השפעות דיקור סיני בסגנון תנועה בקרקפת על מיקרו-מבנה קפסולה חיצוני והתעוררות רפלקס עמוד שדרה במודל עכברוש של ספסטיות לאחר שבץ

Shi-Jing-Xin Tian; Qi-Rui Liu; Jun-Xiang Wang; Fei Li; Ting-Yuan Han; Zi-Yi Zhang

doi:10.3791/72225

מאמר מחקר

השפעות דיקור סיני בסגנון תנועה בקרקפת על מיקרו-מבנה קפסולה חיצוני והתעוררות רפלקס עמוד שדרה במודל עכברוש של ספסטיות לאחר שבץ

DOI:

10.3791/72225

⸱

7 באוגוסט 2026

Shi-Jing-Xin Tian^*¹ , Qi-Rui Liu^*² , Jun-Xiang Wang¹ , Fei Li¹ , Ting-Yuan Han¹ , Zi-Yi Zhang¹

¹School of Nursing, Beijing University of Chinese Medicine, ²Beijing University of Chinese Medicine

^* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר דיקור קרקפת בסגנון תנועה במודל עכברוש של ספסטיות לאחר שבץ ומדגים את הערכתו באמצעות הערכות התנהגותיות, תהודה מגנטית, הערכות היסטולוגיות ואלקטרופיזיולוגיות כדי לחקור שינויים במבנה המיקרו-מבנה החיצוני של הקפסולה ובהתעוררות רפלקס עמוד שדרה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ספסטיות לאחר שבץ (PSS) פוגעת קשות בתפקוד המוטורי ובאיכות החיים לאחר שבץ. הפרעה במסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי ועיכוב ירידה על-שדרתי פגום נחשבים למנגנונים פתולוגיים חשובים; עם זאת, המנגנונים העצביים והמיקרוסטרוקטורליים שעומדים בבסיס ההשפעות הטיפוליות של דיקור סיני קרקפת בסגנון תנועה (MSSA) עדיין אינם מובנים במלואם. מחקר זה נועד לחקור את השפעות MSSA על PSS באמצעות הערכה רב-מודלית המשלבת הדמיה עצבית, אלקטרופיזיולוגיה והיסטולוגיה במודל עכברוש של חסימת עורק מוחי מרכזי. בוצעה הדמיית תהודה מגנטית משוקללת T2 לכימות נפח האוטפקט המוחי, ודימות טנזור דיפוזיה שימש להערכת שלמות המיקרו-מבנית של החומר הלבן החיצוני של הקפסולה. צביעת Luxol Fast Blue (LFB) בדקה את שלמות המיאלין בתוך הקפסולה החיצונית, בעוד שהקלטות רפלקס H העריכו את התעוררות הרפלקס של עמוד השדרה. בוצעו ניתוחי קורלציה כדי לבחון את הקשרים בין נפח האוטם, מיקרו-מבנה של חומר לבן, התעוררות רפלקס עמוד שדרה וחומרת ספסטיות. MSSA הפחית את נפח האוטם המוחי, הקל על נזק מיקרו-מבני חיצוני לקפסולה, והפחית דה-מיאלינציה. בנוסף, MSSA שיפר פרמטרים חריגים של רפלקס H, נורמל את ההתעוררות הרפלקסית של עמוד השדרה, והפחית ספסטיות. ניתוחי קורלציה הראו כי אוטם גדול יותר היה קשור לפגיעה חיצונית גדולה יותר, בעוד שלמות החומר הלבן שמורה טוב יותר הייתה קשורה לשיפור בוויסות הרפלקסים של עמוד השדרה ופחות ספסטיות חמורה. ממצאים אלו מצביעים על כך ש-MSSA עשוי להקל על PSS על ידי הפחתת פגיעות מוח איסכמיות, שמירה על שלמות מיקרו-מבנית חיצונית של קפסולה, ושיפור תפקוד המעכב היורד הקשור למסלול קורטיקו-רטיקולוספינלי, תוך מתן ראיות פרה-קליניות התומכות ביישומה הטיפולי.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ספסטיות לאחר שבץ (PSS) היא המשך נפוץ ומשתק של שבץ איסכמי, המוגדר קלינית על ידי עליות תלויות מהירות ואורך בטונוס השריר. מצב זה מוביל לעיתים קרובות ליציבה לא תקינה של הגפיים ולדפוסי תנועה לקויים, הפוגעים קשות בעצמאות המוטורית ובאיכות החיים של המטופלים, תוך הטלת עומס כלכלי ומטפלים^כבדים ברחבי העולם^. כהופעה טיפוסית של תסמונת הנוירונים המוטוריים העליונים, הפתוגנזה של PSS מיוחסת בעיקר להתעוררות יתר מוגזמת של רפלקסים של מתיחה בעמוד השדרה. מחקרים נוירואנטומיים ונוירופיזיולוגיים מצטברים הראו כי אובדן המודולציה המעכבת היורדת מהמערכת האקסטרפירמידה למעגלי רפלקס עמוד השדרה הוא מנגנון פתולוגי מרכזי העומד בבסיס התחלת והתקדמות PSS, כאשר מסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי משמש כמעגל העצבי הראשי המתווך בקרה רגולטורית יורדת^זו ^3,4,5.

טכניקת דיקור היא גורם מרכזי ליעילות הדיקור ותופסת מקום מרכזי בפרקטיקה הקלינית של דיקור סיני. דיקור קרקפת בסגנון תנועה (MSSA) הוא טכניקת דקירה ייחודית שפותחה במיוחד להתערבות PSS, המשלבת דיקור סיני בקרקפת^{עם תרגיל} גפיים פעיל או פסיבי בו-זמנית. ניסויים קליניים רבים הראו כי MSSA מניב תוצאות טובות יותר בהשוואה לדיקור קרקפת בלבד או שיקום פעילות גופנית בלבד, בהפחתת חומרת הספסטיות, בשיקום תפקוד התנועה ובשיפור הפעילויות היומיומיות בקרב שורדי שבץ 6,7,8,9. המחקרים הקודמים שלנו על בעלי חיים הראו כי MSSA מפעיל השפעות אנטיספסטיות בולטות יותר מאשר דיקור קרקפת קונבנציונלי במודלים של חולדות עם PSS. מבחינה מכנית, השפעות טיפוליות אלו נקשרו לשיפור הפרפוזיה המוחית בפנומברה האיסכמית, להפחתת התעוררות רפלקס המתיחה של עמוד השדרה, ולהגברת ביטוי של קוטרנספורטר אשלגן-כלוריד 2 (KCC2) בנוירונים תנועתיים של קרן קדמית בעמוד השדרה. מודולציה מולקולרית זו עשויה להגביר עוד יותר את ההעברה המעכבת של חומצה γ-אמינובוטירית (GABA) בעמוד השדרה, ובכך לתרום להקלה על ספסטיות^10,11.

המחקרים המכניסטיים הקיימים של MSSA נותרו מוגבלים, ואין מחקרים קודמים שבחנו באופן ספציפי כיצד חומר לבן תוך-מוחי במעלה הזרם במסלולי ירידה חוץ-פירמידליים תורם ל-PSS. הקפסולה החיצונית יוצרת קטע קריטי של חומר לבן במסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי; הוא מכיל סיבים קורטיקו-טגמנטליים שמעבירים אותות קורטיקליים להיווצרות הרטיקולרים בגזע המוח, ובכך תורמים לשליטה מעכבת על-שדרתית במעגלי רפלקס עמוד השדרה^12,13. בהתאם לתפקיד אנטומי זה, מחקרי מיפוי תסמיני נגעים מבוססי ווקסלים הראו כי נזק חיצוני לקפסולה קשור לספסטיות של הגפיים העליונות והתחתונות לאחר שבץ 12,13,14. תצפיות אנטומיות וקליניות אלו תומכות בבחירת הקפסולה החיצונית כאזור העניין הראשי (ROI). עד כה, לא הראו עדות ב-in vivo האם MSSA שומרת על שלמות מיקרו-מבנית חיצונית של קפסולה או שמא שינויים כאלה קשורים לשינויים בהתעוררות הרפלקס של עמוד השדרה. הערכות קליניות המבוססות על הערכות התנהגותיות, דימות תהודה מגנטית קונבנציונלית (MRI) ובדיקות אלקטרופיזיולוגיות מאפשרות ניתוחים מתאמיים בלבד ועשויות להיות מושפעות מהטרוגניות של המטופל, משך המחלה וגורמים קליניים מבלבלים נוספים. לעומת זאת, מודלים סטנדרטיים של חולדות PSS מאפשרים שליטה קפדנית במשתנים ניסיוניים ובפרוטוקולי התערבות אחידים, ובכך מספקים פלטפורמה משלימה לחקירה מכנית.

בהתמקדות במיקרו-מבנה של חומר לבן מוחי ותפקוד נוירופיזיולוגי, מחקר זה שילב גישות רב-מודליות, כולל דימות משוקלל T2 (T2WI), דימות טנזור דיפוזיוני (DTI), הקלטה אלקטרופיזיולוגית רפלקסי H, צביעת Luxol Fast Blue ממוקדת (LFB) של הקפסולה החיצונית, והערכות התנהגות. על ידי הקמת מסגרת משולבת של מבנה-פונקציה-התנהגות, מחקר זה נועד לחקור את הקשרים בין אוטם מוח, מיקרו-מבנה קפסולה חיצוני, התעוררות רפלקס עמוד שדרה וספסטיות לאחר טיפול ב-MSSA במודל עכברוש של PSS. הממצאים נועדו לספק ראיות פרה-קליניות התומכות בקשר בין שלמות קפסולה חיצונית משומרת לבין הפחתת התעוררות רפלקסי עמוד שדרה לאחר MSSA, תוך מתן בסיס תיאורטי ליישום תרגומי של MSSA בשיקום PSS.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ארבעים זכרים בוגרים של Sprague–Dawley (SD) בוגרים מסוג SPF, במשקל 240–280 גרם, נרכשו מ-Beijing Vital River Laboratory Animal Technology [מספר רישיון: SCXK (Jing) 2021-0011]. כל העכברים אוחסנו במרכז בעלי החיים המעבדה של אוניברסיטת הרפואה הסינית בבייג'ינג בתנאים מבוקרים, עם טמפרטורת חדר של 23°C ±-1°C, לחות יחסית של 50% ±-5%, ומחזור אור של 12 שעות ו-12 שעות חושך, עם גישה חופשית למזון ולמים. העכברים הסתגלו ל-5 ימים, שבמהלכם בוצעה אימון הסתגלות על הליכון במקביל. בעלי החיים עברו הסתגלות להליכון פעם ביום במהירות של 10 מ'/דקה במשך 15 דקות בכל מפגש ללא גירוי חשמלי להפחתת לחץ בטיפול.

בהתבסס על המחקר הקודם שלנו, שיעור ההצלחה של השראת PSS באמצעות שיטת חסימת העורק המוחי האמצעי (MCAO) הוא כ-60%¹⁵. באמצעות טבלת מספרים אקראית, 9 חולדות נבחרו מראש כקבוצת ההפעלה המזויפת; 31 העכברים הנותרים שימשו להקמת דגמים. לאחר מידול מוצלח, חולקו חולדות אלו באקראי לקבוצת המודלים ולקבוצת MSSA. בסופו של דבר, בכל קבוצה נכללו תשעה חולדות. ניסוי זה בוצע בהתאם לעקרונות 3R לרווחת בעלי חיים במעבדה ואושר על ידי ועדת האתיקה של בעלי החיים של אוניברסיטת הרפואה הסינית בבייג'ינג (BUCM 20250915-008).

הקמת דגם

מודל MCAO הוקם בחולדות באמצעות טכניקת חוט תוך-לומי מותאמת. החולדות הורדמו עם 3% איזופלורן לצורך השראת, וההרדמה נשמרה עם 1.5% איזופלוראן שסופק בחמצן בקצב זרימה קבוע של 1 ליטר לדקה לאורך כל ההליך. בוצעה חתך צווארי אמצע, ואחריו ניתוח קהה לחשיפת עורק הקרוטיד הימני (CCA), עורק הקרוטיד החיצוני (ECA) והעורק הקרוטידי הפנימי (ICA). תפר מונופילמנט מניילון (קוטר, 0.36 ± 0.02 מ"מ) הוכנס ל-ICA דרך ה-ECA והתקדם כ-18–20 מ"מ לנקודת מוצא העורק המוחי האמצעי (MCA) להשגת חסימה עורקית. כלי הדם היו קשורים, והחתך נסגר. העכברים הונחו לאחר מכן על כרית חימום עד להחלמה מההרדמה. חולדות בקבוצת הניתוח המדומה עברו חשיפה ניתוחית זהה ל-CCA, ICA ו-ECA ללא הכנסת החוט התוך-לומינלי.

לאחר הניתוח, כל חולדות MCAO קיבלו טיפול סטנדרטי לאחר ניתוח. בעלי החיים הוחזקו על כרית חימום של 37°C במשך 12 השעות הראשונות כדי למנוע היפותרמיה. חתכים כירורגיים נוקו מדי יום במשך שלושה ימים רצופים, אמפיצילין (100 מ"ג/ק"ג) ניתנה בהזרקה תוך-צפקית למניעת זיהומים, וסופק מזון מרוכך לשמירה על תזונה מספקת. פעילות כללית, צריכת מזון, מצב הפצע ותפקוד המוטורי של הגפה נבדקו מדי יום מיום 1 עד 10 לאחר הניתוח.

ליקויים נוירולוגיים הוערכו על ידי חוקרים עיוורים להקצאת קבוצות באמצעות ציון החסר הנוירולוגי של Zea Longa, וטונוס השרירים הוערך באמצעות סולם אשוורת' מותאם (MAS). ההערכות בוצעו יום אחד לפני הניתוח (יום −1), ביום הניתוח לפני MCAO (יום 0), ובימים 1, 3, 5, 7 ו-10 לאחר הניתוח. עכברים עם ציוני זיאה לונגה ו-MAS ≥1 ביום השלישי לאחר הניתוח נחשבו כמי שהקימו מודל PSS מוצלח.

טיפול ב-MSSA

ההתערבויות החלו ביום השלישי לאחר הניתוח. אתר גירוי הדיקור בקרקפת היה קו ה-MS 6 האיפסילסיונלי (קו אלכסוני קדמי פריאטוטמפורלי). בהתאם לתקן הלאומי למניפולציות סטנדרטיות של דיקור קרקפת (GB/T 21709.2-2021), קו MS 6 משתרע מ-GV 21 (צ'יאנדינג) ועד GB 6 (שואנלי).

מחטי דיקור סטריליות חד-פעמיות (0.25 × 13 מ"מ) הוכנסו מתחת לגלאה אפונורוטיקה ב-GV 21 בזווית אלכסונית של כ-15° יחסית לפני הקרקפת, והוקדמו לכיוון GB 6 לאורך הקו האלכסוני הפרייטוטמפורלי הקדמי לעומק של כ-10 מ"מ. סיבוב מהיר (200 סיבובים לדקה) בוצע ברציפות במשך דקה אחת. לאחר 15 דקות של החזקת המחט, אותה סיבוב סיבוב חזר פעם אחת, מה שהוביל לזמן החזקת המחט הכולל של 30 דקות. במהלך כל תקופת שמירת המחטים, העכברים עברו בו זמנית תרגיל הליכון במהירות קבועה של 10 מ' לדקה.

העכברים בקבוצות המופעלות בדומה ובקבוצות הדגם לא קיבלו דיקור סיני ולא תרגיל על הליכון. כדי לשלוט בטיפול לא ספציפי ולחץ ריסון, הם טופלו בעדינות ונכבלו במחזיקי גרב לא דחיסיים למשך 30 דקות ליום, בהתאם למשך ההתערבות היומי הכולל של קבוצת MSSA.

הערכות התנהגותיות

ציון זאה לונגה לליקויים נוירולוגיים:

ליקויים נוירולוגיים בעכברים הוערכו באמצעות מערכת הניקוד Zea Longa¹⁶. הקריטריונים הבאים יושמו: ציון 0 הצביע על חוסר פגיעה נוירולוגית ותנועה בלתי מוגבלת תקינה; ציון של 1 הצביע על הארכה לא מלאה של הגפה הקדמית או האחורית הנגדית לצד הפגוע; ניקוד של 2 הצביע על סיבוב לכיוון הצד הנגדי במהלך תנועה; ציון של 3 הצביע על נפילה לצד הנגדי בזמן הליכה; וציון של 4 הצביע על אובדן הכרה עם היעדר תנועה ספונטנית.

MAS לטונוס שרירים:

טונוס השרירים הוערך באמצעות MAS¹⁷. הקריטריונים הוגדרו כך: דרגה 0, ללא עלייה בטונוס השרירים; דרגה 1, עלייה קלה בטונוס השריר, עם תפיסה חולפת או התנגדות מינימלית בסוף כיפוף והארכה פסיבית; דרגה 1+, עלייה משמעותית בטונוס השרירים, עם תפיסה חולפת בטווח התנועה האמצעי והתנגדות מתמשכת במחצית השנייה של התנועה; דרגה 2, עלייה בולטת בטונוס השרירים, עם התנגדות ניכרת ברוב טווח התנועה, אם כי הגפה נותרה ניתנת לתנועה בקלות; דרגה 3, עלייה משמעותית בטונוס השרירים שהקשתה על כיפוף והארכה פסיבית; ודרגה 4, תנועה פסיבית מוגבלת עקב קשיחות מפרקים. כיתה 1+ קיבלה ציון של 2 נקודות, מה שהניב ציון MAS מקסימלי של 5 נקודות במחקר^{זה 10}.

הדמיה מוחית T2WI לכימות נפח אוטם מוחי

כל סריקות T2WI נרכשו באמצעות סורק MRI של PharmaScan שהופעל בתוכנת ParaVision 360 (גרסה 3.5). רצף פולס טורבו מהיר משוקלל במשקל T2 עם שיפור הרפיה (T2_TurboRARE, המכונה גם RARE/echo ספין מהיר [FSE]) יושם על חולדות MCAO לכימות נפח האונם המוחי. פרמטרי ההדמיה הוגדרו כך: זמן חזרה (TR) = 3000.0 מילישניות, זמן הד (TE) = 33.0 מילישניות, שדה ראייה (FOV) = 35.00 × 35.00 מ"^{מ 2}, גודל מטריצה = 250 × 250, עובי פרוסה = 0.80 מ"מ, מספר פרוסות = 35, מספר עירורים (NEX) = 3.0, וזווית היפוך (FA) = 180.0°. אזורי האונם המוחי סומנו ידנית על בסיס פרוסה-אחר פרוסה בתוכנת ITK-SNAP (גרסה 4.4.0) על ידי חוקר יחיד שהיה עיוור להקצאת קבוצות, תוך שימוש בשינויים בעוצמת האות ותכונות מורפולוגיות התואמים לאוטם איסכמית. נפח האוטם המוחי חושב אוטומטית על ידי התוכנה.

DTI Neuroimaging להערכת שלמות מיקרו-מבנית של חומר לבן

נתוני MRI נאספו באמצעות סורק תהודה מגנטית PharmaScan בנפח 7.0 טון. הרדמה הושרתה עם 3% איזופלוראן שסופק באוויר דחוס (0.4–0.6 ליטר לדקה) ונשמרה עם איזופלורן של 1% לאורך כל רכישת DTI. טמפרטורת הגוף המרכזית נשמרה באמצעות אמבטיית מים מבוקרת תרמוסטטית לאורך כל תהליך ההדמיה.

במהלך סריקת MRI, הוחל לראשונה רצף מיקום בשלושה מישורים כדי למקם את מוח העכברוש בתוך המגנט. DTI בוצע באמצעות רצף דימות אקו-מישורי ספין-אקו צירי עם הפרמטרים הבאים: TR/TE = 3000/27 מילישניות, מטריצה = 90 × 75, שדה ראייה = 20 × 15^{מ"מ 2}, עובי פרוסה = 0.7 מ"מ, 30 כיווני גרדיאנט דיפוזיה, וערכי b של 0 ו-1000 שניות/מ"^{מ 2}. לניתוח DTI, אזורים בעלי עניין צוירו בקפסולה החיצונית על פרוסות מוח בעומק 1.3 מ"מ אחורי לברגמה. מיפויים פרמטריים של אניזוטרופיה חלקית (FA), דיפוזיביות ממוצעת (MD), דיפוזיביות אקסיאלית (AD) ודיפוזיביות רדיאלית (RD) שוחזרו באמצעות תוכנת ParaVision 360. הנתונים מבוטאים כיחס בין ההמיספרה הפגועה לחצי הכדור הבריא הנגדי.

צביעת LFB להערכת פגיעת מיאלין ורמיאלינציה

צביעת LFB בוצעה להערכת נזק מבני לאקסונים המיאליניים בקפסולה החיצונית. פגיעת המיאלין, המתאפיינת בהחזרת מיאלין ווואקוולציה, נמדדה על ידי מדידת צפיפות אופטית משולבת (IOD) של סיבים מיואליניים מוצבעים ב-LFB בתוך ה-ROI בקפסולה החיצונית באמצעות תוכנת ImageJ (גרסה 6.0; סף גווני אפור, 35–225). בהתבסס על אטלס סטריאוטקסי¹⁸ של מוח העכברים, נותחו שלושה חתכים קורונליים לכל בעל חיים בעומק של ברגמה +1.0 מ"מ, −1.3 מ"מ ו-−1.6 מ"מ, התואמים לחלקים הקדמיים, האמצעיים והאחוריים של הקפסולה החיצונית. ממוצע ה-IOD בשלושת החלקים חושב כך שייצג כל בעל חיים (n = 4 לכל קבוצה). ערכי IOD איפסילטרליים ננורמו לצד הנגדי והובאו לביטוי באחוז¹⁹.

הקלטות אלקטרופיזיולוגיות להערכת התעוררות רפלקס בעמוד השדרה

רפלקס H-הסינפטי המונוסינפטי של השדרה נרשם באמצעות מערכת ניסוי תפקוד ביולוגי. חולדות הורדמו בעדינות עם α-כלורלוז (50 מ"ג/ק"ג, תוך-פריטוני) כדי לשמור על התעוררות רפלקס עמוד שדרה במהלך הקלטות אלקטרופיזיולוגיות. העצב הסיאטי השמאלי נחשף על ידי דיסקציה קהה והוצב על אלקטרודות דו-קוטביות לגירוי חשמלי. תמיסת ויטמינים שומנית הונחה לסירוגין על העצב החשוף כדי לשמור על הידרציה ברקמה ובחיוניות עצבית. זוג אלקטרודות רישום מפלדת אל-חלד הוכנסו לשרירי הבין-עצמות של כף הרגל האחורית השמאלית, ואלקטרודה קרקעית הונחה בזנב. רפלקס ה-H הופעל באמצעות מגרה פולס מונופולרי-דו-קוטבי עם אורך פולס של 100 מיקרושניות. סף רפלקס H וסף המוטורי (MT) נקבעו באמצעות גירוי חשמלי הדרגתי, כאשר הזרם הוגדל בשלבים של 0.05 mA לעוצמה מקסימלית של 3.0 mA כדי למנוע פגיעה בלתי הפיכה בעצב ההיקפי.

באמצעות אותה עוצמת גירוי שגרמה לרפלקס H המקסימלי (H_max), סופקו גירויים פולסים בתדרים משתנים (0.3, 5 ו-10 הרץ) לקבלת אמפליטודות רפלקס H בתדרי גירוי שונים. גירוי פולסים חוזר ב-0.3 הרץ יושם כדי לוודא שהמשרעת של גל M נשארת בטווח של 95% מערכה ההתחלתי; אחרת, מערך הנתונים נזרק. דיכאון תלוי בתדר H רפלקס (FDD) חושב כאחוז יחס המשרעת של גל H/M (יחס H/M) ב-5 הרץ ו-10 הרץ ביחס לזה ב-0.3 הרץ, כאשר יחס H/M ב-0.3 הרץ משמש כנקודת ייחוס^{בסיסית 10}.

ניתוח נתונים

ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנת SPSS (גרסה 20.0). נתונים רציפים מוצגים כסטיית תקן ממוצעת ± (SD). נורמליות הנתונים הוערכה באמצעות מבחן שפירו–וילק. ניתוח שונות חד-כיווני (ANOVA) שימש להשוואת תוצאות דימות קונבנציונליות ומשתנים כמותיים נוספים בין קבוצות. כאשר הושג הומוגניות של השנות, בוצעו בדיקות פוסט-הוק של בונפרוני; אחרת, מבחן T3 של דאנט יושם. נתוני התנהגות נותחו באמצעות ANOVA דו-כיווני עם קבוצת ניסוי ונקודת זמן לאחר ניתוח כגורמים קבועים. ניתוח קורלציה של ספירמן שימש להערכת קשרים בין משתני המחקר. ערך של p < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MSSA משפר ליקויים נוירולוגיים תפקודיים

ANOVA דו-כיווני עם מדידות חוזרות חשף השפעות עיקריות משמעותיות של זמן (F[2.613, 62.71] = 315.3, p < 0.001) וקבוצה (F[2, 24] = 142.9, p < 0.001), וכן זמן משמעותי × אינטראקציה קבוצתית (F[12, 144] = 99.94, p < 0.001) עבור ציוני הנוירולוגיה של זיאה לונגה. יום לפני הניתוח, כל החולדות בקבוצות הניתוח המדומה, המודל ו-MSSA קיבלו ציון זיאה לונגה של 0, מה שמעיד על תפקוד נוירולוגי בסיסי שלם ללא ליקויים נוירולוגיים. החל מהיום הראשון לאחר הניתוח, ציוני זיאה לונגה עלו בהדרגה הן בקבוצות המודל והן בקבוצות MSSA. לא נצפה הבדל משמעותי בין קבוצות אלו מהיום הראשון לאחר הניתוח ועד יום 5 (עמ' > 0.05). עם המשך ההתערבות שלו, ציוני Zea Longa בקבוצת MSSA היו נמוכים משמעותית מאלו שבקבוצת המודל בימים 7 ו-10 לאחר הניתוח (p < 0.001), מה שמעיד על שיפור בתפקוד הנוירולוגי (איור 1A).

figure-results-1
איור 1. דיקור קרקפת בסגנון תנועה משפר ליקויים נוירולוגיים ומפחית את טונוס השרירים בעכברים עם ספסטיות לאחר שבץ. (א) ציוני ליקוי נוירולוגי של זיאה לונגה שנמדדו לפני חסימת העורק המוחי האמצעי (MCAO; יום −1), מיד לפני MCAO (יום 0), ובימים 1, 3, 5, 7 ו-10 לאחר הניתוח. (ב) ציוני סולם אשוורת' מותאם שנמדדו בנקודות זמן מתאימות. הקו האנכי המקווקוק מציין את MCAO ביום 0. הנתונים מוצגים כסטיית תקן ממוצעת ± (SD). פסי השגיאה מייצגים SD. ***p < 0.001 עבור ההשוואות המסומנות בסוגריים. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

MSSA מפחית את נפח האוטם המוחי

עכברים שהופעלו על ידי דמה הציגו ממצאים תקינים של T2WI, עם עוצמת אות פרנכימלית הומוגנית בכל המוח. לא נצפו עוצמות יתר פתולוגית, אוטם מוח, חריגות מורפולוגיות או התרחבות חדרי (איור 2A). לעומת זאת, קבוצת המודל הציגה היפראינטנסיביות T2 בולטת בהמיספרה המוחית האיפסילטרלית, התואמת לאזור האוטפקט האיסכמי, יחד עם הגדלה חדרית ניכרת (איור 2A). ניתוח מורפומטרי כמותי הראה שנפח האוטם המוחי הופחת משמעותית בקבוצת MSSA בהשוואה לקבוצת המודל (p < 0.001; איור 2B). ההתערבות של MSSA מוצגת באיור 2C.

figure-results-2
איור 2. דיקור קרקפת בסגנון תנועה מפחית את נפח האוטם המוחי בעכברים עם ספסטיות לאחר שבץ. (א) תמונות מוח מייצגות עם דימות משוקלל T2 (T2WI) מקבוצות דיקור קרקפת מדומה מופעל, מודל וסגנון תנועה (MSSA) ברמות 1.00, 0.20, −0.92 ו-−1.88 מ"מ ביחס לברגמה. (ב) כימות נפח האוטם המוחי מ-T2WI. סמלים בודדים מייצגים בעלי חיים בודדים. (ג) צילום של ההתערבות של MSSA שבוצעה במקביל לתרגיל הליכון. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. פסי השגיאה מייצגים SD. ***p < 0.001 לעומת קבוצת המודלים. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

MSSA מפחית את עווית השרירים לאחר שבץ

עבור ציוני MAS, ANOVA דו-כיווני עם מדידות חוזרות חשף השפעות עיקריות משמעותיות של זמן (F[2.158, 51.79] = 183.7, p < 0.001) וקבוצה (F[2, 24] = 57.68, p < 0.001), יחד עם זמן משמעותי × אינטראקציה קבוצתית (F[10, 120] = 58.70, p < 0.001). כל החולדות הציגו ציון MAS של 0 יום לפני הניתוח וביום הראשון לאחר הניתוח, מה שמשקף טונוס שרירים בסיסי תקין ללא ספסטיות. מהיום השלישי לאחר הניתוח ואילך, ציוני ה-MAS עלו בהדרגה בקבוצות המודל ובקבוצות MSSA, מה שמעיד על התפתחות ספסטיות בגפיים לאחר שבץ, ללא הבדל מובהק בין שתי הקבוצות בשלב זה. מהיום החמישי לאחר הניתוח ועד יום 10, ציוני ה-MAS בקבוצת MSSA היו נמוכים משמעותית מאלו שבקבוצת המודל (p < 0.01 עד p < 0.001), מה שמעיד ש-MSSA הקלה על PSS (איור 1B).

MSSA שומר על שלמות מיקרו-מבנית של חומר לבן בקפסולה החיצונית

מפות פרמטרים מייצגות של DTI מוצגות באיור 3A. ביום העשירי לאחר הניתוח, בהשוואה לקבוצת ההפעלה המדומה, קבוצת המודל הראתה ירידה משמעותית ביחס האניזוטרופיה השברית (rFA) בתוך הקפסולה החיצונית (p < 0.001; איור 3B), מלווה בעליות משמעותיות ביחס הדיפוזיביות הממוצעת (rMD) ודיפוזיביות רדיאלית (rRD) (שניהם p < 0.001; איור 3C,D). בהשוואה לקבוצת המודלים, MSSA העלה משמעותית את rFA (p < 0.001; איור 3B) וירידה משמעותית ב-rMD וב-rRD (שניהם p < 0.01; איור 3C,D). לא נצפה הבדל משמעותי ביחס הדיפוזיביות הצירית (rAD) בין הקבוצות (p > 0.05; איור 3E). מיקום החולדות במהלך רכישת DTI והמיקום האנטומי של ROI הקפסולה החיצונית מוצגים באיור 3F,G.

figure-results-3
איור 3. דיקור קרקפת בסגנון תנועה משנה פרמטרים של דימות טנזור דיפוזיה בעכברים עם ספסטיות לאחר שבץ. (A) אניזוטרופיה חלקית מייצגת (FA), דיפוזיביות ממוצעת (MD), דיפוזיביות אקסיאלית (AD) ודיפוזיביות רדיאלית (RD) מקבוצות הדיקור המופעל בזימה, מודל וסגנון תנועה (MSSA) של דיקור קרקפת (MSSA) בגובה של −1.30 מ"מ יחסית לברגמה. (B–E) כימות היחסים בין FA איפסילסיונלי לנגדי (rFA), MD (rMD), RD (rRD) ו-AD (rAD), בהתאמה. סמלים בודדים מייצגים בעלי חיים בודדים. (F) צילום של עכבר הממוקם להדמיית טנזור דיפוזיה (DTI). (G) תמונת סכמטית ותמונת תהודה מגנטית מקבילה המציגה את אזורי הקפסולה החיצוניים הנגדיים והאימסילסיונליים הרלוונטיים. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. פסי השגיאה מייצגים את SD. #p < 0.05 ו-###p < 0.001 לעומת קבוצת ההפעלה המזויפת; **p < 0.01 ו-***p < 0.001 לעומת קבוצת המודלים. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

MSSA משפר את שלמות המיאלין בקפסולה החיצונית

בוצע צביעת LFB להערכת שלמות המיאלין בקפסולה החיצונית. היסטולוגית, סיבים מיאליניים הציגו מורפולוגיה שלמה וסידור סדיר בקבוצת ההפעלה המדומה, בעוד שנצפו אובדן מיאלין וחוסר סדר מבני בקפסולה החיצונית של חולדות מודל MCAO (איור 4A). ניתוח כמותי הראה כי ה-IOD היחסי של צביעת LFB היה נמוך משמעותית בקבוצת המודל מאשר בקבוצת ההפעלה המדומה (p < 0.001; איור 4B). בהשוואה לקבוצת המודל, קבוצת MSSA הציגה ערכי IOD יחסיים גבוהים משמעותית (p < 0.001; איור 4B), המצביע על שיפור בשלמות המיאלין בקפסולה החיצונית לאחר טיפול ב-MSSA.

figure-results-4
איור 4. דיקור קרקפת בסגנון תנועה מפחית פגיעות במיאלין קפסולה חיצונית אצל חולדות עם ספסטיות לאחר שבץ. (א) חתכי מוח פנורמיים מייצגים עם צבעי לוקסול פאסט בלו (LFB) ותצפיות מוגדלות של אזורי הקפסולה החיצוניים הנגדיים והאיפסילסיונליים (ROIs) מקבוצות MSSA (דיקור קרקפת מופעל בזימה, מודל ותנועה). הקופסאות הכחולות והאדומות בתמונות הפנורמיות מציינות את ה-ROIs הנגדיים והאיפסילסיונליים, בהתאמה. פסי קנה מידה בתמונות המוגדלות = 50 מיקרומטר. (B) כימות הצפיפות האופטית המשולבת היחסית (IOD) של צביעת LFB בקפסולה החיצונית האיפסילסיונלית המנורמלת לצד הנגדי. סמלים בודדים מייצגים בעלי חיים בודדים; n = 4 לכל קבוצה. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. פסי השגיאה מייצגים SD. ###p < 0.001 לעומת קבוצת ההפעלה המזויפת; p < 0.001 מול קבוצת המודלים; △p < 0.05 להשוואה שצוינה על ידי הסוגריים. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

MSSA מעכב היפראקסיביטביליות של רפלקס H בעמוד השדרה

הקלטות ייצוגיות של גל M וגל H מוצגות באיור 5A, ומערכת ההקלטה האלקטרופיזיולוגית מוצגת באיור 5B. ביום העשירי לאחר הניתוח, הערכה אלקטרופיזיולוגית הראתה כי בהשוואה לקבוצת ההפעלה המדומה, קבוצת המודל הציגה עלייה משמעותית בסף המוטורי (MT; p < 0.001) ויחס משרעת מקסימלי של גל H/מקסימום גל M (_{מקסימום} H/M_{מקסימום}) (p < 0.001), עלייה מתונה בהשהיית גל M (p < 0.05), וירידה מקבילה בהשהיית רפלקס H (p < 0.05; איור 5C–H). בהשוואה לקבוצת המודלים, קבוצת MSSA הציגה MT נמוך משמעותית (p < 0.001) ויחס_{מקסימום} H/M (p < 0.001), יחד עם סף רפלקס H גבוה משמעותית (p < 0.001; איור 5C–H). לא נצפה הבדל משמעותי בעוצמת הגירוי הנדרשת ליצירת H_max המובע ככפולה של MT בין המודל לקבוצות MSSA (איור 5H). יתרה מזאת, כאשר מנורמל ליחס H/M ב-0.3 הרץ, FDD רפלקס H ירד בהדרגה עם עלייה בתדירות הגירוי בכל שלוש הקבוצות (איור 5I). גם בתדרים 5 הרץ וגם ב-10 הרץ, יחס H/M היה נמוך משמעותית בקבוצת MSSA מאשר בקבוצת המודל (שניהם p < 0.001), מה שמעיד על שיקום חלקי של FDD רפלקס H לכיוון הדפוס הפיזיולוגי (איור 5J; טבלה 1).

figure-results-5
איור 5. דיקור קרקפת בסגנון תנועה מפחית את ההתעוררות הרפלקסית של עמוד השדרה אצל חולדות עם ספסטיות לאחר שבץ. (א) עקבות מייצג בגל M וגל H מקבוצות MSSA (דיקור קרקפת מופעל על ידי שמה מופעלת, מודל ותנועה). (ב) צילום של מערכת ההקלטה האלקטרופיזיולוגית המציגה את אתר גירוי עצב הסיאטיקה, אלקטרודות ההקלטה והאלקטרודה הקרקעית. (C–H) כימות סף מנוע (MT), יחס משרעת גל H מקסימלי ל-M מקסימלי (H_{מקסימום}/M_{מקסימום}), השהיית גל H, סף רפלקס H, השהיית גל M, ועוצמת הגירוי שמעוררת H_max מבוטא ככפולה של MT, בהתאמה. סמלים בודדים מייצגים בעלי חיים בודדים. (I) עקבות רפלקס H מייצגים שהתקבלו בתדרי גירוי של 0.3 הרץ, 5 הרץ ו-10 הרץ בכל קבוצה. (J) דיכאון תלוי בתדר של רפלקס H, המובע כיחס H/M ב-5 הרץ ו-10 הרץ מנורמל ליחס H/M ב-0.3 הרץ. אזורים מוצלים מייצגים את SD של ערכי הממוצע. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. פסי השגיאה מייצגים SD. #p < 0.05 ו-###p < 0.001 לעומת קבוצת ההפעלה המזויפת; p < 0.001 לעומת קבוצת המודלים. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

קבוצה	MT (mA)	Mmax (mV)	Hmax (mV)	השהיה M (ms)	השהיית H (ms)	סף רפלקס H (×MT)	Hmax (×MT)	יחס H/M (0.3 הרץ)	יחס H/M (5 הרץ)	יחס H/M (10 הרץ)
שאם (n = 9)	0.808 ± 0.218	11.119 ± 7.802	2.804 ± 2.896	4.567 ± 0.731	11.311 ± 0.849	1.296 ± 0.251	1.554 ± 0.264	0.452 ± 0.264	0.304 ± 0.155	0.176 ± 0.137
מודל (n = 9)	1.855 ± 0.203^###	3.282 ± 2.040^##	2.307 ± 1.296	5.333 ± 0.893	10.456 ± 1.056	0.729 ± 0.299	1.517 ± 0.303	0.826 ± 0.120^##	0.741 ± 0.129^###	0.684 ± 0.131^###
MSSA (n = 9)	0.663 ± 0.236	5.908 ± 2.751	1.497 ± 0.688	4.744 ± 0.590	10.978 ± 0.602	1.939 ± 0.819	1.832 ± 1.557	0.556 ± 0.238^*	0.390 ± 0.193^**	0.142 ± 0.134

טבלה 1: פרמטרים אלקטרופיזיולוגיים של רפלקס ה-H בעכברים עם ספסטיות לאחר שבץ. מדידות אלקטרופיזיולוגיות שהושגו מקבוצות דיקור קרקפת בסגנון שמה מופעל, מודל וסגנון תנועה (MSSA), כולל סף מוטורי (MT), אמפליטודת גל M מקסימלית (M_{מקסימום}), משרעת גל H מקסימלית (H_max), השהיית גל M, השהיית גל H, סף רפלקס H המובע ככפולה של MT (×MT), עוצמת גירוי המעוררת H_max מבוטאים ככפולה של MT (×MT), ויחסי H/M הנמדדים בתדרי גירוי של 0.3, 5 ו-10 הרץ. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. ##p < 0.01 ו-###p < 0.001 לעומת קבוצת ההפעלה המדומה; *p < 0.05, **p < 0.01, ו-***p < 0.001 לעומת קבוצת המודלים.

מתאמים בין נפח האנקטרום T2WI, מדדי DTI של הקפסולה החיצונית, מדדים אלקטרופיזיולוגיים וציוני MAS

נבדקו לראשונה מתאמים בין נפח האוטם המוחי שנמדד על ידי T2WI לבין מדדי DTI של הקפסולה החיצונית. בניתוח המאוחד, נפח האינקרט היה בקורלציה שלילית חזקה עם rFA (ρ = −0.902, p < 0.001) והיה בקורלציה חיובית עם rMD ו-rRD (ρ = 0.511, p = 0.03; ρ = 0.661, p = 0.003; איור 6A–D). לא נצפו מתאמים משמעותיים בין נפח האוטם לפרמטרי DTI בניתוחי תת-הקבוצות. לאחר מכן הוערכו הקשרים בין מדדי DTI של הקפסולה החיצונית, המדדים האלקטרופיזיולוגיים של התעוררות רפלקסי עמוד השדרה וטונוס השרירים שהוערכו על ידי ה-MAS. בניתוח המאוחד, rFA נמוך יותר היה קשור ליחס_{מקסימום} _{H max/}M גבוה יותר (ρ = −0.895, p < 0.001), בעוד שיחס rRD גבוה יותר היה קשור לסף רפלקס H נמוך יותר (ρ = −0.504, p = 0.03; איור 6E,F). בנוסף, יחס_{מקסימום} H/M גבוה יותר וספי רפלקס H נמוכים יותר היו קשורים לציוני MAS גבוהים יותר (ρ = 0.760, p < 0.001; ρ = −0.479, p = 0.01; איור 6G,H). ניתוחי תת-קבוצות הראו מתאם שלילי משמעותי בין סף רפלקס H לציון MAS רק בקבוצת המודל (ρ = −0.736, p = 0.03), בעוד שלא נצפו מתאמים משמעותיים בקבוצות שמופעלות במזויפת או בקבוצות MSSA.

figure-results-6
איור 6. קשרים בין נפח אוטם מוח, פרמטרי דימות טנזור דיפוזיה, מדדי רפלקס H וטונוס שרירים בעכברים עם ספסטיות לאחר שבץ. (A–D) אסוציאציות של נפח אוטם מוחי מבוסס דימות משוקלל T2 (T2WI) לבין היחסים האיפסיציונליים-לנגדיים של אניזוטרופיה חלקית (rFA), דיפוזיביות ממוצעת (rMD), דיפוזיביות רדיאלית (rRD) ודיפוזיביות אקסיאלית (rAD), בהתאמה. (ה) אסוציאציה בין rFA לבין יחס המשרעת המקסימלי של גל H/גל M מקסימלי (_{מקסימום} H/M_{מקסימום}). (ו) אסוציאציה בין rRD לסף רפלקס H. (ז) קשר בין H_max/M_max לבין ציון בסולם אשוורת' המותאם (MAS). (H) קשר בין סף רפלקס H לציון MAS. עיגולים, ריבועים ומשולשים מייצגים את קבוצות ה-MSSA (MSSA) המופעלות על ידי שמאם, מודל, וסגנון תנועה. קווים מקווקו מתאימים לעקומת התאמת רגרסיה ליניארית שנוצרת מהנתונים הנמדדים. מקדמי מתאם ספירמן הכוללים והספציפיים לקבוצה (ρ) וערכי p תואמים מוצגים בכל פאנל. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

זמינות נתונים:

כל הנתונים שנוצרו או נותחו במהלך מחקר זה כלולים במאמר שפורסם ובחומר המשלים. מערכי הנתונים הגולמיים התומכים בממצאי מחקר זה מסופקים בטבלה משלימה 1.

טבלה משלימה 1. מערכי נתונים גולמיים התומכים בניתוחים הכמותיים שהוצגו במחקר זה. חוברת העבודה כוללת את הנתונים הניסיוניים הגולמיים המשמשים להערכות התנהגות, ניתוח נפח אימפרקט T2, מדדי דימות טנזור דיפוזיה (DTI), כימות צביעת Luxol Fast Blue (LFB), ומדידות אלקטרופיזיולוגיות רפלקס H לכל קבוצות הניסוי. אנא לחצו כאן להורדת הקובץ הזה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מנקודת מבט של הרפואה הסינית המסורתית, PSS נופלת לקטגוריה של הפרעות שריר-גידים, כאשר פתוגנזה מרכזית המתוארת כפציעה מוחית כשורש הבעיה, וספסטיות הגפיים^{היא הביטוי} השטחי. לכן, אסטרטגיות טיפוליות צריכות לטפל הן בנגע המוחי הראשי והן בביטויים ההיקפיים המשניים.²¹. ההיגיון שמאחורי MSSA מדגיש ויסות הוליסטי מהמוח האיסכמי ועד הגפיים הספסטיות, עם מטרות טיפוליות לקדם את זרימת הדם, פתיחת חסימת המרידיאנים, הרפיית גידים והקלה על ספסטיות. טכניקת הדירה היא מרכזית ליעילות הדיקור, ובחירת טכניקה מתאימה המותאמת לדפוס המחלה היא קריטית להשגת תוצאות קליניות חיוביות. MSSA היא שיטת דיקור סיני אופיינית לקרקפת עבור PSS המשלבת דיקור סיני בקרקפת עם תנועת גפה פעילה או פסיבית במהלך החזקת מחט³. סקירה שיטתית ומטא-אנליזה עדכנית הראו ש-MSSA מייצרת השפעות טובות יותר בהפחתת ספסטיות השרירים, שיפור תפקוד מוטורי ושיפור הפעילות היומיומית אצל מטופלים עם PSS בהשוואה לדיקור קרקפת קונבנציונלי או שיקום פעילות גופנית^{בלבד 9}. ראוי לציין כי מתן מקביל של דיקור קרקפת ושיקום מפעילות גופנית, כפי שמיושם ב-MSSA, מניב תוצאות טובות יותר מהתערבות אסינכרונית, כפי שנתמך בראיות קליניות באיכות מתונה⁹. MS 6, כפי שהוגדר ב-GB/T 21709.2-2021, הוא קו דיקור קדמי באלכסון קרקפת פריאטוטמפורל שנבחר בשל רלוונטיותו האנטומית ותועלת קלינית מבוססת⁹. הוא מונח מעל הקורטקס המוטורי הראשי והמשניים, שהם המקורות העיקריים להקרטות קורטיקופוגליות יורדות שמעצבות את פלט הרטיקולרי של גזע המוח ומווסתות את ההתעוררות הרפלקסית של עמוד השדרה. קלינית, MS 6 הוא קו הדיקור הנפוץ ביותר בקרקפת ל-PSS, כפי שמאושר במטא-אנליזה שהוזכרה, מה שהופך אותו למטרה אופטימלית לוויסות מסלולי תנועה במחקר הנוכחי. ממצאים אלו מדגישים את המאפיינים הפרוצדורליים הייחודיים ואת היתרונות הקליניים הפוטנציאליים של MSSA בניהול PSS. מחקרים פרה-קליניים הראו בנוסף ש-MSSA משפר את הפרפוזיה המוחית בפנומברה האיסכמית ומווסת את ההתעוררות של נוירוני הקרניים הקדמיים בעמוד השדרה, ומספק תמיכה מכנית ראשונית ליישומו הטיפולי^10,11.

בתיאוריה הנוירולוגית המודרנית, הפתוגנזה של PSS מיוחסת בעיקר לשלושה תהליכים פתולוגיים קשורים זה לזה: עיכוב ירידה על-שדרתי פגוע, עיבוד אותות תוך-שדרתי לא תקין, ושינוי בתכונות השרירים הפנימיות. מבין אלה, המנגנונים שבאמצעותם מסלולי הירידה העל-שדרתיים מווסתים את ההתעוררות הרפלקסית של עמוד השדרה עדיין אינם מובנים במלואם². המסלול הרטיקולוספינלי (RST) ממלא תפקיד חיוני בשמירה על איזון קשת הרפלקס המתיחה. ה-RST הלטרלי מקבל קלט מעורר מהקורטקס הפרה-מוטורי הנגדי ומהאזור המוטורי המשלים דרך המסלול הקורטיקו-רטיקולר, יורד בתוך הפוניקולוס הגבי-צדדי של חוט השדרה, ומפעיל שליטה מעכבת על פעילות רפלקס המתיחה של עמוד השדרה. לעומת זאת, ה-RST המדיאלי אינו מווסת על ידי הקורטקס הנגדי, יורד בתוך הפוניקולוס הוונטרומדיאלי, ומקל על פעילות רפלקס מתיחה. שבץ קורטיקלי מפריע למסלול הקורטיקו-רטיקולרי, מפחית את הקלט המעורר להיווצרות הרשתית המדולרית, וגורם לפעילות הדומיננטית של ה-RST המדיאלי. חוסר איזון זה תורם להתעוררות יתר של רפלקס מתיחה בעמוד השדרה ולביטוי קליני של ספסטיות גפיים³. מחקרים של דימות מוחי קליניים קישרו את PSS לנגעים הכוללים את הקורטקס הפרה-מוטורי, הפוטמן, הגפה האחורית של הקפסולה הפנימית והקפסולה החיצונית¹²^,¹⁴^,²². מביניהם, הקפסולה החיצונית מהווה תעלה מרכזית של חומר לבן בתוך מסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי, מסלול אקסטרפירמידלי מרכזי שמשלב קלטים קורטיקליים, סינפסות בגרעיני הרטיקולר של גזע המוח, ומוקרן לחוט השדרה כדי להפעיל שליטה מעכבת יורדת על נוירוני α-מוטונים ואינטרנוירונים²³. מסגרת אנטומית זו נתמכת על ידי מעקב עצבי ומחקרי DTI, שמזהים בעקביות את הקפסולה החיצונית כקשר עיקרי בין הקורטקס המוחי, הגנגליונים הבסיסיים וגזע המוח²³^,²⁴. ראוי לציין כי ספסטיות מוכרת יותר ויותר כהפרעה ברמת הרשת הנובעת מהפרעה באיזון בין מערכות מוטוריות יורדות רבות, כולל מסלולים קורטיקוספינליים ואקסטרפירמידליים, ולא מתפקוד לקוי של מסלול יחיד. בהקשר זה, הקפסולה החיצונית משמשת כמבנה מייצג לחקירת תרומות אקסטרפירמידליות ל-PSS, שכן מעורבותה נקשרה בעקביות לפעילות רפלקס עמוד שדרה מוגזמת, בעוד שנגעים קורטיקוספינליים מבודדים לרוב יוצרים חולשה ללא ספסטיות פרופורציונלית. בהתאם לכך, בחרנו את הקפסולה החיצונית כנקודת התשואה העיקרית לחקירת שינויים מיקרוסטרוקטוריאליים בחומר לבן הקשורים לחומרת הספסטיות. בהתאם למסגרת זו, T2WI לא חשף אוטם מוחי ברור בקבוצה המופעלת על ידי דמה, בעוד שנצפו נגעים בולטים בקבוצת המודל. טיפול ב-MSSA שיפר משמעותית את התפקוד הנוירולוגי, כפי שנערך על ידי סולם זיאה לונגה, מה שמרמז על אפקט נוירו-מגן נגד פגיעות מוח איסכמיות. האפקט החיסכון של MSSA עשוי לכלול מנגנונים סינרגטיים מרובים. ראשית, MSSA הוכח כמגביר את הפרפוזיה המוחית האזורית בפנומברה האיסכמית¹⁰, ובכך נוצרת מיקרוסביבה נוחה יותר להישרדות נוירונים. בנוסף, אף שהראיות הישירות ל-MSSA מוגבלות כיום, מחקרים מכניים על דיקור קרקפת הציעו מספר מסלולים נוספים שעשויים גם הם לתרום, כולל קידום אנגיוגנזה באמצעות הפעלת מסלול האיתות MATN2/WNT3a/β-catenin²⁵ והפחתת דלקת עצבית פוסט-איסכמית באמצעות דיכוי התמיינות Th17 בתיווך RORγt ושיקום האיזון בין Th17/Treg²⁶. ממצאים אלו מעלים את האפשרות ש-MSSA עשוי להפעיל מנגנוני נוירו-הגנה דומים מעבר להשפעות ההמודינמיות שלו. עם זאת, התרומה היחסית של כל מסלול טרם נקבעה וראויה לחקירה נוספת.

DTI מאפשר הערכה כמותית רגישה של מיקרו-מבנה חומר לבן, כאשר FA משקף שלמות סיבים, RD משמש כסמן לדמיאלינציה, ו-AD משקף שלמות אקסונים²³. במחקר הנוכחי, הקפסולה החיצונית נבחרה כ-ROI להערכת שינויים מיקרו-מבניים הקשורים למסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי ב-PSS. בהשוואה לקבוצה שהופעלה על ידי הקרם, חולדות מודל הראו ירידות משמעותיות ב-FA יחסי יחד עם עליות משמעותיות ב-MD וב-RD, מה שמעיד על פגיעה בשלמות החומר הלבן, בצקת מוחית ודמיאלינציה בתוך הקפסולה החיצונית. צביעת LFB הדגימה גם אובדן מיאלין ברור וחוסר ארגון של חבילות חומר לבן, וסיפקה תמיכה היסטולוגית לממצאי ה-DTI. ביחד, ממצאי הדמיה הנוירולוגית וההיסטולוגיה מצביעים על כך שפגיעה איסכמית קשורה לפגיעה מיקרוסטרוקטורלית בולטת בקפסולה החיצונית, שהוחלשה לאחר טיפול ב-MSSA. רפלקס ה-H הוא מדד אלקטרופיזיולוגי מבוסס להערכת התעוררות מאגר α תנועות בעמוד השדרה וויסות הירידה העל-שדרתית²⁷. יחס H_max/_{M מקסימלי} משקף את ההתעוררות הכוללת של תנועות נוירונים בעמוד השדרה, בעוד שסף רפלקס H משקף עיכוב פרה-סינפטי המתווך על ידי נוירונים פנימיים של עמוד השדרה יחד עם קלטים יורדים משולבים מעל השדרה²⁷. הפרעה שנגרמה על ידי שבץ במסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי מחלישה את הוויסות המעכב היורד, מה שמוביל להתעוררות יתר של תנועות בעמוד השדרה המאופיינת ביחס_{מקסימום} _{H max/}M מוגבר וסף רפלקס H^{מופחת 27}. הניסויים הראשוניים שלנו חקרו את המנגנונים המולקולריים שמאחורי ההשפעות האנטיספסטיות של MSSA, והראו כי טיפול זה עשוי להעלות את ביטוי KCC2 בעמוד השדרה ולשקם את תפקוד המעכב GABAergic¹⁰. בהתבסס על ממצאים מולקולריים של עמוד השדרה הללו, המחקר הנוכחי מבהיר עוד יותר את המנגנונים העל-שדרתיים במעלה הזרם האחראים לרפלקסים מוגזמים של עמוד השדרה, בכך שהוא מדגים כי פגיעה מיקרומבנית בקפסולה החיצונית בתוך מסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי קשורה לעלייה משמעותית בהתעוררות עמוד השדרה. יחד, ממצאים אלו מצביעים על כך ש-MSSA עשוי לקדם שחזור של מסלולים מעכבים יורדים על-שדרתיים ולהפוך את ההתעוררות הרפלקסית של עמוד השדרה בחולדות עם PSS.

בהינתן האופי החתך של הנתונים הנוכחיים, כל ניתוח הקורלציה צריך להתפרש כחוקרים ומייצרי השערות ולא כראיה ליחסים סיבתיים. בוצעו ניתוחי קורלציה כדי לבדוק את הקשרים בין עומס האוטם, שלמות מיקרומבנית של קפסולה חיצונית, התעוררות רפלקס עמוד שדרה וחומרת ספסטיות. בכל בעלי החיים, נפחי אוטם גדולים יותר היו קשורים להפרעה מיקרוסטרוקטורלית חמורה יותר שמקורם ב-DTI בתוך הקפסולה החיצונית, מה שמרמז על קשר בין פגיעה איסכמית ראשונית לשינויים משניים בחומר לבן לאורך מסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי. ראוי לציין כי הקורלציות הכוללות הללו נראו מונעות בעיקר על ידי הבדלים בין-קבוצתיים ולא על ידי שונות אישית בתוך הקבוצה, שכן לא נצפו מתאמים משמעותיים בתוך אף קבוצה בודדת. FA יחסי גבוה יותר (rFA) היה קשור ליחס H_max/_{M מקסימום} נמוך יותר, בעוד ש-RD יחסי גבוה יותר היה קשור לסף H-רפלקס נמוך יותר, בהתאם לרעיון ששלמות קפסולה חיצונית נשמרת קשורה לוויסות מעכב יורד יעיל יותר. בנוסף, יחס H_max/_M גבוה יותר וסף רפלקס H נמוך יותר היו קשורים שניהם לציוני MAS גבוהים יותר, מה שתמך בקשר בין שינויים אלקטרופיזיולוגיים לחומרת ספסטיות. ניתוחי תת-קבוצות חשפו עוד כי דפוסי המתאם הכוללים מיוחסים בעיקר להבדלים בין קבוצות. ראוי לציין כי נצפה מתאם שלילי משמעותי בין סף רפלקס H לציון MAS רק בקבוצת המודל, מה שמרמז כי עיכוב קדם-סינפטי פגום עשוי להיות קשור לספסטיות גבוהה יותר בתנאים פתולוגיים לא מטופלים.

יש להכיר בכמה מגבלות. ראשית, היעדר קבוצות ביקורת המתבצעות רק בדיקור סיני וקבוצות פעילות גופנית בלבד מונע את ניתוח התרומה העצמאית והסינרגטית שלהן. מחקרים עתידיים שיכללו את קבוצות ההשוואה הללו יסייעו להבהיר את המנגנונים שמאחורי ההתערבות המשולבת. שנית, תקופת התצפית הוגבלה לשלב החריף (ימים לאחר הניתוח 0–10), שנבחר על בסיס חלון הספסטיות השיא במודל הקבוע של MCAO. האם MSSA מעניק יתרונות טיפוליים מתמשכים מעבר לשלב האקוטי עדיין לא ידוע, ואימות במודלים כרוניים של PSS יהיה חשוב לקביעת הפוטנציאל התרגומי ארוך הטווח שלו. שלישית, למרות שה-MAS משמש באופן נרחב להערכת טונוס שרירים, הוא מטבעו סובייקטיבי וחצי-כמותי. כדי להשלים מגבלה זו, רפלקס ה-H הוערך במקביל כמדד אלקטרופיזיולוגי אובייקטיבי לעוררות רפלקס עמוד שדרה. רביעית, גודל המדגם היה צנוע בשל הדרישות הטכניות הקשורות להערכות רב-מודליות, ומחקרים הכוללים מספר גדול יותר של בעלי חיים ישפרו את הכוח הסטטיסטי ואת עמידות הממצאים. לבסוף, כל נקודות הקצה הוערכו רק ביום העשירי לאחר הניתוח. מחקרים עתידיים שיכללו הערכות אורך בנקודות זמן מרובות יספקו הבנה מקיפה יותר של המסלול הזמני של שינויים נוירופלסטיים שנגרמו על ידי MSSA.

מחקרים עתידיים עשויים לחקור את מנגנוני הנוירגנזה והרמיאלינציה בעקבות התערבות MSSA. מכיוון ש-DTI אינו יכול להמחיש ישירות התחדשות נוירונים, גישות משלימות כמו מעקב עצבי ואימונוהיסטוכימיה עשויות לאפיין עוד פלסטיות ורמיאלינציה של הנוירונים. מנקודת מבט תרגומית, מדדי DTI של הקפסולה החיצונית, במיוחד FA ו-RD, עשויים לסייע בדירוג מטופלים עם שבץ לפי חומרת פגיעת מסלול קורטיקו-רטיקולוספינלי ולזהות את אלו שסביר להפיק תועלת מ-MSSA. גישה מונחית סמנים ביולוגיים כזו עשויה להקל על בחירת מטופלים וסטרטיפיקציה של טיפול בניסויים קליניים עתידיים, אף על פי שהתועלת הקלינית שלה טרם אומת בקבוצות שבץ פוטנציאליות. לסיכום, מחקר זה חקר את המנגנונים העצביים הקשורים לטיפול MSSA ב-PSS באמצעות מסגרת משולבת הכוללת הערכת אוטם מבוססת T2WI, הערכת DTI של מיקרו-מבנה חומר לבן, אלקטרופיזיולוגיה רפלקסית H, וניתוח היסטולוגי LFB. הממצאים מצביעים על כך ש-MSSA קשור להפחתת נפח האוטם המוחי, שימור שלמות מיקרו-מבנית חיצונית של קפסולה, ושיפור בוויסות מעכב יורד של מסלול הקורטיקו-רטיקולוספינלי. שינויים אלו לוו בנרמול של התעוררות הרפלקס בעמוד השדרה והפחתת ספסטיות. ביחד, הממצאים מספקים תובנות מכניות וראיות פרה-קליניות התומכות ביישום תרגומי פוטנציאלי של MSSA בניהול PSS.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניגוד עניינים:

המחברים מצהירים שאין ניגוד עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס' 82405579).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
α-Chloralose	GoldBio	C-118-250	חומר הרדמה לתיעוד H-reflex
Absolute Ethanol	Beijing Tong Guang Fine Chemicals Co., Ltd.	VS104021-500 mL	חומר ריאגנט היסטולוגי
Acupuncture Needles (0.25 × 13 mm)	Beijing Zhongyan Taihe Acupuncture Needle Co., Ltd.	NA	מחטי אקופונקטורה חד פעמיות סטריליות לדקירת הקרקפת
Ampicillin	Beijing Rui Da Heng Hui Technology Development Co., Ltd.	HD-3018-500g	אנטיביוטיקה למניעת זיהומים לאחר ניתוח
Biological Function Experiment System (BL420N)	Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd.	NA	מערכת הקלטה אלקטרופיזיולוגית
Diffusion Tensor Imaging Analysis Software (ParaVision 360)	Bruker	NA	רכישת MRI ושחזור DTI
Eco-Friendly Dewaxing and Clearing Solution	Servicebio	G1128-500ML	חומר ריאגנט היסטולוגי
Fully Automatic Rotary Microtome	Leica Microsystems	RM2255	חיתוך רקמות
Heating Pad	Suzhou Caiyang Electric Heating Technology Co., Ltd.	TT180×150-1XD	שמירה על טמפרטורה לאחר ניתוח
ImageJ 6.0	National Institutes of Health	NA	ניתוח תמונה כמותי
Isoflurane	Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.	I8000-25g	חומר הרדמה באמצעות שאיפה
ITK-SNAP 4.4.0	University of Pennsylvania	NA	חלוקת אוטם מוחי
Luxol Fast Blue Solution	Servicebio	G1030-100ML	צביעת מיאלין
Monofilament Nylon Suture (0.36 ± 0.02 mm)	Beijing Cinontech Co., Ltd.	NA	גירוי MCAO
Paraformaldehyde (4% in PBS)	Servicebio	TBAB0102	קיבוע רקמות
PharmaScan 7.0 T Magnetic Resonance Scanner	Bruker	NA	רכישת MRI
SPSS Statistics 20.0	IBM	NA	ניתוח סטטיסטי
Sprague–Dawley Rats (SPF, male)	Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.	NA	חיות ניסוי
Thermostatically Controlled Water Bath System	Shanghai Zhixin Experimental Instrument Technology Co., Ltd.	ZX-5A	שמירה על טמפרטורה במהלך MRI
Treadmill for Rodents	Clever	TreadScan	אימון גופני במהלך הסתגלות ו-MSSA

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Suputtitada A, Chatromyen S, Chen CP, Simpson DM. A modified scoping review of interventions for global post-stroke spasticity. Toxicon. 2025;262:108311.
Li S, Francisco GE, Rymer WZ. A new definition of poststroke spasticity and the interference of spasticity with motor recovery from acute to chronic stages. Neurorehabil Neural Repair. 2021;35(7):601-10.
Wang JX, Fidimanantsoa OL, Ma LX. New insights into acupuncture techniques for poststroke spasticity. Front Public Health. 2023;11:1155372.
Ko SH, et al. Corticoreticular pathway in post-stroke spasticity: a diffusion tensor imaging study. J Pers Med. 2021;11(11):1151.
Cho MJ, Yeo SS, Lee SJ, Jang SH. Correlation between spasticity and corticospinal/corticoreticular tract status in stroke patients after the early stage. Medicine (Baltimore). 2023;102(17):e33604.
Liu YF, et al. Interactive scalp acupuncture for hemiplegic upper extremity motor dysfunction in patients with ischemic stroke: a randomized controlled trial. Zhongguo Zhen Jiu. 2023;43(10):1109-13.
Song TW, Su YL, Kang ZQ. Clinical observation of phased rehabilitation training combined with interactive head acupuncture in treating hemiplegic upper limb spasm after stroke. China’s Naturopathy. 2023;31(16):65-8.
Gan JH, Wang F, Cui XW. Clinical study on interactive scalp acupuncture in adjuvant therapy of post-stroke lower limb spasm. New Chinese Medicine. 2023;55(13):160-4.
Zhong JS, et al. Novel efficacy evidence and mechanistic explorations of motion-style scalp acupuncture in post-stroke muscle spasticity management: systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Neuroscience. 2025;589:96-108.
Zhang QY, et al. Motion-style scalp acupuncture ameliorates post-stroke muscle spasticity through cerebral blood flow augmentation and 5-HT2AR-mediated spinal KCC2 reactivation. Brain Behav. 2025;15(12):e71064.
Zhang QY, et al. Electrophysiological mechanisms of motion-style scalp acupuncture for treating poststroke spasticity in rats. Zhen Ci Yan Jiu. 2023;48(10):986-92.
Lee KB, et al. Which brain lesions produce spasticity? An observational study on 45 stroke patients. PLoS One. 2019;14(1):e0210038.
Picelli A, et al. Association between severe upper limb spasticity and brain lesion location in stroke patients. Biomed Res Int. 2014;2014:162754.
Barlow SJ. Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke. Somatosens Mot Res. 2016;33(2):104-11.
Wang JX, et al. Waggle needling wields preferable neuroprotective and anti-spastic effects on post-stroke spasticity in rats by attenuating γ-aminobutyric acid transaminase and enhancing γ-aminobutyric acid. Neuroreport. 2020;31(10):708-16.
Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, Cummins R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 1989;20(1):84-91.
Meseguer-Henarejos AB, Sánchez-Meca J, López-Pina JA, Carles-Hernández R. Inter- and intra-rater reliability of the Modified Ashworth Scale: a systematic review and meta-analysis. Eur J Phys Rehabil Med. 2018;54(4):576-90.
Paxinos G, Watson C. The rat brain in stereotaxic coordinates. 6th ed. Academic Press; Amsterdam; 2007.
Zhuang YM, et al. Buyang Huanwu decoction improves motor function by enhancing internal capsule reorganization through inhibiting Notch signaling after ischemic stroke. J Ethnopharmacol. 2025;348:119812.
Wang JX, et al. Analysis of the significance of kinetic needling in the treatment of spasm. Zhongguo Zhen Jiu. 2019;39(12):1335-8.
Wang JX, et al. New perspectives on the efficacy of Governor Vessel moxibustion combined with rehabilitation training for poststroke muscle spasticity: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Brain Behav. 2026;16(4):e71346.
Cheung DK, et al. Lesion characteristics of individuals with upper limb spasticity after stroke. Neurorehabil Neural Repair. 2016;30(1):63-70.
Ahn S, Lee SK. Diffusion tensor imaging: exploring the motor networks and clinical applications. Korean J Radiol. 2011;12(6):651-61.
Yang YM, Yao ZW, Feng XY. Locating the neural fibers in the rat brain in vivo by MR DTI and the Mn²⁺ tracing method. Chin J Neuroanat. 2008;(4):379-85.
Zhang Q, et al. The mechanism of promoting angiogenesis after cerebral infarction by scalp acupuncture based on MATN2/WNT3a/β-catenin. J Mol Histol. 2025;56(3):186.
Yuan B, et al. Electroacupuncture of scalp acupoint alleviates cerebral ischemic inflammatory injury by down-regulating RORγt and promoting balance of IL-17A+Th17/FOXP3+Treg in MCAO rats. Zhen Ci Yan Jiu. 2024;49(2):135-44.
Wieters F, et al. Terminal H-reflex measurements in mice. J Vis Exp. 2022;(184).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

234 234 H

השפעות דיקור סיני בסגנון תנועה בקרקפת על מיקרו-מבנה קפסולה חיצוני והתעוררות רפלקס עמוד שדרה במודל עכברוש של ספסטיות לאחר שבץ

במאמר זה

סיכום

תקציר

מבוא

פרוטוקול

תוצאות

דיון

גילויים

תודות

חומרים

מקורות

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מאמרים קשורים