פרוטוקול זה מתאר מערכת כלוב מותאמת אישית לאיסוף דגימות צואה וולונטרי, ידידותי לרווחה, סימולטני ואישי מעכברים שמאוחסנים בקבוצה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
פרוטוקול זה מתאר מערכת כלוב מותאמת אישית לאיסוף דגימות צואה וולונטרי, ידידותי לרווחה, סימולטני ואישי מעכברים שמאוחסנים בקבוצה.
מדידה אמינה של מטבוליטים של קורטיקוסטרון בצואה דורשת דגימות צואה שניתן להקצות לבעלי חיים בודדים ולאסוף בתוך חלון זמן מוגדר. זה מאתגר בעכברים הקבוצתיים, שבהם דגימות הכלוב המאוחדות אינן מאפשרות הקצאה אישית, והפרדה זמנית עלולה להפריע לרווחת בעלי החיים ולתוצאות המחקר. מטרת הפרוטוקול היא להציג מערכת כלוב פשוטה וזולה שמאפשרת איסוף דגימות צואה וולונטרי, סימולטני ואישי מעכברים שמאוחסנים בקבוצה. המערכת מורכבת מכלוב ביתי מפוליקרבונט עם קצה חוט, המחובר לשלושה קופסאות איסוף נפרדות. לאחר ההרגל והאימון, העכברים נכנסים מרצון לקופסאות כדי לקבל פרס מזון קטן. ניתן לסגור את הדלתות ללא מרדף, טיפול או העברה בכפייה. כדורי צואה נאספים מכל קופסה בנפרד, מה שמאפשר להקצות דגימות לבעלי חיים בודדים תוך שמירה על דיור חברתי מחוץ לתקופת הדגימה. פרוטוקול זה תומך בדגימה אורכת לא פולשנית ומתאים למחקרים המודדים מטבוליטים של קורטיקוסטרון בצואה או סמנים ביולוגיים אחרים בצואה. העיצוב קל לבנייה מחומר כלוב סטנדרטי וזכוכית אקרילית, ניתן לפרק אותו לניקוי, ומאפשר לדגום מספר כלובים במקביל. על ידי הפחתת הפרעות הקשורות לטיפול ושיפור הסטנדרטיזציה של חלון הדגימה, השיטה מספקת שיפור מעשי לניטור אנדוקריני בעכברים הקבוצתיים.
אתגר מרכזי בהערכת ריכוזי הקורטיקוסטרון בפלזמה הוא שתהליך הדגימה עצמו עלול לגרום לעלייה חריפה בקורטיקוסטרון, ובכך לבלבל את המדידה ואולי להשפיע על פרשנות תוצאות המחקר 1,2,3. מדידת מטבוליטים של קורטיקוסטרון בצואה (FCMs) מספקת אלטרנטיבה לא פולשנית, שכן ריכוזי FCM משקפים רמות גלוקוקורטיקואידים בסירקולציה מספר שעות לפני הדגימה, בהתאם למין, זן, מין וזמן מעבר במעי 4,5. עם זאת, ניתוח FCM אמין בעכברים שהובאו בקבוצה נותר מאתגר. דגימות צואה מאוחדות שנאספו מהכלוב הביתי אינן ניתנות לשיוך לבעלי חיים בודדים ועלולות להראות שונות גבוהה בשל הבדלים בין-אישיים בהפרשת גלוקוקורטיקואידים ואי-ודאות בחלון הדגימה המדויק. הפרדת בעלי חיים לפרקי זמן ממושכים עלולה להפריע למטרות המחקר, בעוד שהפרדה קצרה לאיסוף דגימות בודדת היא דורשת עבודה רבה, מגבילה את קצב התפוקה, ועלולה לגרום ללחץ2.
כדי לאפשר איסוף דגימות צואה בודדות מעכברים שהוחזקו בקבוצה עם טיפול מינימלי, פותח כלוב איסוף צואה מותאם אישית (איור 1A-E). העיצוב הותאם מכלוב איסוף צואה שתואר קודם לכן לעכברים קוצניים6 והותאם לשימוש בעכברי מעבדה. המערכת מורכבת מכלוב פוליקרבונט סטנדרטי מסוג III המחובר לשלושה תיבות איסוף נפרדות, אליהן החיות יכולות לגשת מרצון ולסגור אותן באמצעות דלתות הזזה. מערכת זו מאפשרת איסוף דגימות צואה מעכברים בודדים ללא טיפול ישיר במהלך תקופת הדגימה ומאפשרת דגימה סימולטנית של מספר בעלי חיים. לכן, הכלוב מספק גישה מעשית לדגימת FCM לא פולשנית ומיוחסת באופן אישי בעכברים הקבוצתיים.
הפרוטוקול הבא מתאר מערכת דגימת צואה המאפשרת איסוף וזיהוי דגימות צואה מעכברים בודדים תוך שמירה על סביבה קבוצתית, תוך שימוש בכלובים מותאמים אישית לדגימת צואה ללא מגע.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ועדת האתיקה האחראית על בעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית של וינה התייעצה לפני ביצוע המחקר והוסבר כי אין צורך ברישיון פורמלי לניסויים בבעלי חיים; לכן, אין אישור או מספר פרוטוקול זמין. המחקר כלל רק שיטות רבייה וגידול מבוססות, יחד עם איסוף דגימות צואה לא פולשניות. לא בוצעו הליכים פולשניים. בהתאם להנחיה 2010/63/האיחוד האירופי, העומס הצפוי על בעלי החיים הוערך כמתחת לסף הכאב, הסבל, המצוקה או הנזק המתמשך השווה או גבוה יותר מזה שנגרם מהחדרת מחט בהתאם לפרקטיקה וטרינרית טובה. כל בעלי החיים אוחסנו וטופלו בהתאם לסטנדרטים מוסדיים לרווחת בעלי חיים.
1. בניית הכלובים (ראו רשימת חומרים)
2. הכנת בעלי חיים ומגורים
3. הרגל ואילוף בעלי החיים
הערה: הכלוב המושלם מורכב מכלוב ביתי, PTIII, שמחובר לכלוב דגימה עם שלוש תיבות איסוף נפרדות, PTII. הכלובים הביתיים יכולים לשמש כמו כלובים רגילים, עם מצעים, העשרת כלוב, מכסה מתכת ללא אטמים חיצוניים, ואספקת מזון ומים. המערכת ניתנת לפירוק לכביסה וניתן להשתמש בה רק במהלך שבועות הדגימה. במהלך שבועות ללא דגימה, ניתן לאחסן בעלי חיים בכלובים סטנדרטיים מסוג PTIII.
4. איסוף דגימות צואה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מטבוליטים של קורטיקוסטרון בצואה (FCMs) נמדדו בהצלחה מדגימות שנאספו עם כלובי דגימות צואה מותאמים אישית במחקר אורך שהשווה עכברים שגדלו באופן קבוע או לסירוגין. ניתוח ה-FCM המייצג כלל 30 בעלי חיים: קבוצת קביעת קבע, n = 15 בעלי חיים ב-5 כלובים; קבוצה שגודלה לסירוגין, n = 10 בעלי חיים ב-5 כלובים, כאשר 5 זכרים שוהים לבד למעט 3 אירועי רבייה, בהם הם שוכנו יחד עם הנקבות. הדגימות נאספו ב-19 נקודות זמן דו-שבועיות בימי החלפת הכלוב וכן בסופי שבוע. הזמן הממוצע עד שרוב בעלי החיים נכנסו לקופסה היה 7.5 דק...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול זה מתאר מערכת כלוב פשוטה לאיסוף דגימות צואה שניתן להקציא בנפרד מעכברים הקבוצתיים. היתרון המרכזי של השיטה הוא שהיא משלבת ייחוס דגימה בודדת עם שמירה על היבטים מרכזיים של דיור חברתי, במיוחד מגע חזותי וריחני עם בני הכלוב. זה רלוונטי כי דיור קבוצתי נדרש לעיתים קרובות לרווחת בעלי חיים ויכול להיות גם חלק מתכנון הניסוי10. בניגוד לדגימה משותפת בכלוב ביתי, המערכת מאפשרת להקצות ערכי FCM לבעלי חיים בודדים, תוך הימנעות משהייה ממושכת של מגורים בודדים לפני או במהלך איסו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
אנו מודים לפרופ' פולאק על תמיכתו בפרסום מאמר זה.
קתרינה טילמן מודה בהכרת תודה על תמיכתו של סבה המנוח, ברונו ווכנר, שבגיל 99 תרם לתכנון מערכת הכלובים, הפך את סדנת העץ שלו לזמינה וסייע בשיוף ובבנייה. ההתלהבות שלו ממלאכת יד ובנייה הייתה מקור השראה מתמשך, והיא זכורה כאן בהכרת תודה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Drill bit 5 mm | Craftomat | 22380487 | 5mm diameter; Quantity 1 |
| Drill bits 60 mm | Bosch | 32064647 | 60 mm diameter; Quantity 1 |
| Drill bits 7 mm | Craftomat | 22380520 | 7 mm diameter; Quantity 1 |
| Drilling machine | Makita | 25730054 | Standard handheld or bench drill; Quantity 1 |
| Hot glue gun | Einhell | 29051207 | For cage assembly; Quantity 1 |
| Hot glue sticks | Einhell | 29049664 | Compatible with hot glue gun; Quantity 5-10 |
| Makrolon cage | Animalab | 31200129 | Standard Type II cage; Quantity 1 |
| Makrolon cage | Animalab | 31200256 | Standard Type III cage; Quantity 1 |
| Plexiglass / acrylic glass | Bauhaus | 29122352 | Approx. 0.25 m² total; 5 mm thickness; Quantity 2DIN A3 sheets |
| Saw or milling device | Scheppach | 32079641 | Small band saw, jigsaw, or CNC mill; Quantity 1 |
| Threaded screws | Profi Depot | 10807533 | 20 mm × 3 mm; Quantity 4 |
| Wooden chopsticks / rods | Ikea | 903.429.71 | Round wooden rods; Quantity 3 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה פורסם
הסרטון יגיע בקרוב