הצהרה אתית: המחקר בוצע בהתאם להנחיות המוסדיות ולעקרונות האתיים של הצהרת הלסינקי. אישור אתי התקבל מוועדת האתיקה של אוניברסיטת בישה (UBCOM-RELOC), תחת מספר אישור H-06-BH-087/(0802.23). ההשתתפות הייתה רשות, והסכמה מדעת בכתב התקבלה מכל המשתתפים לפני הגיוס. החומרים, הציוד וההליכים האנליטיים ששימשו במחקר מסוכמים בטבלת החומרים.
מבנה ומסגרת המחקר
מחקר חתך רטרוספקטיבי נערך בבית החולים לנשים וילדים בבישה, ערב הסעודית, בין דצמבר 2022 למאי 2023, כדי להעריך את רמת הברזל ולבחון גורמים הקשורים לחסר בברזל בקרב נשים הרות באזור צפון עאסיר.
אוכלוסיית המחקר ומתודולוגיית הדגימה
בסה"כ גויסו 200 משתתפות, הכוללות 135 נשים בהריון המבקרות במרפאות שגרתיות לטיפול טרום-לידתי ו-65 נשים שאינן בהריון, המותאמות גיל, אשר שימשו כקבוצת ביקורת. המשתתפות גויסו ממרפאות רפואה חיצונית באמצעות דגימת נוחות במהלך תקופת המחקר. נשים מתאימות שהגיעו בשעות הפעילות של המרפאה פנו אליהן באופן רצוף, והגיוס נמשך עד להשגת גודל המדגם המתוכנן. כדי להפחית הטיות בחירה פוטנציאליות במסגרת זו, קבוצות הביקורת הותאמו לגיל באמצעות דגימה אקראית פשוטה מבין המבקרות במרפאה שאינן בהריון והיו כשירות להשתתפות.
נשים הרריות היו זכאיות להשתתפות אם היו בנות 18 שנים ומעלה והיו בהריון עם גיל הריוני שבין 12 ל-36 שבועות. משתתפות מתאימות גויסו ללא קשר למצב הברזל שלהן, וסווגו לאחר מכן כנשים הרריות עם IDA (אנמיה מחסור בברזל) או ללא IDA על בסיס ממצאים מעבדתיים. על פי קריטריוני ארגון הבריאות העולמי (WHO), אנמיה במהלך ההריון הוגדרה כריכוזי המוגלובין (Hb) < 11.0 גרם/דציליטר במהלך השליש הראשון והשלישי ו- < 10.5 g/dL במהלך הטרימסטר השני. אנמיה כתוצאה מחסר בברזל (IDA) אובחנה בנשים שעמדו בסף ההמוגלובין (Hb) הספציפי להריון והראו עדות לחסר בברזל, כולל רמות פריטין בנסיוב. < 15 ng/mL, ברזל בנסיוב < 10 µmol/L, וקיבולת קישור ברזל כוללת (TIBC) ≥ 68 µmol/L17,18. נשים בהריון שלא עמדו בקריטריונים אבחנתיים אלה סווגו כקבוצת הנשים ההריות ללא IDA. נשים בגיל הפוריות שאינן בהריון, ללא הריון נוכחי וללא הפרעות המטולוגיות ידועות, שימשו כקבוצת הביקורת. קריטריוני ההדרה עבור שתי הקבוצות כללו היסטוריה מתועדת של מצבים כרוניים או סיסטמיים הקשורים לשינויים בחילוף חומרי ברזל או למצב דלקתי, כגון מחלה כרונית של הכליות, הפרעות אוטואימוניות, ממאירות, תסמונת המעי הדלקתי, מחלת כבד כרונית או הפרעות תורשתיות בברזל (למשל, המוכרומטוזיס). נשים עם זיהומים חריפים בעת הדגימה, נשים שקיבלו טיפול בברזל תוך-ורידי או עישורי דם בשלושת החודשים שקדמו למחקר, ונשים המקבלות טיפול אימונוסופרסיבי ארוך טווח, הודרו אף הן. מדד מסת הגוף (BMI) ואתניות נרשמו עבור כל המשתתפות; עם זאת, משתנים אלה לא שימשו כקריטריוני הדרה ובמקום זאת נחשבו כמשתנים משבקיים (covariates) פוטנציאליים בניתוח.
קביעת גודל המדגם
גודל המדגם חושב באמצעות תוכנה לחישוב גודל מדגם אפידמיולוגי19, בהתבסס על שכיחות צפויה של IDA בקרב נשים רמיות בערב הסעודית של 40%6, עם רמת סמך של 95% ושולי טעות של 5%. גודל המדגם המינימלי הנדרש נאמד ב-182 משתתפים; לפיכך, גויסו בסך הכל 200 משתתפים כדי להגביר את הדיוק הסטטיסטי.
איסוף נתונים
שאלון
הנתונים נאספו באמצעות שאלון מובנה ומתוקף. השאלון פותח לאחר סקירה נרחבת של הספרות והוערך על ידי פאנל של מומחים בתחום, הכולל מיילדים, תזונאים ואפידמיולוגים, כדי להבטיח תוקף תוכן. מחקר פיילוט שכלל 20 משתתפים, שלא נכללו בניתוח הסופי, נערך כדי להעריך בהירות, מהימנות והיתכנות. העקביות הפנימית של השאלון הייתה מקובלת, עם ערך אלפא של קרונבך (Cronbach’s alpha) של 0.81.
השאלון הסופי כלל שלושה חלקים המורכבים מ-35 פריטים בסך הכל (Supplementary File 1):
חלק 1 (נתונים סוציו-דמוגרפיים, 10 פריטים): גיל, רמת השכלה, עיסוק, מקום מגורים, לאום והיסטוריה משפחתית של אנמיה.
סעיף 2 (הרגלי תזונה, 12 פריטים): תדירות צריכת מאכלים עשירים בברזל (בשר אדום, בשר לבן, דגים, ירקות ודגנים מועשירים), צריכת תה וקפה, ומשטר תזונתי. המשתנים התזונתיים נבחרו מראש (a priori) על בסיס הרלוונטיות המוכרת שלהם לצריכת ברזל, לזמינות ביולוגית של ברזל ולגורמים תזונתיים שעשויים להשפיע על ספיגת ברזל. השאלון כלל מקורות תזונתיים מרכזיים לברזל, כולל בשר אדום, עוף, דגים, ירקות עליים ירוקים ודגנים מועשירים. מאכלים עשירים בוויטמין C, ובמיוחד פירות הדר, נבחנו מכיוון שוויטמין C יכול להגביר את ספיגת ברזל שאינו מסוג ההם (non-heme iron). לעומת זאת, צריכת תה וקפה נבחנה מכיוון שפוליפנולים תזונתיים עשויים להע inhibiting ספיגת ברזל שאינו מהם כאשר הם נצרכים עם ארוחות או בסמוך להן. כמו כן, נבחנו המשטר התזונתי וצריכת מזון מהיר כדי להצביע על דפוסי תזונה כלליים ועל הלימות תזונתית. הפריטים התזונתיים שנבחרו התבססו על סקירת ספרות שנעשתה במהלך פיתוח השאלון, ולאחר מכן הוערכו על ידי מומחים למיילדות, תזונה ואפידמיולוגיה לצורך תיקוף התוכן.
סעיף 3 (היסטוריה קלינית ותסמינים, 13 פריטים): גיל הריון, פריות, היסטוריה של עירוי דם, עייפות, סחרחורת, חום ותסמינים אחרים הנלווים בדרך כלל לאנמיה.
הערכה ביוכימית
עבור כל משתתף, נלקחה דגימת דם ורידית של 5 mL לאחר צום של לילה. הדגימות הופרדו בצנטריפוגה במהירות של 2000 × g למשך 15 min כדי להפריד את הסרום, אשר נותח מיד לאחר מכן. ריכוז ההמוגלובין נמדד באמצעות אנלייזר המטולוגי אוטומטי ודווח בגרמים לדציליטר (g/dL). רמות פריטין בסרום הוערכו באמצעות בדיקת אימונו-סמיסורפציה אלקטרו-כימילומנשצנטית (ECLIA) באנלייזר אימונו-סמיסורפציה אוטומטי ובוטאו בננוגרמים למיליליטר (ng/mL). ברזל בסרום, קיבולת קשירת ברזל כוללת (TIBC) וקיבולת קשירת ברזל לא רוויה (UIBC) נקבעו בשיטה קולורימטרית באנלייזר ביוכימי אוטומטי, כאשר התוצאות דווחו במיקרו-מול לליטר (µmol/L). רוויית טרנספרין (TR-SAT) חושבה כיחס בין ברזל בסרום ל-TIBC כשהוא מוכפל ב-100 ובוטאה כאחוז.
סטטיסטיקה וניתוחי נתונים
הנתונים קודדו ונותחו באמצעות תוכנה סטנדרטית לניתוח סטטיסטי. סטטיסטיקה תיאורית, כולל ממוצעים, סטיות תקן ואחוזים, שימשה לסיכום משתנים סוציו-דמוגרפיים, תזונתיים, קליניים וביוכימיים. השוואות בין קבוצות בוצעו באמצעות מבחן t-Student למדגמים בלתי זוגיים או ניתוח שונות חד-גורמי (ANOVA), לפי הצורך. מובהקות סטטיסטית הוגדרה כ- p < 0.05. פלטים גרפיים הוכנו באמצעות תוכנה לגרפים ולסטטיסטיקה.
כדי לבחון גורמים הקשורים באופן בלתי תלוי ל-IDA, הוחל מודל רגרסיה לוגיסטית רב-משתנית. סטטוס ה-IDA הוגדר כמשתנה התלוי הבינארי (IDA = 1, ללא IDA/ביקורת = 0). משתנים בלתי תלויים נבחרו מראש (a priori) על בסיס סבירות ביולוגית וראיות ממחקרים קודמים, וכללו מאפיינים סוציו-דמוגרפיים (מקום מגורים, היסטוריה משפחתית של אנמיה), מצב פיזיולוגי (הריון) ומשתנים תזונתיים (צריכה של בשר אדום, עוף ופירות הדר).
משתנים קטגוריים קודדו באמצעות משתני דמי, ומשתני צריכה תזונתית סווגו כנמוכה או מספקת על סמך תדירות הצריכה המדווחת (≤2 פעמים לשבוע לעומת >2 פעמים לשבוע). כל המשתנים הנבחרים הוכנסו בו-זמנית למודל הרגרסיה כדי להעריך את הקשרים העצמאיים שלהם תוך התחשבות בגורמים מתערבים פוטנציאליים. דווחו יחסי סיכויים (ORs) מתוקננים עם רווחי סמך (CIs) של 95%, כאשר ערכי OR הגבוהים מ-1 שיקפו סיכוי גבוה יותר ל-IDA. סיכום חזותי של ערכי ה-OR ורווחי הסמך התואמים של 95% הוצג באמצעות תרשים יער (forest plot) שנוצר בתוכנת גיליון אלקטרוני.