הביטוי של miR‑486‑3p מופחת בחולים עם אוטם מוחי חריף הסובלים מתסמונת דום נשימה חסימתי בשינה, הוא נמצא במתאם שלילי עם חומרת המחלה ומסמני דלקת, וחוזה פרוגנוזה שנתית גרועה, מה שתומך בפוטנציאל שלו כסמן ביולוגי לאבחון ולפרוגנוזה.
מאמר מחקר
מחקר עקיבה רטרוספקטיבי של רמות miR-486-3p בדם פריפרי בקרב מטופלים עם אוטם מוחי חריף ותסמונת דום נשימה בשינה חסימתי
במאמר זה
סיכום
תקציר
אוטם מוחי חריף (ACI) המסובך בתסמונת דום נשימה חסימתי בשינה (OSAS) כרוך בסיכון גבוה לחזרת שבץ ולמוות, אך ביומארקרים יעילים למצב תחלואתי זה נותרים מוגבלים. במחקר עוקבה רטרוספקטיבי זה גויסו 270 מטופלים עם ACI בין נובמבר 2020 לדצמבר 2023, שסווגו לקבוצת ה-ACI (מספר n = 100, מדד דום נשימה-היפופנאה [AHI] < 5) ולקבוצת ACI עם OSAS (מספר n = 170, AHI ≥ 5), כאשר האחרונה חולקה להמשך לשתי תת-קבוצות: קלה (5 ≤ AHI < 15, מספר n = 60), בינונית (15 ≤ AHI < 30, מספר n = 75), וחמורה (AHI ≥ 30, מספר n = 35). ביטוי miR‑486‑3p בסרום נמדד באמצעות RT‑qPCR, ומדדים דלקתיים, כולל tumor necrosis factor‑α (TNF‑α), C‑reactive protein (CRP), ו-hypoxia‑inducible factor‑1α (HIF‑1α), נמדדו בשיטת ELISA. הערך האבחנתי של miR‑486‑3p הוערך באמצעות ניתוח עקומת מאפייני תפעול מקלט (ROC), והחשיבות הפרוגנוסטית שלו נבחנה באמצעות ניתוח הישרדות של Kaplan‑Meier ומודלי רגרסיית Cox. רמות miR-486-3p היו נמוכות באופן ניכר בקבוצה עם התחלואה המשותפת והדגימו יכולת אבחנתית חזקה (AUC = 0.927). בולטת במיוחד מגמה תלוית-מינון שנצפתה בין תת-הקבוצות של חומרת ה-OSAS, כאשר miR‑486‑3p פחת באופן הדרגתי ו-TNF‑α ו-CRP עלו בשלבים מהשלב הקל לחמור של OSAS. ניתוחי מתאם של Spearman גילו כי miR‑486‑3p נמצא במתאם שלילי עם AHI, מדד NIHSS, TNF‑α ו-CRP. במעקב של שנה אחת, למטופלים עם ביטוי נמוך של miR‑486‑3p היו תוצאות תפקודיות גרועות משמעותית בהשוואה לאלו עם ביטוי גבוה. רגרסיית Cox רב-משתנית איששה את miR‑486‑3p כגורם הגנה עצמאי לפרוגנוזה של שנה אחת. ממצאים אלו מרמזים כי miR‑486‑3p עשוי לשמש כביומארקר אבחנתי ופרוגנוסטי חדש למטופלי ACI עם OSAS, פוטנציאלית באמצעות תפקידו הרגולטורי בדלקת מערכתית, ומצדיקים תיקוף נוסף בקוהורטות פרוספקטיביות גדולות יותר.
מבוא
תסמונת דום נשימה חסימתי בשינה (OSAS) היא מצב שכיח המאופיין בהפסקות נשימה חוזרות ונשנות במהלך השינה1. OSAS קשורה לעיתים קרובות לתחלואים נלווים כגון הפרעות מטבוליות, קרדיווסקולריות, כלייתיות, ריאתיות ונוירופסיכיאטריות2. מעבר לקשריה הכלליים עם מחלות קרדיווסקולריות ומטבוליות, OSAS מהווה איום ספציפי וחמור במקרים של שבץ איסכמי חריף, שם היא מסבכת עד 70% מהמקרים ומגבירה את הסיכון להידרדרות נוירולוגית, תמותה ושבץ חוזר3,4,5. אוטם מוחי חריף (ACI) הוא הצורה הנפוצה ביותר של שבץ. למרות שנעשתה התקדמות משמעותית בטיפול ב-ACI בשנים האחרונות, רוב המטופלים עדיין סובלים מנכות קשה או אף מוות6. האינטראקציה הסינרגית בין ACI ל-OSAS מחמירה את הנזק האיסכמי ואת הדלקת הסיסטמית, ומעלה באופן משמעותי את הסיכונים לשבץ חוזר, נכות ותמותה. כתוצאה מכך, זיהוי של ביומרקרים מהימנים לאבחון מוקדם ולניהול של מצב תחלואה נלווית בסיכון גבוה זה הוא בעל חשיבות עליונה.
מיקרו-RNA (miRNAs) הראו פוטנציאל רב כסמנים ביולוגיים בשנים האחרונות. ביניהם, miR-486-3p הוא בעל חשיבות רבה במחלות נוירו-וסקולריות. מחקרים קודמים הראו כי הביטוי של miR-486-3p מעוכב בדרינאות שינה חסימתית (OSA)7. בנוסף, טיפול באמצעות rabies virus glycoprotein-miR-486-3p-exosome יכול להקל על הפרעות נוירו-התנהגותיות, בצקת מוחית, פגיעה במחסום המה הדם-מוח וניוון עצבי8, מה שמעיד על כך ש-miR-486-3p ממלא תפקיד בפגיעה מוחית. לאחר ACI, מיקרוגליה ברקמת המוח הפגועה מופעלת, ובכך מקדמת הפרשה של ציטוקינים דלקתיים5. OSAS גורם לתסמינים של היפוקסיה לסירוגין, המובילים להפעלה של מערכת העצבים הסימפתטית ולעקה חמצונית, ובכך מעוררים תגובת שרשרת של דלקת סיסטמית9. miR-486-3p קשור קשר הדוק לדלקת10. קווי ראיות אלו מרמזים כי miR-486-3p עשוי לשמש כחוליה מולקולרית בין היפוקסיה הקשורה ל-OSAS, דלקת סיסטמית והחלמה לאחר שבץ מוחי.
עם זאת, פרופיל הביטוי שלו, הדיוק האבחנתי והמשמעות הפרוגנוסטית שלו בחולי ACI עם OSAS משולב לא נחקרו באופן שיטתי, ועדיין לא ידוע אם הוא נמצא במתאם עם חומרת ה-OSAS או עם מתווכי דלקת באופן תלוי-מינון. כדי למלא פערים אלו, מחקר זה העריך את הערך האבחנתי של miR-486-3p עבור OSAS בחולי ACI, בחן את הקשר התלוי-מינון שלו עם חומרת ה-OSAS וסממני דלקת (TNF-α, CRP ו-HIF-1α), והעריך את התועלת הפרוגנוסטית שלו עבור תוצאות תפקודיות בטווח של שנה אחת. למיטב ידיעתנו, זהו המחקר המקיף הראשון המדגים כי miR-486-3p עשוי לשמש כסמן ביולוגי אבחנתי ופרוגנוסטי חדש לתחלואה משולבת של ACI-OSAS, פוטנציאלית באמצעות ויסות של דלקת סיסטמית.
פרוטוקול
מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים המסופח לאוניברסיטה הרפואית של Xuzhou (מספר אישור: XYFY2024-KL238-01) והיה פטור מהדרישה להשיג הסכמה מדעת נוספת מהמטופלים. הרכיבים והציוד שנעשה בהם שימוש מפורטים ב- טבלת חומרים.
מטופלים ודגימות
מחקר זה היה מחקר עוקבה רטרוספקטיבי. מנובמבר 2020 עד דצמבר 2023, גויסו באופן רציף 270 מטופלים שעברו ACI בבית החולים המסופח של Xuzhou Medical University. תהליך בחירת המטופלים מסוכם ב-Supplementary Figure 1. מטופלים מתאימים זוהו באמצעות סריקה יומית של כל האשפוזים החדשים ביחידה לשבץ מוחי. הופעת תסמינים בתוך 72 h לפני האשפוז אומתה באמצעות סקירת רשומות רפואיות של מדור מיון ואושרה על ידי נוירולוג מוסמך באמצעות היסטוריה רפואית של המטופל וראיון עם בני המשפחה. גודל המדגם חושב על בסיס היכולת לזהות הבדל מובהק ברמות miR-486-3p בין הקבוצות. בהנחה של גודל אפקט של 0.5, ערך α דו-צדדי של 0.05 ועוצמה (1-β) של 0.80, נדרשו לפחות 64 מטופלים לכל קבוצה. גדלי הקבוצות הסופיים משקפים את הגיוס בפועל ואת השכיחות הגבוהה יותר של OSAS באוכלוסיית השבץ, ולא הקצאה שנקבעה מראש. מטופלים עם ACI בשילוב OSAS נעקבו לגבי הפרוגנוזה שלהם למשך שנה אחת.
קריטריוני ההכללה היו: (1) שבץ איסכמי חריף עם הופעת תסמינים בתוך 72 h לפני האשפוז, שאושר באמצעות דימות תהודה מגנטית (MRI). (2) יכולת להבין ולהשלים את שאלוני המחקר ואת ההערכות הנוירולוגיות. (3) חומרת ה-ACI הוערכה באמצעות מדד השבץ של המכונים הלאומיים לבריאות (NIHSS) בעת האשפוז. כאשר ציון ה-NIHSS הוא <5, המצב מסווג כ-ACI קל; כאשר ציון ה-NIHSS הוא בין 5 ל-20, הוא נחשב כ-ACI בינוני. קריטריוני ההחרגה העיקריים כללו היסטוריה של גידולים ממאירים, מוגבלות פיזית חמורה קודמת או הפרעות פסיכיאטריות, אי-ספיקה לבבית, ריאתית או כלית חמורה, ניתוח גדול או טראומה ב-3 החודשים שקדמו לבדיקה, זיהומים פעילים או מחלות אוטואימוניות; שבץ קודם בתוך 6 חודשים; טיפול אימונו-סופרסיבי; ואבחנה או טיפול קודמים ב-OSAS (כולל טיפול בלחץ אוויר חיובי רציף - CPAP).
לאישור באמצעות MRI, כל המטופלים עברו MRI סטנדרטי של המוח במערכת של 3.0-T, שכלל את הרצפים הבאים: T1-weighted, T2-weighted, fluid-attenuated inversion recovery (FLAIR), diffusion-weighted imaging (DWI), ומיפוי apparent diffusion coefficient (ADC). אוטם חריף הוגדר כנוכחות של אות היפר-אינטנסיבי ב-DWI עם אות היפו-אינטנסיבי תואם ב-ADC. כל סריקות ה-MRI פורשו על ידי שני נוירו-רדיולוגים מנוסים שלא היו חשופים לנתונים הקליניים, וחילגויות נפתרו באמצעות הסכמה. דירוג NIHSS בוצע בעת הקבלה על ידי נוירולוגים מוסמכים לפני כל טיפול תרומבוליטי או תוך-כלי.
דם ורידי בצום נדגם בין 24 h ל-48 h לאחר תחילת השבץ, בעקבות צום של לילה של לפחות 8 h. דגימות הדם נלקחו בין השעות 6:00 AM ל-8:00 AM כדי למזער שינויים צירקדיים. נפח כולל של 5 mL של דם ורידי פריפריאלי נאסף למבחנות ואקום מצופות EDTA. בתוך 2 h מהאיסוף, דגימות הדם עברו סנטריפוגה במהירות של 1,500 × g למשך 15 min בטמפרטורה של 4 °C באמצעות סנטריפוגה מקוררת. הסרום העליון חולק בזהירות לאליקוטים במבחנות מיקרו-סנטריפוגה בנפח 1.5 mL נטולות RNase ואוחסן מיד בטמפרטורה של −80 °C עד להפקת ה-RNA. ה ownנמנעו באופן קפדני ממחזורי הקפאה והפשרה חוזרים; כל האליקוטים הוכפחו למקסימום מחזור הקפאה והפשרה אחד לפני האנליזה.
חלוקת המטופלים לקבוצות
המשתתפים חולקו לקבוצות על סמך מדדי ה-AHI שלהם ממבדקת פוליסומנוגרפיה. כל ההקלטות בוצעו במעבדת השינה של בית החולים בין השעות 22:00 ל-06:00 למשך זמן מינימלי של 7 h. הערוצים הפיזיולוגיים שנוטרו כללו: אלקטרואנצפלוגרפיה (EEG; שישה ערוצים), אלקטרואוקולוגרפיה (EOG; שני ערוצים), אלקטרומיוגרפיה (EMG; סנטר ושרירי הטיביאליס אנטריוריים דו-צדדיים), אלקטרוקרדיוגרפיה (ECG; ליד בודד), זרימת אוויר נזאלית (תרמיסטור ומתמר לחץ), מאמץ נשימתי תרסי ובטני (פלתיסמוגרפיה של השראות נשימתית), ומד סטורציה (SpO2). טכנאי מחקר השינה חישב את ה-AHI. דירוג של שלבי השינה ואירועי נשימה בוצע ידנית על ידי טכנאי שינה מוסמך בהתאם למדריך הדירוג של ה-American Academy of Sleep Medicine (AASM) משנת 2012, באמצעות תוכנת Somnolyzer 24×7. על פי הקריטריונים האבחנתיים המקובלים של ה-American Academy of Sleep Medicine, AHI של 5 אירועים לשעה ומעלה הוא הסף הסטנדרטי לאבחנה של OSA. לפיכך, משתתפים עם AHI < 5 סווגו כקבוצת ה-ACI (n = 100), בעוד שמשתתפים עם AHI ≥ 5 סווגו כקבוצת ACI combined OSAS (n = 170). מבין אלו עם AHI ≥ 5 (קבוצת ACI combined OSAS, n = 170), המטופלים חולקו להמשך לשלוש תתי-קבוצות של חומרה על סמך קריטריונים מוגדרים: OSAS קלה (5 ≤ AHI < 15, n = 60), OSAS בינונית (15 ≤ AHI < 30, n = 75), ו-OSAS חמורה (AHI ≥ 30, n = 35). סיווג זה איפשר הערכה של הקשר התלוי במינון בין העומס ההיפוקסי, ביטוי של miR‑486‑3p ומסמני דלקת. מטופלים שעברו טיפול קודם ב-OSAS (למשל, CPAP) לא נכללו במחקר כדי למנוע הפרעה למדידת ה-AHI הבסיסית.
הערכת פרוגנוזה
נקודת הזמן של שנה אחת מאפשרת להשפעות חריפות לחלוף ולעומס ההיפוקסיה המצטבר של OSAS להתבטא, ובכך מספקת חלון זמן איתן להערכת ההשפעה הפרוגנוסטית שלו. הפרוגנוזה הקלינית של חולים עם ACI בשילוב עם OSAS הוערכה באמצעות סולם Rankin המותאם (mRS) לאחר הופעת המחלה. כל הערכות ה-mRS בוצעו על ידי נוירולוגים מוסמכים שעברו הכשרה סטנדרטית לפני המחקר, תוך שימוש בטופס ראיון מובנה של mRS. מהימנות בין בוחנים הוערכה באמצעות מקדם kappa >0.85. הערכת המעקב נערכה באמצעות ביקור מתוכנן במרפאה חיצונית. עבור חולים שלא יכלו להגיע באופן פרונטלי, בוצע ראיון טלפוני מובנה על ידי אחות מחקר מיומנת תוך שימוש בתסריט סטנדרטי. כל המעריכים היו מסוככים לרמות miR-486-3p ולמצב ה-OSAS של החולים. כדי לשמור על עקביות בין ההערכות במרפאה לבין ההערכות הטלפוניות, שני הפורמטים השתמשו באותו שאלון מובנה, וכל המעריכים השלימו תרגיל כיול לפני תחילת המחקר. חולים עם ציונים של 0–2 שויכו לקבוצת הפרוגנוזה הטובה, וחולים עם ציונים של 3–6 שויכו לקבוצת הפרוגנוזה הרעה. אף חולה לא אבד במעקב. SAQLI, ESS, TNF-α ו-HIF-1α הוערכו כמשתנים פרוגנוסטים ולא שימשו להגדרת קבוצות הפרוגנוזה. NIHSS, SAQLI ו-ESS הוענקו על ידי צוות מחקר מיומן. SAQLI ו-ESS הוענקו כשאלונים המנוהלים על ידי מראיין בחדר שקט.
מדד דירוג
NIHSS הוא סולם כמותי עבור שבץ מוחי11, כאשר ציונים גבוהים יותר מעידים על חומרה גדולה יותר של ACI. SAQLI הוא שאלון איכות חיים עבור OSA בסולם של 1–7, כאשר ציונים גבוהים יותר מעידים על איכות חיים גרועה יותר, ומכסה פעילויות יומיומיות, אינטראקציות חברתיות, מצבים רגשיים, תסמינים ותסמינים הקשורים לטיפול12. ESS משמש לבחינת נמנומי יום בדיווח עצמי של המטופלים, עם טווח ציונים מ-0 עד 24, וציון > 10 מעיד על נמנומי יום13.
מיצוי RNA ושעתוק הפוך
RNA כולל מולא מ-200 µL של סרום באמצעות ריאגנט TRIzol. בקצרה, דגימות סרום עורבבו עם 800 µL של TRIzol, דגרו בטמפרטורת החדר למשך 5 min, וסובבו בצנטריפוגה במהירות 12,000 × g למשך 15 min ב-4 °C. הוספו כלורופורם (200 µL), והתערובת נוערה בעוצמה למשך 15 s, דגרה למשך 3 min, וסובבה בצנטריפוגה במהירות 12,000 × g למשך 15 min ב-4 °C. הפאזה המימית הועברה למבחנה נקייה, ו-RNA שקע באמצעות 500 µL של איזופרופנול, דגור ב-−20 °C למשך 1 h, וסובב בצנטריפוגה במהירות 12,000 × g למשך 10 min ב-4 °C. משקע ה-RNA נשטף עם אתנול 75%, יובש באוויר והומס ב-20 µL של מים נקיים מ-RNase. ריכוז ה-RNA וטוהרו נבדקו באמצעות ספקטרופוטומטר למיקרו-נפחים, כאשר יחס A260/A280 שבין 1.8 ל-2.0 נחשב קביל לניתוחים המשכיים. שלמות ה-RNA אומתה באמצעות אלקטרופורזה בג'ל אגרוזה.
שעתוק הפוך בוצע באמצעות 500 ng של RNA כולל עם ה-Reverse Transcription Kit בנפח תגובה כולל של 20 µL, תוך שימוש בפריימרים מסוג random hexamer בהתאם לפרוטוקול היצרן. תגובת השעתוק ההפוך בוצעה ב-25 °C למשך 10 min, ב-42 °C למשך 60 min, וב-70 °C למשך 5 min. ה-cDNA שהתקבל נשמר ב-−20 °C עד למועד השימוש.
RT-qPCR
ביטוי של miR-486-3p זוהה באמצעות ערכה ל-PCR בזמן אמת מבוססת SYBR Green לכימות microRNA במערכת PCR כמותית בזמן אמת (qPCR). תערובת התגובה הכילה 10 µL של 2× SYBR Green Master Mix, 2 µL של תבנית cDNA (מהולה ביחס של 1:5), 1 µL מכל פריימר (10 µM), ומים נקיים מנוקלאז עד לנפח סופי של 20 µL. רצפי הפריימרים הם כדלקמן (מ-5'-3'): miR-486-3p-forward: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, reverse: CTCAACTGGTGTCGTGGA; ו-U6-forward: CTCGCTTCGGCAGCACA, reverse: AACGCTTCACGAATTTGCGT. תנאי מחזורי ה-qPCR היו: 95 °C למשך 2 min, ולאחריהם 40 מחזורים של 95 °C למשך 30 s, 60 °C למשך 30 s, ו-72 °C למשך 60 s. כל דגימה הורצה בשחזור של שלושה, ובכל הרצה נכללה בקרת ללא תבנית (no-template control). סגוליות ההגברה אומתה באמצעות ניתוח עקומת התכה מ-60 °C עד 95 °C. סף המחזור (Ct) נקבע באופן אוטומטי על ידי תוכנת QuantStudio 6 Pro (v1.5) באמצעות הגדרת הסף ברירת המחדל. רמת miR-486-3p חושבה בשיטת 2-ΔΔCT ונורמלה ל-U6. U6 תוקף כגן ייחוס יציב בדגימות הסרום שלנו באמצעות אלגוריתם NormFinder כדי להבטיח עקביות בין הקבוצות. מקדמי השונות הבין-בדיקתיים והתוך-בדיקתיים היו <5%.
ELISA
ריכוזי הסרום של C-reactive protein (CRP), TNF-α, ו-HIF-1α נמדדו באמצעות ערכת ELISA. הפרוטוקולים הניסויים בוצעו בהתאם להוראות היצרן. בקצרה, דגימות סרום הופשרו על קרח ודוללו ביחס של 1:2 עם תמיסת הדילול המסופקת. דגימות ותמיסות סטנדרט הועברו לפלטות 96-בארים מצופות מראש (100 µL לבאר) ודגרו למשך 2 h בטמפרטורה של 37°C. לאחר ארבעה שלבי שטיפה עם 300 µL של תמיסת שטיפה, הוספו 100 µL של נוגדן זיהוי מצומד לביוטין והדגירו למשך 1 h בטמפרטורה של 37°C. לאחר שלב שטיפה נוסף, הוספו 100 µL של streptavidin מצומד ל-horseradish peroxidase והדגירו למשך 30 min בטמפרטורה של 37°C בחשיכה. תסבסב כרומוגני (tetramethylbenzidine, 100 µL) הוסף והדגירה נמשכה 15 min בטמפרטורה של 37°C בהגנה מאור. התגובה הופסקה באמצעות 50 µL של תמיסת עצירה, והבליעה נמדדה באורך גל של 450 nm באמצעות קורא מיקרופלטות. הריכוזים חושבו על סמך עקומות סטנדרט שנוצרו עם ריכוזים ידועים של חלבונים רקומביננטיים. כל דגימה נמדדה בשכפול, והערך הממוצע שימש לצורך האנליזה. דגימות בקרת איכות (QC) שסופקו על ידי היצרן נכללו בכל פלטה; התוצאות התקבלו רק כאשר ערכי ה-QC היו בטווח שהגדיר היצרן.
בקרת איכות והסבירות לשחזור
כל בדיקות המעבדה בוצעו בהתאם להנחיות ה-MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) עבור RT-qPCR, ובהתאם לתקני הדיווח המתאימים עבור ELISA. מכשירים מרכזיים כוללו כיול לפי לוחות הזמנים של היצרנים. דגימות ביקורת שליליות וחיוביות נכללו בכל סבב של הרצות RT-qPCR ו-ELISA כדי לנטר שונות בין פלטות. כל הנתונים תועדו ונוהלו באמצעות Microsoft Excel, והמחבר המקשר יספק פרוטוקולים ניסיוניים מפורטים ונתונים גולמיים לבקשה סבירה.
ניתוח סטטיסטי
הנתונים נותחו באמצעות SPSS 23.0 ותוכנה לניתוח סטטיסטי והצגת גרפים. התפלגות נורמלית נבחנה באמצעות מבחן Shapiro–Wilk. משתנים רציפים מוצגים כממוצע ± SD או חציון (IQR), והושוו באמצעות t‑test או מבחן Mann–Whitney U, לפי העניין. משתנים קטגוריאליים הושוו באמצעות מבחן χ2. מתאמים נבחנו באמצעות ניתוחי Pearson או Spearman בהתבסס על התפלגות הנתונים. הערך הניבוי נקבע באמצעות עקומת ROC ואומת באמצעות 5-fold cross-validation. ערך הסף האופטימלי עבור miR-486-3p נקבע על ידי מקסום מדד Youden. ניתוחי מתאם של Pearson ו-Spearman שימשו להערכת מתאמים. לצורך ניתוח פרוגנוסטי, החולים סווגו לפי חציוני הביטוי של miR‑486‑3p; עקומות Kaplan–Meier עם מבחן log‑rank שימשו להשוואת תוצאות הישרדות בין הקבוצות. משתנים עם P < 0.1 ברגרסיית Cox חד-משתנית הוכנסו למודל Cox רב-משתנים. P < 0.05 נחשב למשמעותי מבחינה סטטיסטית.
תוצאות
מאפייני בסיס בקבוצת ה-ACI ובקבוצת ה-ACI המשולבת עם OSAS
כפי שמוצג ב-Table 1, קבוצת ה-ACI כללה 68 גברים ו-32 נשים, עם גיל ממוצע של 62.84 ± 12.65 שנים, וקבוצת ה-ACI המשולבת עם OSAS כללה 116 גברים ו-54 נשים, עם גיל ממוצע של 61.31 ± 11.25 שנים. לקבוצת ה-ACI המשולבת עם OSAS היו ערכי AHI, ציוני NIHSS ורמות CRP גבוהים באופן מובהק. עם זאת, שתי הקבוצות הראו התפלגויות דומות של גיל, מגדר, BMI, יתר לחץ דם, DM, קרדיופתיה, דיסליפידמיה, עישון, שתיית אלכוהול, תרומבוליזה ו-TOAST.
שינויים ב-miR-486-3p ובסמנים דלקתיים בין תתי-קבוצות של חומרת OSAS
כדי להעריך את הקשר התלוי במינון בין חומרת ה-OSAS לבין שינויים מולקולריים, חילקנו את 170 המטופלים עם ACI ו-OSAS לתתי-קבוצות של חומרה קלה (5 ≤ AHI < 15, n = 60), בינונית (15 ≤ AHI < 30, n = 75), וחמורה (AHI ≥ 30, n = 35) על בסיס קריטריוני AHI. כפי שמוצג ב-איור 1A–C, נצפתה תבנית מדורגת ברורה בין ארבע הקבוצות (ACI, OSAS קלה, בינונית וחמורה). באופן ספציפי, ביטוי miR-486-3p פחת באופן פרוגרסיבי מקבוצת ה-ACI ועד לתת-הקבוצה של OSAS חמורה (איור 1A, P < 0.001 לעומת קבוצת ACI). לעומת זאת, רמות TNF-α ו-CRP בסרום עלו במדרגות עם חומרת ה-OSAS (איור 1B,C, P < 0.001 לעומת קבוצת ACI). ממצאים אלו מעידים כי העומס ההיפוקסי הנגרם על ידי OSAS קשור לדיכוי מדורג של miR-486-3p ולעלייה מקבילה בדלקת סיסטמית.
הערך האבחנתי של miR-486-3p עבור OSAS בחולי ACI
ל-miR-486-3p עשוי להיות ערך אבחנתי משמעותי ב-OSAS המשולב עם ACI, עם AUC של 0.927 (ערך הסף האופטימלי היה 0.845), והרגישות והסגוליות היו 92.94% ו-79.00% (איור 1D). כדי להעריך את חסונו של המודל האבחנתי ולשלול התאמת יתר (overfitting) פוטנציאלית, בוצע אימות צולב של 5 קיפולים (5-fold cross-validation) עבור ניתוח ה-ROC של miR-486-3p. כפי שמוצג ב-טבלה נספחת 1, ה-AUC הממוצע בחמשת הקיפולים היה 0.928 (בטווח של 0.847 עד 0.969), נתון העולה בקנה מידה רב עם ה-AUC הגלוי של 0.927 מהניתוח המקורי. הרגישות והסגוליות הממוצעות היו 88.83% ו-87.00%, בהתאמה.
מתאמים של miR-486-3p עם חומרת השבץ ומסמני דלקת ב-ACI המשולב ב-OSAS
בקבוצת ה-ACI עם OSAS, ניתוחי מתאם של Spearman גילו כי ביטוי miR-486-3p נמצא במתאם שלילי מובהק עם מדד NIHSS (איור 2A), TNF-α (איור 2B), ו-CRP (איור 2C).
מדדים פרוגנוסטיים בקבוצות עם פרוגנוזה טובה ופרוגנוזה רעה
מטופלים עם ACI בשילוב עם OSAS חולקו לקבוצת פרוגנוזה טובה ולקבוצת פרוגנוזה רעה על פי מדדי mRS. כפי שמוצג בטבלה 2, מדד mRS, מדד SAQLI, מדד ESS, HIF-1α ו-TNF-α היו מוגברים בקבוצת הפרוגנוזה הרעה.
ערך פרוגנוסטי של miR-486-3p לתוצאות שנתיות בחולי ACI עם OSAS משולב
תוצאות עקומת קפלן-מייר (Kaplan-Meier) הצביעו על כך שרמות גבוהות של miR-486-3p היו קשורות לפרוגנוזה טובה, בעוד שרמות נמוכות היו קשורות לפרוגנוזה גרועה (איור 2D). בניתוח החד-משתני, ביטוי miR-486-3p ומדד NIHSS היו קשורים לתוצאות קליניות. משתנים אחרים, כולל מדד SAQLI (P = 0.078), HIF-1α (P = 0.086), TNF-α (P = 0.072), גיל (P = 0.082), DM (P = 0.067), קרדיופתיה (P = 0.065), ו-AHI (P = 0.069), הראו קשרים בעלי מובהקות שולית לפרוגנוזה, והם נכללו גם בניתוח Cox רב-משתני. בניתוח רב-משתני, miR-486-3p נותר גורם הגנה עצמאי (HR = 0.437, 95% CI: 0.278–0.684, P < 0.001), בעוד שקרדיופתיה (HR = 1.822, 95% CI: 1.070–3.104, P = 0.027) ומדד NIHSS (HR = 1.597, 95% CI: 1.008–2.529, P = 0.046) עלו כגורמי סיכון עצמאיים לתוצאות קליניות גרועות (טבלה 3).
סיכום הממצאים
לסיכום, המחקר הנוכחי הדגים כי miR‑486‑3p מופחת באופן משמעותי בחולי ACI עם OSAS נלווה, ומפגין דיוק אבחנתי גבוה בזיהוי OSAS באוכלוסייה זו. נצפתה מערכת יחסים ברורה התלויה במינון בין תתי-הקבוצות של חומרת ה-OSAS, כאשר miR‑486‑3p פחת באופן הדרגתי וסממנים דלקתיים (TNF‑α ו-CRP) עלו בשלבים מ-OSAS קל ל-OSAS חמור. ניתוחי מתאם אישרו עוד כי miR‑486‑3p נמצא בקשר שלילי הן עם חומרת השבץ (NIHSS) והן עם דלקת מערכתית. באופן משמעותי, ביטוי נמוך של miR‑486‑3p ניבא תוצאות תפקודיות גרועות לאחר שנה אחת, ורגרסיית Cox רב-משתנית זיהתה את miR‑486‑3p כגורם מגן עצמאי לאחר התאמה למשתנים מתבלבלים פוטנציאליים, כולל NIHSS ו-AHI. יחד, ממצאים אלו תומכים בהיפותזה כי miR‑486‑3p עשוי לשמש כסמן ביולוגי אבחנתי ופרוגנוסטי חדש לתחלואה משולבת של ACI‑OSAS, פוטנציאלית באמצעות תפקידו הרגולטורי בדלקת מערכתית.
זמינות נתונים:
הנתונים הגולמיים התומכים בממצאי מחקר זה זמינים ב- קובץ משלים 1, הכוללת מאפייני בסיס, רמות ביטוי של miR‑486‑3p, מדידות ELISA ונתוני מעקב של mRS לאחר שנה עבור כל המטופלים שנכללו במחקר.
איור 1: שינויים ב-miR-486-3p ובסמנים דלקתיים בין תתי-קבוצות של חומרת OSAS בשילוב עם ACI והביצועים האבחנתיים של miR-486-3p עבור OSAS. (A) ביטוי יחסי של miR-486-3p בקבוצת ה-ACI ובתתי-הקבוצות של ACI בשילוב עם OSAS. (B) ריכוז משולב של TNF-α בסרום. (C) ריכוז CRP בסרום בקבוצת ה-ACI (AHI < 5, n=100) ובתתי-הקבוצות של OSAS קל (5 ≤ AHI < 15, n=60), בינוני (15 ≤ AHI < 30, n=75), וחמור (AHI ≥ 30, n=35). (D) עקומת ROC של miR-486-3p להבחנה בין חולי ACI עם OSAS לאלו ללא OSAS. ***P < 0.001. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מורחבת של איור זה.
איור 2: מתאמים של miR-486-3p עם חומרת השבץ ומדדי דלקת, וערכו הפרוגנוסטי לתוצאות לאחר שנה אחת. (A–C) ניתוחי מתאם של Spearman של ביטוי miR-486-3p עם מדד NIHSS, TNF-α ו-CRP. (D) עקומות הישרדות של Kaplan-Meier להסתברות לפרוגנוזה טובה במעקב של שנה אחת, בחלוקה לפי חציונו של ביטוי miR-486-3p. ***P < 0.001. נא לחץ כאן להצגת גרסה גדולה יותר של איור זה.
| משתנה | ACI (n=100) | ACI ו-OSAS (n=170) | ערך P | |
| גיל (שנים) | 62.84 ± 12.65 | 61.31 ± 11.25 | 0.303 | |
| מגדר (זכר/נקבה) | 68/32 | 116/54 | 0.968 | |
| BMI (kg/m2) | 24.74 ± 3.57 | 25.02 ± 3.47 | 0.531 | |
| יתר לחץ דם, n (%) | 74 (74%) | 134 (78.82%) | 0.365 | |
| DM, n (%) | 22 (22%) | 43 (25.29%) | 0.543 | |
| קרדיופתיה, n (%) | 13 (13%) | 25 (14.71%) | 0.698 | |
| AHI (פעמים/שעה) | 2.07 ± 1.42 | 19.95 ± 9.19 | < 0.001*** | |
| ציון NIHSS | 1.70 ± 1.18 | 4.05 ± 1.73 | < 0.001*** | |
| CRP (ng/mL) | 2.03 ± 0.17 | 3.01 ± 0.27 | < 0.001*** | |
| דרגת ACI (קל/בינוני) | 99/1 | 69/101 | < 0.001*** | |
| דיסליפידמיה (כן/לא) | 52/48 | 96/74 | 0.478 | |
| עישון (כן/לא) | 48/52 | 91/79 | 0.382 | |
| שתייה (כן/לא) | 40/60 | 87/83 | 0.076 | |
| טרומבוליזה (כן/לא) | 38/62 | 81/89 | 0.124 | |
| TOAST | 0.487 | |||
| קרדיואמבוליזם (n) | 22 | 36 | ||
| חסימת כלי דם קטנים (n) | 18 | 28 | ||
| טרשחית של עורקים גדולים (n) | 13 | 25 | ||
| שבץ בעל אטיולוגיה לא ידועה (n) | 5 | 19 | ||
| שבץ בעל אטיולוגיה ידועה אחרת (n) | 42 | 62 | ||
טבלה 1: מאפייני בסיס של חולי ACI עם ובלי OSAS. נתונים מוצגים כממוצע ± SD עבור משתנים רציפים או n (%) עבור משתנים קטגוריאליים. ערכי P חושבו באמצעות t-test למדגמים בלתי תלויים עבור משתנים רציפים ומבחן חי-ריבוע עבור משתנים קטגוריאליים. ACI, אוטם מוחי חריף; OSAS, תסמונת דום נשימה חסימתי בשינה; BMI, מדד מסת הגוף; DM, סוכרת; AHI, מדד דום נשימה-היפופניאה; NIHSS, סולם השבץ של המכונים הלאומיים לבריאות; CRP, חלבון C-ריאקטיבי; TOAST, Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment.
| משתנה | פרוגנוזה טובה (n=97) | פרוגנוזה גרועה (n=73) | ערך p |
| מדד mRS | 0.88 ± 0.84 | 4.55 ± 1.08 | < 0.001*** |
| מדד SAQIL | 2.59 ± 1.17 | 3.12 ± 1.48 | 0.009** |
| ציון ESS | 8.69 ± 2.76 | 10.05 ± 2.79 | 0.002** |
| HIF-1α (pg/mL) | 1159.94 ± 277.86 | 1283.88 ± 445.15 | 0.027* |
| TNF-α (pg/mL) | 121.4 ± 12.87 | 128.4 ± 11.67 | < 0.001*** |
טבלה 2: מדדים פרוגנוסטיים בקבוצות עם פרוגנוזה טובה ופרוגנוזה רעה של חולי ACI עם OSAS. החולים חולקו לקבוצות פרוגנוזה טובה (mRS 0–2, n = 97) ופרוגנוזה רעה (mRS 3–6, n = 73) על בסיס ציוני mRS לאחר שנה אחת. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. ערכי P חושבו באמצעות t-test בלתי תלוי. mRS, modified Rankin Scale; SAQLI, Calgary Sleep Apnea Quality of Life Index; ESS, Epworth Sleepiness Scale; HIF‑1α, hypoxia‑inducible factor‑1α; TNF‑α, tumor necrosis factor‑α.
| משתנה | משאבי אנוש | רווח בר סמך 95% חד-משתני | P | משאבי אנוש | רווח בר-סמך 95% רב-משתני | P | ||
| נמוך יותר | עליון | נמוך | עליון | |||||
| miR-486-3p | 0.442 | 0.228 | 0.679 | <0.001 | 0.437 | 0.278 | 0.684 | <0.001 |
| מדד SAQLI | 0.628 | 0.375 | 1.053 | 0.078 | 0.713 | 0.416 | 1.22 | 0.217 |
| ציון ESS | 0.922 | 0.595 | 1.429 | 0.718 | ||||
| HIF-1α | 0.694 | 0.457 | 1.053 | 0.086 | 0.802 | 0.523 | 1.229 | 0.311 |
| TNF-α | 1.469 | 0.966 | 2.233 | 0.072 | 1.494 | 0.978 | 2.284 | 0.063 |
| גיל | 1.445 | 0.955 | 2.188 | 0.082 | 1.29 | 0.845 | 1.97 | 0.238 |
| מגדר | 0.829 | 0.534 | 1.285 | 0.401 | ||||
| מדד מסת הגוף (BMI) | 1.196 | 0.786 | 1.821 | 0.402 | ||||
| יתר לחץ דם | 0.754 | 0.465 | 1.222 | 0.252 | ||||
| סוכרת (DM) | 1.512 | 0.972 | 2.351 | 0.067 | 1.246 | 0.79 | 1.965 | 0.343 |
| מחלת לב | 1.611 | 0.971 | 2.673 | 0.065 | 1.822 | 1.07 | 3.104 | 0.027 |
| מדד הפסקות נשימה-חרירות (AHI) | 1.468 | 0.97 | 2.222 | 0.069 | 1.125 | 0.734 | 1.725 | 0.588 |
| מדד NIHSS | 1.588 | 1.027 | 2.455 | 0.037 | 1.597 | 1.008 | 2.529 | 0.046 |
| דיסליפידמיה | 1.178 | 0.776 | 1.788 | 0.442 | ||||
| עישון | 0.895 | 0.593 | 1.35 | 0.596 | ||||
| שתייה | 1.116 | 0.738 | 1.689 | 0.603 | ||||
| תרוליזה | 1.259 | 0.834 | 1.902 | 0.272 | ||||
טבלה 3: ניתוחי רגרסיית Cox חד-משתניים ורב-משתניים לפרוגנוזה גרועה במשך שנה אחת במטופלי ACI עם OSAS. HR, יחס סיכון; CI, רווח בר-סמיכות; SAQLI, מדד איכות החיים של קלגרי לדום נשימה בשינה; ESS, סולם הנעוסיות של אפורת'; HIF‑1α, גורם המושרה על ידי היפוקסיה-1α; TNF‑α, גורם נמק גידולי-α; BMI, מדד מסת הגוף; DM, סוכרת; AHI, מדד דום נשימה-היפופניאה; NIHSS, סולם השבץ של המכונים הלאומיים לבריאות. משתנים עם P < 0.1 בניתוח החד-משתני הוכנסו למודל Cox הרב-משתני.
איור משלים 1: תרשים זרימה של בחירת מטופלים וחלוקה לתתי-קבוצות.אנא לחץ כאן להורדת הקובץ.
טבלה נלווית 1: תיקוף צולב חמיש-קיפול (Five‑fold cross‑validation) לצורך תיקוף פנימי של הערך האבחנתי של miR‑486‑3p. AUC, השטח תחת העקומה; CI, רווח בר-סמיכות. ה-AUC הממוצע, הרגישות והסגוליות חושבו כממוצע אריתמטי על פני חמשת הקיפולים.אנא לחצו כאן להורדת קובץ זה.
קובץ משלים 1: הנתונים הגולמיים התומכים בממצאי מחקר זה.אנא לחצו כאן כדי להוריד קובץ זה.
דיון
מטופלים עם OSAS חווים קריסה וחסימה חוזרות ונשנות של נתיבי הנשימה, המובילות להיפוקסיה לסירוגין (IH) ולישנוניות יתר במהלך היום (EDS), העלולות לגרום לנזק נוירונלי14דום נשימה בשינה חסימתי (OSA) שכיח מאוד לאחר אירוע קרדיאלי חריף (ACI), והוא משפיע על כ-72% מהמטופלים ומחמיר משמעותית את הסיכון הקרדיווסקולרי.15ACI מהווה ספקטרום של גירעונות נוירולוגיים הנובעים מאיסכמיה והיפוקסיה מוחיות מוקדיות כתוצאה מפרפוזיה לא מספקת.16ההיפוקסיה לסירוגין, המרכזית לפתולוגיה של OSAS, ככל הנראה פועלת באופן סינרגי עם הפגיעה האיסכמית של ACI, ובכך מגבירה את הנזק המוחי. עם זאת, מחקרים המתמקדים ספציפית במצב תחלואה נלווה זה, המהווה סיכון גבוה, הם מועטים. ראיות מצטברות מצביעות על כך ש-miRNAs ממלאים תפקידים מכריעים פתוגנוגנזה הן של OSAS והן של ACI.17,18צוין בעבר כי miR-486-3p עשוי להיות קשור ל-OSAS ול-ACI. לפיכך, בחנו את miR-486-3p כקשר מולקולרי פוטנציאלי בין OSAS ל-ACI. ראוי לציין כי קוהורט זה גויס מנובמבר 2020 עד דצמבר 2023, תקופה המכסה את פנדמיית ה-COVID-19. ראיות מצטברות מצביעות על כך שדלקת מערכתית מתמשכת שעוררה זיהום ב-SARS-CoV-2 עשויה להחמיר פגיעה נוירונלית ולקדם את התקדמותם של נגעים נוירודגנרטיביים.19,20עם זאת, המחקר הנוכחי אינו מתמקד בזיהום ב-SARS-CoV-2/COVID-19, ומטרות המחקר והניסוח שלו אינם קשורים ל-COVID-19. נמצאו רמות נמוכות משמעותית של miR-486-3p בסרום במקרים של ACI בשילוב עם OSAS, ממצא המספק ראיה קלינית ראשונית לתפקידו של המולקולה בתחלואה הנלווית זו ומדגיש את הצורך במחקרים נוספים.
מדד ה-NIHSS יכול להעריך את חומרתה של שברה 11. מדד AHI בבדיקת פוליסומנוגרפיה משמש בדרך כלל לאבחון OSAS, וככל שציון ה-AHI גבוה יותר, כך ה-OSAS חמור יותר21. בהינתן האתגרים הקליניים והלוגיסטיים של פוליסומנוגרפיה, זיהוי סמנים ביולוגיים נגישים עבור דום נשימה חסימתי בשינה בחולים עם שברה הוא חיוני22. הממצאים הנוכחיים הצביעו על כך של-miR-486-3p יש פוטנציאל אבחנתי משמעותי עבור OSAS המשולב עם ACI, שכן רמותיו נמצאות במתאם הפוך הן עם מדד ה-AHI והן עם מדד ה-NIHSS, ובכך הן משקפות את חומרת המחלה.
מבחינה מתודולוגית, מחקר זה מדגים את ההיתכנות של שילוב פרופיל מולקולרי עם פנוטיפ קליני כמותי בתוך קוהורט אחת, כדי להעריך בו-זמנית דיוק אבחנתי, קשרי מינון-תגובה וערך פרוגנוסטי. מסגרת משולבת זו עשויה לשמש כנקודת ייחוס למחקרי גילוי ביומרקרים עתידיים בתחלואה נלווית הקשורה לשבץ מוחי, שבה אינטראקציות מורכבות בין מספר נתיבים פתופיזיולוגיים מסבכות לעיתים קרובות ניתוחים מסורתיים של נקודת קצה בודדת.
היפוקסיה לסירוגין (IH) היא סימן היכר של OSAS ומשרה דלקת ונזק רקמתי על ידי הפעלת מסלולי איתות פרו-דלקתיים23. באופן קריטי, מצב דלקתי זה מצטלב עם הפתוגנזה של ACI ומחמיר אותה, כאשר דלקת פוסט-איסכמית מתווכת פגיעה מוחית משנית24,25. מתווכי דלקת מרכזיים כגון TNF-α ו-CRP מוגברים בשני המצבים, וממוקמים בצומת של קסקדות דלקתיות המושרות על ידי היפוקסיה ומגורות על ידי איסכמיה, מה שהופך אותם למולקולות מרכזיות בפתולוגיה התחלואית המשולבת של ACI ו-OSA26,27,28. לכן, נמדדו ריכוזי הסרום של TNF-α ו-CRP בחולים עם ACI בשילוב עם OSAS. במחקר זה, המתאמים השליליים שנצפו בין רמות miR-486-3p בסרום לבין רמות TNF-α ו-CRP ב-ACI המשולב עם OSAS מרמזים על קשר פוטנציאלי בין miRNA זה לבין המצב הדלקתי הסיסטמי המאפיין מצב תחלואי משולב זה.
ל-OSAS יש השפעה שלילית מאוד על איכות החיים, ו-SAQLI הוא שאלון איכות חיים ספציפי ל-OSA29. EDS הוא תסמין נפוץ של OSAS, ו-OSAS הנלווה ל-EDS מוביל ליותר אירועים חריגים ולפרוגנוזה גרועה יותר30. ESS משמש בדרך כלל לקביעת חומרת הנמנומיות בשעות היום31. ב-OSAS, פרקים חוזרים של IH נחשבים לגורם סיכון עצמאי למחלות וסקולריות32. בנוסף, עקה חמצונית הנובעת מ-IH עלולה להוביל לסיבוכים כגון אוסטאופורוזיס, סיכון קרדיווסקולרי מוגבר ושינויים נוירולוגיים33. לכן, מחקר זה בחן גם את ביטויו של HIF-1α. הממצא של HIF-1α מוגבר בקבוצה עם פרוגנוזה גרועה של ACI המשולב עם OSAS תואם את הפתופיזיולוגיה של היפוקסיה אינטרמיטנטית כרונית ב-OSAS. יתרה מכך, התוצאות הראו כי miR-486-3p ו-TNF-α היו במתאם עם הפרוגנוזה ב-ACI המשולב עם OSAS, ורמות נמוכות של miR-486-3p היו קשורות לפרוגנוזה גרועה. הדבר מרמז על שרשרת פוטנציאלית שבה HIF-1α המושרה על ידי IH מדכא את miR-486-3p, ובכך תורם להעלאת ביטוי של מתווכי דלקת כגון TNF-α, ובכך מחמיר את הפגיעה המוחית ב-ACI.
למחקר זה עדיין יש מגבלות. המחקר מוגבל בשל היעדרה של קבוצות ביקורת (בריאים, OSAS בלבד), מה שמונע הגדרה של טווח נורמלי עבור miR-486-3p והבחנה בין שינויים הספציפיים לתחלואה נלווית לבין אלו של OSAS לבדו. לכן, עבודות עתידיות חייבות לכלול קבוצות אלו כדי למפות באופן מלא את פרופיל הביטוי של miR-486-3p. יתרה מכך, אין זה מספיק להסיק את מנגנון הבקרה הספציפי של miR-486-3p רק על בסיס מתאם. אנו נאמת את המנגנון המולקולרי שלו בניסויים עתידיים.
מנקודת מבט תרגומית, הדיוק האבחנתי הגבוה והערך הפרוגנוסטי העצמאי של miR‑486‑3p מרמזים על מספר יישומים קליניים פוטנציאליים. כסמן ביולוגי מבוסס דם, ניתן יהיה לשלב אותו בבדיקות השגרה של שבץ מוחי כדי לזהות חולי ACI עם OSAS בבסיסם, ובכך להקל על הפניה מוקדמת לפוליסומנוגרפיה והתערבות בזמן. ניטור רמות miR‑486‑3p במהלך השלבים החריפים והתת-חריפים עשוי לסייע במעקב אחר הדינמיקה הדלקתית ובסיווג חולים לפי סיכון פרוגנוסטי, מה שיאפשר אסטרטגיות שיקום מותאמות אישית. נתיבים תרגומיים אלה מצדיקים חקירה נוספת במחקרים פרוספקטיביים רב-מרכזיים. באופן כללי, miR-486-3p עשוי להשתתף ב-ACI בשילוב עם OSAS על ידי ויסות גורמים דלקתיים, ויש לו ערך אבחנתי ופרוגנוסטי ב-ACI בשילוב עם OSAS.
גילויים
מחקר זה מומן על ידי 'Research on Stroke Prevention and Treatment Technologies' (מס' WKZX2023CZ0143).
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| סורק MRI 3.0T | Siemens Healthineers, גרמניה | MAGNETOM Skyra | דימות מוחי לאישור אוטם מוחי חריף |
| מיקרו-פלטות ELISA בעלות 96 בארות | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., סין | XBS-PLATE | תגובת אנטיגן-נוגדן לזיהוי באמצעות ELISA |
| הנחיות הפרקטיקה הקלינית של AASM להפרעות נשימה בשינה | האקדמיה האמריקאית לרפואת שינה | הנחיה מלאה משנת 2020 | קריטריונים סטנדרטיים לאבחון AHI ולסיווג חומרת OSAS |
| הגרסה המתוקף בסינית של מדד איכות החיים של קלגרי לדום נשימה בשינה (SAQLI) | אוניברסיטת קלגרי | מהדורת תרגום 2021 | הערכת איכות חיים עבור מטופלים עם ACI המסובכת ב-OSAS |
| מבחנות ואקום לאיסוף דם עם EDTA-K2, 5 מ"ל | BD Biosciences, ארה"ב | 367863 | איסוף דם ורידי פריפרי להפרדת סרום |
| גרסה מתוקפת בסינית של סולם הנעוסיות של אפוורת' (ESS) | אוניברסיטת ג'ונס הופקינס | מהדורת 2018 מעודכנת | הערכת נבבּות יום במטופלים לאחר שבץ מוחי |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Software, ארה"ב | גרסה 9.4.1 | תרשימי פיזור, תרשימי קופסה, ויזואליזציה של עקומת ROC |
| ערכת ELISA ל-CRP אנושי | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., שנג'ן, סין | XBS-H001 | גילוי כמותי של חלבון C-reactive בנסיוב (serum) |
| HIF-1 אנושיα ערכת ELISA | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., שנג'ן, סין | XBS-H007 | גילוי כמותי של גורם המושרה על ידי היפוקסיה 1 (hypoxia-inducible factor-1) בסרוםα |
| TNF- אנושיα ערכת ELISA | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., שנג'ן, סין | XBS-H003 | גילוי כמותי של TNF- $\alpha$ בסרוםα גורם דלקתי |
| IBM SPSS Statistics 23.0 | IBM, ארמונק, ניו יורק, ארה"ב | גרסה 23.0 | כל הניתוחים הסטטיסטיים (t-test, מתאם, ROC, Kaplan–מייר, רגרסיית קוקס (Meier, Cox regression) |
| ספקטרופוטומטר למיקרו-פלטה | Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | Multiskan FC | קריאת בליעה עבור פלטות ELISA באורך גל של 450 ננומטר |
| miR-486-3p & פריימרים ל-qPCR של U6 | Sangon Biotech, שנגחאי, סין | סינתזה מותאמת אישית | הגברה של הגן מטרה ושל הגן הייחוס עבור qPCR |
| miScript SYBR Green PCR Kit | Qiagen GmbH, הילדן, גרמניה | 218073 | הגברה באמצעות PCR כמותי בזמן אמת של miR-486-3p ו-U6 |
| גרסהי מזוכה בסינית של מדד השבץ של ה-NIH (NIHSS) | המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ (NINDS), ארה"ב | מהדורה קלינית סטנדרטית | הערכת חומרת מצב נוירולוגי בנקודת הבסיס עבור חולי ACI |
| תוכנה לדירוג שינה ב-PSG | BMC Medical Co., Ltd., סין | גרסה 3.2 | דירוג ראשוני אוטומטי של אירועי נשימה בשינה |
| מערכת QuantStudio 6 Pro Real-Time PCR | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | QuantStudio 6 Pro | הגברה באמצעות RT-qPCR, רכישת עקומת המסה, רישום ערכי Ct |
| תוכנת QuantStudio Real-Time PCR | Applied Biosystems, USA | גרסה 1.7 | ייצוא נתוני גלם של qPCR, ניתוח ערכי Ct |
| צנטריפוגה שולחנית מקוררת | Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., חנאן, סין | TDZ5-WS | הפרדת סרום מדם מלא (2700 × ג', 4 °C) |
| ערכה לשעתוק הפוך RevertAid RT Reverse Transcription Kit | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | K1691 | שעתוק הפוך של miRNA מסרום ל-cDNA |
| מבחנות מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל נקיות מ-RNase | Axygen, USA | MCT-150-C | חלוקה למנות ואחסון של סרום מופרד |
| ריאגנט TRIzol לבידוד RNA | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | 15596026 | מיצוי RNA כולל מדגימות סרום אנושיות |
| מקפיא בטמפרטורה נמוכה מאוד | Haier Biomedical, שנדונג, סין | DW-86L388 | אחסון ארוך טווח של דגימות סרום ב- −80 °C |
| מסך ניטור לפוליסומנוגרפיה YH-600B | BMC Medical Co., Ltd., בייג'ינג, סין | YH-600B | ניטור שינה למשך הלילה וחישוב AHI לאבחון OSAS |
מקורות
- Lv R, et al. Pathophysiological mechanisms and therapeutic approaches in obstructive sleep apnea syndrome. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):218.
- Gleeson M, McNicholas WT. Bidirectional relationships of comorbidity with obstructive sleep apnoea. Eur Respir Rev. 2022;31(164):210256.
- Seiler A, et al. Prevalence of sleep-disordered breathing after stroke and TIA: a meta-analysis. Neurology. 2019;92(7):e648-e654.
- Zhou Y, et al. Correlation between obstructive sleep apnea and hypoperfusion in patients with acute cerebral infarction. Front Neurol. 2024;15:1363053.
- Du W, Fan L, Du J. Neuroinflammation-associated miR-106a-5p serves as a biomarker for the diagnosis and prognosis of acute cerebral infarction. BMC Neurol. 2023;23(1):248.
- Tang Y, et al. Analysis of carotid vulnerable plaque MRI high-risk features and clinical risk factors associated with concomitant acute cerebral infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):173.
- Santamaria-Martos F, et al. Circulating microRNA profile as a potential biomarker for obstructive sleep apnea diagnosis. Sci Rep. 2019;9(1):13456.
- Sheng B, et al. Exosome-mediated delivery of miR-486-3p alleviates neuroinflammation via. SIRT2-mediated inhibition of mitophagy after subarachnoid hemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2025;10(3):335-346.
- May AM, Mehra R. Obstructive sleep apnea: role of intermittent hypoxia and inflammation. Semin Respir Crit Care Med. 2014;35(5):531-544.
- Verjans R, et al. Functional screening identifies microRNAs as multicellular regulators of heart failure. Sci Rep. 2019;9(1):6055.
- Kwah LK, Diong J. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). J Physiother. 2014;60(1):61.
- Tanellari O, et al. Study on quality of life of patients with obstructive sleep apnea: pilot study. Medicina (Kaunas). 2025;61(7):1234.
- Hajikarim-Hamedani A, Rassa S, Tarjoman T, Shafiei M. Assessment of sleep patterns in migraine sufferers using the Epworth Sleepiness Scale. J Headache Pain. 2025;26(1):58.
- Liu X, et al. The relationship between inflammation and neurocognitive dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome. J Neuroinflammation. 2020;17(1):229.
- Dharmakulaseelan L, Boulos MI. Sleep apnea and stroke: a narrative review. Chest. 2024;166(4):857-866.
- Song XD, Li SX, Zhu M. Plasma miR-409-3p promotes acute cerebral infarction via. suppressing CTRP3. Kaohsiung J Med Sci. 2021;37(4):324-333.
- Wu Z, et al. Integrated analysis of competitive endogenous RNA networks in acute ischemic stroke. Front Genet. 2022;13:833545.
- Li K, Wei P, Qin Y, Wei Y. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine (Baltimore). 2017;96(34):e7917.
- Sriram S, Mehkri Y, Quintin S, Lucke-Wold B. Shared pathophysiology: understanding stroke and Alzheimer's disease. Clin Neurol Neurosurg. 2022;218:107306.
- Small C, Mehkri Y, Panther E, Felisma P, Lucke-Wold B. Coronavirus disease 2019 and stroke: pathophysiology and management. Can J Neurol Sci. 2023;50(4):495-502.
- Tamin S, et al. Association between laryngopharyngeal reflux and obstructive sleep apnea in adults. PeerJ. 2022;10:e13303.
- Fabbri M, et al. Measuring subjective sleep quality: a review. Int J Environ Res Public Health. 2021;18(3):1082.
- Song R, Baker TL, Watters JJ, Kumar S. Obstructive sleep apnea-associated intermittent hypoxia-induced immune responses in males, pregnancies, and offspring. Int J Mol Sci. 2024;25(3):1852.
- Liu X, et al. Effects of Kudiezi injection on serum inflammatory biomarkers in patients with acute cerebral infarction. Dis Markers. 2018;2018:7936736.
- Liang Z, et al. Effects of remote ischemic postconditioning on the proinflammatory neutrophils of peripheral blood in acute cerebral infarction. Aging (Albany NY). 2023;15(10):4481-4497.
- Imani MM, et al. Serum and plasma tumor necrosis factor alpha levels in individuals with obstructive sleep apnea syndrome: a meta-analysis and meta-regression. Life (Basel). 2020;10(6):87.
- Bian F, Kang S, Cui H, Wang F, Luan T. The clinical efficacy of compound Danshen injection on acute cerebral infarction and on the changes in the CRP, D-dimer, and IL-6 levels. Am J Transl Res. 2021;13(7):8126-8133.
- Tie YX, Fu YY, Xu Z, Peng Y. Relationship between C-reactive protein levels and obstructive sleep apnea syndrome. Genet Mol Res. 2016;15(2): DOI:10.4238/gmr.15027808.
- Dutt N, Janmeja AK, Mohapatra PR, Singh AK. Quality of life impairment in patients of obstructive sleep apnea and its relation with the severity of disease. Lung India. 2013;30(4):289-294.
- Feng X, et al. Test-retest reliability of Epworth Sleepiness Scale score in patients with untreated obstructive sleep apnea. Nat Sci Sleep. 2024;16:2299-2309.
- Lapin BR, Bena JF, Walia HK, Moul DE. The Epworth Sleepiness Scale: validation of one-dimensional factor structure in a large clinical sample. J Clin Sleep Med. 2018;14(8):1293-1301.
- Zolotoff C, et al. Obstructive sleep apnea, hypercoagulability, and the blood-brain barrier. J Clin Med. 2021;10(14):3099.
- Meliante PG, et al. Molecular pathology, oxidative stress, and biomarkers in obstructive sleep apnea. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5478.