מאמר מחקר

הערכת תפקידו של miR-93-5p בילדים שנדבקו ב-Mycoplasma pneumoniae עם פגיעה במערכת העיכול

50 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/72281

⸱

9 באוקטובר 2026

 ,  ,  , 
1Child Health Department, Department of Pediatrics, Shounan Community Health Service, 2Longyan First Hospital, 3Department of Pediatrics, Affiliated Hospital of Yangzhou University, 4Department of Pediatrics, The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

במאמר זה

סיכום

MiR-93-5p פוגע באופן ישיר בקולטן דמוי Toll 4 (TLR4) בדלקת ריאות הנגרמת על ידי Mycoplasma pneumoniae בילדים (MPP). ירידה בביטויו עשויה לתרום להתקדמות המחלה ולפגיעה נלווית במערכת העיכול. ממצאים אלו מצביעים על כך ש-miR-93-5p עשוי לשמש כסמן ביולוגי אבחנתי פוטנציאלי ל-MPP ול-MPP עם פגיעה במערכת העיכול.

תקציר

MiR-93-5p מעורב בוויסות של פגיעה ריאתית חריפה, אך תפקידו וערכו האבחנתי באוכלוסיית ילדים Mycoplasma pneumoniae הקשר בין דלקת ריאות שאיפתית (MPP) לפגיעה במערכת העיכול נותר לא ברור. מחקר זה העריך את תפקידו של miR-93-5p כסמן ביולוגי אבחנתי פוטנציאלי עבור MPP וסיבוכים עיכוליים נלווים בילדים. דגימות קליניות נאספו מבית חולים מילדים הסובלים מ-MPP וממקבוצת ביקורת בריאה. ביטויו של miR-93-5p נמדד באמצעות PCR כמותי עם שעתוק הפוך (RT-qPCR). Mycoplasma pneumoniae תאי A549 שהודאו ב-(MP) שימשו להקמת מודל תאי של MPP כדי להעריך שינויים בחיוניות התאים ובציטוקינים פרו-דלקתיים. השפעת miR-93-5p על קולטן דמוי-טול 4 (TLR4) נבחנה באמצעות בדיקת לוסיפראז (luciferase reporter assay). הביצועים האבחנתיים הוערכו באמצעות ניתוח עקומת מאפייני operating characteristic (ROC). רמות miR-93-5p היו נמוכות באופן מובהק בחולים עם MPP בהשוואה לקבוצות ביקורת בריאות (P < (0.001) ופחתו עוד יותר בחולים עם MPP עם פגיעה במערכת העיכול בהשוואה לאלו עם MPP בלבד. זיהום ב-MP הפחית את חיוניות התאים והגביר את IL-6 ו-TNF-α רמות, בעוד שבטא-ביטוי יתר של miR-93-5p החליש השפעות אלו. ביטוי TLR4 עלה בעקבות זיהום ב-MP ונשלט באופן שלילי על ידי miR-93-5p. מבחינה קלינית, פגיעה במערכת העיכול בחולים עם MPP הייתה קשורה לרמות נמוכות יותר של miR-93-5p. ניתוחי עקומות ROC הראו ביצועים אבחנתיים חיוביים להבחנה בין חולים עם MPP לבקרות בריאות, ובין חולים עם MPP עם פגיעה במערכת העיכול לאלה עם MPP בלבד. miR-93-5p פועל כמטרה ישירה של TLR4 ב-MP פדיאטרי, והדריסה (downregulation) שלו עשויה לתרום להתקדמות המחלה ולפגיעה נלווית במערכת העיכול. ממצאים אלו מצביעים על כך ש-miR-93-5p עשוי לשמש כביומארקר אבחנתי פוטנציאלי ל-MPP ול-MPP עם פגיעה במערכת העיכול.

מבוא

Mycoplasma pneumoniae (MP) הוא פתוגן שכיח האחראי לדלקת ריאות בילדים1, ומוביל לעיתים לתחלואה נשימתית משמעותית ברחבי העולם. למרות ש-MP גורם בעיקר לזיהום ריאתי, הוא עלול לגרום גם לסיבוכים חוץ-ריאתיים המערבים מערכות איברים מרובות2. במהלך זיהום ב-M. pneumoniae, התסמינים הגסטרו-אינטסטינליים המדווחים ביותר כוללים בחילה, הקאות, שלשולים וכאבי בטן3. מגוון של מצבים ומגממאות גסטרו-אינטסטינליים זוהו גם כחלק ממחלות חוץ-ריאתיות הקשורות ל- M. pneumoniae (MPEPDs)2. מטופלים פדיאטריים עם M. pneumoniae pneumonia (MPP) המלווה בפגיעה במערכת העיכול מציבים אתגרים קליניים שעלולים להחמיר את חומרת המחלה ולסבך את הטיפול4. ראיות חדשות מצביעות על קשר בין זיהום ריאתי לבין תפקוד לקוי של המעיים, אשר עשוי להוות את הבסיס לקשר זה5,6. הפרה של התגובות החיסוניות במהלך זיהום MP עשויה להיות קשורה אף היא לפגיעה במערכת העיכול7.

למרות ההתקדמות בשיטות האבחון8, זיהוי מוקדם ומדויק של MPP נותר מאתגר בשל ביטויים קליניים החופפים לזיהומים נשימתיים אחרים ומעורבות חוץ-ריאתית משתנה9. הריאות והמעי הם מרכיבים מרכזיים של מערכת החיסון הרירית המשותפת, ואיברים אלו יכולים להשפיע זה על תפקודיו של זה, כפי שבא לידי ביטוי בהפרעות במעי במהלך מחלת ריאות ובהשפעות הדדיות, תופעה המכונה lung-gut crosstalk10. יתרה מכך, הטיפול הסיעודי הפדיאטרי מתמקד בעיקר בניהול התסמינים הנשימתיים11, בעוד שביטויים גסטרו-אינטסטינליים עשויים שלא להיות מזוהים כראוי או שיוייכו לתופעות לוואי של הטיפול. פער זה מדגיש את הצורך בהערכה מקיפה המשלבת בחינה ריאתית וגסטרו-אינטסטינלית כדי למטב את ההתערבויות הסיעודיות התומכות12. מחקרים מולקולריים אחרונים הדגישו רגולטורים של מסלולי איתות דלקתיים המעורבים הן בפתולוגיה של הריאות והן בדלקת של המעי ב-MPP12,13.

MiR-93-5p היה מעורב בפתוגנזה של פגיעה ריאתית חריפה, שבה ביטוי מופחת שלו נמצא במתאם עם תפקוד ריאתי לקוי ותגובות דלקתיות מוחמרות14,15. על בסיס ממצאים אלו, הועלתה ההשערה כי miR-93-5p מופחת באופן דומה בסרום של ילדים עם MPP. ניתוח ביו-אינפורמטי המשתמש במאגר הנתונים TargetScan זיהה את Toll-like receptor 4 (TLR4) כמטרה ישירה פוטנציאלית של miR-93-5p. דווח כי TLR4 ממלא תפקיד חשוב בוויסות ציר הריאה-מעי16,17, ולכן נחשב כבעל קשר פוטנציאלי לסיבוכים במערכת העיכול ב-MPP. בהתאם לכך, מחקר זה בחן את המעורבות של miR-93-5p במטופלים פדיאטריים עם MPP המלווה בפגיעה במערכת העיכול.

פרוטוקול

מחקר זה נסקר ואושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים המסונף לאוניברסיטת Yangzhou (מספר אישור 2023-YKL01-(16); 17 בינואר, 2023). דגימות דם ורידי פריפריאלי נאספו מכל משתתף לצורך בדיקות מעבדה רלוונטיות. לפני ההשתתפות, התקבלה הסכמה מדעת מהאפוטרופוסים החוקיים של כל המשתתפים. الريאגנטים, הציוד והכלים ששימשו בפרוטוקול זה מפורטים ב- טבלת חומרים.

1. איסוף דגימות קליניות

סך הכל 108 ילדים בגילאי 2–14 גויסו למחקר בבית החולים המסונף לאוניברסיטת Yangzhou בין פברואר 2023 לדצמבר 2024. כל 108 הילדים אובחנו עם MPP, דבר שאושר באמצעות דימות חזה ובדיקת polymerase chain reaction (PCR) לזיהוי MP DNA בדגימות מפרונקסופרינגאליות. MP DNA במטבחי אף ולוע נבדק באמצעות quantitative real-time PCR המכוון לגן ה-P1 adhesin הספציפי ל-MP.

המטופלים סווגו לפי מצב המחלה לשתי קבוצות: MPP ללא DSI (n = 60) ו-MPP עם DSI (n = 48). DSI הוגדר על סמך נוכחות של לפחות תסמין גסטרואינטסטינלי אחד, כולל שלשולים (≥3 צאאות רכות או מימי ליום למשך >24 שעות), בחילות, הקאות, או כאב בטני מתמשך עם או ללא רגישות בריבונד (rebound tenderness), בליווי לפחות פרמטר מעבדה חריג אחד ו/או ממצא מאשר של דימות בטנית. פרמטרי מעבדה חריגים כללו רמות גבוהות של טרנסאמינזות בנסיוב, עמילאז או ליפאז, ו/או עלייה בסממני חדירות מעיים, כגון D-lactate ואנדוטוקסין. ממצאי דימות בטנית מאשרים כללו עיבוי של דופן המעי, קשריים לימפטיים מזוכיליים מוגדלים, או תסריס פריטונאלי שנזוהו באמצעות אולטרסאונד או טומוגרפיה ממוחשבת. בנוסף, 60 ילדים בריאים שעברו בדיקות שגרתיות שימשו כביקורת.

  1. קריטריוני הכללה
    חולים שהפגינו תסמינים גסטרו-אינטסטינליים יחד עם חריגות בממצאים מעבדתיים או בדיקות דימוי סווגו לקבוצת ה-DSI.
  2. קריטריוני החרגה
    קריטריוני ההחרגה כללו דלקת ריאות ויראלית או בקטריאלית, שחפת, היסטוריה של אלרגיה לתרופות במחקר, הפרעות חיסוניות, תת-תזונה, תפקוד לקוי של הכליות, מומים גסטרו-אינטסטינליים וטיפול קודם באנטיביוטיקה לפני האשפוז.

2. תרבית תאים ומודל MPP

Mycoplasma pneumoniae זן סטנדרטי ATCC 15531 גודל במצע PPLO broth. תאי אפיתל אלבולריים אנושיים A549 גודלו במצע RPMI-1640 המכיל 10% fetal bovine serum בתנאים לחים ב-37 °C עם 5% CO₂.

כדי להקים מודל in vitro של MPP, תאי A549 הוחדרו התליות של M. pneumoniae בריבוי הדבקה (MOI) של 1:10018. לאחר ההחדרה, חיידקים שלא נקשרו הוסרו על ידי החלפת מצע התרבית. יעילות ההחדרה אוששה באמצעות זיהוי DNA של MP בנוזל העליון של התרבית לאחר ההחדרה באמצעות qPCR.

3. בניית פלסמיד והטרנספקציה

מימיקים (mimics) של MiR-93-5p, פלסמידים לביטוי יתר של TLR4 (oe-TLR4), והביקרות השליליות המתאימות להם סונתזו באופן מסחרי. תאי A549 שהודבקו ב-MP הועברו טרנספקציה באמצעות ריאגנט טרנספקציה מבוסס ליפידים. יעילות הטרנספקציה נבחנה 48 h לאחר הטרנספקציה באמצעות RT-qPCR (PCR כמותי עם שעתוק הפוך).

4. ניתוח RT-qPCR

RNA כולל הוצא מתוך תאי A549 שנאספו בסיום הניסויים. התאים עברו ליזיס והומוגניזציה באמצעות תמיסת סליין בבופר פוספט (PBS). RNA כולל טוהר באמצעות ריאגנט להפקת RNA מבוסס פנול. ערכה לתעתוק הפוך שימשה לתעתוק הפוך של miR-93-5p, בעוד ש-DNA משלים (cDNA) לצורך ניתוח mRNA סונתז באמצעות ריאגנט לתעתוק הפוך הזמין מסחרית. ניתוח RT-qPCR בוצע באמצעות כימיית SYBR Green.

5. בדיקת MTT

תאי A549 שעברו טרנספקציה מכל קבוצת ניסוי נאספו ונזרעו לתוך פלטות 96-בארים בצפיפות של 2 × 103 תאים לבאר. לאחר מכן, הוספו 20 µL של ריאגנט methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide (MTT) לכל באר. בעקבות דגירה נוספת של 2 h ב-37 °C, הוסרו התלויות בזהירות. גבישי הפורמזאן שנוצרו על ידי תאים פעילים מטבולית הומסו בהתאם להוראות הבדיקה. חיוניות התאים נקבעה באופן עקיף על ידי מדידת צפיפות אופטית (OD) באורך גל של 490 nm באמצעות קורא מיקרופלטות.

6. בדיקת ELISA (ספיחה חיסונית מקושרת לאנזים)

ערכות מסחריות של בדיקת ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) שימשו למדידת רמות של אינטרלוקין-6 (IL-6) וגורם נמק גידולי-α (TNF-α). הבדיקות בוצעו בהתאם להוראות היצרן. המדידות בוצעו בשלוש חזרות בכל אחת משתי חזרות ניסיוניות בלתי תלויות כדי להבטיח דיוק ו reproducibility.

7. בדיקת דואל-לוסיפראז רפורטר (Dual-luciferase reporter assay)

אתרי קישור של miR-93-5p בתוך האזור הבלתי מתורגם (UTR) של ה-3′ של TLR4 נחזו באמצעות מאגר הנתונים TargetScan. מקטעים המכילים את הרצפים מסוג wild-type (WT) או רצפים מוטגניים (MUT) שובטו לתוך וקטור דשיין של לוציפראז. תאי A549 עברו טרנספקציה משותפת עם 500 ng של מבנה ה-WT או ה-MUT, יחד עם miR-93-5p mimics או ביקורות, באמצעות ריאגנט טרנספקציה מבוסס ליפידים. לאחר 48 h, נמדדה פעילות לוציפראז באמצעות בדיקת דשיין לוציפראז כפולה (dual-luciferase reporter assay). פעילות לוציפראז של גחליליות (Firefly) נורמלה לפעילות לוציפראז של Renilla כדי לתקן עבור יעילות הטרנספקציה.

8. בדיקת Western blotting

עבור Western blotting, תמציות תאים עורבבו עם loading buffer וסובבו בצנטריפוגה ב-10,000 × g למשך 3 min. העלונות הועברו לאלקטרופורזה של ג'ל sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide, והחלבונים הועברו לממברנות polyvinylidene fluoride. הממברנות נחסמו עם 5% bovine serum albumin (BSA) למשך 1 h בטמפרטורת החדר ולאחר מכן דגרו למשך הלילה ב-4 °C עם נוגדנים ראשוניים נגד glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) ו-inhibitor kappa B alpha (IκBα) בדילול של 1:1000 ב-Tris-buffered saline המכיל Tween 20 ו-5% BSA. לאחר שלושה שלבי שטיפה, הממברנות דגרו עם HRP-conjugated goat anti-rabbit IgG (1:500) למשך 1 h בטמפרטורת החדר. לאחר שטיפות נוספות, פסי החלבון הודגמו באמצעות substrate של enhanced chemiluminescence ותועדו באמצעות מערכת imaging של chemiluminescence. עוצמות הפסים של חלבוני המטרה ושל GAPDH כוונתו משלושה ניסויים בלתי תלויים באמצעות תוכנה לניתוח תמונות.

9. ניתוח סטטיסטי

ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנה לניתוח סטטיסטי. נורמליות של נתוני המדידה הוערכה באמצעות מבחן שפירו-וילק (Shapiro-Wilk). נתונים בעלי התפלגות נורמלית מוצגים כממוצע ± סטיית תקן והושוו באמצעות מבחני t למדגמים בלתי תלויים עבור שתי קבוצות, או ניתוח שונות חד-כיווני (ANOVA) עבור קבוצות מרובות. כאשר ANOVA העיד על הבדל כולל מובהק, נעשה שימוש במבחן פוסט-הוק של טוקי (Tukey’s post hoc) להשוואות זוגיות. נתונים שאינם בעלי התפלגות נורמלית נותחו באמצעות מבחן Mann-Whitney U. משתנים קטגוריאליים בוטאו כמספרים ואחוזים והושוו באמצעות מבחני חי-ריבוע. ניתוח עקומת מאפייני תגובה (ROC) שימש להערכת הפוטנציאל האבחנאי של miR-93-5p לניבוי MPP או MPP עם DSI. כדי לזהות גורמי ניבוי הקשורים ל-MPP עם DSI, בוצעה רגרסיה לוגיסטית רב-משתנית. המשתנים שהוכנסו למודל כללו גיל, מגדר, משך החום, משך השימוש באנטיביוטיקה וביטוי miR-93-5p בחלוקה דיכוטומית לפי החציון. ערך P דו-צדדי <0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.

תוצאות

רמות MiR-93-5p פחתו ב-MPP פדיאטרי
ביצועיה האבחנתיים של miR-93-5p נבחנו כדי לבחון את פוטנציאלן כסמן ביולוגי ב-MPP פדיאטרי. כפי שמוצג ב-איור 1A, ביטוי miR-93-5p פחת באופן משמעותי בחולים פדיאטריים עם MPP בהשוואה לקבוצות ביקורת בריאות. מאפיינים דמוגרפיים והמטולוגיים של שתי הקבוצות מסוכמים ב-טבלה 1. לא נצפו הבדלים מובהקים סטטיסטית בחלוקת הגיל או המין בין הקבוצות (P > 0.05). עם זאת, ספירת תאי דם לבנים פריפריים (WBC), אחוז נויטרופילים (Net%) ורמות חלבון C-reactive (CRP) היו גבוהות באופן משמעותי בקבוצת ה-MPP בהשוואה לקבוצות הביקורת הבריאות (P < 0.001).

ניתוח עקומת מאפייני תפעול המקלט (ROC) בוצע כדי להעריך באופן מעמיק את הביצועים האבחנתיים של miR-93-5p בהבחנה בין חולים עם MPP לילדים בריאים (איור 1B). השטח תחת העקומה (AUC) היה 0.9009 [רווח סמך (CI) של 95%: 0.8537–0.9482], עם רגישות של 80.56% וסגוליות של 88.33%. ממצאים אלו מעידים כי רמות נמוכות של miR-93-5p בסרום היו קשורות ל-MPP בילדים.

השפעת miR-93-5p על מודלים של תאי MPP
סדרה של ניסויי in vitro בוצעה כדי להעריך את השפעת miR-93-5p במודל תאי MPP. בהשוואה לתאי ביקורת, הביטוי של miR-93-5p היה מופחת במודל תאי MPP (איור 2A). זיהום ב-MP היה קשור גם לירידה בחיוניות של תאי A549 (איור 2B). בנוסף, הרמות של הציטוקינים הפרו-דלקתיים IL-6 ו-TNF-α היו מוגברות במודל MPP בהשוואה לביקורות (איור 2C).

כדי להעריך יותר להעמיק את ההשפעה הפונקציונלית של miR-93-5p, הוקם מודל של ביטוי יתר של miR-93-5p בתאי A549 שהודבקו ב-MP (איור 2D). ביטוי יתר של miR-93-5p העלה באופן משמעותי את חיוניות התאים בהשוואה למודל MPP ללא ביטוי יתר של miR-93-5p (איור 2E). בדומה לממצאים אלו, ביטוי מוגבר של miR-93-5p לווה בירידה בייצור של IL-6 ו-TNF-α (איור 2F). תוצאות אלו מצביעות על כך שביטוי מופחת של miR-93-5p היה קשור לירידה בחיוניות התאים ולעלייה בתגובות דלקתיות במהלך הדבקת MP, בעוד שביטוי יתר של miR-93-5p הקליט שינויים אלו.

MiR-93-5p פוגע ב-TLR4
כדי להבהיר את הקשר הרגולטורי בין miR-93-5p ל-TLR4, ניתוח ביו-אינפורמטיקה זיהה אתר קישור חזוי של miR-93-5p בתוך האזור שאינו מתורגם (UTR) ב-3′ של mRNA של TLR4 (איור 3A). ביטוי TLR4 עלה במודל תאי MP בהשוואה לבקרות (איור 3B). האינטראקציה החזויה נבחנה לאחר מכן באמצעות מבחן לוקיפראז (luciferase reporter assay). טרנספקציה משותפת עם miR-93-5p mimics הפחיתה את פעילות הלוקיפראז של הקונסטרקט מסוג wild-type, מה שמעיד על קישור ספציפי לאתר החזוי (איור 3C).

ביטוי יתר של miR-93-5p בתאים שהודבקו ב-MP הפחית את ביטוי TLR4 בהשוואה לבקרה של תאים מדובקים ללא טיפול במימיק (איור 3D). כדי לחקור לעומק השפעות רכיבות הקשורות לוויסות של TLR4, הוקמו מודלים של תאי A549 עם ביטוי יתר של TLR4 (איור 3E). אנליזת Western blot הראתה רמות מוגברות של IκBα בעקבות ביטוי יתר של TLR4 (איור 3F).

ביטוי יתר של TLR4 הפחית באופן משמעותי את חיות התאים לאחר זיהום ב-MP בהשוואה לתאי ביקורת, בעוד שביטוי יתר סימולטני של miR-93-5p הפך את הפחתה זו (איור 3G). מדידה של ציטוקינים דלקתיים הראתה עוד כי ביטוי יתר של TLR4 הגביר את רמות המתווכים הפרו-דלקתיים, בעוד שביטוי יתר של miR-93-5p הנמיך שינויים אלו גם בנוכחות ביטוי יתר של TLR4 (איור 3H). ממצאים אלו מעידים על כך ש-miR-93-5p מווסת באופן שלילי את ביטוי ה-TLR4 ומפחית שינויים תאיים הקשורים לזיהום ב-MP.

הערך האבחנתי של miR-93-5p ב-MPP וב-MPP עם DSI
דיווחים קודמים תיארו את מעורבותו של TLR4 ברקמות ריאתיות ומרקמות המעי הגס16. לפיכך, נבחן באופן קליני הקשר הפוטנציאלי בין miR-93-5p לבין פגיעה במערכת העיכול ב-MPP. כפי שמוצג ב-איור 4A, הביטוי של miR-93-5p היה מופחת בקבוצת ה-MPP+DSI בהשוואה לקבוצת ה-MPP.

המאפיינים הדמוגרפיים וההמטולוגיים מסוכמים ב- טבלה 2לא נצפו הבדלים משמעותיים בגיל או במין בין הקבוצות. עם זאת, משך החום והשימוש באנטיביוטיקה היו ארוכים באופן משמעותי בחולים עם DSI נלווה (P < 0.05).

הערך האבחנאי של miR-93-5p להבחנה בין מקרי MPP עם DSI למקרים ללא DSI הוערך באמצעות ניתוח עקומת ROC. ה-AUC היה 0.7866 (95% CI: 0.6889–0.8843)(איור 4B), עם רגישות של 85.71% וסגוליות של 57.45%.

ניתוח רגרסיה לוגיסטית רב-משתנית זיהה ביטוי נמוך של miR-93-5p, משך חום ממושך ושימוש ממושך באנטיביוטיקה כגורמים הקשורים לפגיעה במערכת העיכול במהלך זיהום MP (טבלה 3; P < 0.05).

תרשים קופסה המשווה את ביטוי miR-935-5p בבריאים לעומת MPP; עקומת ROC לדיוק אבחנתי.
איור 1: ביטוי וערך אבחנתי של miR-93-5p בביקורות בריאות (n = 60) ובחולים עם MPP (n = 108). (A) ביטוי miR-93-5p היה מופחת בחולים עם MPP. (B) ניתוח עקומת ROC של miR-93-5p. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה מורחבת של איור זה.

תרשימי עמודות המראים ביטוי mRNA יחסי, חיות תאים וגורמים דלקתיים (TNF-α, IL-6).
איור 2: השפעות תפקודיות של miR-93-5p במודל של תאים המודבקים ב-MP. (A) ביטוי miR-93-5p פחת במודל המודבק ב-MP. (B) חיות התאים פחתה במודל המודבק ב-MP. (C) רמות TNF-α ו-IL-6 עלו במודל המודבק ב-MP. (D) יעילות הטרנספקציה של miR-93-5p mimic. (E) חיות התאים עלתה בעקבות ביטוי יתר של miR-93-5p. (F) רמות TNF-α ו-IL-6 פחתו בעקבות ביטוי יתר של miR-93-5p. n = 3. P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של איור זה.

גרפים של ביטוי גנים; האינטראקציה בין TLR4 ל-miR-93-5p; תוצאות של לוסיפראז, mRNA ובריאות תאים.
איור 3: MiR-93-5p מכוון ישירות ל-TLR4. (A) אתר קישור חזוי בין miR-93-5p ל-TLR4. (B) ביטוי TLR4 במודל שהודבק ב-MP. (C) בדיקת דואל-לוסיפראז (Dual-luciferase reporter assay). (D) בקרה שלילית של TLR4 על ידי miR-93-5p. (E) יעילות של ביטוי יתר של TLR4. (F) ניתוח Western blot של IκBα. (G) חיוניות תאים. (H) רמות של TNF-α ו-IL-6. n = 3. P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מורחבת של איור זה.

רמות ביטוי של miRNA, ניתוח סטטיסטי, עקומה של ROC, רגישות מול סגוליות, נתונים ניסיוניים.
איור 4: ביטוי וערך אבחנתי של miR-93-5p בחולים עם MPP (n = 60) ובחולים עם MPP עם DSI (n = 48). (A) ביטוי של miR-93-5p בקבוצת ה-MPP+DSI. (B) ניתוח עקומת ROC של miR-93-5p. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מורחבת של איור זה.

משתנהבריאים (n = 60)MPP (n = 108)P
גיל (שנים)6.81± 3.147.12 ± 3.550.559
מגדר (זכר/נקבה)28/3249/590.872
WBC ( × 109/L)7.27 ± 0.899.86 ± 1.36<0.001
CRP (mg/L)2.35 ± 0.1711.53 ± 2.01<0.001
Net %42.55 ± 5.6256.51 ± 15.40<0.001

טבלה 1: השוואה של מאפיינים דמוגרפיים ופרמטרים שגרתיים של דם בין ביקורות בריאות לבין חולים עם MPP. טבלה זו מסכמת את המאפיינים הדמוגרפיים והפרמטרים ההמטולוגיים השגרתיים של ביקורות בריאות וחולים עם MPP, כולל גיל, מין, WBC, אחוז נויטרופילים, אחוז אאוזינופילים, אחוז בזופילים ו-CRP. מוצגות השוואות בין-קבוצתיות וערכי P תואמים.

משתנהMPP (n = 60)MPP+DSI (n = 48)P
גיל (שנים)6.88 ± 3.877.42 ± 3.110.441
מגדר (זכר/נקבה)31/2928/200.494
WBC ( × 109/L)8.9 ± 0.8911.05 ± 0.76<0.001
CRP (mg/L)10.94 ± 1.6212.27 ± 2.22<0.001
Net %55.87 ± 14.7557.32 ± 16.290.629
משך החום (ימים)4.60 ± 1.837.26 ± 1.04<0.001
זמן שימוש באנטיביוטיקה (ימים)4.65 ± 1.1476.29 ± 0.771<0.001

טבלה 2: השוואת מאפיינים דמוגרפיים ופרמטרים שגרתיים של דם בין חולים עם MPP לחולים עם MPP+DSI. טבלה זו משווה מאפיינים דמוגרפיים, פרמטרים המטולוגיים שגרתיים ומאפיינים קליניים רלוונטיים בין חולים עם MPP בלבד לבין חולים עם MPP המסובך ב-DSI. מוצגות השוואות בין-קבוצתיות וערכי P תואמים.

משתנהאורווח בר סמך של 95%ערך p
נמוךעליון
miR-93-5p (נמוך לעומת גבוה)6.7021.48730.2110.013
גיל1.1260.2864.4370.866
מגדר1.0710.274.2480.923
משך החום73.41615.018358.895<0.001
משך השימוש באנטיביוטיקה7.9211.87733.4210.005

טבלה 3: ניתוח רגרסיה לוגיסטית של ילדים עם זיהום MP המסובך בפגיעה במערכת העיכול. טבלה זו מציגה את תוצאות ניתוח הרגרסיה הלוגיסטית המעריך גורמים הקשורים לפגיעה במערכת העיכול בקרב ילדים עם זיהום MP. הניתוח כולל את ה-OR, 95% CI, וערך P עבור כל משתנה.

קיצורים: Baso%, אחוז בסופילים; CI, רווח בר-סמך; CRP, חלבון C-reactive; DSI, פגיעה במערכת העיכול; Eos%, אחוז אאוזינופילים; IκBα, inhibitor kappa B alpha; IL-6, אינטרלוקין-6; MP, Mycoplasma pneumoniae; MPP, דלקת ריאות על ידי Mycoplasma pneumoniae; NC, ביקורת שלילית; Net%, אחוז נויטרופילים; oe-TLR4, ביטוי יתר של TLR4; OR, יחס סיכויים; ROC, מאפיין תפעול מקלט; TLR4, Toll-like receptor 4; TNF-α, גורם נמק גידול-α; WBC, ספירת תאי דם לבנים.

זמינות נתונים:

הנתונים המספריים הגולמיים העומדים בבסיס האיורים והטבלאות מסופקים כSupplementary Table 1.

טבלה משלימה 1: נתונים מספריים גולמיים עבור האיורים והטבלאות. אנא לחצו כאן להורדת קובץ זה.

דיון

על אף שזיהום ב-MP נחשב בעיקר כפתוגן ריאתי, הוא עלול לגרום לסיבוכים חוץ-ריאתיים מגוונים המשפיעים על מערכות איברים מרובות מעבר לריאות19,20. ראיות חדשות מצביעות על אינטראקציה לאורך ציר הריאה-מעי, שבה מתווכי דלקת המשתחררים במהלך פתולוגיה ריאתית משבשים את מאזן הפלורה במעי21 ואת תפקוד המעי22. יחסי גומלין דו-כיווניים אלו מדגישים את החשיבות של הערכה מקיפה של המטופל, המתייחסת הן לתסמינים נשימתיים והן לבריאות מערכת העיכול. בשל כך, ביומרקרים בסרום במחזור זכו לתשומת לב גוברת ככלים זעיר-פולשניים בעלי ערך אבחנתי או פרוגנוסטי פוטנציאלי23,24. MiRNAs התגלו כמועמדים מבטיחים בשל יציבותם ותפקידם בוויסות מסלולי איתות הקשורים לדלקת המעורבים בפתוגנזה של MP25,26,27. מחקר זה בחן באופן שיטתי את התפקיד והחשיבות הקלינית של miR-93-5p ב-MP פדיאטרי, במיוחד כאשר הוא מלווה בפגיעה במערכת העיכול. רמות של miR-93-5p היו נמוכות יותר בילדים עם MPP בהשוואה לקבוצות ביקורת בריאות, ונרשמה ירידה נוספת אצל אלו עם פגיעה במערכת העיכול. ממצאים אלו מצביעים על תפקיד פוטנציאלי של הפרעה בביטוי miR-93-5p בפתולוגיה ריאתית, ועל פוטנציאל לשמש כביומרקר למניפסטציות חוץ-ריאתיות.

MiRNAs הוכיחו ערך אבחנתי בדלקת ריאות חמורה, עם רגישות, סגוליות ודיוק אבחנתי כולל מבטיחים28,29. מבחינה קלינית, לילדים עם MPP המסובכת ב-DSI היה משך חום ממושך וטיפול אנטיביוטי מוארך בהשוואה לאלו ללא סיבוכים במערכת העיכול. בניתוח רגרסיה לוגיסטית רב-משתנית, רמות נמוכות של miR-93-5p היו קשורות באופן בלתי תלוי למעורבות של מערכת העיכול, לצד פרמטרים קליניים אלו. יתרה מכך, ניתוח עקומת ROC הראה ביצועים אבחנתיים חיוביים של miR-93-5p בסרום להבחנה בין חולי MPP עם DSI לאלו ללא DSI. לפיכך, מדידה של miR-93-5p עשויה לספק ערך נוסף לזיהוי מוקדם ולסיווג סיכונים בזיהום MP בילדים.

בנוגע לביצועים האבחנתיים של miR-93-5p במחזור הדם ביחס לסמנים דלקתיים קליניים שגרתיים, הממצאים מרמזים כי miR-93-5p עשוי לספק ערך משלים ולא להחליף את האינדיקטורים המקובלים. CRP ופרוקאלסיטונין (PCT) נשארים ביומארקרים נפוצים בפרקטיקה הקלינית להערכת חומרת הזיהום ולהכוונת הטיפול האנטיביוטי, כאשר מטה-אנליזות מראות כי PCT מציג דיוק אבחנתי מעט גבוה יותר בהשוואה ל-CRP בדלקת ריאות חיידקית30. עם זאת, רכיבי שלב חריף אלו הם במידה רבה לא ספציפיים, כיוון שהם מגיבים לגירויים דלקתיים מגוונים ואינם יכולים להבחין באופן מהימן בין זיהום על ידי MP לבין פתוגנים נשימתיים אחרים, או לשקף באופן ספציפי את הסיכון לסיבוכים חוץ-ריאתיים. בניגוד להם, miR-93-5p, כמולקולה רגולטורית הקשורה לשבילי השמעת TLR4/nuclear factor kappa B (NF-κB), עשוי לספק מידע פתופיזיולוגי ייחודי המשלים את הסמנים המקובלים. המתאם בין miR-93-5p ל-CRP דווח כחלש יחסית (Pearson r = 0.2698), מה שמרמז כי miR-93-5p עשוי לשקף היבט שונה של התגובה הדלקתית מאשר התגובה המערכתית של השלב החריף.

ראיות עולות ממודלים של בעלי חיים הדגימו כי זיהום ב- Mycoplasma pneumoniae יכול להוביל לא רק לפתולוגיה נשימתית, אלא גם לפגיעה במערכת העיכול דרך ציר הריאה-מעי המתווך על ידי פלורת המעי31. בעכברים שהודבקו ב-MP, נצפתה פגיעה פתולוגית הן בריאות והן במעי הגס, יחד עם שינויים בהרכב מיקרוביוטת המעי, כולל ירידה בשכיחות של חיידקים מועילים כגון Corynebacterium glutamicum ועלייה בשכיחות של פתוגנים פוטנציאליים כגון Lachnospiraceae NK4A136 group ו- Escherichia-Shigella, בליווי רמות מוגברות של ליפופוליסכריד (LPS) בתכולת המעי הגס ובדם32. כמו כן, דווח כי Baicalin מקל על דלקת ריאתית ומבקר את פלורת המעי בעכברי MPP דרך מסלול TLR4/NF-κB, מה שתומך במעורבותו של רצף סיגנלינג זה בתקשורת בין הריאה למעי33. ממצאים אלו עולים בקנה אחד עם מעורבות אפשרית של סיגנלינג NF-κB בציר miR-93-5p/TLR4 שנבדק במחקר הנוכחי.

ברמה המכניסטית, TLR4, מתווך מרכזי של חיסוניות מולדת הקשורה לתגובות פרו-דלקתיות34,35,36,37, הראה ביטוי מוגבר במהלך זיהום ב-MP. ביטוי מוגבר של TLR4 לווה לרמות גבוהות יותר של הציטוקינים הדלקתיים IL-6 ו-TNF-α ולירידה בחיוניות תאי אפיתל. ביטוי יתר של miR-93-5p דיכא את ביטוי TLR4, הפחית את שחרור הציטוקינים הדלקתיים ושיפר את הישרדות התאים בתנאי זיהום. לפיכך, ביטוי נמוך של miR-93-5p בחולים עם MPP, ובמיוחד באquם עם פגיעה במערכת העיכול, עשוי להיות קשור להגברה של אותות דלקתיים המתווכים על ידי TLR4 ולתגובות דלקתיות סיסטמיות רחבות יותר. הממצאים הנוכחיים אינם קובעים הפעלה של מסלול NF-κB שפועל במורד, כיוון ש-IκBα ו-p65 פוספורליים לא נבדקו.

יש להכיר במספר מגבלות של מחקר זה. ראשית, זה היה מחקר חד-מרכזי עם גודל מדגם קטן יחסית, במיוחד עבור תת-הקבוצה של DSI, דבר שעלול להגביל את העוצמה הסטטיסטית ואת יכולת ההכללה. נדרש תיקוף חיצוני בקוהורטות רחבות יותר ומרובות מרכזים כדי לאשש ממצאים אלו ולקבוע ערכי סף קליניים מהימנים. שנית, למרות ש-IκBα זוהה באמצעות Western blotting, לא בוצע תיקוף מקיף של רכיבים במורד המסלול בנתיב TLR4/NF-κB, כולל MyD88, p-IκBα ו-p65. תיקוף של רכיבי איתות אלו ברמת החלבון יחזק את הפרשנות המכניסטית. שלישית, העיצוב התצפיתי מונע הסקת מסקנות סיבתיות; נדרשים ניסויי loss-of-function ו-gain-of-function, כולל שימוש ב-miRNA mimics או במעכבים in vitro או in vivo, כדי לקבוע האם miR-93-5p תורם ישירות לפגיעה במערכת העיכול הקשורה ל-MPP. רביעית, הניסויים in vitro בוצעו בתאי אפיתל ריאה מסוג A549. למרות שמודל זה מתאים להערכת ההשפעות האנטי-דלקתיות של miR-93-5p בהקשר ריאתי, הוא אינו יכול לדגמן באופן ישיר פתולוגיה של מערכת העיכול. הקשר המוצע בין איתות miR-93-5p/TLR4 ריאתי לבין ביטויים במערכת העיכול, שייתכן ומתווך באמצעות ציר הריאה-מעי, דורש תיקוף ישיר במודלים של תאי אפיתל של המעי, כגון תאי Caco-2, ובמודלים של בעלי חיים in vivo עם זיהום MP. לבסוף, אתגרים טכניים הקשורים לגילוי miRNA, כולל יציבות ה-RNA ואסטרטגיות נורמליזציה, נותרים כמחסומים ליישום קליני שגרתי. למרות מגבלות אלו, הממצאים מספקים בסיס למחקרי מנגנון עתידיים ולמאמצי תיקוף רחבי היקף.

לסיכום, ביטוי מוגבר של miR-93-5p החליש את הדלקת המושרה על ידי MP בתאי אפיתל של הריאה באמצעות דיכוי של TLR4. מבחינה קלינית, רמות מופחתות של miR-93-5p במחזור הדם היו קשורות לפגיעה במערכת העיכול בילדים עם MPP, מה שמרמז על תועלת פוטנציאלית כסמן ביולוגי משלים לזיהוי מטופלים הנמצאים בסיכון לסיבוכים גסטרו-אינטסטינליים.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תאי אפיתל אלבאולריים אנושיים A549ATCC, USACat# CCL-185; RRID: CVCL_0023שבט תאי אפיתל אלבאולריים אנושיים ששימש למודל MPP in vitro
נוגדן Anti-GAPDHHangzhou XianZhi Biological Technology, ChinaCat# AB-P-R001; RRID: AB_3096355נוגדן ראשוני ששימש לזיהוי GAPDH כביקורת טעינה ב-Western blotting
נוגדן Anti-IκBαBeyotime, ChinaCat# AG2741; RRID: AB_3731391נוגדן ראשוני ששימש לזיהוי IκBα באמצעות Western blotting
אלבומין מיומרים של בקר (BSA)Solarbio, ChinaCat# A8012ריאגנט חסימה ששימש במהלך Western blotting
צנטריפוגהThermo Fisher Scientific, USAMultifuge X4 Pro; Cat# 75016066; RRID: SCR_020726צנטריפוגה ששימשה במהלך תרבית תאים והכנת דגימות
מערכת דימוי כימילומינצנציהTanon, China5200Multi; RRID: SCR_027114מערכת דימוי ששימשה להדמיית אותות כימילומינצנטיים של Western blot
מערכת Dual-Luciferase Reporter AssayPromega, USACat# E1910שימשה למדידת פעילות לוציפראז של גחליליות ושל Renilla
סרום עוברי של בקר (FBS)Gibco, USACat# A5256701תוסף סרום עבור מצע תרבית תאים
Goat anti-rabbit IgG, HRP-conjugatedCell Signaling Technology, USACat# 7074; RRID: AB_2099233נוגדן משני מצומד ל-HRP ששימש ל-Western blotting
GraphPad PrismGraphPad SoftwareVersion 10.1.2; URL: https://www.graphpad.comתוכנה ששימשה לניתוח סטטיסטי ולהצגה גרפית
ערכה ל-ELISA של Interleukin-6 (IL-6)Elabscience, ChinaCat# E-EL-H6156; RRID: AB_3665145ערכת ELISA ששימשה לכימות IL-6
ריאגנט טרנספקציה Lipofectamine 3000Thermo Fisher ScientificCat# L3000015ריאגנט מבוסס ליפידים ששימש לטרנספקציה של תאי A549
קורא פלטות מיקרו (Microplate reader)Tecan, SwitzerlandInfinite M Plex; RRID: SCR_026522קורא פלטות מיקרו ששימש למדידת צפיפות אופטית ב-490 nm
miR-93-5p mimicsRibobio, ChinaCat# miR10000093-1-5מימיק סינתטי של miR-93-5p ששימש לביטוי יתר של miR-93-5p
בקרת שלילה ל-miR-93-5pRibobio, ChinaCat# miR1N0000001-1-5בקרת שלילה לטרנספקציית מימיק miR-93-5p
ערכת MTT לבדיקת ת proliferate תאים וציטוטוקסיותBeyotime, ChinaCat# C0009Sשימשה להערכת חיוניות תאים
זן סטנדרטי של Mycoplasma pneumoniae ATCC 15531ATCC, USACat# 15531זן סטנדרטי של M. pneumoniae ששימש להקמת מודל הזיהום
וקטור pGL3-Basic Luciferase ReporterPromega, USACat# E1751וקטור רפורטר ששימש לבדיקת dual-luciferase reporter assay
סליין מחויץ פוספט (PBS)Solarbio, ChinaCat# IP9212בופר ששימש לשטיפת תאים ולהכנת דגימות
סובסטרט Pierce ECL WesternThermo Scientific, USACat# 32209סובסטרט כימילומינצנטי ששימש לזיהוי ב-Western blot
מצע Pleuropneumonia-like organism (PPLO)BD, USACat# 255420מצע תרבית ששימש ל-M. pneumoniae
ממברנת Polyvinylidene fluoride (PVDF)Bio-RadCat# 1620177ממברנה ששימשה להעברת חלבונים במהלך Western blotting
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)Takara Bio Inc., JapanCat# RR036Aתערובת מאסטר לשעתוק הפוך ששימשה לסינתזת cDNA
ערכת ריאגנטים PrimeScript RTTakara Bio Inc., JapanCat# RR037Aערכת ריאגנטים ששימשה לשעתוק הפוך
מערכת Real-time PCRApplied Biosystems, USAQuantStudio 3 Real-Time PCR System; RRID: SCR_020238מכשיר Real-time PCR ששימש לניתוח qPCR
מצע RPMI-1640Gibco, USACat# 11875135מצע תרבית תאים ששימש לתאי A549
SPSSIBMVersion 27.0; RRID: SCR_016479תוכנה ששימשה לניתוח סטטיסטי
בקרת שלילה לביטוי יתר של TLR4Ribobio, ChinaNAבקרת שלילה לניסויי ביטוי יתר של TLR4
פלסמיד לביטוי יתר של TLR4 (oe-TLR4)Ribobio, ChinaNAפלסמיד ששימש לביטוי יתר של TLR4
ריאגנט TRIzolInvitrogen, Thermo Fisher ScientificCat# 15596026ריאגנט ששימש למיצוי RNA כולל
ערכה ל-ELISA של Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α)Elabscience, ChinaCat# E-EL-H0109; RRID: AB_3665144ערכת ELISA ששימשה לכימות TNF-α
Universal SYBR qPCR Master MixTakara Bio Inc., JapanCat# BL697Aתערובת מאסטר ששימשה ל-quantitative PCR
מערכת אלקטרופורזה של ג'ל Western blotBio-Rad, USAMini-PROTEAN Tetra Cell; Cat# 1658004מערכת אלקטרופורזה ששימשה להפרדת חלבונים

מקורות

  1. Yan C et al. Current status of Mycoplasma pneumoniae. infection in China. World Journal of Pediatrics. 2024;20(1):1-4.
  2. Poddighe D. Extra-pulmonary diseases related to Mycoplasma pneumoniae. in children: recent insights into the pathogenesis. Current Opinion in Rheumatology. 2018;30(4). doi:10.1097/BOR.0000000000000494.
  3. Schildgen O et al. Clinical manifestations in infants and children with Mycoplasma pneumoniae. infection. PLOS ONE. 2018;13(4). doi:10.1371/journal.pone.0195288.
  4. Li X et al. Intestinal necrosis due to nonocclusive mesenteric ischemia in a child with Mycoplasma pneumoniae. pneumonia: a case report. BMC Infectious Diseases. 2025;25(1):1049.
  5. Ran B, Yang Z, Li M. METTL3-mediated miR-4534 maturation promotes IVDD progression by targeting the Sirt6-mediated Nrf2/HO-1 pathway. 2024;21(6):2795-2813.
  6. Du B et al. The lung-gut crosstalk in respiratory and inflammatory bowel disease. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2023;13. doi:10.3389/fcimb.2023.1218565.
  7. Jiang Y et al. Intestinal bacteria flora changes in patients with Mycoplasma pneumoniae pneumonia. with or without wheezing. Scientific Reports. 2022;12(1):5683.
  8. Lin L-J et al. The diagnostic value of serological studies in pediatric patients with acute Mycoplasma pneumoniae. infection. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 2020;53(2):351-356.
  9. Cui J et al. Integrated microfluidic cartridge for rapid and colorimetric detection of Mycoplasma pneumoniae. Microchimica Acta. 2025;192(9):559.
  10. Wang X, Starodubtseva MN, Kapron CM, et al. Cadmium, von Willebrand factor and vascular aging. NPJ Aging. 2023;9(1):11.
  11. Chen J. Efficacy of the PDCA cyclic care model in improving lung function and speed of recovery in children with Mycoplasma pneumonia. American Journal of Translational Research. 2025;17(3):1792-1802.
  12. Li Y et al. Clinical significance of serum miR-98-5p in children with Mycoplasma pneumoniae. infection complicated with digestive system damage. Immunobiology. 2025;230(4):153101.
  13. Zhang Y, Wu ZM. LINC02605 involved in paediatric pneumonia complicated with diarrhoea via miR-539-5p/CXCL1 axis. European Journal of Clinical Investigation. 2024;54(9). doi:10.1111/eci.14234.
  14. Gao H et al. Knockdown of lncRNA MEG3 protects against sepsis-induced acute lung injury in mice through miR-93-5p-dependent inhibition of NF-κB signaling pathway. Pathology - Research and Practice. 2022;239:154142.
  15. Gao H et al. MicroRNA-93 contributes to the suppression of lung inflammatory responses in LPS-induced acute lung injury in mice via the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway. Int J Mol Med. 2020;46(2):561-570.
  16. Wedgwood S et al. Intestinal dysbiosis and the developing lung: the role of Toll-like receptor 4 in the gut-lung axis. Frontiers in Immunology. 2020;11. doi:10.3389/fimmu.2020.00357.
  17. Zou N et al. Transcutaneous auricular vagus nerve stimulation as a novel therapy connecting the central and peripheral systems: a review. Int J Surg. 2024;110(8):4993-5006.
  18. Chen Y et al. Combination of azithromycin and methylprednisolone alleviates Mycoplasma pneumoniae.-induced pneumonia by regulating miR-499a-5p/STAT3 axis. Exp Ther Med. 2022;24(3):578.
  19. Poddighe D. Mycoplasma pneumoniae.-related extra-pulmonary diseases and antimicrobial therapy. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 2020;53(1):188-189.
  20. Meyer Sauteur PM, Ramien ML, Theiler M. Mycoplasma pneumoniae.: extrapulmonary manifestations in children with focus on mucocutaneous disease. The Pediatric Infectious Disease Journal. 9900. doi:10.1097/INF.0000000000004946.
  21. Liu C et al. Mast cells participate in regulation of lung-gut axis during Staphylococcus aureus pneumonia. Cell Proliferation. 2019;52(2).
  22. Guo J et al. People are an organic unity: gut-lung axis and pneumonia. Heliyon. 2024;10(6).
  23. Fan F et al. Clinical characteristics and serum inflammatory markers of community-acquired mycoplasma pneumonia in children. The Clinical Respiratory Journal. 2023;17(7):607-617.
  24. Ding L, Jiang Y. Biomarkers associated with the diagnosis and prognosis of Mycoplasma pneumoniae. pneumonia in children: a review. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2025;15. doi:10.3389/fcimb.2025.1552144.
  25. Peng W et al. Comparative analysis of the efficacy and safety of different methods for injecting polidocanol in the treatment of venous malformations. Phlebology. 2024;39(9):629-635.
  26. Wang J et al. Peripheral blood microR-146a and microR-29c expression in children with Mycoplasma pneumoniae. pneumonia and its clinical value. Italian Journal of Pediatrics. 2023;49(1):119.
  27. Chu C et al. High expression of miR-222-3p in children with Mycoplasma pneumoniae. pneumonia. Italian Journal of Pediatrics. 2019;45(1):163.
  28. Powell BH, Witwer KW, Meffert MK. Cellular miRNAs and viruses: trends in miRNA sequestering and target de-repression. J Virol. 2025;99(7).
  29. Gan T, Yu J, He J. miRNA, lncRNA and circRNA: targeted molecules with therapeutic promises in Mycoplasma pneumoniae. infection. Arch Microbiol. 2023;205(8):293.
  30. Im PK et al. Hyperuricemia, gout and the associated comorbidities in China: findings from a prospective study of 0.5 million adults. The Lancet Regional Health – Western Pacific. 2025;58. doi:10.1016/j.lanwpc.2025.101572.
  31. Hu J et al. Insight into the pathogenic mechanism of Mycoplasma pneumoniae. Curr Microbiol. 2022;80(1):14.
  32. Li B et al. Cecropin AD ameliorates pneumonia and intestinal injury in mice with Mycoplasma pneumoniae. by mediating gut microbiota. BMC Vet Res. 2025;21(1):39.
  33. Song D et al. The mechanism of baicalin in improving pulmonary inflammatory response and injury and regulating intestinal flora in Mycoplasma pneumoniae pneumoni.a mice. Cellular Signalling. 2025;126:111530.
  34. Coutinho-Wolino KS et al. Bioactive compounds modulating Toll-like 4 receptor (TLR4)-mediated inflammation: pathways involved and future perspectives. Nutrition Research. 2022;107:96-116.
  35. Thorburn AN et al. TLR2, TLR4 and MyD88 mediate allergic airway disease (AAD) and Streptococcus pneumoniae-induced suppression of AAD. PLOS ONE. 2016;11(6).
  36. Tang J et al. Effect of gut microbiota on LPS-induced acute lung injury by regulating the TLR4/NF-kB signaling pathway. International Immunopharmacology. 2021;91:107272.
  37. Jia H et al. Pulmonary epithelial TLR4 activation leads to lung injury in neonatal necrotizing enterocolitis. The Journal of Immunology. 2016;197(3):859-871.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

דלקת ריאות בילדים הנגרמת מ-Mycoplasma pneumoniae (MPP)סמן ביולוגי לאבחנהRT-PCRחיוניות תאיתציטוקינים פרו-דלקתייםביטוי TLR4ניתוח עקומת ROC
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.