הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

מחקר עקיבה רטרוספקטיבי של רמות miR-486-3p בדם פריפרי בקרב מטופלים עם אוטם מוחי חריף ותסמונת דום נשימה בשינה חסימתי

42 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/72643

⸱

28 באוגוסט 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, 2The Second Clinical Medical College, Xuzhou Medical University

במאמר זה

סיכום

הביטוי של miR‑486‑3p מופחת בחולים עם אוטם מוחי חריף הסובלים מתסמונת דום נשימה חסימתי בשינה, הוא נמצא במתאם שלילי עם חומרת המחלה ומסמני דלקת, וחוזה פרוגנוזה שנתית גרועה, מה שתומך בפוטנציאל שלו כסמן ביולוגי לאבחון ולפרוגנוזה.

תקציר

אוטם מוחי חריף (ACI) המסובך בתסמונת דום נשימה חסימתי בשינה (OSAS) כרוך בסיכון גבוה לחזרת שבץ ולמוות, אך ביומארקרים יעילים למצב תחלואתי זה נותרים מוגבלים. במחקר עוקבה רטרוספקטיבי זה גויסו 270 מטופלים עם ACI בין נובמבר 2020 לדצמבר 2023, שסווגו לקבוצת ה-ACI (מספר n = 100, מדד דום נשימה-היפופנאה [AHI] < 5) ולקבוצת ACI עם OSAS (מספר n = 170, AHI ≥ 5), כאשר האחרונה חולקה להמשך לשתי תת-קבוצות: קלה (5 ≤ AHI < 15, מספר n = 60), בינונית (15 ≤ AHI < 30, מספר n = 75), וחמורה (AHI ≥ 30, מספר n = 35). ביטוי miR‑486‑3p בסרום נמדד באמצעות RT‑qPCR, ומדדים דלקתיים, כולל tumor necrosis factor‑α (TNF‑α), C‑reactive protein (CRP), ו-hypoxia‑inducible factor‑1α (HIF‑1α), נמדדו בשיטת ELISA. הערך האבחנתי של miR‑486‑3p הוערך באמצעות ניתוח עקומת מאפייני תפעול מקלט (ROC), והחשיבות הפרוגנוסטית שלו נבחנה באמצעות ניתוח הישרדות של Kaplan‑Meier ומודלי רגרסיית Cox. רמות miR-486-3p היו נמוכות באופן ניכר בקבוצה עם התחלואה המשותפת והדגימו יכולת אבחנתית חזקה (AUC = 0.927). בולטת במיוחד מגמה תלוית-מינון שנצפתה בין תת-הקבוצות של חומרת ה-OSAS, כאשר miR‑486‑3p פחת באופן הדרגתי ו-TNF‑α ו-CRP עלו בשלבים מהשלב הקל לחמור של OSAS. ניתוחי מתאם של Spearman גילו כי miR‑486‑3p נמצא במתאם שלילי עם AHI, מדד NIHSS, TNF‑α ו-CRP. במעקב של שנה אחת, למטופלים עם ביטוי נמוך של miR‑486‑3p היו תוצאות תפקודיות גרועות משמעותית בהשוואה לאלו עם ביטוי גבוה. רגרסיית Cox רב-משתנית איששה את miR‑486‑3p כגורם הגנה עצמאי לפרוגנוזה של שנה אחת. ממצאים אלו מרמזים כי miR‑486‑3p עשוי לשמש כביומארקר אבחנתי ופרוגנוסטי חדש למטופלי ACI עם OSAS, פוטנציאלית באמצעות תפקידו הרגולטורי בדלקת מערכתית, ומצדיקים תיקוף נוסף בקוהורטות פרוספקטיביות גדולות יותר.

מבוא

תסמונת דום נשימה חסימתי בשינה (OSAS) היא מצב שכיח המאופיין בהפסקות נשימה חוזרות ונשנות במהלך השינה1. OSAS קשורה לעיתים קרובות לתחלואים נלווים כגון הפרעות מטבוליות, קרדיווסקולריות, כלייתיות, ריאתיות ונוירופסיכיאטריות2. מעבר לקשריה הכלליים עם מחלות קרדיווסקולריות ומטבוליות, OSAS מהווה איום ספציפי וחמור במקרים של שבץ איסכמי חריף, שם היא מסבכת עד 70% מהמקרים ומגבירה את הסיכון להידרדרות נוירולוגית, תמותה ושבץ חוזר3,4,5. אוטם מוחי חריף (ACI) הוא הצורה הנפוצה ביותר של שבץ. למרות שנעשתה התקדמות משמעותית בטיפול ב-ACI בשנים האחרונות, רוב המטופלים עדיין סובלים מנכות קשה או אף מוות6. האינטראקציה הסינרגית בין ACI ל-OSAS מחמירה את הנזק האיסכמי ואת הדלקת הסיסטמית, ומעלה באופן משמעותי את הסיכונים לשבץ חוזר, נכות ותמותה. כתוצאה מכך, זיהוי של ביומרקרים מהימנים לאבחון מוקדם ולניהול של מצב תחלואה נלווית בסיכון גבוה זה הוא בעל חשיבות עליונה.

מיקרו-RNA (miRNAs) הראו פוטנציאל רב כסמנים ביולוגיים בשנים האחרונות. ביניהם, miR-486-3p הוא בעל חשיבות רבה במחלות נוירו-וסקולריות. מחקרים קודמים הראו כי הביטוי של miR-486-3p מעוכב בדרינאות שינה חסימתית (OSA)7. בנוסף, טיפול באמצעות rabies virus glycoprotein-miR-486-3p-exosome יכול להקל על הפרעות נוירו-התנהגותיות, בצקת מוחית, פגיעה במחסום המה הדם-מוח וניוון עצבי8, מה שמעיד על כך ש-miR-486-3p ממלא תפקיד בפגיעה מוחית. לאחר ACI, מיקרוגליה ברקמת המוח הפגועה מופעלת, ובכך מקדמת הפרשה של ציטוקינים דלקתיים5. OSAS גורם לתסמינים של היפוקסיה לסירוגין, המובילים להפעלה של מערכת העצבים הסימפתטית ולעקה חמצונית, ובכך מעוררים תגובת שרשרת של דלקת סיסטמית9. miR-486-3p קשור קשר הדוק לדלקת10. קווי ראיות אלו מרמזים כי miR-486-3p עשוי לשמש כחוליה מולקולרית בין היפוקסיה הקשורה ל-OSAS, דלקת סיסטמית והחלמה לאחר שבץ מוחי.

עם זאת, פרופיל הביטוי שלו, הדיוק האבחנתי והמשמעות הפרוגנוסטית שלו בחולי ACI עם OSAS משולב לא נחקרו באופן שיטתי, ועדיין לא ידוע אם הוא נמצא במתאם עם חומרת ה-OSAS או עם מתווכי דלקת באופן תלוי-מינון. כדי למלא פערים אלו, מחקר זה העריך את הערך האבחנתי של miR-486-3p עבור OSAS בחולי ACI, בחן את הקשר התלוי-מינון שלו עם חומרת ה-OSAS וסממני דלקת (TNF-α, CRP ו-HIF-1α), והעריך את התועלת הפרוגנוסטית שלו עבור תוצאות תפקודיות בטווח של שנה אחת. למיטב ידיעתנו, זהו המחקר המקיף הראשון המדגים כי miR-486-3p עשוי לשמש כסמן ביולוגי אבחנתי ופרוגנוסטי חדש לתחלואה משולבת של ACI-OSAS, פוטנציאלית באמצעות ויסות של דלקת סיסטמית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים המסופח לאוניברסיטה הרפואית של Xuzhou (מספר אישור: XYFY2024-KL238-01) והיה פטור מהדרישה להשיג הסכמה מדעת נוספת מהמטופלים. הרכיבים והציוד שנעשה בהם שימוש מפורטים ב- טבלת חומרים.

מטופלים ודגימות
מחקר זה היה מחקר עוקבה רטרוספקטיבי. מנובמבר 2020 עד דצמבר 2023, גויסו באופן רציף 270 מטופלים שעברו ACI בבית החולים המסופח של Xuzhou Medical University. תהליך בחירת המטופלים מסוכם ב-Supplementary Figure 1. מטופלים מתאימים זוהו באמצעות סריקה יומית של כל האשפוזים החדשים ביחידה לשבץ מוחי. הופעת תסמינים בתוך 72 h לפני האשפוז אומתה באמצעות סקירת רשומות רפואיות של מדור מיון ואושרה על ידי נוירולוג מוסמך באמצעות היסטוריה רפואית של המטופל וראיון עם בני המשפחה. גודל המדגם חושב על בסיס היכולת לזהות הבדל מובהק ברמות miR-486-3p בין הקבוצות. בהנחה של גודל אפקט של 0.5, ערך α דו-צדדי של 0.05 ועוצמה (1-β) של 0.80, נדרשו לפחות 64 מטופלים לכל קבוצה. גדלי הקבוצות הסופיים משקפים את הגיוס בפועל ואת השכיחות הגבוהה יותר של OSAS באוכלוסיית השבץ, ולא הקצאה שנקבעה מראש. מטופלים עם ACI בשילוב OSAS נעקבו לגבי הפרוגנוזה שלהם למשך שנה אחת.

קריטריוני ההכללה היו: (1) שבץ איסכמי חריף עם הופעת תסמינים בתוך 72 h לפני האשפוז, שאושר באמצעות דימות תהודה מגנטית (MRI). (2) יכולת להבין ולהשלים את שאלוני המחקר ואת ההערכות הנוירולוגיות. (3) חומרת ה-ACI הוערכה באמצעות מדד השבץ של המכונים הלאומיים לבריאות (NIHSS) בעת האשפוז. כאשר ציון ה-NIHSS הוא <5, המצב מסווג כ-ACI קל; כאשר ציון ה-NIHSS הוא בין 5 ל-20, הוא נחשב כ-ACI בינוני. קריטריוני ההחרגה העיקריים כללו היסטוריה של גידולים ממאירים, מוגבלות פיזית חמורה קודמת או הפרעות פסיכיאטריות, אי-ספיקה לבבית, ריאתית או כלית חמורה, ניתוח גדול או טראומה ב-3 החודשים שקדמו לבדיקה, זיהומים פעילים או מחלות אוטואימוניות; שבץ קודם בתוך 6 חודשים; טיפול אימונו-סופרסיבי; ואבחנה או טיפול קודמים ב-OSAS (כולל טיפול בלחץ אוויר חיובי רציף - CPAP).

לאישור באמצעות MRI, כל המטופלים עברו MRI סטנדרטי של המוח במערכת של 3.0-T, שכלל את הרצפים הבאים: T1-weighted, T2-weighted, fluid-attenuated inversion recovery (FLAIR), diffusion-weighted imaging (DWI), ומיפוי apparent diffusion coefficient (ADC). אוטם חריף הוגדר כנוכחות של אות היפר-אינטנסיבי ב-DWI עם אות היפו-אינטנסיבי תואם ב-ADC. כל סריקות ה-MRI פורשו על ידי שני נוירו-רדיולוגים מנוסים שלא היו חשופים לנתונים הקליניים, וחילגויות נפתרו באמצעות הסכמה. דירוג NIHSS בוצע בעת הקבלה על ידי נוירולוגים מוסמכים לפני כל טיפול תרומבוליטי או תוך-כלי.

דם ורידי בצום נדגם בין 24 h ל-48 h לאחר תחילת השבץ, בעקבות צום של לילה של לפחות 8 h. דגימות הדם נלקחו בין השעות 6:00 AM ל-8:00 AM כדי למזער שינויים צירקדיים. נפח כולל של 5 mL של דם ורידי פריפריאלי נאסף למבחנות ואקום מצופות EDTA. בתוך 2 h מהאיסוף, דגימות הדם עברו סנטריפוגה במהירות של 1,500 × g למשך 15 min בטמפרטורה של 4 °C באמצעות סנטריפוגה מקוררת. הסרום העליון חולק בזהירות לאליקוטים במבחנות מיקרו-סנטריפוגה בנפח 1.5 mL נטולות RNase ואוחסן מיד בטמפרטורה של −80 °C עד להפקת ה-RNA. ה ownנמנעו באופן קפדני ממחזורי הקפאה והפשרה חוזרים; כל האליקוטים הוכפחו למקסימום מחזור הקפאה והפשרה אחד לפני האנליזה.

חלוקת המטופלים לקבוצות
המשתתפים חולקו לקבוצות על סמך מדדי ה-AHI שלהם ממבדקת פוליסומנוגרפיה. כל ההקלטות בוצעו במעבדת השינה של בית החולים בין השעות 22:00 ל-06:00 למשך זמן מינימלי של 7 h. הערוצים הפיזיולוגיים שנוטרו כללו: אלקטרואנצפלוגרפיה (EEG; שישה ערוצים), אלקטרואוקולוגרפיה (EOG; שני ערוצים), אלקטרומיוגרפיה (EMG; סנטר ושרירי הטיביאליס אנטריוריים דו-צדדיים), אלקטרוקרדיוגרפיה (ECG; ליד בודד), זרימת אוויר נזאלית (תרמיסטור ומתמר לחץ), מאמץ נשימתי תרסי ובטני (פלתיסמוגרפיה של השראות נשימתית), ומד סטורציה (SpO2). טכנאי מחקר השינה חישב את ה-AHI. דירוג של שלבי השינה ואירועי נשימה בוצע ידנית על ידי טכנאי שינה מוסמך בהתאם למדריך הדירוג של ה-American Academy of Sleep Medicine (AASM) משנת 2012, באמצעות תוכנת Somnolyzer 24×7. על פי הקריטריונים האבחנתיים המקובלים של ה-American Academy of Sleep Medicine, AHI של 5 אירועים לשעה ומעלה הוא הסף הסטנדרטי לאבחנה של OSA. לפיכך, משתתפים עם AHI < 5 סווגו כקבוצת ה-ACI (n = 100), בעוד שמשתתפים עם AHI ≥ 5 סווגו כקבוצת ACI combined OSAS (n = 170). מבין אלו עם AHI ≥ 5 (קבוצת ACI combined OSAS, n = 170), המטופלים חולקו להמשך לשלוש תתי-קבוצות של חומרה על סמך קריטריונים מוגדרים: OSAS קלה (5 ≤ AHI < 15, n = 60), OSAS בינונית (15 ≤ AHI < 30, n = 75), ו-OSAS חמורה (AHI ≥ 30, n = 35). סיווג זה איפשר הערכה של הקשר התלוי במינון בין העומס ההיפוקסי, ביטוי של miR‑486‑3p ומסמני דלקת. מטופלים שעברו טיפול קודם ב-OSAS (למשל, CPAP) לא נכללו במחקר כדי למנוע הפרעה למדידת ה-AHI הבסיסית.

הערכת פרוגנוזה
נקודת הזמן של שנה אחת מאפשרת להשפעות חריפות לחלוף ולעומס ההיפוקסיה המצטבר של OSAS להתבטא, ובכך מספקת חלון זמן איתן להערכת ההשפעה הפרוגנוסטית שלו. הפרוגנוזה הקלינית של חולים עם ACI בשילוב עם OSAS הוערכה באמצעות סולם Rankin המותאם (mRS) לאחר הופעת המחלה. כל הערכות ה-mRS בוצעו על ידי נוירולוגים מוסמכים שעברו הכשרה סטנדרטית לפני המחקר, תוך שימוש בטופס ראיון מובנה של mRS. מהימנות בין בוחנים הוערכה באמצעות מקדם kappa >0.85. הערכת המעקב נערכה באמצעות ביקור מתוכנן במרפאה חיצונית. עבור חולים שלא יכלו להגיע באופן פרונטלי, בוצע ראיון טלפוני מובנה על ידי אחות מחקר מיומנת תוך שימוש בתסריט סטנדרטי. כל המעריכים היו מסוככים לרמות miR-486-3p ולמצב ה-OSAS של החולים. כדי לשמור על עקביות בין ההערכות במרפאה לבין ההערכות הטלפוניות, שני הפורמטים השתמשו באותו שאלון מובנה, וכל המעריכים השלימו תרגיל כיול לפני תחילת המחקר. חולים עם ציונים של 0–2 שויכו לקבוצת הפרוגנוזה הטובה, וחולים עם ציונים של 3–6 שויכו לקבוצת הפרוגנוזה הרעה. אף חולה לא אבד במעקב. SAQLI, ESS, TNF-α ו-HIF-1α הוערכו כמשתנים פרוגנוסטים ולא שימשו להגדרת קבוצות הפרוגנוזה. NIHSS, SAQLI ו-ESS הוענקו על ידי צוות מחקר מיומן. SAQLI ו-ESS הוענקו כשאלונים המנוהלים על ידי מראיין בחדר שקט.

מדד דירוג
NIHSS הוא סולם כמותי עבור שבץ מוחי11, כאשר ציונים גבוהים יותר מעידים על חומרה גדולה יותר של ACI. SAQLI הוא שאלון איכות חיים עבור OSA בסולם של 1–7, כאשר ציונים גבוהים יותר מעידים על איכות חיים גרועה יותר, ומכסה פעילויות יומיומיות, אינטראקציות חברתיות, מצבים רגשיים, תסמינים ותסמינים הקשורים לטיפול12. ESS משמש לבחינת נמנומי יום בדיווח עצמי של המטופלים, עם טווח ציונים מ-0 עד 24, וציון > 10 מעיד על נמנומי יום13.

מיצוי RNA ושעתוק הפוך
RNA כולל מולא מ-200 µL של סרום באמצעות ריאגנט TRIzol. בקצרה, דגימות סרום עורבבו עם 800 µL של TRIzol, דגרו בטמפרטורת החדר למשך 5 min, וסובבו בצנטריפוגה במהירות 12,000 × g למשך 15 min ב-4 °C. הוספו כלורופורם (200 µL), והתערובת נוערה בעוצמה למשך 15 s, דגרה למשך 3 min, וסובבה בצנטריפוגה במהירות 12,000 × g למשך 15 min ב-4 °C. הפאזה המימית הועברה למבחנה נקייה, ו-RNA שקע באמצעות 500 µL של איזופרופנול, דגור ב-−20 °C למשך 1 h, וסובב בצנטריפוגה במהירות 12,000 × g למשך 10 min ב-4 °C. משקע ה-RNA נשטף עם אתנול 75%, יובש באוויר והומס ב-20 µL של מים נקיים מ-RNase. ריכוז ה-RNA וטוהרו נבדקו באמצעות ספקטרופוטומטר למיקרו-נפחים, כאשר יחס A260/A280 שבין 1.8 ל-2.0 נחשב קביל לניתוחים המשכיים. שלמות ה-RNA אומתה באמצעות אלקטרופורזה בג'ל אגרוזה.

שעתוק הפוך בוצע באמצעות 500 ng של RNA כולל עם ה-Reverse Transcription Kit בנפח תגובה כולל של 20 µL, תוך שימוש בפריימרים מסוג random hexamer בהתאם לפרוטוקול היצרן. תגובת השעתוק ההפוך בוצעה ב-25 °C למשך 10 min, ב-42 °C למשך 60 min, וב-70 °C למשך 5 min. ה-cDNA שהתקבל נשמר ב-−20 °C עד למועד השימוש.

RT-qPCR
ביטוי של miR-486-3p זוהה באמצעות ערכה ל-PCR בזמן אמת מבוססת SYBR Green לכימות microRNA במערכת PCR כמותית בזמן אמת (qPCR). תערובת התגובה הכילה 10 µL של 2× SYBR Green Master Mix, 2 µL של תבנית cDNA (מהולה ביחס של 1:5), 1 µL מכל פריימר (10 µM), ומים נקיים מנוקלאז עד לנפח סופי של 20 µL. רצפי הפריימרים הם כדלקמן (מ-5'-3'): miR-486-3p-forward: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, reverse: CTCAACTGGTGTCGTGGA; ו-U6-forward: CTCGCTTCGGCAGCACA, reverse: AACGCTTCACGAATTTGCGT. תנאי מחזורי ה-qPCR היו: 95 °C למשך 2 min, ולאחריהם 40 מחזורים של 95 °C למשך 30 s, 60 °C למשך 30 s, ו-72 °C למשך 60 s. כל דגימה הורצה בשחזור של שלושה, ובכל הרצה נכללה בקרת ללא תבנית (no-template control). סגוליות ההגברה אומתה באמצעות ניתוח עקומת התכה מ-60 °C עד 95 °C. סף המחזור (Ct) נקבע באופן אוטומטי על ידי תוכנת QuantStudio 6 Pro (v1.5) באמצעות הגדרת הסף ברירת המחדל. רמת miR-486-3p חושבה בשיטת 2-ΔΔCT ונורמלה ל-U6. U6 תוקף כגן ייחוס יציב בדגימות הסרום שלנו באמצעות אלגוריתם NormFinder כדי להבטיח עקביות בין הקבוצות. מקדמי השונות הבין-בדיקתיים והתוך-בדיקתיים היו <5%.

ELISA
ריכוזי הסרום של C-reactive protein (CRP), TNF-α, ו-HIF-1α נמדדו באמצעות ערכת ELISA. הפרוטוקולים הניסויים בוצעו בהתאם להוראות היצרן. בקצרה, דגימות סרום הופשרו על קרח ודוללו ביחס של 1:2 עם תמיסת הדילול המסופקת. דגימות ותמיסות סטנדרט הועברו לפלטות 96-בארים מצופות מראש (100 µL לבאר) ודגרו למשך 2 h בטמפרטורה של 37°C. לאחר ארבעה שלבי שטיפה עם 300 µL של תמיסת שטיפה, הוספו 100 µL של נוגדן זיהוי מצומד לביוטין והדגירו למשך 1 h בטמפרטורה של 37°C. לאחר שלב שטיפה נוסף, הוספו 100 µL של streptavidin מצומד ל-horseradish peroxidase והדגירו למשך 30 min בטמפרטורה של 37°C בחשיכה. תסבסב כרומוגני (tetramethylbenzidine, 100 µL) הוסף והדגירה נמשכה 15 min בטמפרטורה של 37°C בהגנה מאור. התגובה הופסקה באמצעות 50 µL של תמיסת עצירה, והבליעה נמדדה באורך גל של 450 nm באמצעות קורא מיקרופלטות. הריכוזים חושבו על סמך עקומות סטנדרט שנוצרו עם ריכוזים ידועים של חלבונים רקומביננטיים. כל דגימה נמדדה בשכפול, והערך הממוצע שימש לצורך האנליזה. דגימות בקרת איכות (QC) שסופקו על ידי היצרן נכללו בכל פלטה; התוצאות התקבלו רק כאשר ערכי ה-QC היו בטווח שהגדיר היצרן.

בקרת איכות והסבירות לשחזור
כל בדיקות המעבדה בוצעו בהתאם להנחיות ה-MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) עבור RT-qPCR, ובהתאם לתקני הדיווח המתאימים עבור ELISA. מכשירים מרכזיים כוללו כיול לפי לוחות הזמנים של היצרנים. דגימות ביקורת שליליות וחיוביות נכללו בכל סבב של הרצות RT-qPCR ו-ELISA כדי לנטר שונות בין פלטות. כל הנתונים תועדו ונוהלו באמצעות Microsoft Excel, והמחבר המקשר יספק פרוטוקולים ניסיוניים מפורטים ונתונים גולמיים לבקשה סבירה.

ניתוח סטטיסטי
הנתונים נותחו באמצעות SPSS 23.0 ותוכנה לניתוח סטטיסטי והצגת גרפים. התפלגות נורמלית נבחנה באמצעות מבחן Shapiro–Wilk. משתנים רציפים מוצגים כממוצע ± SD או חציון (IQR), והושוו באמצעות t‑test או מבחן Mann–Whitney U, לפי העניין. משתנים קטגוריאליים הושוו באמצעות מבחן χ2. מתאמים נבחנו באמצעות ניתוחי Pearson או Spearman בהתבסס על התפלגות הנתונים. הערך הניבוי נקבע באמצעות עקומת ROC ואומת באמצעות 5-fold cross-validation. ערך הסף האופטימלי עבור miR-486-3p נקבע על ידי מקסום מדד Youden. ניתוחי מתאם של Pearson ו-Spearman שימשו להערכת מתאמים. לצורך ניתוח פרוגנוסטי, החולים סווגו לפי חציוני הביטוי של miR‑486‑3p; עקומות Kaplan–Meier עם מבחן log‑rank שימשו להשוואת תוצאות הישרדות בין הקבוצות. משתנים עם P < 0.1 ברגרסיית Cox חד-משתנית הוכנסו למודל Cox רב-משתנים. P < 0.05 נחשב למשמעותי מבחינה סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מאפייני בסיס בקבוצת ה-ACI ובקבוצת ה-ACI המשולבת עם OSAS
כפי שמוצג ב-Table 1, קבוצת ה-ACI כללה 68 גברים ו-32 נשים, עם גיל ממוצע של 62.84 ± 12.65 שנים, וקבוצת ה-ACI המשולבת עם OSAS כללה 116 גברים ו-54 נשים, עם גיל ממוצע של 61.31 ± 11.25 שנים. לקבוצת ה-ACI המשולבת עם OSAS היו ערכי AHI, ציוני NIHSS ורמות CRP גבוהים באופן מובהק. עם זאת, שתי הקבוצות הראו התפלגויות דומות של גיל, מגדר, BMI, יתר לחץ דם, DM, קרדיופתיה, דיסליפידמיה, עישון, שתיית אלכוהול, תרומבוליזה ו-TOAST.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מטופלים עם OSAS חווים קריסה וחסימה חוזרות ונשנות של נתיבי הנשימה, המובילות להיפוקסיה לסירוגין (IH) ולישנוניות יתר במהלך היום (EDS), העלולות לגרום לנזק נוירונלי14דום נשימה בשינה חסימתי (OSA) שכיח מאוד לאחר אירוע קרדיאלי חריף (ACI), והוא משפיע על כ-72% מהמטופלים ומחמיר משמעותית את הסיכון הקרדיווסקולרי.15ACI מהווה ספקטרום של גירעונות נוירולוגיים הנובעים מאיסכמיה והיפוקסיה מוחיות מוקדיות כתוצאה מפרפוזיה לא מספקת.‌16ההיפוקסיה לסירוגין, המרכזית לפתול...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

מחקר זה מומן על ידי 'Research on Stroke Prevention and Treatment Technologies' (מס' WKZX2023CZ0143).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
סורק MRI 3.0TSiemens Healthineers, גרמניהMAGNETOM Skyraדימות מוחי לאישור אוטם מוחי חריף
מיקרו-פלטות ELISA בעלות 96 בארותShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., סיןXBS-PLATEתגובת אנטיגן-נוגדן לזיהוי באמצעות ELISA
הנחיות הפרקטיקה הקלינית של AASM להפרעות נשימה בשינההאקדמיה האמריקאית לרפואת שינההנחיה מלאה משנת 2020קריטריונים סטנדרטיים לאבחון AHI ולסיווג חומרת OSAS
הגרסה המתוקף בסינית של מדד איכות החיים של קלגרי לדום נשימה בשינה (SAQLI)אוניברסיטת קלגרימהדורת תרגום 2021הערכת איכות חיים עבור מטופלים עם ACI המסובכת ב-OSAS
מבחנות ואקום לאיסוף דם עם EDTA-K2, 5 מ"לBD Biosciences, ארה"ב367863איסוף דם ורידי פריפרי להפרדת סרום
גרסה מתוקפת בסינית של סולם הנעוסיות של אפוורת' (ESS)אוניברסיטת ג'ונס הופקינסמהדורת 2018 מעודכנתהערכת נבבּות יום במטופלים לאחר שבץ מוחי
GraphPad Prism 9GraphPad Software, ארה"בגרסה 9.4.1תרשימי פיזור, תרשימי קופסה, ויזואליזציה של עקומת ROC
ערכת ELISA ל-CRP אנושיShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., שנג'ן, סיןXBS-H001גילוי כמותי של חלבון C-reactive בנסיוב (serum)
HIF-1 אנושיα ערכת ELISAShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., שנג'ן, סיןXBS-H007גילוי כמותי של גורם המושרה על ידי היפוקסיה 1 (hypoxia-inducible factor-1) בסרוםα
TNF- אנושיα ערכת ELISAShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., שנג'ן, סיןXBS-H003גילוי כמותי של TNF- $\alpha$ בסרוםα גורם דלקתי
IBM SPSS Statistics 23.0IBM, ארמונק, ניו יורק, ארה"בגרסה 23.0כל הניתוחים הסטטיסטיים (t-test, מתאם, ROC, Kaplan–מייר, רגרסיית קוקס (Meier, Cox regression)
ספקטרופוטומטר למיקרו-פלטהThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)Multiskan FCקריאת בליעה עבור פלטות ELISA באורך גל של 450 ננומטר
miR-486-3p & פריימרים ל-qPCR של U6Sangon Biotech, שנגחאי, סיןסינתזה מותאמת אישיתהגברה של הגן מטרה ושל הגן הייחוס עבור qPCR
miScript SYBR Green PCR KitQiagen GmbH, הילדן, גרמניה218073הגברה באמצעות PCR כמותי בזמן אמת של miR-486-3p ו-U6
גרסהי מזוכה בסינית של מדד השבץ של ה-NIH (NIHSS)המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ (NINDS), ארה"במהדורה קלינית סטנדרטיתהערכת חומרת מצב נוירולוגי בנקודת הבסיס עבור חולי ACI
תוכנה לדירוג שינה ב-PSGBMC Medical Co., Ltd., סיןגרסה 3.2דירוג ראשוני אוטומטי של אירועי נשימה בשינה
מערכת QuantStudio 6 Pro Real-Time PCRApplied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)QuantStudio 6 Proהגברה באמצעות RT-qPCR, רכישת עקומת המסה, רישום ערכי Ct
תוכנת QuantStudio Real-Time PCRApplied Biosystems, USAגרסה 1.7ייצוא נתוני גלם של qPCR, ניתוח ערכי Ct
צנטריפוגה שולחנית מקוררתXiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., חנאן, סיןTDZ5-WSהפרדת סרום מדם מלא (2700 × ג', 4 °C)
ערכה לשעתוק הפוך RevertAid RT Reverse Transcription KitThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USAK1691שעתוק הפוך של miRNA מסרום ל-cDNA
מבחנות מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל נקיות מ-RNaseAxygen, USAMCT-150-Cחלוקה למנות ואחסון של סרום מופרד
ריאגנט TRIzol לבידוד RNAInvitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA15596026מיצוי RNA כולל מדגימות סרום אנושיות
מקפיא בטמפרטורה נמוכה מאודHaier Biomedical, שנדונג, סיןDW-86L388אחסון ארוך טווח של דגימות סרום ב- −80 °C
מסך ניטור לפוליסומנוגרפיה YH-600BBMC Medical Co., Ltd., בייג'ינג, סיןYH-600Bניטור שינה למשך הלילה וחישוב AHI לאבחון OSAS

מקורות

  1. Lv R, et al. Pathophysiological mechanisms and therapeutic approaches in obstructive sleep apnea syndrome. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):218.
  2. Gleeson M, McNicholas WT. Bidirectional relationships of comorbidity with obstructive sleep apnoea. Eur Respir Rev. 2022;31(164):210256.
  3. Seiler A, et al. Prevalence of sleep-disordered breathing after stroke and TIA: a meta-analysis. Neurology. 2019;92(7):e648-e654.
  4. Zhou Y, et al. Correlation between obstructive sleep apnea and hypoperfusion in patients with acute cerebral infarction. Front Neurol. 2024;15:1363053.
  5. Du W, Fan L, Du J. Neuroinflammation-associated miR-106a-5p serves as a biomarker for the diagnosis and prognosis of acute cerebral infarction. BMC Neurol. 2023;23(1):248.
  6. Tang Y, et al. Analysis of carotid vulnerable plaque MRI high-risk features and clinical risk factors associated with concomitant acute cerebral infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):173.
  7. Santamaria-Martos F, et al. Circulating microRNA profile as a potential biomarker for obstructive sleep apnea diagnosis. Sci Rep. 2019;9(1):13456.
  8. Sheng B, et al. Exosome-mediated delivery of miR-486-3p alleviates neuroinflammation via. SIRT2-mediated inhibition of mitophagy after subarachnoid hemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2025;10(3):335-346.
  9. May AM, Mehra R. Obstructive sleep apnea: role of intermittent hypoxia and inflammation. Semin Respir Crit Care Med. 2014;35(5):531-544.
  10. Verjans R, et al. Functional screening identifies microRNAs as multicellular regulators of heart failure. Sci Rep. 2019;9(1):6055.
  11. Kwah LK, Diong J. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). J Physiother. 2014;60(1):61.
  12. Tanellari O, et al. Study on quality of life of patients with obstructive sleep apnea: pilot study. Medicina (Kaunas). 2025;61(7):1234.
  13. Hajikarim-Hamedani A, Rassa S, Tarjoman T, Shafiei M. Assessment of sleep patterns in migraine sufferers using the Epworth Sleepiness Scale. J Headache Pain. 2025;26(1):58.
  14. Liu X, et al. The relationship between inflammation and neurocognitive dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome. J Neuroinflammation. 2020;17(1):229.
  15. Dharmakulaseelan L, Boulos MI. Sleep apnea and stroke: a narrative review. Chest. 2024;166(4):857-866.
  16. Song XD, Li SX, Zhu M. Plasma miR-409-3p promotes acute cerebral infarction via. suppressing CTRP3. Kaohsiung J Med Sci. 2021;37(4):324-333.
  17. Wu Z, et al. Integrated analysis of competitive endogenous RNA networks in acute ischemic stroke. Front Genet. 2022;13:833545.
  18. Li K, Wei P, Qin Y, Wei Y. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine (Baltimore). 2017;96(34):e7917.
  19. Sriram S, Mehkri Y, Quintin S, Lucke-Wold B. Shared pathophysiology: understanding stroke and Alzheimer's disease. Clin Neurol Neurosurg. 2022;218:107306.
  20. Small C, Mehkri Y, Panther E, Felisma P, Lucke-Wold B. Coronavirus disease 2019 and stroke: pathophysiology and management. Can J Neurol Sci. 2023;50(4):495-502.
  21. Tamin S, et al. Association between laryngopharyngeal reflux and obstructive sleep apnea in adults. PeerJ. 2022;10:e13303.
  22. Fabbri M, et al. Measuring subjective sleep quality: a review. Int J Environ Res Public Health. 2021;18(3):1082.
  23. Song R, Baker TL, Watters JJ, Kumar S. Obstructive sleep apnea-associated intermittent hypoxia-induced immune responses in males, pregnancies, and offspring. Int J Mol Sci. 2024;25(3):1852.
  24. Liu X, et al. Effects of Kudiezi injection on serum inflammatory biomarkers in patients with acute cerebral infarction. Dis Markers. 2018;2018:7936736.
  25. Liang Z, et al. Effects of remote ischemic postconditioning on the proinflammatory neutrophils of peripheral blood in acute cerebral infarction. Aging (Albany NY). 2023;15(10):4481-4497.
  26. Imani MM, et al. Serum and plasma tumor necrosis factor alpha levels in individuals with obstructive sleep apnea syndrome: a meta-analysis and meta-regression. Life (Basel). 2020;10(6):87.
  27. Bian F, Kang S, Cui H, Wang F, Luan T. The clinical efficacy of compound Danshen injection on acute cerebral infarction and on the changes in the CRP, D-dimer, and IL-6 levels. Am J Transl Res. 2021;13(7):8126-8133.
  28. Tie YX, Fu YY, Xu Z, Peng Y. Relationship between C-reactive protein levels and obstructive sleep apnea syndrome. Genet Mol Res. 2016;15(2): DOI:10.4238/gmr.15027808.
  29. Dutt N, Janmeja AK, Mohapatra PR, Singh AK. Quality of life impairment in patients of obstructive sleep apnea and its relation with the severity of disease. Lung India. 2013;30(4):289-294.
  30. Feng X, et al. Test-retest reliability of Epworth Sleepiness Scale score in patients with untreated obstructive sleep apnea. Nat Sci Sleep. 2024;16:2299-2309.
  31. Lapin BR, Bena JF, Walia HK, Moul DE. The Epworth Sleepiness Scale: validation of one-dimensional factor structure in a large clinical sample. J Clin Sleep Med. 2018;14(8):1293-1301.
  32. Zolotoff C, et al. Obstructive sleep apnea, hypercoagulability, and the blood-brain barrier. J Clin Med. 2021;10(14):3099.
  33. Meliante PG, et al. Molecular pathology, oxidative stress, and biomarkers in obstructive sleep apnea. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5478.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

סמני דלקתRT-qPCRמבחן ELISAסמן ביולוגי פרוגנוסטיהישנות שבץדלקת סיסטמית
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.