוזל של 1:20 גרם למ"ל. התערובת חוממה ב-80 מעלות צלזיוס במשך 3 שעות תחת ערבוב ב-500 סל"ד. הסיבים שטופלו עברו סינון ונשטפו במים דה-יוניים עד שהסינון הגיע ל-pH 7.0 ± 0.2, ואז יובשו ב-60 מעלות צלזיוס למשך 12 שעות.
הסיבים שטופלו באלקליות הולבנו עם 3% משקל H₂O₂ ב-pH 11.0 ± 0.2 ו-80°C למשך 2 שעות. תהליך ההלבנה חזר פעמיים. העיסה העשירה בתאית שהושגה נשטפה ל-pH ניטרלי ואוחסן במים דה-יוניים בטמפרטורה של 4°C למשך לא יותר מ-7 ימים. תכולת תאית, המיצלולוז, ליגנין ואפר נקבעו באמצעות ניתוח הרכב גרבימטרי לאישור הסרת רכיבים לא-תאיים14.
תפוקת העיסה חושבה כך:
(1)
הכנת ננו-צלולוז שמקורו בפסולת
עיסת תאית רטובה השווה ל-5.0 גרם מסה יבשה פוזרה ב-500 מ"ל מים דה-יוניים ועברה הומוגניזציה מוקדמת ב-10,000 סל"ד למשך 10 דקות. המתלה עובדה לאחר מכן באמצעות הומוגניזציה בלחץ גבוה: שתי מעברים ב-300 בר, שלושה מעברים ב-600 בר, וחמש מעברים ב-900 בר. טמפרטורת היציאה נשמרה מתחת ל-35 מעלות צלזיוס באמצעות מערכת סיבוב מים קרחוניים.
המתלה ההומוגני עבר סוניקה ב-400 וואט למשך 10 דקות במצב פולס, עם 3 שניות דלוק ו-3 שניות כבוי. הכלי נשמר באמבט קרח במהלך הסוניקציה. המתלה הסופי דולל ל-1.0% משקל ואוחסן ב-4 מעלות צלזיוס. תליות שהראו שקיעה נראית לעין או הפרדת פאזה לאחר 24 שעות הושלכו. הכנת ננוצלולוז התקבלה רק כאשר קוטר הסיב הממוצע של TEM היה מתחת ל-50 ננומטר, והפוטנציאל האבסולוטי של זטה עלה על 25 mV.
תפוקת הננוצלולוז חושבה כך:
(2)
הכנה וסטנדרטיזציה של תמצית תה ירוק
אבקת תה ירוק, 5.0 גרם, נוספה ל-100 מ"ל מים דה-יוניים וחוממה בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. התמצית הייתה מקוררת, סיננה דרך נייר סינון Whatman No. 1, צנטריפוגה בכ-7,500 × גרם למשך 10 דקות (שווה ערך לכ-8,000 סל"ד לרדיוס רוטור של 10.5 ס"מ), סיננה דרך ממברנה של 0.45 מיקרון, ואוחרה בטמפרטורה של 4°C למשך לא יותר מ-48 שעות.
התכולה הפנולית הכוללת נמדדה באמצעות שיטת פולין-צ'יוקלטאו. בקצרה, 0.5 מ"ל של תמצית מדוללת עורבבה עם 2.5 מ"ל של תגובת פולין-צ'יוקלטאו מדוללת ו-2.0 מ"ל של 7.5 אחוז משקל נתרן קרבונט. לאחר דגירה בחושך למשך 30 דקות, נמדדה הספיגה ב-765 ננומטר. חומצה גאלית שימשה כסטנדרט. רק אצולות תמצית עם תכולת פנולית כוללת של ±10% מהממוצע באצווה שימשו להפחתת AgNP.
ייצור ננו-תאית/אירוג'לים צ'יטוזנים
צ'יטוזן הומס בחומצה אצטית של 1.0% נפח להכנת תמיסה של 1.0% משקל וערבבו במשך הלילה. התמיסה סיננה דרך רשת ניילון של 100 מיקרון לפני השימוש.
להכנת WNC/CS-A, 80 מ"ל של תליית ננו-תאית 1.0 wt% עורבבו עם 20 מ"ל תמיסת כיטוזן 1.0 wt% ב-600 סל"ד. ה-pH הותאם מצד הירידה ל-5.5 ± 0.2 תוך שימוש ב-0.1 M NaOH בקצב מתחת ל-0.5 מ"ל לדקה. התערובת הושלכה אם הופיעה פלוקולציה נראית לעין או הפרדת פאזה בתוך 30 דקות.
נפח קבוע של פיזור של 5.0 מ"ל נשפך לתבניות פוליפרופילן גליליות בקוטר פנימי של 20 מ"מ וגובה של 20 מ"מ. הדגימות הוקפאו ב-80- מעלות צלזיוס למשך 12 שעות ויובשו בהקפאה בטמפרטורה של מינוס 55 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות תחת לחץ תא מתחת ל-20 פסקל. ייבוש בהקפאה שימש לשימור רשת הננוצלולוזה הנקבובית במהלך יצירת אירוג'ל15. WNC-A הוכן באותו הליך ללא צ'יטוזן. האירוג'ל היבש התקבל רק כאשר שמר על צורתו המונוליטית והראה התכווצות בגובה מתחת ל-20%.
טעינה ירוקה במקום של ננו-חלקיקי חקלאות
מונוליתים מיובשים מסוג WNC/CS-A הוטבעו ב-30 מ"ל של תמיסת AgNO₃ בעומק 1, 3 או 5 מ"מ ל-6 שעות בחושך. האירוג'לים הועברו לאחר מכן לתוך 30 מ"ל של תמצית תה ירוק סטנדרטית והגיבו בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות בחושך. לאחר הפחתה, הדגימות נשטפו חמש פעמים במים דה-יוניים, הוקפאו ב-80- מעלות צלזיוס למשך 6 שעות, ויובשו בהקפאה בטמפרטורה של מינוס 55 מעלות צלזיוס למשך 36 שעות. הדגימות האחרונות קודדו כ-Ag-WNC/CS-A-1, Ag-WNC/CS-A-3, ו-Ag-WNC/CS-A-5. קיבוע החקלאות באירוג'לים תאית משפר את שחזור הקטליזטורים ומפחית אובדן ננו-חלקיקים בהשוואה למערכות AgNP לא נתמכות16.
עומס החקלאות נמדד באמצעות ספקטרוסקופיית פליטה פלזמה-אופטית מקושרת אינדוקטיבית (ICP-OES). כ-20 מ"ג אירוג'ל טעון חקלאות עוכלו בחומצה חנקתית מדוללת בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס, דוללו ל-50 מ"ל, ונותחו באמצעות עקומת כיול חקלאית של 0.01–5.0 מ"ג לליטר. יעילות העומס החקלאית חושבה כך:
(3)
מדדי תהליך ירוק המשמשים לתפוקה, שימוש בתגובה, טעינת חקלאות, שחרור חקלאות והערכת שימוש חוזר מסוכמים בטבלה 2.
צפיפות, נקבוביות, קליטת מים ויציבות ממדית
צפיפות האירוג'ל חושבה ממסת יבשה ונפח גאומטריה. הדגימות יובשו בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס במשך 6 שעות, קיררו במייבש ומדדו עם קליפר דיגיטלי בשלוש עמדות.
(4)
הנקבוביות הוערכה כך:
(5)
כאשר ρs נלקח כ-1.50 גרם לס"מ 3 עבור מוצקים מבוססי תאית.
ספיגת המים נמדדה על ידי הטבלת אירוג'לים יבשים במים דה-יוניים למשך 24 שעות. הדגימות נמחקו במשך 10 שניות ונשקלו מיד.
(6)
כאשר Ws ו-Wd הם משקלי האירוסולים הרטובים והיבשים. היציבות הממדית הוערכה על ידי השוואת גובה וקוטר לפני ואחרי ההטבילה. לפחות חמישה מונוליתים נבדקו בכל קבוצה.
אפיון מורפולוגי ומבנה נקבובי
מורפולוגיית הננוצלולוז נצפתה על ידי TEM. מתלה של 0.005 משקל הוטל על רשת נחושת מצופה פחמן, צובע בחומצה פוספוטונגסטית של 1% משקל למשך 60 שניות, יובש וצולם בעוצמה של 80–120 קילו-וולט. לפחות 100 סיבים משלושה מתלים עצמאיים נמדדו באמצעות גרסה 1.54 של ImageJ.
מורפולוגיית האירוג'ל נצפתה על ידי SEM. הדגימות נשברו בחנקן נוזלי, הותקנו על שברי אלומיניום, צופו בזהב במשך 60 שניות, וצולמו בעוצמה של 5–10 קילווולט. לפחות חמישה שדות נרשמו לכל דגימה. מיפוי EDS בוצע כדי לקבוע את התפלגות החקלאות, ה-C, O ו-N.
בוצע ניתוח ספיגת חנקן בטמפרטורה של 77 K. הדגימות עברו ניקוי גזים בטמפרטורה של 60 °C במשך 12 שעות לפני הניתוח. שטח הפנים של BET והתפלגות גודל הנקבוביות של ברט-ג'ונר-הלנדה (BJH) חושבו משום שנגישות הנקבוביות משפיעה ישירות על ספיחת הספיחה והביצועים הקטליטיים באירוג'לים של תאית17.
ניתוח FTIR, XRD, XPS ו-TGA
ספקטרום FTIR נאספו במצב ATR בין 4000 ס"מ-1 ל-500 ס"מ-1 ברזולוציה של 4 ס"מ-1 עם 32 סריקות לכל דגימה. הספקטרום תוקן בסיס וננורמל לרצועת C-O-C של התאית בסמוך ל-1050 ס"מ-1. FTIR שימש להערכת קבוצות פונקציונליות הקשורות לתאית וכיטוזן; היווצרות החקלאות אושרה על ידי XRD, XPS, EDS ו-ICP-OES.
XRD בוצע באמצעות קרינת Cu K-אלפא בתדרים של 40 kV ו-40 mA. הדגימות נסרקו מ-5° עד 80° במהירות של 5°/דקה. מדד הגבישיות של התאית חושב בשיטת סגל. חקלאית מתכתית גבישית הוקצתה רק כאשר שיאי דיפרקציה בסביבות 38.1°, 44.3° ו-64.4° היו ניתנים לזיהוי, והיווצרות חקלאית פורשה יחד עם XPS, מיפוי EDS ו-ICP-OES במקום רק מ-XRD.
XPS שימש לקביעת הרכב יסודות פני השטח. ספקטרום הסקר נרשם מ-0 eV עד 1200 eV, וספקטרות ברזולוציה גבוהה נאספו עבור C1s, O 1, N1s ו-Ag 3d. אנרגיות הקישור כויללו ל-C 1s ב-284.8 eV. התאמת השיא בוצעה באמצעות גרסה 2.3.25 של CasaXPS. התאמת תלת-ממד חקלאית שימשה כראיה תומכת למיני חקלאות שטחיים; מכיוון שניתוח פרמטרי אוגר לא נכללו, התרומות היחסיות של Ag0 מתכתי ומיני חקלאות מחומצנים פורשו בזהירות.
TGA בוצע תחת חנקן מ-30 מעלות צלזיוס עד 700 מעלות צלזיוס במהירות של 10 מעלות צלזיוס לדקה. כ-5–8 מ״ג דגימה מיובשת שימשו בכל ריצה. טמפרטורת ההתדרדרות ההתחלתית, טמפרטורת ההתדרדרות המקסימלית והמסה השארית ב-700 מעלות צלזיוס נרשמו.
בדיקות מכניות
בדיקות דחיסה בוצעו באמצעות מכונת בדיקה אוניברסלית המצוידת בתא עומס של 100 ניוטון. דגימות גליליות בקוטר 20 מ"מ וגובה 20 מ"מ נדחסו ל-50% מאמץ בקצב של 2 מ"מ לדקה. חושבו מאמץ דחיסה ב-50% מאמץ ומודולוס יאנג מתחת ל-10% מאמץ.
דחיסה מחזורית בוצעה במשך חמישה מחזורי טעינה-פריקה בלחץ של 50%. התאוששות הצורה חושבה מהגובה שהוחזר לאחר כל מחזור. לפחות חמישה דגימות נבדקו בכל קבוצה. דגימות עם החלקה, קרע בקצה לפני מאמץ של 20%, או ליקויים גלויים הוצאו. בדיקות מכניות שימשו להערכת יציבות הטיפול במהלך הטמעה, התאוששות ושימוש חוזר18.
בדיקה אנטיבקטריאלית
הפעילות האנטיבקטריאלית הוערכה נגד Escherichia coli ו-Staphylococcus aureus. חיידקים גודלו במרק Luria-Bertani (LB) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במהלך הלילה ודיוללו לכ-1 ×10 6 CFU/mL. הריכוז אומת על ידי ספירת לוחות.
דיסקי אירוג'ל בקוטר 10 מ"מ ועובי 3 מ"מ עברו סטריליזציה באמצעות הקרנת UV למשך 30 דקות בכל צד. הסטריליות אושרה על ידי דגירה של אירוגלים מטופלים במרק LB בטמפרטורה של 37°C למשך 24 שעות.
לבדיקות השמדת מגע, דיסקים סטריליים של אירוג'ל הוקמו ב-2 מ"ל של השעיית חיידקים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות עם ניעור ב-120 סל"ד. המתלה דולל בסדרת, צופה על אגר LB, ודגרה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. חיזור חיידקים חושב כך:
(7)
הבדיקות כללו רק PBS, דיסק פילטר סטרילי, WNC-A, WNC/CS-A, תמיסת AgNO₃ עם ריכוז Ag השווה לשחרור הנמדד של Ag-WNC/CS-A-3, ודיסק אנטיביוטי מסחרי.
לבדיקות אזור עיכוב, דיסקי אירוג'ל הונחו על לוחות אגר פרוסים ב-100 מיקרוליטר של תלייה חיידקית. הלוחות דגרו בטמפרטורה של 37°C במשך 24 שעות, ונמדדו קוטרי אזורי העיכוב. כל בדיקה השתמשה בשלוש קבוצות אירוג'ל עצמאיות עם משולשים טכניים. גם בדיקות הרג מגע וגם אזורי עיכוב שימשו משום שמגע עם פני השטח ומיני חקלאות משוחררים עשויים לתרום באופן שונה לפעילות אנטיבקטריאלית19.
הפחתה קטליטית של 4-ניטרופנול
הפעילות הקטליטית הוערכה באמצעות הפחתה של 4-ניטרופנול ל-4-אמינופנול. תמיסה של 0.10 mM 4-ניטרופנול עורבבה עם NaBH₄ טרי שהוכנה כדי להגיע לריכוז NaBH₄ סופי של 10 mM. NaBH₄ שימש תוך 30 דקות לאחר ההכנה. התגובה הייתה מוגנת מאור ישיר.
דגימת 10.0 מ"ג ± 0.5 מ"ג אירוג'ל נוספה ל-10 מ"ל תמיסת תגובה בטמפרטורת החדר. במרווחים של דקה אחת, נמדדו אליקווטים של 1 מ"ל באמצעות ספקטרוסקופיית UV-Vis מ-250 ננומטר עד 500 ננומטר וחזרו לכלי התגובה. הספיגה ב-400 ננומטר שימשה למעקב אחר המרה.
הבדיקות כללו תגובה ללא אירוג'ל, WNC-A, WNC/CS-A, ובקרת ספיחה מקבילה ללא NaBH4 להבחנה בין הפחתה קטליטית לספיחת 4-ניטרופנול. בקרת הספיגה ללא NaBH4 טופלה כבקרה להסרה פיזית; רק הירידה הנוספת במערכת המכילה NaBH4 פורשה כהמרה קטליטית. קבוע הקצב הפסאודו-מסדר ראשון חושב כך:

ההמרה חושבה כך:
(8)
בדיקת הפחתת 4-ניטרופנול נבחרה משום שמדובר בתגובה סטנדרטית הניתנת למעקב UV-Vis להערכת קטליזטורים נתמכים לחקלאות20.
שימוש חוזר קטליטי
Ag-WNC/CS-A-3 שימש מחדש לחמישה מחזורי קטליזה. לאחר כל מחזור, האירוג'ל הוסר, נשטף שלוש פעמים במים דה-יוניים, הוטבל במים דה-יוניים למשך 10 דקות, ויובש בהקפאה בטמפרטורה של −55 מעלות צלזיוס למשך 12 שעות. המרה ב-15 דקות ו-k app נרשמו לכל מחזור.
(9)
לאחר חמישה מחזורים, האירוג'ל בשימוש נותח על ידי SEM ו-ICP-OES להערכת שימור מבני ואובדן חקלאות.
ספיחת מתילן כחול
מתילן כחול שימש כצבע קטיוני לדוגמה. אירוג'ל מיובש, 20.0 מ"ג ± 0.5 מ"ג, נוסף ל-50 מ"ל של תמיסת 50 מ"ג/ליטר MB ב-pH 7.0 ± 0.2. התערובת נוערה ב-150 סל"ד ו-25 ± 1 מעלות צלזיוס.
ב-5, 10, 20, 30, 60, 90, 120 ו-180 דקות, נאספו אליקווטים של 1 מ"ל, סיננו דרך ממברנה של 0.22 מיקרון, ונמדדו ב-664 ננומטר. ריכוז MB חושב באמצעות עקומת כיול מ-1 עד 50 מ"ג/ליטר עם R2 ≥ 0.995.
(10)
הנתונים הקינטיים הותאמו באמצעות מודלים פסאודו-מסדר ראשון ופסאודו-מדרגה שנייה. בחירת המודל התייחסה ל-R2, התאמה בין q_e מחושב לניסוי, והתפלגות שאריתית. MB נבחר משום שאירוג'לים ננוצלולוזיים מוערכים לעיתים קרובות להסרת צבע באמצעות אינטראקציה אלקטרוסטטית, קשרי מימן ודיפוזיה ברשת נקבובית21.
ספיחת Pb(II)
ספיחת Pb(II) נבדקה באמצעות תמיסת ניטראט עופרת. תמיסת מקור של 1000 מ"ג לליטר דוללה לפני השימוש. אירוג'ל מיובש, 20.0 מ"ג ± 0.5 מ"ג, נוסף ל-50 מ"ל של תמיסת 50 מ"ג/ליטר Pb(II) ב-pH 5.5 ± 0.2. התערובת נוערה ב-150 סל"ד ו-25 מעלות צלזיוס ± 1 מעלות צלזיוס במשך 180 דקות.
אליקווטים סיננו דרך ממברנה של 0.22 מיקרון, חומצו בחומצה חנקתית של 1% נפח, ונותחו על ידי ICP-OES. בקרות ריקות ללא אירוג'ל הופעלו באותו pH התחלתי כמו דגימות הספיחה, ובקרות ללא Pb(II) נכללו לבדיקת אותות רקע.
לניתוח איזותרמי, נבדקו ריכוזים של Pb(II) של 10, 25, 50, 75, 100 ו-150 מ"ג/ליטר למשך 24 שעות. דגמי לנגמייר ופריינדליך שימשו להתקנת שיווי משקל. Pb(II) שימש להערכת קישור על ידי קבוצות המכילות חמצן וחנקן בתוך רשת האירוג'ל22. מכיוון שסיכון היווצרות ומשקעים של Pb(II) רגישים ל-pH ולזמן מגע, Pb(II) פורש בעיקר באמצעות נתוני קצה ושיווי משקל/איזותרם מבוקרי pH; לכן מדווחים פרמטרי מודל קינטי רק עבור MB.
pH, יונים קיימים במקביל, והשפעות מטריצת מים
השפעת ה-pH נבדקה ב-pH 3.0, 5.0, 7.0 ו-9.0 עבור MB, וב-pH 3.0, 4.5, 5.5 ו-6.5 עבור Pb(II). ספיחת Pb(II) לא נבדקה בתנאים בסיסיים כדי למנוע משקעים. נרשמו רמות pH ראשוניות וסופיות, וריצות ספיחה חזרו על עצמן כאשר סטיית ה-pH עלתה על 0.5 יחידות. בקרות ריקות באותו pH ללא אירוג'ל שימשו להבחנה בין ספיחת אירוג'ל לאובדן או משקעים תלויי pH של Pb(II).
השפעת היונים הקיום במקביל הוערכה על ידי הוספת 10 mM NaCl, 5 mM CaCl₂, או 5 mM MgCl₂. נבדק גם מצב של יונים מעורבים שכלל את שלושת המלחים. מי שפכים מדומים הכילו 10 מ"מ NaCl, 2 מ"מ CaCl₂, 2 מ"מ מ"מ MgCl₂ ו-5 מ"ג/ליטר חומצה הומית. ה-pH הותאם ל-7.0 ± 0.2 עבור MB ו-5.5 ± 0.2 עבור Pb(II). בדיקות אלו נכללו כדי להעריך את ביצועי הספיגה תחת מטריצות מים מורכבות יותר23.
התחדשות ספיחה
Ag-WNC/CS-A-3 שוחזר במשך חמישה מחזורי ספיחה. ל-MB, אירוג'לים טעונים הוטבעו בתמיסת אתנול/מים בנפח 30 מ"ל ב-50:50 וולט/וולט למשך 2 שעות. עבור Pb(II), אירוג'לים טעונים הוטבעו ב-30 מ"ל של 0.05 M HCl למשך שעה אחת ונשטפו ל-pH של 6.5–7.0. לאחר כל שלב רגנרציה, דגימות יובשו בהקפאה בטמפרטורה של מינוס 55°C למשך 12 שעות.
(11)
מסה יבשה של אירוג'ל נרשמה לפני ואחרי כל מחזור. דגימות עם קריסה נראית לעין, פיצול או אובדן מסה יבשה מעל 15% סווגו ככלות מבנית.
שחרור חקלאי
שחרור החקלאות נבדק על ידי הטבילה של 20.0 ± 0.5 מ"ג של איירג'ל טעון חקלן ב-50 מ"ל מים דה-יוניים, תמיסת NaCl במשקל 0.9%, או בופר אצטט pH 5.5 בטמפרטורה של 25 ± 1 מעלות צלזיוס. ב-24 שעות ו-72 שעות נאספו 2 מ"ל אליקווטים, חומצו בחומצה חנקתית באחוז נפח אחד, ונותחו על ידי ICP-OES. הכרך שנלקח הוחלף במדיום טרי.
שחרור החקלאות דווח כמיקרוגרם/ליטר וכאחוז מסך החקלאות הטעון:
(12)
בדיקה זו שימשה להערכת האם עומס החקלאות המוגבר גרם לחליטה מיותרת של החקלאות תוך שמירה על ביצועים אנטיבקטריאליים וקטליטיים24.
תוכנה ועיבוד נתונים
תמונות SEM ו-TEM נותחו באמצעות גרסה 1.54 של ImageJ. ספקטרום FTIR, דפוסי XRD, עקומות קינטיות UV–Vis, קינטיקה של ספיחה וגרפים איזותרמיים עובדו באמצעות OriginPro 2024. ספקטרום XPS הותקן באמצעות גרסה 2.3.25 של CasaXPS. ניתוח סטטיסטי והכנת גרף בוצעו באמצעות GraphPad Prism 10.
לצורך התאמת ספיחה, הדגמים לא נבחרו על ידי R2 בלבד. הסכמה בין קיבולת הספיחה הניסויית והמחושבת, התפלגות שאריתית וסבירות פיזיקלית של הפרמטרים נחשבהגם היא 25.
בקרת איכות וניתוח סטטיסטי
כל הניסויים בוצעו באמצעות אירוג'לים משלוש קבוצות ייצור עצמאיות לפחות. בדיקות פיזיקליות ומכניות השתמשו בחמישה דגימות לכל קבוצה. בדיקות אנטיבקטריאליות, קטליטיות, ספיחה, רגנרציה ושחרור חקלאי השתמשו בשלוש קבוצות עצמאיות עם שלשות טכניות כאשר היה רלוונטי.
מנות אירוג'ל התקבלו רק כאשר שונות הצפיפות היבשה באותה קבוצה הייתה מתחת ל-15%. לוחות אנטיבקטריאליים התקבלו כאשר מספר המושבות היה בטווח של 30–300 CFU. בדיקות קטליטיות חזרו כאשר הספיגה ההתחלתית ב-400 ננומטר השתנתה ביותר מ-10% מהממוצע של האצווה. בדיקות ספיחה חזרו כאשר סטיית ה-pH עלתה על 0.5 יחידות. עקומות כיול ICP-OES ו-UV–Vis דרשו R2 ≥ 0.995.
הנתונים מוצגים כסטיית תקן ממוצעת ±. הנורמליות הוערכה באמצעות מבחן שפירו–וילק. הנתונים המפוזרים בדרך כלל נותחו באמצעות ANOVA חד-כיווני ואחריו מבחן פוסט-הוק של טוקי. נתונים לא נורמליים נותחו במבחן קרוסקאל-ווליס ואחריו מבחן ההשוואה המרובת של דאן. ערך p מתחת ל-0.05 נחשב מובהק סטטיסטית. לא הוסר חריג אלא אם כן הייתה סיבה טכנית מתועדת.