הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

גלולת Zuogui מווסת את הצימוד בין אוסטאובלסטים לאוסטאוקלסטים בחולדות שעברו כריתת שחלות: מחקר פקטוריאלי של שלושה על שלושה

83 צפיות

⸱

11 בספטמבר 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Inner Mongolia Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מחקר זה מעריך את ההשפעות של Zuogui Pill על אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר בחולדות שעברו כריתת שחלות (ovariectomized), תוך שימוש במערך ניסויי פקטוריאלי של שלושה על שלושה. התוצאות תומכות בהשפעות סינרגטיות של רכיבי Yin ו-Yang על מטבוליזם של העצם ועל סמנים קשורים של מסלול EphB4/ephrinB2, אם כי הראיות המכניסטיות נותרות אסוציאטיביות ולא סיבתיות.

תקציר

אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר נגרם כתוצאה מניתוק בין תהליכי בניית העצם לספיגת העצם, הקשור למחסור באסטרוגן. מחקר זה כימת את ההשפעות העצמאיות והאינטראקטיביות של תתי-פורמולציות של Zuogui Pill Yin-nourishing במודל של חולדות שעברו כריתת שחלות, ובחן קשרים עם מסלול EphB4/ephrinB2/RhoA/alkaline phosphatase. בהתאם ל-ARRIVE 2.0, 130 חולדות נקבה מסוג Sprague-Dawley נטולות פתוגנים ספציפיים חולקו רנדומלית ל-13 קבוצות (n=10/group), כולל תשע קבוצות במערך פקטוריאלי של שלושה על שלושה. מדדי הקצה כללו P1NP, CTX-1, צפיפות מינרלים של עצם הפמור כפי שנמדדה באמצעות ספיגומטריה של קרני רנטגן באנרגיה כפולה (DXA), היסטולוגיה של העצם הספוגית, וביטוי של mRNA וחלבונים שנמדד באמצעות RT-qPCR ו-Western blotting. הפורמולה המלאה (I2A2) הייתה קשורה לרמות P1NP גבוהות יותר, CTX-1 נמוך יותר ו-BMD גבוה יותר בהשוואה לקבוצת המודל. ניתוח פקטוריאלי זיהה אינטראקציית Yin-Yang בין P1NP ל-BMD, מה שתומך בסינרגיה פרמקולוגית. שינויים מולקולריים היו קשורים לעלייה בביטוי של EphB4/ephrinB2/ALP ולירידה בביטוי של RhoA. ממצאים אלו תומכים בקשר בין טיפול ב-Zuogui Pill, שיפור בפנוטיפים של העצם ומודולציה של סממני המסלול; הוכחת תלות סיבתית במסלול דורשת תיקוף באמצעות מעכבים, knockdown ותרביות משותפות (co-culture).

מבוא

אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר (PMOP) פוגע באוכלוסייה גדולה של נשים ומאופיין בשיבוש של האיזון בין בניית העצם לספיגתה, הקשור למחסור באסטרוגן1,2. מערכת הקולטן-ליגנד EphB4/ephrinB2 מתווכת את התקשורת בין אוסטאובלסטים לאוסטאוקלסטים; איתות של EphB4 תומך בדיפרנציאציה של אוסטאובלסטים ובפעילות של פוספטאזה אלקלית (ALP), בעוד שאיתות הפוך של ephrinB2 יכול להגביל את האוסטאוקלסטוגנזה באמצעות מנגנונים הקשורים ל-RhoA3,4. צימוד מופחת בעצם עם מחסור באסטרוגן מספק רציונל מכניסטי להערכת התערבויות המשפיעות על שני הזרועות התאיים של תהליך השחלוף.

טיפולים נוכחיים באוסטאופורוזיס, כולל סוכנים אנאבוליים ואנטי-רסורפטיביים, מפחיתים את הסיכון לשברים אך עשויים להיות מוגבלים על ידי היענות לטיפול, עלות, התוויות נגד, אפקטים של ריבאונד או תופעות לוואי במהלך שימוש ממושך5. לפיכך, טיפולים מועמדים המשפרים את בניית העצם תוך הגבלת רסורפציה מוגברת נותרים רלוונטיים מבחינה מדעית.

גלולת Zuo Gui (ZGP; Zuo Gui Wan) היא מרשם קלאסי רב-מרכיבים המשמש ברפואה סינית מסורתית לטיפול בחסר של תמצית הכליות (kidney-essence deficiency), תבנית תיאורטית הקשורה לחולשה של העצמות. המרכיבים המזינים את ה-Yin כוללים Rehmannia glutinosa (שורש מעובד, Shu Di Huang, 24 g), Dioscorea opposita (ריזומה, Huai Shan Yao, 12 g), Cornus officinalis (פרי, Shan Zhu Yu, 12 g), Lycium barbarum (פרי, Gou Qi Zi, 12 g), ג'לטין מלוחית של Chinemys reevesii (ג'לטין המופק מהלוחית, Gui Ban Jiao, 12 g), ו-Cyathula officinalis (שורש, Chuan Niu Xi, 9 g). המרכיבים המחזקים את ה-Yang כוללים Cuscuta australis (זרע, Tu Si Zi, 12 g) וג'לטין מקרן של Cervus elaphus (ג'לטין המופק מהקרן, Lu Jiao Jiao, 12 g). בתיאוריה הקלאסית, העיקרון של חיפוש Yang בתוך Yin חוזה כי צמחים מחזקי Yang עשויים להגביר בסיס מזין Yin במקום לפעול כתוספים עצמאיים פשוטים. ראיות קליניות ומחקרים פרה-קליניים דיווחו על פעילות אנטי-אוסטאופורוטית של ZGP או של התערבויות המכילות ZGP, כולל השפעות על BMD, אוסטאוגנזה והתנהגות פרמקוקינטית6,7,8,9,10.

החידוש במחקר זה טמון בהפרדה פקטוריאלית פורמלית של שלושה על שלושה בין מרכיבים מזיני-Yin למרכיבים מחזקי-Yang בחולדות שעברו כריתת שחלות (OVX), תוך הערכה סימולטנית של פנוטיפים של עצם ומסמנים של נתיב ה-EphB4/ephrinB2/RhoA/ALP. תכנון זה בוחן את תאוריית התאימות של הפורמולציה באופן ישיר יותר ממחקרים המשתמשים רק במרשם המלא או במשווה יחיד, תוך הכרה בכך ששינויים במסמני הנתיב נותרים אסוציאטיביים אלא אם כן הם נחסמים או מושתקים באופן מכניסטי1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים במחקר זה אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ובקרת בעלי חיים של אוניברסיטת הרפואה של מונגוליה הפנימית (מספר אישור YKD202404105) ובוצעו בהתאם להנחיות ARRIVE 2.012.

מערך המחקר

המחקר בוצע בפלטפורמת הניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת הרפואה של מונגוליה הפנימית. הוחל תכנון פקטוריאלי מלא של שלושה על שלושה עם שני גורמים: פורמולציית בסיס להזנת Yin (I; שלוש רמות מינון: 0, 27, 54 g של שווה ערך לסם גולמי) ופורמולציית הגברת Yang (A; שלוש רמות מינון: 0, 8, 16 g של שווה ערך לסם גולמי), מה שהניב תשעה תאים פקטוריאליים בתוספת ארבע קבוצות ביקורת. התכנון הפקטוריאלי מוצג בטבלה 1. I2A2 מייצגת את פורמולציית ZGP המלאה במינון שווה-קליני. המרת המינונים בוצעה בשיטת שטח פני השטח של הגוף (חולדה: בן אדם, פקטור = 6.25)13.

בעלי חיים, רנדומיזציה וסמיות

מאה ושלושים חולדות נקבה מסוג Sprague-Dawley נקיות מפתוגנים ספציפיים (בגיל 6 חודשים, 20–250 g) הוקצו באמצעות טבלת מספרים אקראית שהופקה במחשב. קודי ההקצאה הוכנסו למעטפות שנחתמו באופן רצפי על ידי חוקר שלא היה מעורב בהערכת התוצאות. החולדות שוכנו בקבוצות של 3–4 פרטים לכל כלוב מאוורר תחת מחזור אור/חושך של 12 h, בטמפרטורה של 22 ± 2 oC ולחות של 50–60%, עם גישה חופשית למים, מזון סטנדרטי למכרסמים עם תכולת סידן וזרחן מתועדת, פעילות בכלוב והעשרה סביבתית. בדיקות מולקולריות, דירוג היסטולוגי, כימות תמונות ודנסיטומטריה בוצעו על ידי חוקרים שהיו עיוורים להקצאה. גודל המדגם נקבע באמצעות ניתוח עוצמה a priori, שהניב n = 10 לכל קבוצה.

מודל OVX וטיפול תרופתי

כריתה דו-צדדית של השחלות (OVX) בוצעה תחת הרדמה של isoflurane שנשאף באמצעות מאייד מדויק. ההרדמה הושרתה בריכוז של 3–4% בחמצן ונשמרה בריכוז של 1.5–2.5% באמצעות קונוס לאף. עומק הרדמה מספק אוש על ידי אובדן רפלקס נסיגת הכף ורפלקס העפעפיים, לצד נשימה יציבה. הצלחת ה-OVX הוערכה על פי היעדר מחזור בנרתיק ביום ה-5 והפחתה ב-BMD כ-12 שבועות לאחר הניתוח. לאחר תיקוף המודל, ניתן טיפול באמצעות gavage למשך 8 שבועות (1 mL/10 g/day). תמציות (Decoctions) הוכנו על ידי מיצוי רצף במים ברתיחה גולית (10 °C, reflux), בנפח של 10x למשך 2 שעות, ולאחר מכן בנפח של 8x למשך 1.5 שעות, סינון דרך ארבע שכבות של גזה רפואית, וריכוז תחת לחץ מופחת ל-0.968 g של תרופה גולמית/mL. התמצית המרוכזת נשמרה ב-4 °C ונעשה בה שימוש תוך 7 ימים מההכנה. ביקורות חיוביות היו גרנולות Gusukang (1.8 g/kg/day) ו-diethylstilbestrol (0.04 mg/kg/day). בסיום הניסוי, החולדות הורדמו עמוק ב-5% isoflurane עד לאובדן רפלקס הכף והקרנית, לאחר מכן בוצע דימום מלא (exsanguination) ופריקה צווארית. המוות אוש על ידי הפסקת דופק ונשימה. גופות ורקמות נשלחו כפסולת ביולוגית; שאריות כימיות פונו כפסולת מסוכנת; ומחטים או להבים הונחו במכלי חפצים חדים מאושרים.

מדדי תוצאה

רמות P1NP ו-CTX-1 בסרום נמדדו באמצעות sandwich ELISA (מבית Jiyinmei)14צפיפות העצם (BMD) הפמורלית כמתה באמצעות DXA. היסטולוגיה של העצם הספוגית נבחנה באמצעות צביעת המטוקסילין ואאוזין בהגדלה של 20x. ביטוי גנים נבחן באמצעות RT-qPCR תוך שימוש ב-2-ΔΔCt שיטה, בנורמליזציה ל-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH). ביטוי חלבוני הוערך באמצעות Western blot וכימות באמצעות ImageJ (ראה טבלת חומרים). המשקלים המולקולריים שנצפו ומידע מקטלוג הנוגדנים מופיעים ב- טבלה נלווית 1. Primer sequences were: EphB4 forward/reverse, 5'-CTAGACTCTTTCCTGCGGCT/GGGAACTTGTGTAGGTGGGA-3'; ephrinB2, 5'-CGGACAAGGCCTGGTACTAT/ACAGTTGAGCAGTGGGGTAT-3'; RhoA, 5'-GTTTATGTGCCCACGGTGTT/ACTATCAGGGCTGTCGATGG-3'; ALP, 5'-CGGACACAAGCATTCCCAGA/TGGTGGAGCTGAACAGGCTT-3'; GAPDH, 5'-ACAGCAACAGGGTGGTGGAC/TTTGAGGGTGCAGCGAACTT-3'.

ניתוח סטטיסטי

הנורמליות נבחנה באמצעות מבחן Shapiro-Wilk, והומוגניות השונות נבחנה באמצעות מבחן Levene לפני ביצוע ניתוח פרמטרי. נתונים מוצגים כממוצע ± SD, וכל פסי השגיאה באיורים הכמותיים מציינים SD. ניתוח שונות דו-כיווני (Two-way factorial ANOVA) הוחל על תשעת התאים הפקטוריאליים כדי להעריך את ההשפעות המרכזיות ואת האינטראקציה בין I ל-A, כאשר גודל האפקט נמדד באמצעות partial eta-squared (ηp2). השוואות זוגיות בין כל 13 הקבוצות בוצעו באמצעות ANOVA חד-כיווני עם תיקון Bonferroni. הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו בתוכנת GraphPad Prism. סמלי המובהקות מוגדרים באופן עקבי כדלקמן: *, **, ***, **** מציינים p <0.05, p <0.01, p <0.01, p <0.01 לעומת המודל; #, ##, ###, #### מציינים את אותם ספי השונות לעומת full-formula ZGP.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תיקוף המודל באמצעות ציטולוגיה נרתיקית

הצלחת ה-OVX אוששה בכל החיות שעברו כריתת שחלות, כפי שניתן לראות מהיעדר מחזורי הסטרוס תוך 5 ימים לאחר הניתוח (איור 1A), בעוד שחיות שעברו ניתוח דמה (sham) שמרו על מחזור של 4 ימים (איור 1B). לאחר 12 שבועות, בדיקת DXA הראתה BMD פמורלי נמוך יותר בקבוצת מודל ה-OVX מאשר בביקורת ה-sham (0.214 ± 0.020 לעומת 0.281 ± 0.019 mg/cm3; Bonferroni-adjusted p < 0.01), ממצא הת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

איבר האינטראקציה הפקטוריאלית תומך בקשר לא-אדיטיבי בין הרכיבים המזינים את ה-Yin והמרקיים את ה-Yang של ZGP. תוצאה זו עולה בקנה אחד עם העיקרון המסורתי של חיפוש Yang בתוך Yin, שבו רכיבים המרקיים את ה-Yang צפויים להפעיל או להגביר את הבסיס המזין את ה-Yin15. יש לפרש ממצא זה כסינרגיה פרמקולוגית ברמת הפורמולציה. הוא אינו מזהה את הרכיבים הפעילים הבודדים האחראים לאפקט.

EphB4 ו-ephrinB2 הם מתווכים סבירים מבחינה ביולוגית של צימוד בין אוסטאובלסטים לאוסטאוקלסטים3

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן למדעי הטבע של מונגוליה הפנימית (מענק מספר 2025LHMS08047), הפרויקט הכללי של האוניברסיטה לרפואה של מונגוליה הפנימית (מענק מספר YKD2025MS015), וקרן ההקמה לדוקטורט של האוניברסיטה לרפואה של מונגוליה הפנימית (מענק מספר YKD2023BSQD007). למממנים לא היה תפקיד בתכנון המחקר, באיסוף הנתונים, בניתוח, בהחלטה על הפרסום או בהכנת כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מים עם 1% אמוניהN/AN/Aתמיסת כחול לאחר דיפרנציאציה של המטוקסילין.
אלכוהול עם 1% חומצה הידרוכלוריתN/AN/Aתמיסת דיפרנציאציה לצביעת המטוקסילין.
2x qPCR MixN/AN/Aתערובת מאסטר ל-qPCR כמותי. נפח תגובה מקורי: 12.5 uL לתגובה.
תמיסת 4% פאראפורמאלדהידN/AN/Aקיבוע של דגימות פמורוס וטיביה שמאליים לניתוח היסטולוגי.
בופר טעינה 5xN/AN/Aדנטורציה של דגימות לפני אלקטרופורזה.
נוגדן ראשוני ל-ALPAffinity BiosciencesN/Aנוגדן ל-Western blot. דילול מקורי: 1:200. נדרשים RRID ומספר אצווה עבור JoVE.
זוג פריימרים ל-ALPN/AN/AmRNA של ALP נמדד באמצעות qRT-PCR, אך טבלת הפריימרים המקורית אינה מספקת את רצפי הפריימרים של ALP. נדרש אישור מהמחבר.
ריאגנט נוגדן ביוטיןSupplied with ELISA kit, JiyinmeiKit componentנוסף לבארות הדגימה במהלך ELISA.
ג'לטין מקרן של Cervus elaphus, Lu Jiao JiaoBeijing TongrentangN/Aמרכיב להגברת Yang. מינון פורמולה מלא במקור: 12 g, יחס 4. הג'לטין הומס לתוך התבשיל.
ג'לטין פלסטרון של Chinemys reevesii, Gui Ban JiaoBeijing TongrentangN/Aמרכיב להזנת Yin. מינון פורמולה מלא במקור: 12 g, יחס 4. הג'לטין הומס לתוך התבשיל.
כלורופורםN/AN/Aהפרדת פאזות במהלך מיצוי RNA.
במת קירורLeica150תמיכת קירור או קריו עבור תהליך חיתוך.
Cornus officinalis, Shan Zhu YuBeijing TongrentangN/Aמרכיב להזנת Yin. מינון פורמולה מלא במקור: 12 g, יחס 4.
Cuscuta australis, Tu Si ZiBeijing TongrentangN/Aמרכיב להגברת Yang. מינון פורמולה מלא במקור: 12 g, יחס 4.
Cyathula officinalis, Chuan Niu XiBeijing TongrentangN/Aמרכיב להזנת Yin. מינון פורמולה מלא במקור: 9 g, יחס 3.
PBS שעבר טיפול ב-DEPCN/AN/Aשטיפה של חולאי L4 עד L5 לפני הקפאה בחנקן נוזלי.
DiethylstilbestrolN/AN/Aביקורת חיובית של תרופה מערבית. מינון מקורי: 0.04 mg/kg/day, 1 mL/10 g/day. המסמך המקורי מכיל אי-עקביות במינוח הסיני שיש להאחד ל-diethylstilbestrol.
Dioscorea opposita, Huai Shan YaoBeijing TongrentangN/Aמרכיב להזנת Yin. מינון פורמולה מלא במקור: 12 g, יחס 4.
תערובת dNTPN/AN/Aכלולה בתגובת שעתוק הפוך.
ריאגנט ECL כימילומינסנסN/AN/Aריאגנט גילוי ל-Western blot.
ריאגנט כרומוגני A ל-ELISASupplied with ELISA kit, JiyinmeiKit componentריאגנט לפיתוח צבע עבור ELISA.
ריאגנט כרומוגני B ל-ELISASupplied with ELISA kit, JiyinmeiKit componentריאגנט לפיתוח צבע עבור ELISA.
תמיסת עצירה ל-ELISASupplied with ELISA kit, JiyinmeiKit componentמשת לסיום תגובת הצבע ב-ELISA.
ריאגנט ELISA מסומן באנזיםSupplied with ELISA kit, JiyinmeiKit componentנוסף לבארות שאינן ריקות ב-ELISA.
נוגדן ראשוני ל-EphB4ProteintechN/Aנוגדן ל-Western blot. דילול מקורי: 1:20. נדרשים RRID ומספר אצווה עבור JoVE.
זוג פריימרים ל-EphB4N/APCR product 232 bpForward CTAGACTCTTTCCTGCGGCT; Reverse GGGAACTTGTGTAGGTGGGA. טעות דפוס בטבלה המקורית: Rat RphB4 צריך להיות Rat EphB4.
נוגדן ראשוני ל-ephrinB2Affinity BiosciencesN/Aנוגדן ל-Western blot. דילול מקורי: 1:20. נדרשים RRID ומספר אצווה עבור JoVE.
זוג פריימרים ל-ephrinB2N/APCR product 172 bpForward CGGACAAGGCCTGGTACTAT; Reverse ACAGTTGAGCAGTGGGGTAT.
אתנול, מוחלט ובדרגות 95%, 85%, 75%N/AN/Aדהידרטציה ורהידרטציה מדורגת במהלך צביעת המטוקסיליןת ואאוזין.
חולדות Sprague-Dawley נקבותBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.Animal certificate and license number not supplied in source articleנקיות מפתוגנים ספציפיים, בנות 6 חודשים, נקבות בריאות שאינן בהיריון. המקור בסינית מציין 230 עד 270 g; טיוטה אנגלית מוקדמת מציינת 20 עד 250 g. יש לאמת את הטווח הסופי לפני ההגשה.
נוגדן ראשוני ל-GAPDHServicebioN/Aנוגדן ביקורת טעינה. דילול מקורי: 1:20. נדרשים RRID ומספר אצווה עבור JoVE.
זוג פריימרים ל-GAPDHN/APCR product 253 bpForward ACAGCAACAGGGTGGTGGAC; Reverse TTTGAGGGTGCAGCGAACTT.
תוכנת GraphPad PrismGraphPad SoftwareVersion 9.4.1; RRID:SCR_02798ניתוח סטטיסטי וגרפים. נורמליות, הומוגניות של שונות, ANOVA, תיקון בונפרוני וגודלי אפקט צריכים להישמר בקובצי הפלט.
גרנולות GusukangLiaoning Wohua Kangchen Pharmaceutical Co., Ltd.N/Aביקורת חיובית של רפואה סינית מסורתית. מינון מקורי: 1.8 g/kg/day או 0.5 mL/10 g/day.
תמיסת צביעת המטוקסיליןZhuhai Beisuo Biotechnology Co., Ltd.N/Aצביעה היסטולוגית. הפרוטוקול המקורי השתמש בצביעת המטוקסילין למשך 5 min.
מיקרוצנטריפוגה במהירות גבוההN/ATG16Wצנטריפוגציה עבור נהלי סרום וחומצות גרעיניות.
סורק DXA של HologicHologicN/Aניתוח צפיפות מינרליים של העצם. המקור מדווח על סריקת פמורוס in vivo ו-ex vivo.
תוכנת ImageJNational Institutes of HealthRRID:SCR_03070כימות דנסיטומטרי עבור פסי Western blot. גרסה לא סופקה במאמר המקורי.
כיריים אינדוקציהMideaN/Aמופיע בטבלת המכשירים של המקור הסיני.
איסופלורןN/AN/Aהרדמה עבור כריתת שחלות דו-צדדית ומיקום ל-DXA. הפרוטוקול המעודכן צריך לציין השראה, תחזוקה, נתיב וקריטריונים לעומק ההרדמה.
איזופרופנולN/AN/Aהשקעת RNA במהלך מיצוי.
חנקן נוזליN/AN/Aהקפאה מהירה של דגימות חולאי מותניים.
Lycium barbarum, Gou Qi ZiBeijing TongrentangN/Aמרכיב להזנת Yin. מינון פורמולה מלא במקור: 12 g, יחס 4.
קורא מיקרו-פלטהN/AAMR-10גילוי בולענות ELISA ב-450 nm.
שוטף מיקרו-פלטותN/AAPW-20שלב שטיפה עבור פלטות ELISA.
MMLV reverse transcriptaseN/AN/Aאנזים לשעתוק הפוך.
דבק הרכבה ניטרליSinopharm GroupN/Aתווך הרכבה עבור סליידים שצבעו בהמטוקסילין ואאוזין.
סליין נורמליN/AN/Aחומר נשאי להזנה ב-gavage עבור קבוצת ביקורת ריקה, קבוצת Sham וקבוצת מודל.
פריימר Oligo(dT)18N/AN/Aמש לשעתוק הפוך.
פניציליןN/AN/Aמניעת זיהומים לאחר ניתוח. מינון מקורי: 20,0 U/kg תוך-שרירית למשך 3 ימים.
סיר לחץXinfeiN/Aמופיע בטבלת המכשירים של המקור הסיני.
מעכב פרוטאזN/AN/Aנוסף במהלך מיצוי חלבונים.
בופר ליזיס של חלבוניםN/AN/Aמיצוי חלבונים מרקמת עצם עבור Western blotting.
ממברנת PVDFN/AN/Aממברנת העברה ל-Western blot המופעלת על ידי מתנול.
מכשיר qRT-PCRN/AN/APCR שעתוק הפוך כמותי עבור EphB4, ephrinB2, RhoA, ALP ו-GAPDH.
ערכת ELISA ל-Rat CTX-1JiyinmeiJYM0026RaSandwich ELISA עבור C-terminal telopeptide של קולגן סוג 1 בסרום. גילוי ב-450 nm.
ערכת ELISA ל-Rat P1NPJiyinmeiJYM030RaSandwich ELISA עבור procollagen type 1 N-terminal propeptide בסרום. גילוי ב-450 nm.
Rehmannia glutinosa, Shu Di HuangBeijing TongrentangN/Aמרכיב להזנת Yin. מינון פורמולה מלא במקור: 24 g, יחס 8.
נוגדן ראשוני ל-RhoAProteintechN/Aנוגדן ל-Western blot. דילול מקורי: 1:20. נדרשים RRID ומספר אצווה עבור JoVE.
זוג פריימרים ל-RhoAN/APCR product 177 bpForward GTTTATGTGCCCACGGTGTT; Reverse ACTATCAGGGCTGTCGATGG. המינוח אוחד מ-RHoA ל-RhoA.
מעכב RNaseN/AN/Aכלול בתגובת שעתוק הפוך.
מים נקיים מ-RNaseN/AN/Aהמסה של RNA לאחר ייבוש.
מיקרוטום סיבוביLeica245חיתוך היסטולוגי.
נוגדן משני ל-Western blottingN/AN/Aדילול מקורי: 1:150. תגובתיות המארח ו-RRID נדרשים עבור JoVE.
אבקת חלב דל שומן, 5%N/AN/Aריאגנט חסימה ל-Western blotting, בטמפרטורת החדר למשך 2 h.
מכשיר למריחה וייבוש סליידיםJinhua YidiN/Aהכנת סליידים להיסטולוגיה.
סודיום פנטובארביטול, 3%N/AN/Aהרדמה סופית לפני איסוף דם מאורטה בטנית במסמך המקור הסיני. יש לוודא את הליך ההמתה הסופי ואת שיטת האישור.
מדלל דגימות סטנדרטיSupplied with ELISA kit, JiyinmeiKit componentמש לדילול סטנדרטים סדרתי בנהל ה-ELISA.
בופר TBSTN/AN/Aבופר שטיפה ל-Western blotting.
אינקובטור עם ניעור תרמוסטטיShanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.N/Aאינקובציה וניעור במעבדה.
ריאגנט TRIzolN/AN/Aמיצוי RNA מ-10 mg רקמת עצם.
מיקרוסקופ אנכיLeicaDM10דימוי היסטולוגי של המטוקסילין ואאוזין בהגדלה של 20x.
אינקובטור תרמוסטטי עם מעטפת מיםN/AGNP-9080אינקובציה עבור נהלי בדיקה.
תמיסת צביעת אאוזין מסיסה במיםZhuhai Beisuo Biotechnology Co., Ltd.N/Aצביעת נגד היסטולוגית. הפרוטוקול המקורי השתמש בצביעת אאוזין למשך 3 min.
מערכת אלקטרופורזה ל-Western blotN/AN/Aהפרדת חלבונים. אלקטרופורזה מקורית: 80 V בתחילה, לאחר מכן 120 V.
מערכת דימוי ל-Western blotN/AN/Aדימוי ממברנה כימילומינסנטי. ממברנות לא חתוכות נדרשות להגשה.
מערכת העברה ל-Western blotN/AN/Aהעברת חלבונים לממברנת PVDF. תנאי העברה מקוריים: 40 mA, 90 min, אמבט קרח.
קסילןN/AN/Aהסרת שעווה והבהרה של רקמה במהלך היסטולוגיה.
עשבי מרכיבי גלולת ZuoguiBeijing TongrentangN/Aפורמולה של שמונה עשבים: Rehmannia glutinosa, Dioscorea opposita, Cornus officinalis, Lycium barbarum, ג'לטין פלסטרון של Chinemys reevesii, Cyathula officinalis, Cuscuta australis, וג'לטין מקרן של Cervus elaphus.

מקורות

  1. Compston JE, McClung MR, Leslie WD. Osteoporosis. Lancet. 2019;393(10169):364-376. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(18)32112-3
  2. Shen Y, Huang X, Wu J, et al. The global burden of osteoporosis, low bone mass, and its related fracture in 204 countries and territories, 1990-2019. Front Endocrinol (Lausanne). 2022;13:882241. https://doi.org/10.3389/fendo.2022.882241
  3. Zhao C, Irie N, Takada Y, et al. Bidirectional ephrinB2-EphB4 signaling controls bone homeostasis. Cell Metab. 2006;4(2):111-121. https://doi.org/10.1016/j.cmet.2006.05.012
  4. Wu Z, Li W, Jiang K, et al. Regulation of bone homeostasis: signaling pathways and therapeutic targets. MedComm (2020). 2024;5(8):e657. https://doi.org/10.1002/mco2.657
  5. Reid IR, Billington EO. Drug therapy for osteoporosis in older adults. Lancet. 2022;399(10329):1080-1092. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)02646-5
  6. Li J, Sun K, Qi B, et al. An evaluation of the effects and safety of Zuogui pill for treating osteoporosis: current evidence for an ancient Chinese herbal formula. Phytother Res. 2021;35(4):1754-1767. https://doi.org/10.1002/ptr.6908
  7. Shi T, Liu T, Kou Y, et al. The synergistic effect of Zuogui Pill and eldecalcitol on improving bone mass and osteogenesis in type 2 diabetic osteoporosis. Medicina (Kaunas). 2023;59(8):1414. https://doi.org/10.3390/medicina59081414
  8. Yang S, Zhang B, Wang YG, et al. Zuo Gui Wan promotes osteogenesis via PI3K/AKT signaling pathway: network pharmacology analysis and experimental validation. Curr Med Sci. 2023;43(5):1051-1060. https://doi.org/10.1007/s11596-023-2782-x
  9. Qiu J, Zhu Y, Xing J, Wang L, Zhang J, Yin H. Comparative pharmacokinetic study of 5 active ingredients after oral administration of Zuogui Pill in osteoporotic rats with different syndrome types. Int J Anal Chem. 2023;2023:1473878. https://doi.org/10.1155/2023/1473878
  10. Gong W, Zhang N, Cheng G, et al. Rehmannia glutinosa Libosch extracts prevent bone loss and architectural deterioration and enhance osteoblastic bone formation by regulating the IGF-1/PI3K/mTOR pathway in streptozotocin-induced diabetic rats. Int J Mol Sci. 2019;20(16):3964. https://doi.org/10.3390/ijms20163964
  11. Wang K, Kou Y, Rong X, Wei L, Li J, Liu H, Li M, Song H. ED-71 improves bone mass in ovariectomized rats by inhibiting osteoclastogenesis through EphrinB2-EphB4-RANKL/OPG axis. Drug Des Devel Ther. 2024;18:1515-1528. https://doi.org/10.2147/DDDT.S454116
  12. Percie du Sert N, Hurst V, Ahluwalia A, et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.3000410
  13. Reagan-Shaw S, Nihal M, Ahmad N. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB J. 2008;22(3):659-661. https://doi.org/10.1096/fj.07-9574LSF
  14. Eastell R, Szulc P. Use of bone turnover markers in postmenopausal osteoporosis. Lancet Diabetes Endocrinol. 2017;5(11):908-923. https://doi.org/10.1016/S2213-8587(17)30184-5
  15. Yao ZY, Fan SY, Song ZF, Li ZC. Network pharmacology-based and molecular docking-based analysis of You-Gui-Yin for the treatment of osteonecrosis of the femoral head. Medicine (Baltimore). 2023;102(43):e35581. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000035581
  16. Wang J, Xu C, Zhang J, Bao Y, Tang Y, Lv X, Ma B, Wu X, Mao G. RhoA promotes osteoclastogenesis and regulates bone remodeling through mTOR-NFATc1 signaling. Mol Med. 2023;29(1):49. https://doi.org/10.1186/s10020-023-00638-1
  17. Noviana E, Indrayanto G, Rohman A. Advances in fingerprint analysis for standardization and quality control of herbal medicines. Front Pharmacol. 2022;13:853023. https://doi.org/10.3389/fphar.2022.853023
  18. Fischer V, Haffner-Luntzer M. Interaction between bone and immune cells: implications for postmenopausal osteoporosis. Semin Cell Dev Biol. 2022;123:14-21. https://doi.org/10.1016/j.semcdb.2021.05.014
  19. Komori T. Animal models for osteoporosis. Eur J Pharmacol. 2015;759:287-294. https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2015.03.028
  20. Dempster DW, Compston JE, Drezner MK, et al. Standardized nomenclature, symbols, and units for bone histomorphometry: a 2012 update of the report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee. J Bone Miner Res. 2013;28(1):2-17. https://doi.org/10.1002/jbmr.1805

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעברצפיפות מינרלית של העצםנתיב EphB4אינטראקציית Yin Yangרנטגן באנרגיה כפולה (DXA)Western BlottingRT-PCR
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.