מאמר שיטה

מודל של קרע בכבד בעכברים המפשט את הכימות של קואגולופתיה של דימום מושרית טראומה, דלקת והישרדות

75 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/72215

⸱

25 בספטמבר 2026

 ,  ,  , 
1Division of Hematology and Cellular Therapy, Department of Medicine, University of California San Diego

במאמר זה

סיכום

אנו מציגים מודל הדיר של קרע בכבד עכבר הניתן לשחזור עבור דימום עמוק, המשלב איבוד דם, קואגולופתיה מושרית טראומה ותוצאות הישרדות. המודל מאפשר הערכה של התערבויות המוסטטיות, כולל recombinant factor VIIa וחומצה טרנזמיקה, לצד הערכות קרישה, פיברינוליזה ותמותה, ובכך מספק פלטפורמה חסכונית וניתנת להרחבה למחקר מכניסטי ותרגומי על דימומים.

תקציר

דימום בלתי נשלט נותר סיבה מרכזית למוות שניתן למנוע בקרב חולי טראומה, וקוואולופתיה מושרית טראומה (TIC) היא גורם מכריע בתמותה מוקדמת. מודלים ניסיוניים המשחזרים באופן מהימן דימום ותגובות קוואולופתיות נלוות הם חיוניים למחקרים מכניסטיים ולהערכה של התערבויות ממוקדות. כאן, אנו מתארים מודל עכברי סטנדרטי של דימום חמור באמצעות קרע כבדי (LL) הניתן לשחזור הגורם לדימום, שניתן לכמת במדויק, תוך מעקב סימולטני אחר קוואולופתיה סיסטמית, סמני דלקת ותמותה.

עכברים עוברים לפרוטומיה סטנדרטית בקו האמצע ולאחריה LL, כאשר איבוד הדם נמדד באמצעות ספוגים ספוגים בדם. סממנים סיסטמיים של קרישה, פיברינוליזה וסממני דלקת נאספים באמצעות דגימת דם רטרו-אורביטלית לפני הפרוצדורה ובמרווחי זמן סדרתיים שנקבעו מראש לאחריה. LL עם איבוד דם גורם באופן עקבי ל-TIC (המאופיין בהארכה של זמן תרומבופלסטין חלקי מופעל (aPTT), עלייה בקומפלקס thrombin-antithrombin (TAT), התכלות סלקטיבית של פקטורי קרישה (F) V ו-VIII עם הפעלת פיברינוליזה). במקביל, הפעלה דלקתית באה לידי ביטוי בעלייה של interleukin-6 (IL-6). יתרה מכך, המודל מאפשר לבצע ניתוחי הישרדות לאחר תיקון החתך בקו האמצע.

כיישום תרגומי, נעשה שימוש ב-rhFVIIa וב-TXA כדי להוכיח שהמודל רגיש להצלה מדימום באמצעות מודולציה פרמקולוגית של פרמטרי קרישה ופיברינוליזה. בהשוואה למודלים של בעלי חיים גדולים, מערכת עכברית זו מציעה הזדמנות חסכונית, רב-גונית וניתנת להרחבה בקלות לחקר התערבויות ממוקדות וחדשניות עבור דימום טראומטי.

מבוא

טראומה היא גורם מוביל למוות ולנכות בקרב מבוגרים צעירים (גיל < 45 שנים)1,2, כאשר דימום בלתי נשלט מהווה גורם מרכזי לתמותה מוקדמת3. גורם קריטי לתוצאות גרועות בחולים פצועים קשה הוא התפתחות של קואגולופתיה מושרית טראומה (TIC)4,5. TIC היא הפרה רב-גורמית ומורכבת של ההומוסטזיס המאופיינת בדלדול של פקטורי קרישה V ו-VIII6,7, פיברינוליזה לא תקינה7,8,9, ואקטיבציה דלקתית סיסטמית10. TIC תורמת לדימום מתמשך ומקושרת לעלייה בצורך בעירוי דם11, לכשל באיברים5, ולתמותה, למרות התקדמות בשיטות החייאה לבקרת נזקים (damage-control resuscitation) ובהתערבויות טיפוליות5.

מודלים ניסיוניים המשחזרים באופן מהימן הלם המורגי עם שינויים קואגולופתיים נלווים הם לפיכך חיוניים לחקירה מכניסטית ולהערכה של התערבויות המוסטטיות ממוקדות. מודלים של דימום מבוקר עושים שימוש בשאיבת דם סטנדרטית, שעלולה שלא לגרום לפגיעה רקמתית, התורמת לתגובה הקואגולופתית המערכתית הנצפית בטראומה קלינית12. לפיכך, מודלים של דימום המשלבים פגיעה באיברים מוצקים צריכים לספק רלוונטיות קלינית רבה יותר, בתנאי שניתן להעריך באופן כמותי דימום מתמשך ותגובות מערכתיות13,14,15,16. מודלים מורכבים יותר של TIC משלבים שילובים של פגיעה מוחית טראומטית, שברים בעצמות ארוכות או בגפיים, פגיעה ברקמות רכות, לפרוטומיה והלם המורגי מבוקר כדי לשחזר מרכיבים מרובים של טראומה קשה17,18. למרות שגישות אלו מספקות ייצוג מקיף יותר של פוליטראומה, הליכי הפגיעה המרובים והמניפולציות הפיזיולוגיות שבהם עלולים להגביר את המורכבות הטכנית ואת השונות הניסיונית.

למרות עשורים של מחקר, מודלים ניסיוניים של TIC שהם רלוונטיים קלינית וניתנים לשחזור נותרו מוגבלים והטרוגניים. סקירות הדגישו את הצורך במודלים חסונים המשחזרים באופן מדויק יותר את הרצף הקליני של פגיעה ברקאות והלם המורגי ותומכים בהערכה של התערבויות טיפוליות17,19. מודלים מורכבים הדורשים מיכשור נרחב, כולל קטטריזציה של הלב וניטור המודינמי רציף, יכולים לספק מידע פיזיולוגי מפורט אך דורשים גם ציוד ייעודי ומניפולציות פרוצדורליות נוספות. כדי להסיר חסמים למחקר טראומה, פישוט הגישה הניסיונית תוך שמירה על המאפיינים המרכזיים של TIC נראה קריטי. כאן, אנו מתארים מודל עכברי סטנדרטי המוביל להלם המורגי בלתי נשלט14 באמצעות LL שניתן לשחזור, המשרה דימום עז ומשחזר מאפיינים מרכזיים של TIC. מודל זה מאפשר הערכה של תגובות קרישה ודלקת, כולל מדדי קרישה כלליים (aPTT ויצירת תרומבין), התרוקנות סלקטיבית של פקטורי קרישה (FV ו-FVIII) כסימן היכר של TIC, סממנים של פיברינוליזה ופרופיל ציטוקינים. כדי להדגים את הרגישות והרלוונטיות של מודל זה לטראומה אנושית, אנו מעריכים את ההשפעות של rhFVIIa (חומר פרוהמוסטטי) ו-TXA (חומר אנטי-פיברינולייטי), המשמשים בהחייאת טראומה, על חומרת הדימום, התקדמות הקואגולופתיה ותוצאות הישרדות.

המודל תומך בנוסף בדגימת דם סדרתית וסופית, מה שמאפשר הערכה לאורכית של מסלולי קרישה ודלקת ביחס לחומרת הפגיעה ולהתערבות הטיפולית. יחד, המודל מספק מערכת עכברית הניתנת לשחזור ולהרחבה לצורך חקר TIC בהקשר של דימום חמור, ולהערכת התערבויות המוסטטיות ופארמקולוגיות ממוקדות באמצעות נקודות סוף רלוונטיות קלינית, כולל איבוד דם, קואגולופתיה, פיברינוליזה, דלקת והישרדות.

בהשוואה למודלים קודמים שפורסמו של קרעים בכבד של עכברים, כולל הפרוטוקול שתואר על ידי Dyer et al.13, שיטה זו מציגה מספר התקדמויות מתודולוגיות מרכזיות. אלו כוללות מדידה גרבימטרית כמותית של איבוד דם, סטנדרטיזציה של חומרת הפגיעה באמצעות נורמליזציה של מסת הכבד הפגוע ביחס למשקל הגוף, ואפיון מקיף של TIC, פיברינוליזה ודלקת. יתרה מכך, המודל מאפשר דגימה סדרתית, מודולציה פרמקולוגית ואנליזות הישרדות המפרטות טכניקות לסגירה של חלל הבטן, המאפשרות התאוששות פיזית במקום סיום הניסוי. ניתן לבצע את כל הפרוצדורות במסגרת גישה ניסיונית אחת, ובכך לספק פלטפורמה ניתנת להרחבה ולתרגום למחקר של דימומים והתערבויות המוסטטיות ממוקדות.

פרוטוקול

ועדת טיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של אוניברסיטת קליפורניה בסן דייגו (UCSD) אישרה את כל פרוטוקולי בעלי החיים. עכברי C57BL/6J רבו והוחזקו במתקן הריבוי הפנימי של UCSD. בניסויים נעשה שימוש בעכברים זכרים ונקבות, בגילאי 8 עד 10 שבועות. סקירה סכמטית של זרימת העבודה והלוח הזמנים הניסויים מוצגת ב-Supplementary Figure 1.

הערה: גודל המדגמים נקבע על בסיס ניסויים מקדימים, השונות הצפויה של נקודות קצה בודדות וניסיון קודם עם מודל קרע בכבד של עכבר. גדלי המדגמים הסופיים עבור נקודות קצה ניסוייות ובודדות וקבוצות ניסוייות מופיעים במקראות האיורים המתאימות. עבור מדידות משקל הכבד, נתונים ממספר ניסויים עצמאיים אוחדו כדי להעריך את העקביות בין קהרי הניסויים. עבור בדיקות קרישה שבוצעו בסבבי ניסוי נפרדים, מדגמים שנותחו בעבר נכללו בין הסבבים כדי לנטר את העקביות והשחזוריות בין הבדיקות.

1. הכנה טרום-ניסויית

  1. איסוף דגימות בסיס (יום 1-)
    1. אסוף ~200 µL דם באמצעות גישה רטרו-אורביטלית מכל עכבר (בני 8–10 שבועות) 24 שעות לפני הניסוי כדי לקבוע את פרמטרי הבסיס.
    2. הזרק ~200 µL של סליין סטרילי המיועד להזרקה באופן תת-עורי לאחר איסוף הדם.
    3. שכן את העכברים בכלובים נקיים בתנאי מעבדה סטנדרטיים, בטמפרטורה נשלטת של 20–24 °C, לחות יחסית של 30%–70%, ומחזור של 12 שעות אור/12 שעות חושך, עם גישה חופשית (ad libitum) למזון ומים עד ליום הניסוי.
  2. הכנת הכלוב (יום 0)
    1. העבר את העכבר לכלוב נקי מרופד במגבות נייר טריות ביום הניסוי.
    2. הסר את המזון והמים 15 דקות לפני הניסוי והשאר אותם ללא גישה עד להסרת ספוגי הספיגה לאחר הניתוח.

2. הכנת הכלים ושדה הניתוח

  1. עיקור מכשירים
    1. עקרו את המכשירים הכירורגיים, את הפ तुमने, את האפליקטורים ואת ניירות המסנן באמצעות אוטוקלאב.
    2. חטאו את משטח הניתוח באמצעות 70% ethanol.
  2. הכנת שולחן הניתוח
    1. סדרו את המכשירים הסטריליים על סביבת עבודה סטרילית (sterile drape).
    2. הכינו מיכל פלדת אל חלון עם 70% ethanol וצמר גפן סטרילי לניקוי ביניים של המכשירים.
    3. הפעילו מכשיר עיקור בחרוזים (microbead sterilizer) והמתינו עד שיגיע ל-150 °C לצורך עיקור בין חיה אחת לשנייה.

3. הכנה לשמירה על הטמפרטורה

  1. הכנת רפידה איזותרמית
    1. הפעל את ה- פד חימום איזותרמי מיד לפני הניתוח, בהתאם להוראות היצרן.
    2. כוון את פחד החימום האיסותרמי לשמור על טמפרטורת גוף העכבר בטווח מטרה של 36–37 °C לאורך כל ההרדמה והניתוח.
    3. וודאו כי חלוקת החום היא אחידה על פני שטח הפלטה.
    4. הנח את הפד על פלטפורמת הניתוח וכסה אותו בסדין סטרילי.
    5. חבר את לוח הניתוח למערכת ההרדמה באיסופלורן (isoflurane).

4. הרדמה והליכים טרום-ניתוחיים

  1. השראה של הרדמה
    1. השרה של הרדמה על ידי הנחת העכבר בתא השראה עם 2% isoflurane ב-2 L/min חמצן.
    2. אישור של הרדמה נאותה באמצעות רפלקס צביטה של בהונות.
    3. תיעוד משקל גוף לפני הניתוח.
  2. מתן אלגזיה וטיפול
    1. מתן buprenorphine (במינון של 3.25 mg/kg, תת-עורי) לאלגזיה.
    2. הכנת חומרי המסטזיס לפי הצורך.
    3. עבור קבוצות הטיפול, מתן recombinant human activated factor VII (rhFVIIa; במינון של 3 mg/kg) או tranexamic acid (במינון של 10 mg/kg) באמצעות הזרקה תוך-ורידית רטרו-אורביטלית 5 min לפני הפציעה.
    4. מתן נפח שווה (~100 µL) של סליין סטרילי בדרגת הזרקה לבעלי החיים בקבוצת הביקורת.

5. הכנה כירורגית

  1. הכנת אזור הניתוח
    1. העבר את העכבר המורדם ללוח הניתוחים המונח על פד איזותרמי.
    2. שמור על ההרדמה באמצעות מסכת אף עם 1.5%–2% isoflurane בזרם חמצן של 2 L/min לאורך כל ההליך הכירורגי.
    3. מקם את העכבר בשכיבה על הגב (supine) והדבק את ארבע הגפיים בעזרת סרט הדבקה.
    4. גלח את אזור הבטן.
    5. בצע חיטוי אספטי תוך שימוש לסירוגין ב-povidone-iodine וב-70% ethanol (שלושה מחזורים).

6. פרוצדורה של קרע בכבד

  1. שקילה מוקדמת של חומרים
    1. שקול מראש שתי מבחנות בנפח 1.5 mL, כולל מבחנה אחת המכילה 0.5 mL של סליין ומבחנה אחת ריקה.
    2. שקול מראש שלושה משולשי ספיגה ראשוניים ושני משולשי ספיגה משניים עבור כל חיה ורשום את מסתם המשותפת.
    3. שקול מראש כלי שקילה אחד עבור כל חיה לשקילה מאוחרת של רקמת הכבד שהוצאה.
  2. השראת פגיעה בכבד
    1. בצע לפרוטומיה בקו האמצע באורך של כ-0.5 inch (12.7 mm) כדי לחשוף את הכבד.
    2. מקם שני משולשי ספיגה לאורך דפנות הבטן הימנית והשמאלית, תוך הימנעות ממגע עם הכבד.
    3. הוצא החוצה את האונה השמאלית של הכבד וזהה את שולי האונה כדי להנפיק סטנדרט להיקף הסרת הרקמה. הימנע מפגיעה לא מכוונת ברקמה.
    4. בעזרת מספריים חדים, חתוך כ-75% מהאונה בתנועה אחת מבוקרת כדי להבטיח עקביות בין החיות.
    5. העבר את הרקמה החתוכה שהוצאה אל המבחנה הריקה שנשקלה מראש לצורך כימות מאוחר של חומרת הפגיעה.
    6. הכנס משולש ספיגה שלישי לחלל הבטן כדי להקל על איסוף אחיד של דם במהלך שלב הדימום.
  3. סגירה מהירה של הבטן לשמירה על דימום פנימי (שלב קריטי)
    1. סגור מיד את דופן הבטן תוך ~10–15 s באמצעות שני תפסים כירורגיים (autoclips).
    2. הבטח יישור מדויק של שולי החתך כדי להשיג סגירה מלאה ללא פערים. סגירה חלקית עלולה להוביל לדליפת דם חיצונית ולהערכה חסרה של איבוד הדם.
    3. הפעיל מתיחה עקבית אך עדינה במהלך הסגירה, והימנע מדחיסה של תכולת הבטן, דבר שעלול לשנות את דינמיקת הדימום.
    4. חזק את הסגירה באמצעות דבק לרקמות (2–3 טיפות) כדי להבטיח תא בטן אטום לחלוטין.
  4. ניטור לאחר הפגיעה
    1. שקול את רקמת הכבד שהוצאה ונרמל את המדידה למשקל הגוף כדי לכמת ולאשר את היקף הפגיעה בכבד.
    2. החזר את העכבר לכלוב המונח על פד איזותרמי.
    3. אפשר לדימום להימשך במשך 60 min עבור קבוצת נקודת הסיום וההישרדות.

7. איסוף דם וכימות איבוד דם

  1. איסוף ועיבוד דגימות דם
    1. עבור קהילת נקודת הסיום (endpoint cohort), הרדם מחדש את העכבר באמצעות isoflurane כ-60 דקות לאחר קרע הכבד.
    2. עבור קהילת ההישרדות (survival cohort), הרדם מחדש את העכבר באמצעות isoflurane כ-6 שעות ו-7 ימים לאחר קרע הכבד לצורך איסוף דם.
    3. אסוף דם באמצעות דקירה רטרו-אורביטלית למבחנות המכילות תמיסת sodium citrate (יחס דם-נוגד קרישה: 9:1) להכנת פלזמה.
    4. סבב את הדגימות בצנטריפוגה במהירות 2,000 × g למשך 10 דקות, ולאחר מכן בצע סבב שני במהירות 12,000 × g למשך 5 דקות, כדי לקבל פלזמה דלה בטסיות (platelet-poor plasma) עבור בדיקות קרישה ופיברינוליזה בהמשך.
  2. מדידת איבוד דם
    1. פתח מחדש את הבטן כ-60 דקות לאחר קרע הכבד הן עבור קהילת נקודת הסיום והן עבור קהילת ההישרדות, והסר את ספגי הספיגה המכילים דם.
    2. העבר את כל הספגים הספוגים בדם למבחנה שנשקלה מראש ומכילה saline סטרילי.
    3. השתמש בספגי ספיגה נוספים שנשקלו מראש כדי לאסוף דם שנותר בתוך חלל הבטן.
    4. שקול את מבחנת האיסוף לאחר איסוף הדם כדי לקבל את המשקל הסופי של המבחנה.
    5. חשב את איבוד הדם באמצעות המשוואה הגרווימטרית הבאה:
      איבוד דם (µL/g) = [(משקל סופי של המבחנה − משקל ראשוני של המבחנה – משקל ספג הספיגה) / משקל גוף העכבר] × 1000.
      הערה: כל המשקלים מבוטאים בגרמים. המקדם 1,000 ממיר גרמים של דם למיקרוליטרים, בהנחה שצפיפות הדם היא בערך 1 g/mL.
  3. קהילת הישרדות ותוצאים ארוכי טווח
    1. בעקבות מדידת איבוד הדם ב-60 דקות, סגור מיד את החתך באמצעות סיכות כירורגיות ודבק לרקמות כדי להבטיח חלל בטן אטום לחלוטין.
    2. הזרק 400 µL של saline סטרילי תת-עורית לפני ההתאוששות.
    3. החזר את העכבר לכלוב סטנדרטי ועקב אחריו באופן רציף במהלך ההתאוששות מההרדמה, ובצע הערכה ב-2 שעות, 6 שעות ו-24 שעות לאחר הניתוח, ולאחר מכן בצע ניטור יומי עד היום ה-7.

8. טיפול לאחר ניתוח

  1. ניטור לאחר ניתוח
    1. יש לנטר את בעלי החיים באופן רציף במהלך ההתאוששות המוקדמת מההרדמה כדי לזהות סימנים של מצוקה או תחלואה.
    2. יש לתעד את סטטוס ההישרדות ותצפיות קליניות בכל הערכה מתוכננת.
  2. טיפול תומך
    1. יש להחדיר 400 µL של תמיסת סליין סטרילית תת-עורית פעם ביום למשך 3 ימים.
    2. יש לספק אלגזיה (buprenorphine, במינון 3.25 mg/kg, תת-עורית) בכל 72 h בהתאם לפרוטוקול המאושר לטיפול בבעלי חיים.
    3. יש להחזיק את העכברים בדיור סטנדרטי עם גישה חופשית (ad libitum) למזון ומים.
  3. נקודות סיום הומניאניות
    1. יש לנטר את בעלי החיים לאיתור נקודות סיום הומניאניות שהוגדרו מראש, כולל רזרזות (lethargy) חמורה או מתמשכת, חוסר יכולת להתנייד או להשיג מזון ומים, מצוקה נשימתית חמורה, חוסר תגובה, או סימנים אחרים למצוקה חמורה כפי שפורט בפרוטוקול המוסדי המאושר לטיפול בבעלי חיים.
    2. יש להקריב (euthanize) בעלי חיים העומדים בנקודות הסיום ההומניאניות שהוגדרו מראש, בהתאם להנחיות המוסדיות.
    3. יש להמשיך בניטור ההישרדות עד היום ה-7 או עד להגעה לנקודת סיום הומניאנית.

9. פרוצדורות סיום ואיסוף רקמות

  1. בנקודות זמן ניסיוניות שהוגדרו מראש, הרדימו את העכברים וגבו דם באמצעות דקירה רטרו-אורבית.
  2. בצעו קטילה באמצעות שאיפת CO₂ בהתאם להנחיות המוסדיות.
  3. הוציאו את האיברים ועבדו את הרקמות לצורך אנליזה היסטולוגית בהתאם להליכים הבאים שצוינו.

10. בדיקות קרישה, פיברינוליזה וציטוקינים

הערה: הריאגנטים, ערכות הבדיקה והציוד המשמשים להליכים אלו מפורטים בטבלת החומרים.

  1. מדידת aPTT
    1. יש להירשם את כל זמני הקרישה באמצעות הקוגולומטר (coagulometer) המפורט ב- טבלת חומרים.
    2. ערבב 25 µL של פלזמה מעכבר עם 25 µL של ריאגנט aPTT והדגירה למשך 3 דקות ב- 37 °Cהתחל את קרישת הדם על ידי הוספת 25 µL של CaCl2₂ (25 mM) שהוכן ב-HBS (‏20 mM HEPES, ‏147 mM NaCl, ‏3 mM KCl, pH 7.4), ורשום את זמן הקרישה.
  2. מדידת הפעילות של FV, FII ו-FX
    1. ערבב 5 µL של פלזמה מעכבר עם 20 µL של הפלסמה התואמת, החסרה את הגורם, ו- 25 µL של HBS המכיל 0.5% bovine serum albumin.
    2. דגרו למשך דקה אחת ב- 37 °C, והתחל את תהליך הקרישה על ידי הוספת ריאגנט Innovin המופיע ב- טבלת חומרים.
    3. קבע את פעילות הגורם ביחס למערכת הכיול/הייחוס המתאימה.
  3. מדידת FVIII
    1. קבע את רמת ה-FVIII באמצעות בדיקת FVIII כרומוגנית בהתאם להוראות היצרן.
  4. מדידת פיברינוגן
    1. קביעת ריכוז פיברינוגן באמצעות שיטת קלאוס (Clauss method). הוסף 10 µL של פלזמה מעכברים ל- 40 µL של תמיסת סלין עם בופר HEPES המכילה 0.01% אלבומין מסרום בקר (bovine serum albumin) ולהדגיר למשך 3 דקות ב- 37 °C.
    2. התחילו את תהליך היווצרות הקריש על ידי הוספת 25 µL של תרומבין (25 U/mL), וקבע את ריכוז הפיברינוגן באמצעות כיול הבדיקה.
  5. מדידת סמנים ביולוגיים בפלסמה
    1. מדוד קומפלקסי TAT בבלאזמה, קומפלקסי PAP ו-D-dimer באמצעות ערכות הבדיקה הזמינות מסחרית המפורטות ב- טבלת חומריםבצעו כל בדיקה בהתאם להוראות היצרן.
    2. השתמשו בסטנדרטים, קליברטורים ובקרים ספציפיים לבדיקה כפי שצוין על ידי היצרנים, וחשבו את ריכוזי האנליטים מתוך עקומות הסטנדרט המתאימות.
  6. מדידת IL-6 בפלזמה
    1. מדוד את ריכוזי ה-IL-6 בפלזמה בנקודת הבסיס, ב-60 דקות וב-6 שעות לאחר קרע בכבד, באמצעות בדיקת ציטוקינים מרובת רכיבים (multiplex) המפורטת ב- טבלת חומרים.
    2. בצע את הבדיקה בהתאם להוראות היצרן ונתח את הנתונים באמצעות תוכנת ה-Q-View של היצרן.

תוצאות

מודל ה-LL גורם לחומרת פגיעה הדירה וסטנדרטית בעכברים. איור 1A מדגים את העקביות של משקל הכבד הפצוע כאשר הוא מנורמל למשקל הגוף (%BW), עם פגיעה חציונית של 1.4% BW בכל הקבוצות הניסויים. עקביות זו מאשרת השראה כירורגית מהימנה ומאפשרת הדירות בין בעלי חיים ובין תנאי ניסוי שונים. היכולת להגדיר רמה סטנדרטית של חומרת הפגיעה היא קריטית להערכת תגובות פיזיולוגיות המשכיות ללא תלות בשונותיות של נזקי הרקמה.

תיקוף התגובה לדימום והווסת הטיפולית בתוך המודל מוצגים ב-איור 1B. עכברים טופלו מראש במי מלח, בחומר הפרה-המוסטטי rhFVIIa, או בחומר האנטי-פיברינוליטי TXA, ואובדן הדם נמדד ונורמל למשקל הגוף (µL/g). עכברים שטופלו במי מלח הראו דימום משמעותי בעקבות LL, בעוד שעכברים שטופלו ב-rhFVIIa או TXA הראו הפחתה באובדן הדם. ממצאים אלה מדגימים את יכולתו של מודל זה לזהות מודולציה פרמקולוגית של דימום ולהעריך התערבויות המוסטטיות בתנאים של דימום בלתי נשלט.

המודל משחזר גם מאפייני מפתח של קואגולופתיה הנגרמת מטראומה. כפי שמוצג ב-איור 1C, LL הוביל להארכה של aPTT, המעידה על קרישה לקויה לאחר הפגיעה. טיפול ב-rhFVIIa או TXA העדיף הארכה זו, דבר המצביע על שיקום של תפקודי הקרישה. באופן דומה, יצירת תרומבין, שנבדקה באמצעות קומפלקסים של TAT, עלתה בעקבות LL ופחתה עם טיפול ב-TXA, בעוד ש-rhFVIIa אינו מפחית את רמות ה-TAT (איור 1D), מה שמרמז על ויסות של הפעלת הקרישה.

אפיון נוסף של הקואגולופתיה מוצג באיור 2. LL הוביל לדלדול סלקטיבי של גורמי הקרישה V ו-VIII, באופן העולה בקנה אחד עם TIC, ושינויים אלו הוחזרו למצבם המקורי באמצעות טיפול ב-rhFVIIa או TXA (איור 2A,B). לעומת זאת, גורמים II ו-X לא השתנו באופן משמעותי (איור 2C,D), מה שמעיד על כך ששינויים אלו מתרחשים בהקשר של גורמי II ו-X שמורים, ובכך תומך בפנוטיפ הדומיננטי של TIC ולא בפנוטיפ דמוי קרישה תוך- 혈vסקולרית מפושטת (DIC).

ההתפתחות של פיברינוליזה בעקבות LL מוצגת ב-איור 3. רמות הפיברינוגן פחתו לאחר הפגיעה, מה שמעיד על צריכה, ולא שוחזרו במלואן באמצעות rhFVIIa או TXA (איור 3A). לעומת זאת, סמני פיברינוליזה, כולל קומפלקסים של פלסמין-אנטיפלסמין (PAP) ו-D-dimer, היו מוגברים בעקבות LL. rhFVIIa הפחית את רמות קומפלקס PAP אך לא שינה באופן משמעותי את רמות ה-D-dimer. TXA הפחית הן את רמות קומפלקס PAP והן את רמות ה-D-dimer בעקבות LL (איור 3B,C).

לבסוף, התגובה הדלקתית המערכתית ותוצאות ההישרדות מוערכות ב-איור 4. רמות Interleukin-6 (IL-6) בפלזמה נמדדות ב-60 דקות ו-6 שעות לאחר LL בכל קבוצות הטיפול. רמות ה-IL-6 גבוהות בנקודות זמן מוקדמות בכל הקבוצות (איור 4A). ההישרדות לאורך תקופה של 7 ימים מוערכת באמצעות אנליזת Kaplan-Meier. ההישרדות לשבעה ימים היא 75% בקבוצת הסלין, 55% בקבוצת ה-rhFVIIa, ו-80% בקבוצה שטופלה ב-TXA. לא נצפה הבדל משמעותי בין קבוצות הסלין וה-TXA, בעוד שההישרדות פחתה באופן משמעותי בקבוצת ה-rhFVIIa בהשוואה לקבוצות הסלין וה-TXA (איור 4B).

נתוני משקל כבד, איבוד דם, aPTT וקומפלקס TAT; תרשים עמודות המשווה טיפולים במי מלח, rFVIIa ו-TXA.
איור 1: תיקוף של מודל קרע בכבד (LL): שחזור של חומרת הפגיעה, איבוד דם כמותי והשראה של קואגולופתיה. דימום פנימי חמור משרה על ידי לפרוטומיה בקו האמצע ולאחריה LL סטנדרטי. עכברים ได้וטיפול מקדים במי מלח (~100 µL), פקטור VII אנושי רקומינטנטי מופעל (rhFVIIa; 3 mg/kg), או חומצה טרנקסמית (TXA; 10 mg/kg) לפני הפגיעה, כדי להעריך מודולציה פרמקולוגית של הדימום והקואגולופתיה. (A) חומרת הפגיעה נמדדת כמשקל הכבד הקרוע מנורמל למשקל הגוף (%BW), מה שמעיד על השראה שחזורית של פגיעה סטנדרטית בין בעלי החיים. (B) איבוד דם נמדד בשיטה גרבימטרית ומנורמל למשקל הגוף (µL/g), מה שמעיד על דימום מדיד שמופחת לאחר טיפול ב-TXA. (C) זמן thromboplastin חלקי מופעל (aPTT) ו(D) קומפלקס thrombin–antithrombin (TAT) מעידים על השראה שחזורית של קואגולופתיה לאחר LL, כאשר נצפתה מודולציה לאחר טיפול ב-rhFVIIa או TXA. הנתונים מוצגים כערכים אינדיבידואליים עם חציונה וטווח רבעוני; השוואות בוצעו באמצעות מבחן Mann–Whitney U לא-פרמטרי (n = 5–21). ****P ≤ 0.0001. הותאם עם רשות מ-Joseph et al.16. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מורחבת של איור זה.

השוואת רמות גורמי קרישה בדם, גרף של FV, F-VIII, F-IX, F-X, ניתוח סטטיסטי בקבוצות טיפול.
איור 2: תיקוף של קואגולופתיה מושרית מטראומה (TIC) בעקבות קרע בכבד (LL): דילול סלקטיבי של גורמי קרישה. דימום פנימי חמור מודע באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע ולאחריה LL סטנדרטי. עכברים קיבלו טיפול מקדים בתמיסת מלח (~100 µL), גורם VII אקטיבי רקומיננטי אנושי (rhFVIIa; 3 mg/kg), או חומצה טרנקסמית (TXA; 10 mg/kg) לפני הפגיעה, כדי להעריך מודולציה פרמקולוגית של הקואגולופתיה. פרמטרי קרישה נבדקו 60 דקות לאחר ה-LL. (A) רמות של גורם V ו-(B) גורם VIII מראות דילול הניתן לשחזור בעקבות LL, התואם ל-TIC. (C) גורם II ו-(D) גורם X נשמרים יחסית, מה שמעיד על דילול סלקטיבי של גורמי קרישה ולא על צריכה גלובלית. הנתונים מוצגים כערכים פרטניים עם חציון וטווח בין-רבעוני (n = 7–10). השוואות סטטיסטיות בוצעו באמצעות מבחן Mann-Whitney U לא פרמטרי. ***P ≤ 0.001; ****P ≤ 0.0001. הותאם באישור מ-Joseph et al.16. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה מוגדלת של איור זה.

תרשים בעל שלושה חלקים המציג רמות של פיברינוגן, קומפלקסי PAP ו-D-dimer בטיפולים שונים.
איור 3: תיקוף של הפעלה פיברינוליטית לאחר קרע בכבד (LL). דימום פנימי חמור מושרה על ידי לפרוטומיה קו-מרכזית ולאחריה LL סטנדרטי. עכברים קיבלו טיפול מקדים בתמיסת מלח (~100 µL), או גורם VII פעיל אנושי רקומביננטי (rhFVIIa; 3 mg/kg), או חומצה טרנקסמית (TXA; 10 mg/kg) לפני הפגיעה, כדי להעריך מודולציה פרמקולוגית של פיברינוליזה. פרמטרים פיברינוליטיים נבדקו 60 דקות לאחר LL. (A) רמות פיברינוגן מדגימות צריכה לאחר הפגיעה, דבר העולה בקנה אחד עם הפעלה של פיברינוליזה ודלדול של גורמי קרישה. (B) קומפלקסי פלסמין-אנטיפלסמין (PAP) ו-(C) רמות D-dimer עלו לאחר LL, מה שמעיד על פירוק פיברין פעיל והפעלה פיברינוליטית מערכתית. הנתונים מוצגים כערכים אינדיבידואליים עם חציונה וטווח בין-רבעוני (n = 8–13). השוואות סטטיסטיות בוצעו באמצעות מבחן Mann-Whitney U לא-פרמטרי. **P ≤ 0.01; ***P ≤ 0.001; ****P ≤ 0.0001. הותאם באישור מ-Joseph et al.16. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

השוואת רמות IL-6 ושיעורי הישרדות; A: גרף ריכוז IL-6, B: תרשים שיעור הישרדות.
איור 4: תיקוף של התגובה הדלקתית הסיסטמית והערכת הישרדות בעקבות קרע בכבד (LL). דימום פנימי חמור מושרה על ידי לפרוטומיה בקו האמצע ולאחריה LL סטנדרטי. עכברים מקבלים טיפול מקדים של תמיסת סלין (100 µL), גורם VII אקטיבי רקומביננטי אנושי (rhFVIIa; 3 mg/kg), או חומצה טרנקסמית (TXA; 10 mg/kg) לפני הפגיעה. לאחר הפגיעה, חתך הבטן נסגר באמצעות סגורי פצעים ודבק לרקמות, והבעלי החיים מוחזרים לכלובים שלהם. הטיפול התומך כולל מתן תת-עורי יומי של סלין (400 µL) בשלושת הימים הראשונים לאחר הפגיעה. דגימות פלזמה נאספות ב-60 min ו-6 h לאחר ה-LL כדי להעריך את ההפעלה הדלקתית הסיסטמית. (A) רמות Interleukin-6 (IL-6) מדגימות תגובה דלקתית סיסטמית מתמשכת לאחר הפגיעה. הנתונים מוצגים כערכים בודדים עם חציון וטווח בין-רבעוני. השוואות סטטיסטיות בוצעו באמצעות מבחן Mann–Whitney U לא-פרמטרי (n = 9–13). (B) הישרדות של שבעה ימים מוערכת באמצעות ניתוח Kaplan-Meier, המדגים את יכולתו של המודל לתמוך בנקודות קצה ארוכות טווח מבוססות תוצאה (n = 20). ****P ≤ 0.0001. הותאם באישור מ-Joseph et al.16. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של איור זה.

איור משלים 1: סכמה כללית של מודל קרע בכבד ולוח הזמנים הניסויי.איור זה מסכם את זרימת העבודה הניסוית עבור מודל סטנדרטי של קרע בכבד (LL) בעכברים לדימום בלתי נשלט. העכברים עוברים לפרותומיה בקו האמצע, ולאחריה קרע (LL) הדיר בעך של כ-75% מאונה שמאלית של הכבד. לפני הפגיעה, העכברים מקבלים תמיסת סלין (~100 µL, ביקרת נשאי), או גורם VII אקטיבי רקומביננטי אנושי (rhFVIIa; 3 mg/kg), או חומצה טרנקסמית (TXA; 10 mg/kg), המ diberikan תוך-ורידית באמצעות הזרקה רטרו-אורביטלית 5 דקות לפני ה-LL. כימות איבוד הדם מבוצע באמצעות ספוגים בטניים שנשקלו מראש והונחו בתוך הבטן בזמן הפגיעה, הוצאו 60 דקות לאחר ה-LL, ונשקלו כדי לקבוע את סך הדימום. לאחר מכן הבטן נסגרת באמצעות סיכות פצעים עם דבק לרקמות. דגימות דם נאספות באמצעות גישה רטרו-אורביטלית בנקודת הזמן של 60 דקות בקבוצת נקודת הסיום, ובזמנים של 6 שעות ו-7 ימים בקבוצת השרידות. הפלזמה מנותחת למדדי קרישה, כולל זמן תרומבופלסטין חלקי מופעל (aPTT), פעילות גורמי קרישה, קומפלקסים של תרומבין-אנטי-תרומבין (TAT), קומפלקסים של פלזמין-α2-אנטיפלזמין (PAP) ו-D-dimer ב-60 דקות. פרופיל ציטוקינים מבוצע ב-60 דקות וב-6 שעות. השרידות מנוטרת לאורך תקופה של 7 ימים. עובד באישור מ-Joseph et al.16. אנא לחצו כאן להורדת קובץ זה.

דיון

במחקר זה, אנו מציגים מודל עכברי הניתן לשחזור של דימום קשה באמצעות LL סטנדרטי, המשלב הערכה כמותית של איבוד דם, אפיון של TIC ודלקת, וניתוח הישרדות במסגרת ניסוי אחד. המודל מייצר חומרת פגיעה עקבית, כפי שמוצג על ידי משקל כבד קרוע דומה לאחר נרמול למשקל הגוף, תוך שהוא מאפשר הערכה הניתנת לשחזור של דימום ותגובות המוסטזה סיסטמיות בין קבוצות ניסוי שונות. השימוש במודל של מכרסם קטן עם פגיעה סטנדרטית ומדדי תוצאה כמותיים מאפשר הערכה יעילה של מספר נקודות סיום ניסויים במסגרת ניסויית אחת, דבר התומך בחקירה שניתנת לשחזור ובקנה מידה רחב של TIC, ללא צורך בהליכים מורכבים מבחינה טכנית.

חשוב לציין כי מודל זה משחזר מאפיינים מרכזיים של TIC, כולל הארכה של פרמטרי קרישה כלליים (aPTT), עלייה בייצור תרומבין כפי שמשתקף מקומפלקסי TAT, דילול סלקטיבי של גורמי קרישה V ו-VIII, והפעלה של פיברינוליזה המעידה על רמות גבוהות של קומפלקסי PAP ויצירת D-dimer. שינויים אלו מתרחשים בהקשר של שימור גורמים II ו-X, מה שתומך בפנוטיפ דומיננטי של TIC ולא של קרישה תוך-หลอด דם מפושטת. היכולת לכמת פרמטרים אלו בו-זמנית מספקת מסגרת רלוונטית תרגומית להערכת הפרות המאוסטטיקה בעקבות פגיעה טראומטית.

נקודת חוזק מרכזית של מודל זה היא השילוב של הישרדות כנקודת קצה של תוצאה בהקשר של דימום טראומטי. כדי לבחון אסטרטגיות הצלה רלוונטיות מבחינה קלינית, הערכנו הן את rhFVIIa והן את TXA, שני חומרים המשמשים או נחקרים להחייאה בטראומה בבני אדם. TXA הפגין השפעות עקביות בהפחתת איבוד דם, נורמליזציה של קואגולופתיה והפעלה פיברינולית, שהובילו להצלה של השורדים. לעומת זאת, rhFVIIa גרם לתמותה ניכרת הקשורה לתיקון יתר של פרמטרים המוסטטיים ושליטה לא מלאה בפיברינוליזה16.

ממצאים אלה מדגישים היבט חשוב של המודל: השרידות מונעת על ידי יחסי גומלין מורכבים בין חומרת הדימום, קואגולופתיה ותגובה סיסטמית, ולא על ידי תיקון מבודד של מסלולי המוסטזה בודדים. נראה כי מודל דימום זה רגיש לשילוב של פרמטרים ביוכימיים של המוסטזה עם השרידות, שהיא מדד תוצאה קריטי בפרקטיקה קלינית. למרות שדימום טראומטי חמור הוא הפגיעה העיקרית המדגם במערכת זו, פגיעה איברית משנית עשויה אף היא לתרום לתוצאה. במחקר קודם שלנו שהשתמש במודל זה, נצפו מיקרו-תרומבי ריאתיים והשקעת פיברין בעכברים שטופלו ב-rhFVIIa, וממצאים אלו היו קשורים לעלייה בתמותה, מה שמרמז על תרומה פוטנציאלית של פגיעה איברית תרומבו-דלקתית לתוצאה16.

על אף שקבוצת דמה (sham) שעברה ניתוח במקביל לא נכללה במחקר הנוכחי, הראינו בעבר כי לפרוטומיה ללא LL לא גרמה ל-TIC, מה שמעיד על הצורך באיבוד דם מהיר נוסף (הלם) כדי להביא להפרעות הקרישה האופייניות הנצפות ב-TIC14.

מספר שיקולים טכניים חשובים לשחזור של מודל זה. יש להגדיר סטנדרט להיקף ולמיקום של LL, שכן שונות בכמות הכבד המוסרת עלולה להשפיע משמעותית על חומרת הדימום ועל התגובה הקואגולופתית הנובעת מכך. בפרוטוקול שלנו, מוסרים כ-75% מאונה שמאלית של הכבד, כאשר משקל הכבד הפגוע מנרמל למשקל הגוף, מה ש מספק מדד אובייקטיבי לעקביות הפגיעה. סגירה מהירה ומאובטחת של בטן היא קריטית אף היא כדי למנוע איבוד דם חיצוני ולשמור על סביבה של דימום תוך-בטני מוגבל במהלך תקופת התצפית. לצורך מדידה מדויקת של איבוד דם, יש לאסוף בעקביות ספוגים שנשקלו מראש, תוך שימוש באותו הליך איסוף ותזמון בכל הקבוצות הניסוייות. שלבים אלו ממזערים שונות התלויה במבצע והם חשובים במיוחד מכיוון שהבדלים באיבוד דם ראשוני עלולים להשפיע על הקואגולופתיה ועל ההישרדות העוקבים. אם מתרחש דימום מסיבי לפני הסגירה או שדם אובד באופן חיצוני, יש להסיר את בעל החיים מהניסוי.

מגבלה של מודל זה היא התמקדותו בפגיעה באיבר, שאינה משקפת את ההטרוגניות של פוליטראומה, שעשויה לכלול שברים בעצמות ארוכות, פגיעות מעיכה של רקמות רכות ומצבי הלם מורכבים אחרים. עם זאת, פגיעה ממוקדת זו היא גם מאפיין מכוון של המודל, המאפשר לחקור את ההשפעות של דימום חמור ו-TIC ללא המורכבות הפרוצדורלית והשונות הנוספות המובאות על ידי מודלי פגיעה מרובים. לסיכום, מודל LL עכברי זה מספק גישה יעילה כלכלית (בהשוואה למחקרים בבעלי חיים גדולים), חסונה וניתנת להרחבה לחקר TIC של דימום הקשור לטראומה ותמותה. באמצעות שילוב של פלטפורמה ניסיוית פשוטה של מכרסמים קטנים עם פגיעה סטנדרטית, מדידה כמותית של איבוד דם, פרופיל המוסטטי מקיף והערכת הישרדות, המודל מספק חלופה מעשית למודלים של טראומה בעלי מיכשור נרחב יותר. הוא מאפשר הערכה משולבת של איבוד נפח דם, קרישה (aPTT, FII, FV, FVIII, FX, TAT), פיברינוליזה (Fibrinogen, PAP, D-dimer) ומדדי הישרדות בהקשר רלוונטי קלינית, באופן המתאים היטב להערכת התערבויות אנטי-פיברינוליטיות והמוסטטיות ממוקדות.

גילויים

A.v.D. קיבל שכר עבור השתתפות במועצות מייעוץ מדעי, ייעוץ והרצאות מ-BioMarin, Regeneron, Pfizer, Bioverativ/Sanofi, CSL Behring, Novo Nordisk, Spark Therapeutics, Genentech ו-uniQure. A.v.D. הוא מייסד שותף של Hematherix LLC, חברת ביוטכנולוגיה המפתחת טיפול ב-superFVa לסיבוכי דימום. B.C.J., M.L.C. ו-R.M. מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

אנו מודים ל-Laurent Mosnier, PhD, על הייעוץ הטכני.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מחט 25 GBD Diagnostics305124
מחט 30GBD Diagnostics305106
מערכת הרדמהPatterson Scientific78915712
ריאגנט aPTT - STA-C.K. Prest. 5Stago597
AutoclipFine Science Tools12022-19
מפעיל אוטוקליפ (Autoclip applicator)Fine Science Tools12020-09
מסיר אטב אוטומטי (Autoclip remover)Fine Science Tools12023-00
אלבמין סרום בקרSigma Aldrich10735078001
סידום כלורידFisher ScientificC79-500
צינור קפילרי – פשוטFisher Scientific22-260943
מקלון צמר גפןMedique19-090-701
כדורי צמר גפןFisher Scientific22-456-103
ערכת ELISA ל-D-dimerInvitrogenEEL094
פד איזותרמי לשלב דלתאBraintree Scientific50-195-4663
אתנולFisher ScientificBP28184
EthiqaFidelisמק"ט 072117
פלזמה חסרה בגורם IIAffinity BiologicalsFII-DP
פלסמה חסרה בגורם VAffinity BiologicalsFV-DP
פלזמה חסרה בגורם VIIIAffinity BiologicalsFVIII-DP
פלזמה חסרה בגורם XAffinity BiologicalsFX-DP
נייר סינון, עבה במיוחד, 7 ס"מ × 8.4 ס"מFisher ScientificPI88605
פינצטת GraefeFine Science Tools11049-10
תא השראהPatterson Scientific78933385
סליין בדרגה להזרקהHospira0409-4888-02
InnovinSiemens Healthineers23-044-778
איזופלוראןרפואה ווטרינרית בינלאומית50-304-2993
K824086 Chromogenix Coatest SP Factor VIIIDiapharma K822585
דבק רקמות מהיר Liqui VetWorld Precision Instrument50-253-9340
מכשיר עיקור בחרוזי מיקרוFisher Scientific14-955-342
מבחנות מיקרופוג' (Microfuge tubes) – 1.5 מ"לFisher ScientificAM12400
ערכה למולטיפלקס של ציטוקינים בעכברQuansys Biosciences 111049MS-13P
ערכה לבדיקת קומפלקס PAPBiotechneNBP3-06903
פובידון-יודרפואה וטרינרית בינלאומית50-283-2277
גורם VII אנושי רקומיננטי מופעלNovo Nordisk0169-7001
סודיום ציטראטFisher ScientificS279-500
סדין ניתוחStoelting10-000-695
סבון הרדמה Equaflow למערכת ניתוח לעכברים 5Patterson Scientific78919268
מספריים כירורגייםFine Science Tools91405-11
סרט הדבקהFisher Scientific15-901-5R
ערכה לבדיקת קומפלקס TATSiemens Healthineers23-044-704
טרומביןInvitrogenPIRP43100
חומצה טראנקסמיתAuromedics55150-0188-10
מלטשתStoelting10-000-792
מערכת סינון פחם פעיל של WAGPatterson Scientific78909457
סירת שקילהFisher Scientific01-549-752

מקורות

  1. Rhee P, et al. Increasing trauma deaths in the United States. Ann Surg. 2014;260(1):13-21.
  2. Kauvar DS, Lefering R, Wade CE. Impact of hemorrhage on trauma outcome: an overview of epidemiology, clinical presentations, and therapeutic considerations. J Trauma. 2006;60(6):S3-S11.
  3. Bernhardt IM, et al. Timing of trauma deaths due to uncontrolled bleeding have not changed in three decades: a multicenter study of patients in hemorrhagic shock. Am J Surg. 2025;250.
  4. Cohen MJ, Christie SA. Coagulopathy of trauma. Crit Care Clin. 2017;33(1):101-18.
  5. Kornblith LZ, Moore HB, Cohen MJ. Trauma-induced coagulopathy: the past, present, and future. J Thromb Haemost. 2019;17(6):852-62.
  6. Brohi K, et al. Acute traumatic coagulopathy: initiated by hypoperfusion: modulated through the protein C pathway? Ann Surg. 2007;245(5):812-8.
  7. Cohen MJ, et al. Early coagulopathy after traumatic brain injury: the role of hypoperfusion and the protein C pathway. J Trauma. 2007;63(6):1254-61; discussion 1261-2.
  8. Davenport RA, et al. Activated protein C drives the hyperfibrinolysis of acute traumatic coagulopathy. Anesthesiology. 2017;126(1):115-27.
  9. Moore HB, et al. Hyperfibrinolysis, physiologic fibrinolysis, and fibrinolysis shutdown: the spectrum of postinjury fibrinolysis and relevance to antifibrinolytic therapy. J Trauma Acute Care Surg. 2014;77(6):811-7; discussion 817.
  10. Johansson PI, et al. Traumatic endotheliopathy: a prospective observational study of 424 severely injured patients. Ann Surg. 2017;265(3):597-603.
  11. Vernon T, Morgan M, Morrison C. Bad blood: a coagulopathy associated with trauma and massive transfusion review. Acute Med Surg. 2019;6(3):215-22.
  12. Lie SL, Rognes IN. Human and animal models for studying hemorrhagic shock. Scand J Trauma Resusc Emerg Med. 2025;33(1):124.
  13. Dyer M, et al. Uncontrolled hemorrhagic shock modeled via liver laceration in mice with real time hemodynamic monitoring. J Vis Exp. 2017;(123).
  14. Joseph BC, et al. An engineered activated factor V for the prevention and treatment of acute traumatic coagulopathy and bleeding in mice. Blood Adv. 2022;6(3):959-69.
  15. Joseph BC, et al. Traumatic bleeding and mortality in mice are intensified by iron deficiency anemia and can be rescued with tranexamic acid. Res Pract Thromb Haemost. 2024;8(6):102543.
  16. Chumappumkal Joseph B, et al. The effects of recombinant human activated factor VII and tranexamic acid on traumatic bleeding and mortality in mice. Res Pract Thromb Haemost. 2026;10(3):103436.
  17. Ask A, et al. Spotlight on animal models of acute traumatic coagulopathy: an update. Transfus Apher Sci. 2022;61(2):103412.
  18. Mayer AR, et al. A systematic review of large animal models of combined traumatic brain injury and hemorrhagic shock. Neurosci Biobehav Rev. 2019;104:160-77.
  19. Frith D, Cohen MJ, Brohi K. Animal models of trauma-induced coagulopathy. Thromb Res. 2012;129(5):551-6.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

קוואגולופתיה מושרית טראומהכימות דימוםסממני דלקתניתוח הישרדותמדידת איבוד דםפקטורי קרישההפעלת פיברינוליזההפעלה דלקתיתמודולציה פרמקולוגית

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.