ניסוי מבוקר אקראי זה מספק פרוטוקול הניתן לשחזור לדיקור סטנדרטי בתוספת מרשם Xiaoxuming משונה כטיפול משלים לטיפול בשבץ מוחי איסכמי חריף. ההתערבות הייתה קשורה לשיפור נוירולוגי צנוע ביום ה-28 ולהבדלים בסממנים ביולוגיים נבחרים; ניתוחים ברמת המשתתף לא תמכו בתיווך או בטענה לתיווך סיבתי.
מאמר מחקר
דיקור סיני סטנדרטי בתוספת מרשם Xiaoxuming Decoction משונה לטיפול בשבץ מוחי איסכמי חריף: ניסוי מבוקר אקראי
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
שבץ איסכמי חריף מלווה בדלקת סיסטמית ובהפרעה של המיקרוביום המעי. ניסוי מבוקר ואקראי זה, שבו המעריכים היו מסווגים (assessor-blinded) ונערך במרכז אחד, בחן האם דיקור סטנדרטי בתוספת מרשם Xiaoxuming Decoction משונה, כתוספת לטיפול הסטנדרטי, שיפרו את ההחלמה הנוירולוגית המוקדמת והיו קשורים לסמנים ביולוגיים מוגדרים מראש של דלקת ומעי. מבוגרים עם שבץ איסכמי חריף המאומת בדימות בתוך 72 h וציון של 4–15 במדד NIHSS (National Institutes of Health Stroke Scale) הוקצו באופן אקראי ביחס של 1:1 לטיפול סטנדרטי או להתערבות המשולבת למשך 28 ימים, עם 64 משתתפים בכל קבוצה. נקודת הסיום הראשונית הייתה ציון NIHSS ביום ה-28, מותאם ל-NIHSS בבסיס, גיל, מין, טיפול ברפרפוזיה וזמן מתחילת האירוע ועד להקצאה האקראית, כאשר תוצאות חסרות טופלו באמצעות השלמה מרובה (multiple imputation) של 30 פעמים. תוצאות משניות וסקרניות כללו את מדד Barthel, מדד modified Rankin Scale (mRS) ביום ה-90, אירועים חריגים, סמני דלקת, ליפופוליסכריד (LPS), גיוון מיקרוביאלי בצואה, סוגים (genera) נבחרים וחומצות שומן קצרות שרשרת. ניתוח השלמה מרובה העריך ציון NIHSS נמוך יותר ביום ה-28 בקבוצת ההתערבות (הפרש מותאם: −1.30 נקודות; רווח בר סמך של 95%: −2.36 עד −0.24; P = 0.017). מדד Barthel ביום ה-28 היה גבוה יותר, בעוד ש-NIHSS ביום ה-90, מדד Barthel ו-mRS 0–2 שנצפו לא הראו הבדל משמעותי. ביום ה-28, לקבוצת ההתערבות היה גיוון Shannon גבוה יותר ורמות בוטיראט גבוהות יותר בצואה, ורמות נמוכות יותר של interluekin-6 ו-LPS. שינויים ברמת המשתתף בבוטיראט, interluekin-6, LPS וגיוון Shannon לא היו קשורים באופן משמעותי לשינוי ב-NIHSS; לפיכך, לא בוצע ניתוח תיווך. לא זוהה אף אירוע חריג חמור הקשור להתערבות. ההתערבות המשולבת הייתה קשורה לשיפור נוירולוגי מוקדם מתון ולהבדלים בסמנים ביולוגיים נבחרים, אך הממצאים הביולוגיים הם סקרניים ואינם מבססים נתיב סיבתי של מוח–מעי.
מבוא
שבץ מוחי נותר גורם מוביל לתמותה ולנכות ארוכת טווח ברחבי העולם, כאשר שבץ איסכמי מהווה את רוב המקרים. הטיפול הסטנדרטי מדגיש אבחון מהיר, פרפוזיה מחדש כאשר הדבר מומלץ, טיפול אנטי-פלטלטים, ניהול גורמי סיכון, מניעת סיבוכים ושיקום1,2. למרות נקיטת אמצעים אלו, גרעונות נוירולוגיים שיוריים הם שכיחים, דבר המניע לבחינה של התערבויות משלימות הניתנות לשחזור.
דלקת פוסט-איסכמית, עקה של האנדותל ומחסום הדם-מוח, הפעלה חיסונית פריפריאלית והפרעה מטבולית תורמים לפגיעה משנית ולהחלמה3. שבץ מוחי עשוי גם לשנות את מוטיליות המעי, את החדירות, את הרכב המיקרוביום ואת האותות החיסוניים המקוריים מהמעי, ובכך ליצור קשרים דו-כיווניים המתוארים בדרך כלל כציר המוח-מעי4.
מחקרים קליניים קשרו בין שבץ איסכמי חריף לבין דיסביוזה במעי, פרופילים משתנים של חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA) ותוצאות טיפוליות גרועות יותר5. בוטיראט מעורר עניין מכיוון שהוא תומך בשלמות מחסום האפיתל ומווסת סיגנלציה חיסונית6. תצפיות אלו מצדיקות מדידה של גיוון מיקרוביאלי, מטבוליטים מיקרוביאליים, חשיפה לאנדוטוקסינים ומתווכי דלקת לצד תוצאים נוירולוגיים, תוך הכרה בכך ששינויים מקבילים אינם מוכיחים תיווך.
דיקור נבחן כטיפול משלים לשבץ מוחי, אך ניסויים שפורסמו נבדלים ביניהם בעיתוי, בבחירת נקודות הדיקור, בתדירות ובהערכת התוצאות7,8. לכן, פרוטוקול הניתן לשחזור מחייב נהלים מפורשים של דיקור, גרייה, זמן השארת המחטים, בטיחות והיצמדות לטיפול. תמצית Xiaoxuming היא פורמולה צמחית קלאסית המשמשת למצבים הקשורים לשבץ מוחי. מחקרים סיסטמטיים ופארמקולוגיים מדווחים על תועלת אפשרית, אך הראיות הקליניות נותרות מוגבלות בשל גודל המדגם, הטרוגניות וסיכון להטיה9,10. לא ניתן להפריד את תרומתה מהדיקור בתכנון מחקר הכולל שתי קבוצות עם התערבות משולבת.
ניסוי זה העריך התערבות משולבת סטנדרטית באמצעות תוצאים קליניים ובדיקה של סמנים ביולוגיים של דלקת ומעי שהוגדרו מראש11. ההשערה הייתה כי הוספת דיקור סינוכי סטנדרטי יחד עם תמצית Xiaoxuming משופרת לטיפול הסטנדרטי תשפר את ההחלמה הנוירולוגית המוקדמת ותשפיע לחיוב על סמנים ביולוגיים שהוגדרו מראש הקשורים לציר המוח-מעי.
פרוטוקול
אישור אתי למחקר זה ניתן על ידי ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים לרפואה סינית מסורתית ורפואה מערבית בעיר Dazhou ב-10 ביוני 2025 (מספר אישור 2025–29; בתוקף עד 9 ביוני 2027). כל משתתף או נציגו המוסמך מבחינה משפטית סיפקו הסכמה מדעת בכתב לפני הרנדומיזציה. ההסכמה כיסתה דיקור, טיפול בצמחים, איסוף דם וצואה, הגנה על נתוני מיקרוביום ונסיגה מדגימה ביולוגית ללא פגיעה בטיפול הסטנדרטי. הפרוצדורות בוצעו בהתאם להצהרת הלסינקי. כלי המחקר ששימשו בפרוטוקול מפורטים ב- טבלת חומריםהניסוי לא נרשם באופן פרוספקטיבי מכיוון שהרישום לא הושלם לפני תחילת גיוס המשתתפים.
1. תכנון המחקר והקצאה אקראית
משתתפים גויסו בין ה-1 במרץ ל-31 בדצמבר 2025, וכל משתתף נמעקב במשך 90 ימים. המחקר השתמש במערך של מרכז יחיד, עם סמיות של המעריך וקבוצות מקבילות, הכולל התערבות פעילה של 28 ימים. משתתפים מתאימים הוקצו ביחס של 1:1 לטיפול סטנדרטי או לטיפול סטנדרטי בתוספת דיקור ו-modified Xiaoxuming Decoction. הרנדומיזציה בוצעה באמצעות בלוקים של 4 או 6 שהופקו במחשב, והייתה מסווגת לפי ציון NIHSS בבסיס (4–8 לעומת 9–15). ההקצאה נשמרה בסודיות באמצעות מעטפות אטומות, חתומות ומסומנות במספרים רצופים.
ההתערבות הסופית שנמשכה 28 ימים הושלמה ב-28 בינואר 2026, המעקב הסופי הושלם ב-31 במרץ 2026, מאגר הנתונים ננעל ב-15 באפריל 2026, והניתוח שנקבע מראש הושלם עד 30 באפריל 2026. המחקר פעל לפי עקרונות CONSORT12; זרימת המשתתפים מוצגת ב-איור 1, ולוח הזמנים להערכה מופיע ב-טבלה 1.
2. סינון וגיוס משתתפים
חולים עם שבץ איסכמי חריף שאובחן באמצעות טומוגרפיה ממוחשבת או דימות תהודה מגנטית נסרקו תוך 72 h מהופעת התסמינים או מהזמן האחרון שבו המטופל היה במצב תקין. המשתתפים ההגמריים היו מבוגרים בגילאי 40–80 שנים עם ציון NIHSS (National Institutes of Health Stroke Scale) בבסיס של 4–15, סימנים חיוניים יציבים לאחר הערכה דחופה, יכולת להתחיל את ההתערבות שהוקצתה להם תוך 24 h, ונכונות לספק דגימות דם וצואה. הערכות NIHSS בוצעו על ידי מעריכים מיומנים13.
קריטריונים להדרה היו דימום תוך-מוחי; התקף איסכמי חולף ללא אוטם; תרדמה; ניתוח דקומפרסיה מתוכנן; צריכה פהית שאינה בטוחה; זיהום פעיל הדורש אנטיביוטיקה סיסטמית; שימוש באנטיביוטיקה, תוסף פרוביוטי או תוסף פרה-ביוטי בתוך 4 שבועות; מחלה דלקתית של המעיים; שלשולים כרוניים; ניתוח במערכת העיכול בתוך 6 חודשים; ממאירות; תפקוד כבדי או כלייתי לקוי קשה; יתר לחץ דם לא מאוזן; מחלה כלילית לא יציבה; הפרעת קצב לב שאינה מתאימה; ספירת טסיות < 80 × 109/L; התוויית נגד לדיקור סיני; אלרגיה לפורמולה הצמחית; הריון או הנקה; השתתפות בניסוי התערבותי אחר בתוך 3 חודשים; או חוסר יכולת להשלים את המעקב. מזונות צמחיים רגילים, ירקות כבושים וטופו מותסס לא סווגו כמוצרים אסורים מכיוון שלא ניתן היה לנstandardize באופן מלא תזונה סינית שגרתית.
3. טיפול סטנדרטי וחשיפות רלוונטיות למיקרוביום
שתי הקבוצות קיבלו טיפול בהתאם להנחיות, כולל תרומבוליזה תוורידית ו/או תרומבקטומיה מכנית כאשר הדבר היה מומלץ; ניהול טיפולי נגד פלטיקות, הורדת שומנים, לחץ דם וגלוקוז; הידרציה ותזונה; סריקת דיספגיה; מניעת דלקת ריאות ופקקת ורידים עמוקה; שיקום; ומניעה משנית14. הטיפול בפרפוזיה חוזרת לא הופסק או הוחלף עקב ההשתתפות במחקר.
מרגע ההקצאה האקראית ועד ליום ה-28, נאסרו דיקור סיני שאינו חלק מהמחקר, מוקסובוסטיה (moxibustion), מרשמי צמחים הקשורים לשבץ, תוספי פרוביוטיקה/פרה-ביוטיקה/סינביוטיקה, ותכשירים המכוונים למיקרוביוטה. המשתתפים והמטפלים קיבלו הודעה כי הגבלות אלו חלות על תוספי תזונה ומוצרי פרוביוטיקה המשווקים, ולא על מאכלים שבשגרה.
טיפול ברפרפוזיה וסטיות מהפרוטוקול תועדו. תזונה, חומרת הדיספגיה, הזנה אנטרלית, אנטיביוטיקה לאחר הרנדומיזציה, שימוש במעכבי פומפת פרוטון, עצירות ומשך האשפוז תועדו כמשתנים עם khả năng להוות גורמים מתבלבלים (confounders) הקשורים למיקרוביום. משתנים אלה לא נכללו כקו-וריאנטים במודלים הסטטיסטיים של המיקרוביום, ולכן נחשבו כגורמים מתבלבלים שיריים.
4. הסתרת הקצאה
רצף ההקצאה האקראית הופק על ידי סטטיסטיקאי עצמאי. מעטפות אטומות, חתומות ומסופרות ברצף הוכנו על ידי רכז שלא היה מעורב בגיוס, בטיפול, בהערכת התוצאים, בעבודה במעבדה או בניתוח הסטטיסטי. המעטפה הבאה נפתחה רק לאחר קבלת הסכמה מדעת, אישור עמידה בקריטריונים והשלמת הערכות הבסיס. רצף ההקצאה האקראית נשמר בקובץ מוגן בסיסמה, אשר נותר לא נגיש למעריכי התוצאים, לצוות המעבדה ולאנליסטים עד להשלמת הניתוח הראשי.
5. סמיות של תוצאות, מעבדה ואנליזה
הערכות NIHSS, מדד ברטל (Barthel Index) וסולם רנקין המודגם (mRS) בוצעו על ידי מעריכים שלא השתתפו במתן הטיפול. המשתתפים והמטפלים הונחו לא לחשוף את הקצאת הטיפול בפני מעריכי התוצאות. דגימות ביולוגיות סומנו באמצעות מזהים מקודדים, ואנשי המעבדה והסטטיסטיקאים נותרו מסווגים לקודים של הקבוצות עד לסיום הניתוחים שנקבעו מראש. מקרי חשיפה מקרית של הסיווג תועדו.
6. דיקור סיני ידני סטנדרטי
הדיקור הוחל בתוך 24 שעות לאחר ההקצאה האקראית, לאחר שהנוירו-לוג המטפל אישר יציבות המודינמית וסיכון דימום מקובל. הטיפול נקבע למשך מפגש אחד של 30 דקות ליום, 5 ימים בשבוע למשך 4 שבועות, בסך הכל 20 מפגשים מתוכננים.
המשתתפים מוקמו בבטחה, והעור חוטר לפני הדיקור. נקודות הדיקור Baihui (GV20), Shuigou (GV26), Fengchi (GB20) דו-צדדי, Quchi (LI11), Hegu (LI4), Zusanli (ST36), Yanglingquan (GB34) ו-Sanyinjiao (SP6) דוקרו בהתאם לצד ולעומק המפורטים ב Table 215.
נעשה שימוש במחטי דיקור סטריליות חד-פעמיות מפלדת אל-חלד במידות של 0.25 mm × 40 mm. המחטים הוחדרו לעומקים של 10–25 mm בהתאם לנקודת הדיקור ומבנה הגוף. בוצעו פעולות של הרמה-דחיפה וסיבוב ידני עד להשגת תחושת deqi או תגובה מקומית לדיקור. המחטים הושארו למשך 30 min וניתנה להן גירוי ידני חוזר מדי 10 min. לא נעשה שימוש באלקטרו-אקופנקטורה.
דיקור בוצע על ידי מדקרי מחטים מורשים עם ניסיון קליני של לפחות 5 שנים. המפגשים נדחו במקרה של חום, לחץ דם לא יציב, התדרדרות נוירולוגית, דימום פעיל, אי-שקט חמור או עייפות, או במידה והמשתתף סירב. הסיבה לדחייה וכל אירוע לוואי נלווה תועדו.
7. מרשם Xiaoxuming משופר
כל מנה יומית הכילה Ephedrae Herba 6 g, Cinnamomi Ramulus 9 g, Paeoniae Radix Alba 12 g, Saposhnikoviae Radix 9 g, Zingiberis Rhizoma Recens 6 g, Glycyrrhizae Radix et Rhizoma 6 g, Angelicae Sinensis Radix 10 g, Chuanxiong Rhizoma 10 g, Astragali Radix 20 g, Poria 15 g, ו-Paeoniae Radix Rubra 12 g. זהותם של צמחי הגלם שנרשמו אומתה על ידי בית המרקחת של בית החולים לפני ההכנה, ונעשה שימוש בהליכי חלוקה ובישול (decoction) שגרתיים. פירוט הפורמולה מופיע ב-טבלה 39˒16.
רק שינויים שהוגדרו מראש היו מותרים. ניתן היה להוסיף Cannabis Fructus במינון של 10 g במקרה של עצירות, להעלות את כמות ה-Poria ל-20 g במקרה של צואה רכה, ולהעלות את כמות ה-Astragali Radix ל-30 g במקרה של הזעה ספונטנית בולטת. כל שינוי, מנה שהוחמצה, אירוע של הקאה והפסקת טיפול תועדו.
מנה יומית אחת הוכנה כדשדש (decoction) בבית המרקחת של בית החולים ורוכזה ל-400 mL. התמיסה חולקה לשתי מנות של 200 mL וניתנה לאחר ארוחת הבוקר וארוחת הערב במשך 28 ימים. המתן הופסקה במקרים של בליעה לא בטוחה, הקאות מתמשכות, אלרגיה, alanine/aspartate aminotransferase >3× הגבול העליון של הנורמה, קצב סינון גלומרולרי מוערך <45 mL/min/1.73 m2, לחץ דם לא מאוזן, טכי-אריתמיה בעלת חשיבות קלינית, כאבים חדשים בחזה, או סיכון שנקבע על ידי החוקר.
8. הגבלות על קבוצת הביקורת
משתתפים שהוקצו לקבוצת הביקורת קיבלו טיפול סטנדרטי בלבד. דיקור שאינו חלק מהפרוטוקול, מוקסבסטיון (moxibustion), טיפול בצמחים הקשור לשבץ, תוספי פרוביוטיקה/פריביוטיקה/סינביוטיקה ומוצרים המכוונים למיקרוביוטה היו אסורים עד היום ה-28. כל שימוש בהתערבויות אלו תועד כסטייה מהפרוטוקול.
9. ניטור היענות ובטיחות
ההיענות לדיקור חושבה כמספר המפגשים שהושלמו חלקי 20 המפגשים המתוכננים. ההיענות לטיפול בצמחים הוערכה באמצעות אריזות שהוחזרו ויומני תרופות. היענות לפי פרוטוקול הוגדרה כהשלמה של לפחות 16 מפגשי דיקור וצריכה של לפחות 80% ממנות התשביח שנרשמו. מטופלים במחלקות הפנימיות נבחנו מדי יום, ומטופלים חיצוניים נוטרו במפגשי מעקב קבועים. אירועים חריגים שתועדו כללו דימום מקומי, המטומה, כאב, סחרחורת, עילפון, זיהום, תסמינים גסטרואינטסטינליים, פריחה, הפרעות כבדיות או כלייתיות, דפיקות לב, תנודות בלחץ הדם ואלרגיה. אירועים חריגים חמורים והשיוך שלהם סווגו באופן עצמאי על ידי שני קלינאים כלא קשורים, כנראה קשורים, סביר שקשורים או קשורים בוודאות.
10. הערכת תוצאות קליניות
מדד ה-NIHSS הוערך בנקודת ההתחלה ובימים 14, 28 ו-90. מדד ה-NIHSS ביום ה-28, לאחר התאמה ל-NIHSS בנקודת ההתחלה, היווה את נקודת הקצה הראשונית. מדד בארתל (Barthel Index) הוערך בנקודת ההתחלה ובימים 28 ו-90, ומדד ה-mRS הוערך ביום 90. שבץ חוזר, מוות מכל סיבה ותופעות לוואי תועדו עד יום 90.17תוצאה חיובית ביום ה-90 הוגדרה כ-mRS 0–2. התוצאות הקליניות והביולוגיות, נקודות הזמן להערכה, ההגדרות וסיווגי הניתוח מסוכמים ב- טבלה 4.
11. איסוף דם ובדיקות סמנים ביולוגיים
דם ורידי נאסף בנקודת הבסיס לפני ההתערבות ובימים 14 ו-28, רצוי בין השעות 06:30 ל-08:30 לאחר צום לילה. במקרים הרלוונטיים, תועדה איסוף דם ללא צום.
הדגימות עובדו בתוך 2 h. סבוב בצנטריפוגה בוצע ב-850 × g למשך 10 min ב-4 °C. סרום ופלזמה הוקצו לאליקוטות בתוך מבחנות קריו סטריליות ונשמרו ב-−80 °C. דגימות מאותו משתתף נשמרו בתוך אותה סדרת בדיקה במידת האפשר.
ריכוזיהם של חלבון C-reactive בעל רגישות גבוהה, אינטרלוקין-6 (IL-6), גורם נמק גידול אלפא (tumor necrosis factor-alpha), ליפופולסכריד (LPS) וזונולין נקבעו באמצעות הבדיקות שצוינו. רמות ה-IL-6, גורם נמק גידול אלפא, LPS וזונולין נמדדו בשכפול, והמדידות חזרו כאשר מקדם השונות של השכפולים עלה על 15%.
מפרטי הקטלוג שדווחו על ידי היצרן, ולא תוצאות תיקוף ספציפיות למחקר, היו כדלקמן: רגישות ל-hs-CRP, 5.36 pg/mL; טווח, 1,200–18.75 pg/mL; מקדמי וריאציה (CVs) של סרום בתוך בדיקה ובין בדיקות, 1.4%/4.0%; רגישות ל-IL-6, 0.7 pg/mL; טווח, 300–3.12 pg/mL; מקדמי וריאציה (CV) של סרום/פלזמה בתוך בדיקה, 4.2%–1.6%; מקדמי וריאציה (CV) בין בדיקות, 6.4%–3.3%; רגישות ל-tumor necrosis factor-alpha, 6.23 pg/mL; טווח, 1,000–15.6 pg/mL; מקדמי וריאציה (CV) בתוך בדיקה, 3.0%–2.2%; מקדמי וריאציה (CV) בין בדיקות, 8.4%–7.3%; וגבול גילוי ל-zonulin, 0.183 ng/mL; גבול כימות, 0.183 ng/mL; ליניאריות, 40.25–3.03 ng/mL; מקדמי וריאציה (CV) של חזרתיות, 6.0%–3.5%; ומקדמי וריאציה (CV) של שחזור, 8.3%–7.7%. גבול הגילוי וגבול הכמות של zonulin דווחו על ידי היצרן לפני החלת מקדם דילול הדגימה.
ריכוזי LPS דווחו ב-EU/mL, וריכוזי trimethylamine N-oxide בפלזמה דווחו ב-µmol/L. שתי המדידות נחשבו לתוצאות של סממנים ביולוגיים (biomarkers) למטרות מחקר ראשוני.
12. איסוף צואה וריצוף 16S rRNA
דגימות צואה נאספו בנקודת הבסיס וביום ה-28 למבחנות סטריליות, וזמני ההגבלה וההקפאה תועדו. כאשר משתתף לא היה מסוגל להגביר את הצואה בתוך חלון האיסוף המתוכנן, נאספה הצואה הספונטנית הבאה ברגע שהדבר היה אפשרי מבחינה קלינית. כל המשתתפים שהוקצו רנדומלית סיפקו בסופו של דבר דגימות צואה המתאימות לניתוחי מיקרוביום וחומצות שומן קצרות שרשרת; עיכובים בהליכי האיסוף לא הובילו להיעדר דגימות צואה עבור הניתוחים המתוכננים המבוססים על צואה. עיכוב באיסוף ומצב של עצירות תועדו, ומשלשלים לא ניתןו אך ורק לצורך דגימה מחקרית.
צואה טרייה הובלה תוך 2 h. כאשר הובלה מיידית לא הייתה אפשרית, הדגימות נשמרו בטמפרטורה של 4 °C למשך לא יותר מ-6 h לפני אחסון ב-−80 °C. נמנעו מחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים. DNA הופק באמצעות ערכת הפקת DNA צואתי ייעודית. אזור V3–V4 הוגבר באמצעות הפריימרים 338F ו-806R, ובוצע ריצוף paired-end של 300-bp. בתוכנת QIIME 2 גרסה 2024.10.1 (RRID: SCR_021258), בוצע demultiplexing של הקריאות והפריימרים הוסרו. DADA2 שימשה לסינון איכות, denoising, מיזוג קריאות זוגיות, הסרת כימרות והסקה של וריאנטים של רצפי אמפליקונים. הטקסונומיה הוקצתה בהתבסס על SILVA גרסה 138.1 (RRID: SCR_006423).
מדדי Shannon ו-Chao1 חושבו עבור גיוון אלפא. מרחקי Bray–Curtis וניתוח רכיבים ראשיים (PCoA) שימשו עבור גיוון בטא, וניתוח שונות רב-משתני פרמוטטי (PERMANOVA) שימש להערכת הבדלים בגיוון בטא18.
13. כימות חומצות שומן קצרות שרשרת בצואה
כ-100 mg של צואה שהופשרה עורבבו עם 1.0 mL של חומצה פוספורית בריכוז 0.5%, עוברו במכשיר וורטקס במשך 60 s, וסבבו בצנטריפוגה במהירות של 14,000 × g למשך 10 min בטמפרטורה של 4 °C. את תסמיך העילוי חילצו באמצעות אתיל אצטט המכיל 4-methylvaleric acid כסטנדרט פנימי.
מנה של 1 µL נותחה באמצעות כרומטוגרפיית גזים המשולבת עם גילוי סלקטיבי למסה (GC-MS), תוך שימוש בעמודה מסוג DB-FFAP במידות של 30 m × 0.25 mm × 0.25 µm. נעשה שימוש בהליום בזרימה של 1.0 mL/min עם יחס פיצול (split ratio) של 10:1 ויינון אלקטרונים ב-70 eV.
נערכה מדידה כמותית של אצטט, פרופיונאט, בוטיראט, איזובוטיראט, ולראט ואיזוולראט, וחומצות השומן קצרות השרשרת הכוללות הוגדרו כסכומן. האנליסטים נותרו עיוורים להקצאת הטיפולים, וניתוחי חומצות השומן קצרות השרשרת נחשבו כניתוחים גששיים.
14. תגובת סמנים ביולוגיים חקרנית
התגובה המרוכבת החוקרת הוגדרה כנוכחות של לפחות שניים מארבעה שינויים ביום ה-28: עלייה במדד Shannon > 0.20, עלייה בבוטיראט בצואה > 20%, ירידה ב-LPS בפלסמה > 15%, וירידה ב-IL-6 > 20%. ספים פרגמטיים אלו נועדו לעלות על תנודות אנליטיות קטנות, לא תוקפו קלינית, ושימשו לתיאור חוקר בלבד. לא נעשה שימוש בסף Shannon של < 1.5.
15. חישוב גודל מדגם
חישוב גודל המדגם הניח הפרש של 1.2 נקודות בין הקבוצות בשינוי ב-NIHSS ביום ה-28, סטיית תקן של 2.3, רמת אלפא דו-צדדית של 0.05 ועוצמה של 80%. חישוב זה דרש 58 משתתפים לכל קבוצה. בהתחשב ב-10% נקודות סיום ראשוניות לא שלמות, נקבע יעד גיוס של 64 משתתפים לכל קבוצה, ובסך הכל 128 משתתפים שהוקצו באופן אקראי19.
16. ניהול נתונים ובקרת איכות
נתונים קליניים תועדו באמצעות טפסי דיווח מקרה סטנדרטיים ועברו הזנה כפולה של נתונים. בדיקות טווח ועקביות בוצעו לפני נעילת מסד הנתונים, וסתירות נפתרו אל מול רשומות המקור. מעריכי התוצאים הוכשרו לפני הגיוס. איסוף דגימות, זמן עיבוד, טמפרטורת אחסון, מחזורי הקפאה-הפשרה, מנת בדיקה ומנת ריצוף עוקבו באמצעות מזהים מקודדים.
17. ניתוח סטטיסטי
כל 128 המשתתפים שהוקצו באופן אקראי נכללו בניתוח ה-intention-to-treat הראשוני. אוכלוסיית ה-per-protocol הוגדרה על פי השלמת ההערכה ביום ה-28, קבלה של לפחות 80% מחשיפת ההתערבות שהוקצתה, והיעדר הפרה מהותית של הפרוטוקול. כל המשתתפים שטופלו נכללו בניתוחי הבטיחות. ניתוחי המיקרוביום וחומצות שומן קצרות שרשרת בוצעו באמצעות דגימות צואה ניתנות להערכה שנאספו בנקודת הבסיס וביום 28. מכיוון שכל המשתתפים שהוקצו באופן אקראי סיפקו דגימות צואה ניתנות לניתוח, אף משתתף לא הוצא מהמחקר, ולא נדרש השלמה של דגימות חסרות (imputation) עבור ניתוחים המבוססים על צואה.
ערכי NIHSS חסרים ליום ה-28 הושלמו ב-30 חזרות תחת הנחת "חסר באופן אקראי" (missing-at-random) באמצעות מודלי ridge בייסיאניים של משוואות משורשרות, שכללו טיפול, NIHSS בקו הבסיס וביום ה-14, מדד Barthel בקו הבסיס, גיל, מין, טיפול ברפרפוזיה וזמן מההתחלה ועד לאקראיות. ההערכות אוחדו באמצעות כללי Rubin, וניתוח מקרים שלמים בוצע כניתוח רגישות.
היסטוגרמות וגרפי Q–Q נבחנו, ומבחני Shapiro–Wilk הוחלו על שאריות המודל. השאריות מ-ANCOVA הראשוני של המקרים השלמים היו תואמות להתפלגות נורמלית (P = 0.308). סמנים ביולוגיים עם התפלגות חיובית חזקה (right-skewed) הועברו טרנספורמציה לפני מידול ליניארי במידת הצורך. עבור רגרסיה לוגיסטית, לא נדרש שההתפלגות של התוצאה הבינארית תהיה נורמלית; נבחנו הליניאריות של המנבאים הרציפים ותצפיות משפיעות.
ניתוח שונות משותף (ANCOVA) שימש עבור מדד NIHSS ביום ה-28, כאשר הטיפול, מדד NIHSS בבסיס, גיל, מין, טיפול ברופרופוזיה וזמן מתחילת האירוע ועד לרנדומיזציה נכללו במודל20. מודלים ליניאריים מותאמים לבסיס שימשו עבור תוצאות גישוש רציפות ביום ה-28. מבחני Chi-square או מבחני Fisher exact שימשו עבור פרופורציות, ו-PERMANOVA עם 9,999 פרמוטציות שימש עבור מרחקי Bray–Curtis. ניתוחי גיוון המיקרוביום ומבנה הקהילה לא הותאמו לתזונה, לחומרת הדיספגיה, להזנה אנטרלית, לאנטיביוטיקה לאחר רנדומיזציה, לשימוש במעכבי פומפת פרוטונים, לעצירות או למשך האשפוז; גורמים אלו נחשבו כמשתנים מתבלבלים שאריות פוטנציאליים.
החלה תיקון של Benjamini–Hochberg לשיעור התגליות השגויות (false-discovery-rate) על שלושת הסוגים המוצגים, ודווחו הן ערכי P נומינליים והן ערכי q. עבור קשרי חקירה ברמת המשתתף נעשה שימוש ב-Spearman rho עם 5,000 דגימות bootstrap, ומקדמי מתאם של Pearson לא שימשו לצורך פרשנות הסקתית. ניתוח תיווך תוכנן רק במקרה שבו נמצא תמיכה הן בקשרים בין החשיפה למתווך והן בין המתווך לתוצאה. ערך P דו-צדדי < 0.05 שימש עבור התוצאות הקליניות העיקריות והמוגדרות מראש.
איור 1: זרימת המשתתפים ולוח הזמנים להערכה. (A) תרשים זרימה בסגנון CONSORT המציג סינון (n = 176), החרגות (n = 48), הקצאה רנדומלית (64 לקבוצה), תרומבוליזה תוך-ורידית (16 בקבוצת הביקורת; 18 בקבוצת ההתערבות), תרומבקטומיה מכנית (4; 5), זמינות מדד NIHSS ביום ה-28 (59; 58), מעקב נצפה ביום ה-90 (57; 56), ואוכלוסיות הניתוח. (B) לוח זמנים להתערבות ולהערכה. NIHSS, National Institutes of Health Stroke Scale; ITT, intention-to-treat; mRS, modified Rankin Scale. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.
| הליך המחקר | סינון | קו בסיס | ימים 1–28 | יום 14 | יום 28 | יום 90 |
| חלון לוח שנה | 1 במרץ–31 בדצמבר, 2025 | אותו יום של הרנדומיזציה | מרץ 2025–ינואר 2026 | ±2 ימים | ±3 ימים | ±7 ימים |
| הערכת התאמה | ✓ | |||||
| הסכמה מדעת בכתב | ✓ | |||||
| אישור CT/MRI לשבץ איסכמי | ✓ | |||||
| איסוף נתונים דמוגרפיים וקליניים | ✓ | |||||
| רנדומיזציה | ✓ | |||||
| טיפול סטנדרטי בשבץ איסכמי חריף | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| דיקור ידני סטנדרטי | ✓ | |||||
| מרשם Xiaoxuming משופר | ✓ | |||||
| הערכת NIHSS | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ||
| הערכת מדד Barthel | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| הערכת מדד Rankin משופר | ✓ | |||||
| איסוף דגימות דם פריפריות | ✓ | ✓ | ✓ | |||
| איסוף דגימות צואה | ✓ | ✓ | ||||
| ניטור אירועים חריגים | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | ✓ | |
| השלמת מעקב קליני סופי | עד 31 במרץ, 2026 | |||||
| ניקוי נתונים וניתוח סטטיסטי | 1 באפריל–30 באפריל, 2026 |
טבלה 1: לוח זמנים למחקר, חשיפה להתערבות, איסוף דגימות והערכות תוצאה. CT, טומוגרפיה ממוחשבת; MRI, דימות תהודה מגנטית; NIHSS, מדד השבץ של המכונים הלאומיים לבריאות (National Institutes of Health Stroke Scale).
| נקודת דיקור | קטגוריית מיקום | צדיות | עומק המחט | שיטת הגירוי | זמן שימור | תדירות הטיפול | אמצעי זהירות בטיחותיים |
| באיהוי (GV20) | נקודת קרקפת | יחיד | 10–15 מ"מ | החדרה אלכסונית עם גירוי ידני קל | 30 דק׳ | 5 מפגשים לשבוע למשך 4 שבועות | הימנעו מגירוי מרובה במטופלים עם סימנים חיוניים לא יציבים |
| שוויגאו (GV26) | נקודה פנימית בפנים | בודד | 5–10 מ"מ | החדרה אלכסונית עם גירוי ידני קל | 30 דקות | 5 מפגשים לשבוע למשך 4 שבועות | יש להימנע מדקירה במטופלים עם פגיעה מקומית בעור, זיהום או חוסר שיתוף פעולה |
| פנגצ'י (GB20) | נקודת ראש וצוואר | דו-צדדי | 15–25 מ"מ | החדרה אלכסונית; נמנעה דיקור מדיאלי עמוק | 30 דקות | 5 מפגשים לשבוע למשך 4 שבועות | הימנעו מהחדרה עמוקה לכיוון תעלת השדרה או אזור העורק החוליי (vertebral artery) |
| קוצ'י (LI11) | נקודת גפה עליונה | דו-צדדי | 15–25 ממ"ק | הרמה-דחיפה וסיבוב ידניים | 30 דקות | 5 מפגשים לשבוע למשך 4 שבועות | הימנעו מדקירה דרך עור פגוע (bruised), בצקתִי או מזוהם |
| הגו (LI4) | נקודת גפה עליונה | דו-צדדי | 10–20 מ"מ | הרמה-דחיפה וסיבוב ידניים | 30 דקות | 5 מפגשים לשבוע למשך 4 שבועות | יש להימנע ממניפולציות מרובות בחולים שבירים או בחולים עם אי-סבירות לכאב |
| Zusanli (ST36) | נקודת גפה תחתונה | דו-צדדי | 20–25 מ"מ | הרמה-דחיפה וסיבוב ידניים | 30 דק׳ | 5 מפגשים לשבוע למשך 4 שבועות | יש להימנע מדקירה באזורים עם בצקת, זיהום או טראומה מקומית |
| יאנגלינגקוואן (GB34) | נקודה בגפיים התחתונות | דו-צדדי | 20–25 מ"מ | הרמה-דחיפה וסיבוב ידניים | 30 דקות | 5 מפגשים לשבוע למשך 4 שבועות | הימנעו מדקירה בחולים הסובלים מכאב גפיים חמור, טראומה או אי-שקט |
| סניינג'יאו (SP6) | נקודת גפה תחתונה | דו-צדדי | 15–25 ממ"ק | הרמה-דחיפה וסיבוב ידניים | 30 דקות | 5 מפגשים בשבוע למשך 4 שבועות | יש להימנע משימוש במהלך ההיריון ובמטופלים עם נגעים מקומיים בעור |
טבלה 2: מרשם דיקור סיני סטנדרטי ופרוטוקול ביצוע. הערות תפעוליות: מחטים חד-פעמיות סטריליות מפלדת אל-חלד במידה של 0.25 מ"מ × נעשה שימוש ב-40 מ"מ. הופעל גירוי ידני עד לדיווח על תחושת דה-צ'י (deqi) או עד להשגעה של תגובת הדיקור מקומית. המחטים הושארו למשך 30 דקות, והגירוי הידני חזר על עצמו בכל 10 דקות במהלך ההשארה.
| רכיב | שם פרמצבוטי לטיני | מינון יומי | תפקיד פונקציונלי בנוסחה | הערות בקרת איכות ובטיחות |
| אפדרה | Ephedrae Herba | 6 g | רכיב לפיזור רוח ופתיחת תעלים | לחץ דם, דפיקות לב, אי-נוחות בחזה ונדודי שינה נוטרו במהלך הטיפול |
| ענף קינמון | Cinnamomi Ramulus | 9 g | רכיב מחמם ותומך בסירקולציה | הושתמש בזהירות בחולים עם הזעת יתר או תסמינים הקשורים לחום |
| שורש פוניה לבנה | Paeoniae Radix Alba | 12 g | רכיב הרמוני ואנטי-ספאסמודי | נדרשו אישור רוקחי ותיעוד סדרות |
| שורש ספושניקוביה | Saposhnikoviae Radix | 9 g | רכיב לפיזור רוח | נדרשו אישור רוקחי ותיעוד סדרות |
| ג'ינג'ר טרי | Zingiberis Rhizoma Recens | 6 g | רכיב להרמוניזציה של מערכת העיכול | המתנה במתן התרופה במקרה של הקאות מתמשכות |
| שורש ליקוריץ | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | 6 g | רכיב להרמוניזציה של הנוסחה | הפרעות אלקטרוליטים ובצקת נוטרו בחולים בסיכון גבוה |
| שורש אנגליקה | Angelicae Sinensis Radix | 10 g | רכיב למזינת דם ותמיכה בסירקולציה | שימוש נלווה בתרופות אנטי-פלטלטיות או נוגדות קרישה תועד |
| ריזומה של צ'ואנשיונג | Chuanxiong Rhizoma | 10 g | רכיב להפעלת דם | אירועים חריגים הקשורים לדימומים נוטרו ותועדו |
| שורש אסטרגלז | Astragali Radix | 20 g | רכיב תומך Qi | ניתן להעלות ל-30 g במקרה של הזעה ספונטנית ניכרת, אם תועד כשינוי מוגדר בפרוטוקול |
| פוריה | Poria | 15 g | רכיב תומך טחול ומסלק לחות | ניתן להעלות ל-20 g במקרה של צואה רכה, אם תועד כשינוי מוגדר בפרוטוקול |
| שורש פוניה אדומה | Paeoniae Radix Rubra | 12 g | רכיב להפעלת דם ואנטי-דלקתי | נדרשו אישור רוקחי ותיעוד סדרות |
| זרעי המפ | Cannabis Fructus | 10 g, במידת הצורך | להתאמה במקרה של עצירות בלבד | נוסף רק במקרה של עצירות ותועד כשינוי מוגדר בפרוטוקול |
טבלה 3: הרכב ופרוטוקול מתן של מרשם Xiaoxuming משוער. פרוטוקול מתן: מנה יומית אחת הורתכה על ידי בית המרקחת של בית החולים ורוכזה ל-400 mL. המרקש חולק לשתי מנות של 200 mL שניתנו経 orally לאחר ארוחת הבוקר וארוחת הערב למשך 28 ימים רצופים. המתן הופסק בחולים עם בליעה לא בטוחה, הקאות מתמשכות, חשד לתגובה אלרגית, alanine aminotransferase או aspartate aminotransferase הגבוהים פי שלושה מהגבול העליון של הנורמה, קצב סינון גלומרולרי מוערך נמוך מ-45 mL/min/1.73 m2, לחץ דם לא מאוזן לאחר טיפול סטנדרטי, tachyarrhythmia בעלת משמעות קלינית, כאבים חדשים בחזה, או כל חשש בטיחות שנקבע על ידי החוקר.
| קטגוריית תוצאה | משתנה | נקודת זמן להערכה | הגדרה או מדידה | סיווג ניתוח |
| גירעון נוירולוגי | מדד NIHSS | קו בסיס, יום 14, יום 28, יום 90 | סולם השבץ של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH Stroke Scale) כפי שהוערך על ידי נוירולוגים מסווגים באופן עיוור | תוצאה קלינית ראשונית ביום 28; משנית ביום 14/יום 90 |
| תפקוד בחיי היום-יום | מדד ברת'ל (Barthel Index) | קו בסיס, יום 28, יום 90 | ציון פעילויות היומיום כפי שהוערך על ידי מעריכים מסווגים באופן עיוור שעברו הכשרה | תוצאה קלינית משנית |
| נכות גלובלית | סולם Rankin המותאם (Modified Rankin Scale) | יום 90 | ציון נכות תפקודית 0–6 | תוצאה קלינית משנית; התפלגות שנצפתה ודיכוטומיית ITT מסומנת בנפרד |
| תוצאה תפקודית חיובית | mRS 0–2 | יום 90 | משתתפים עם mRS 0, 1 או 2 | תוצאה קלינית משנית |
| חזרה של שבץ | שבץ איסכמי חוזר | עד יום 90 | אבחנה של נוירולוג עם דימות כאשר זמין | תוצאה הקשורה לבטיחות |
| תמותה | מוות מכל סיבה | עד יום 90 | מוות מכל סיבה שהיא | תוצאת בטיחות |
| דלקת סיסטמית | hs-CRP, IL-6, TNF-alpha | קו בסיס, יום 14, יום 28 | ריכוזים בסרום/בפלזמה | תוצאת ביו-מרקר גישושית |
| סמני אנדוטוקסין/מחסום | LPS, zonulin | קו בסיס, יום 14, יום 28 | ריכוזים מבוססי דם | תוצאת ביו-מרקר גישושית |
| מטבוליט מיקרוביאלי | TMAO | קו בסיס, יום 28 | ריכוז בפלזמה | תוצאת ביו-מרקר גישושית |
| מגוון מיקרוביוטת המעי | Shannon, Chao1, Bray–Curtis | קו בסיס, יום 28 | מגוון נגזר מ-16S rRNA | תוצאת ביו-מרקר גישושית |
| הרכב מיקרוביאלי | סוגים (genera) נבחרים | יום 28 | שפע יחסי ברמת הסוג (genus) | גישושי; P נומינלי ו-BH-FDR q על פני שלושה סוגים שסופקו |
| חומצות שומן קצרות שרשרת | Acetate, propionate, butyrate, total SCFAs | יום 28 | ריכוזים בצואה באמצעות GC-MS | תוצאת ביו-מרקר גישושית |
| תגובה גישושית | תגובה משולבת | יום 28 | לפחות שניים: Shannon >0.20; butyrate >20%; ירידה ב-LPS >15%; ירידה ב-IL-6 >20% | גישושי; ספי השדה לא תוקפו קלינית |
| בטיחות ההתערבות | אירועים חריגים ואירועים חריגים חמורים | ימים 1–90 | אירועים ואסייבציה שתועדו על ידי החוקר | תוצאת בטיחות |
טבלה 4: תוצאות קליניות וביולוגיות, חלונות זמן, הגדרות וסיווג ניתוח. טבלה זו מסכמת את התוצאות הקליניות והביולוגיות שהוגדרו מראש, נקודות הזמן להערכתן, ההגדרות האופרטיביות וסיווגי הניתוח. FDR, שיעור התגליות השגויות; hs-CRP, חלבון C-רַאקטיבי ברגישות גבוהה; IL-6, אינטרלוקין-6; LPS, ליפופוליסכריד; mRS, סולם רנקין המעודכן; NIHSS, סולם שבץ של מכוני הבריאות הלאומיים (NIH); SCFA, חומצת שומן קצרה; TMAO, טרימეთילאמין N-אוקסיד.
תוצאות
זרימת המשתתפים ואוכלוסיות הניתוח
מתוך 176 מטופלים שנסקרו, 48 הוצאו לפני האקראיזציה, ו-128 הוקצו באופן אקראי (64 לקבוצה; איור 1). כל המשתתפים שעברו אקראיזציה נכללו באוכלוסיות ה-intention-to-treat ובאוכלוסיות הבטיחות. מדד ה-NIHSS ביום ה-28 נצפה עבור 59 משתתפי ביקורת ו-58 משתתפי התערבות; מעקב ביום ה-90 הושלם על ידי 57 ו-56 משתתפים, בהתאמה. אוכלוסיות ה-per-protocol כללו 58 ו-57 משתתפים (איור 2).
מאפייני בסיס
המאפיינים הבסיסיים היו דומים בין הקבוצות (טבלה 5). הגיל הממוצע היה 65.1 ± 8.7 לעומת 64.7 ± 9.1 שנים, מדד NIHSS בקו הבסיס היה 8.6 ± 2.6 מול 8.4 ± 2.9, ומדד Barthel בבסיס היה 43.5 ± 13.2 לעומת 44.8 ± 12.7. תרופה להמסת קרישי דם (thrombolysis) הנתה תוך-ורידית ל-16/64 (25.0%) ממשתתפי קבוצת הביקורת, ול-18/64 (28.1%) ממשתתפי קבוצת ההתערבות; תבלין מכני (mechanical thrombectomy) בוצע ב-4/64 (6.3%) וב-5/64 (7.8%), בהתאמה.
הישמעות להתערבות
בקבוצת ההתערבות, מספר מפגשי הדיקור החציוני היה 18 (טווח בין-רבעוני, 17–20); 57 משתתפים השלימו ≥ 16 מפגשים, ו-58 צרכו ≥ 80% מהמרשם (decoction). שימוש בפרוביוטיקה/פרה-ביוטיקה שאינו חלק מהפרוטוקול התרחש אצל שני משתתפי ביקורת ואצל משתתף אחד מקבוצת ההתערבות; משתתפים אלו נכללו בניתוח של כוונת הטיפול (intention-to-treat analysis) אך הוחרגו מניתוח לפי הפרוטוקול (per-protocol analysis) (Supplementary Table 1).
תוצאות קליניות
נצפה ירידה במדד ה-NIHSS מ-8.6 ± 2.6 ל-5.5 ± 3.1 בקבוצת הביקורת (n = 59 ביום 28) ומ-8.4 ± 2.9 ל-4.1 ± 2.9 בקבוצת ההתערבות (n = 58; איור 3A). השינויים הממוצעים שנצפו היו −3.34 ± 4.14 ו-−3.97 ± 4.03 נקודות, בהתאמה (איור 3B). בניתוח ANCOVA עם 30 השלמות (imputations) שהוגדרו מראש, מדד ה-NIHSS המתוקנן ליום 28 היה נמוך ב-1.30 נקודות עם ההתערבות (רווח סמך [CI] של 95%, −2.36 עד −0.24; P = 0.017).
מדד ה-NIHSS ביום ה-14 היה 5.49 ± 2.45 לעומת 4.61 ± 2.23 (P מותאם לבסיס = 0.041), ומדד ה-NIHSS שנצפה ביום ה-90 היה 3.68 ± 2.68 (n = 57) לעומת 2.88 ± 2.36 (n = 56; P = 0.091; איור 3A).
מדד בארת'ל (Barthel Index) ביום ה-28 היה 61.39 ± 18.80 לעומת 68.82 ± 19.36 (P מתוקנן לבסיס = 0.040); הערכים שנצפו ביום ה-90 היו 75.56 ± 19.22 לעומת 81.49 ± 17.67 (P = 0.098; איור 3Cבקרב המשתתפים שנכללו בניתוח ה-mRS ביום ה-90 לפי שיטת observed-case, תוצאה חיובית הופיעה ב-32/57 מהביקרות (56.1%) וב-38/56 מהמשתתפים בקבוצת ההתערבות (67.9%; P = 0.200). התפלגות קטגוריות ה-mRS המלאה לפי שיטת observed-case מוצגת ב- איור 3D ו- טבלה נלווית 1הערכות ITT עבור תוצאת mRS הדיכוטומית באמצעות השלמה מרובה (36/64) לעומת 44/64; P = 0.144) מדווחים בנפרד.
סמנים ביולוגיים הקשורים לציר מוח-מעי
דגימות צואה היו זמינות ואושרו לניתוח בהצלחה עבור כל המשתתפים שהוקצו רנדומלית (64 לקבוצה) בנקודת הזמן המתוכננת לניתוח. מדד הגיוון של שנון (Shannon diversity) ביום ה-28 היה 3.08. ± 0.52 מול 3.31 ± 0.57 (P מותאם לבסיס = 0.019; איור 4A), וריכוז הבוטיראט בצואה היה 10.21 ± 4.27 מול 12.91 ± 5.08 µmol/g (P = 0.002; איור 4B).
רמת ה-IL-6 הייתה 18.23 ± 9.44 מול 15.62 ± 8.06 pg/mL ביום 14 (P נומינלי = 0.095) ו-14.61 ± 8.18 לעומת 11.84 ± 6.83 pg/mL ביום ה-28 (P מותאם לבסיס = 0.041; איור 4C). ה-LPS היה 0.85 ± 0.32 לעומת 0.78 ± 0.30 EU/mL ביום ה-14 (P = 0.204) ו-0.78 ± 0.31 מול 0.66 ± 0.28 EU/mL ביום ה-28 (P מותאם לבסיס = 0.023; איור 4D).
ביום 28, Faecalibacterium ו-Roseburia היו שכיחים יותר בקבוצת ההתערבות (nominal P = 0.006 ו-0.009; שניהם q = 0.013), בעוד ש-Bifidobacterium לא הגיע למשמעות סטטיסטית נומינלית (P = q = 0.056; איור 4E). תיקון Benjamini–Hochberg הוחל על שלושת הסוגים המוצגים.
התגובה המורכבת החקרנית הופיעה ב-21/64 מקבץ הביקורת (32.8%) וב-34/64 מהמשתתפים בקבוצת ההתערבות (53.1%; P = 0.020). תוצאות הרכיבים מדווחות ב- איור 4F ו- טבלה נלווית 2; הספים הם לצורכי מחקר בלבד ואינם מתוקפים קלינית.
קשרים גששתיים ברמת המשתתף
קשרי חקירה ברמת המשתתף הוערכו באמצעות rho של Spearman עם 5,000 דגימות חוזרות בשיטת bootstrap. שינויים בבוטיראט בצואה, IL-6, LPS ומדד הגיוון של Shannon לא היו קשורים באופן מובהק לשינויים הנוירולוגיים או לסממנים הביולוגיים התואמים (איור 5).
שינויים ברמות ה-butyrate בצואה ובמדד ה-NIHSS לא נמצאו כקשורים באופן מובהק (Spearman rho = −0.05; 95% bootstrap confidence interval [CI], −0.23 to 0.13; P = 0.601; n = 117). שינוי ב-IL-6 לא היה קשור לשינוי ב-NIHSS (rho = −0.01; 95% bootstrap CI, −0.18 to 0.15; P = 0.887; n = 117), ושינוי ב-LPS לא היה קשור לשינוי ב-IL-6 (rho = −0.14; 95% bootstrap CI, −0.29 to 0.03; P = 0.125; n = 128).
שינוי במדד גיוון שנון (Shannon diversity) לא היה קשור באופן מובהק לשינוי ב-NIHSS (rho = −0.15; 95% CI, −0.34 to 0.06; P = 0.119; n = 117). מכיוון שהקשרים שהוגדרו מראש ברמת המשתתף בין החשיפה למתווך ובין המתווך לתוצאה לא נתמכו, לא בוצע ניתוח תיווך (mediation analysis), ולא הוסק השפעה עקיפה או נתיב סיבתי בין המוח למעי.
תוצאות בטיחות
אירוע חריג כלשהו התרחש בקרב 8/64 מהביקורות ו-11/64 ממשתתפי ההתערבות (12.5% לעומת 17.2%; P = 0.456). סימנים כחולים באתר הדקירה הופיעו ב-0 לעומת 5 משתתפים (P = 0.023) וחלפו ללא טיפול; אי-נוחות גסטרו-אינטסטינלית קלה הופיעה ב-3 לעומת 6 משתתפים (P = 0.300; טבלה 6).
אירועים חריגים חמורים התרחשו בקרב 3 נבדקים מקבוצת הביקורת ו-2 נבדקים מקבוצת ההתערבות (P = 0.648). מקרה מוות אחד התרחש בכל קבוצה; אף אירוע חריג חמור לא נשפט כקשור באופן ודאי לדיקור או ל-modified Xiaoxuming Decoction.
לסיכום, ההתערבות המשולבת הייתה קשורה לשיפור מתון ב-NIHSS ביום ה-28 ובסממנים ביולוגיים נבחרים ביום ה-28. הבדלים קליניים ביום ה-90 לא היו מובהקים סטטיסטית, ונתונים ברמת המשתתף לא תמכו בתיווך באמצעות הסממנים הביולוגיים שנמדדו.
איור 2: זרימת העבודה של דגימה קלינית וביולוגית. נאספו דגימות דם וצואה לצורך מדידות של מיקרוביום, חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA), מדדי דלקת ומדדים הקשורים למחסום המעי. זרימת העבודה מגדירה קשרים חקרים ואינה טוענת למנגנון סיבתי של ציר המוח-מעי. אנא לחצו כאן להצגת גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3: תוצאות קליניות. (A) מסלול NIHSS; הנקודות הן ממוצע ± SD, כאשר n מוצג בכל נקודת זמן. (B) שינוי נצפה ב-NIHSS מקו הבסיס ליום 28, מוצג כממוצע ± SD (ביקורת n = 59; התערבות n = 58); ההערה מדווחת על ANCOVA עם 30 השלמות (imputation), מותאם ל-NIHSS בקו הבסיס, גיל, מין, רפרפוזיה וזמן מההופעה ועד לאקראיות. (C) מדד Barthel, מוצג כממוצע ± SD, כאשר n מוצג. (D) קטגוריות mRS ביום 90 למקרים שנצפו (ביקורת n = 57; התערבות n = 56); האחוזים מחושבים לפי המכנה הנצפה. ערכי P הם דו-צדדיים. לא נעשה שימוש בסמלי מובהקות. CI, רווח בר סמך; MI, השלמה מרובה (multiple imputation); SD, סטיית תקן. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 4: סממנים ביולוגיים חקרים. העמודות והנקודות מייצגות ממוצע ± SD. כל המשתתפים שהוקצו באופן אקראי סיפקו דגימות שניתן היה להעריכן עבור האנליזות המתאימות; לפיכך, n = 64/group היה זמין עבור כל פאנל. דגימות צואה נאספו ועובדו בהצלחה מכל המשתתפים, כולל אלו שנדרשה עבורם איסוף מושהה בתוך חלון האיסוף שהוגדר מראש. (A) מדד Shannon ו(B) butyrate בצואה: מודלים לינאריים ביום ה-28 מותאמים לבסיס (baseline). (C) מסלולי IL-6 ו(D) LPS: מבחני Welch ביום ה-14 ומודלים ביום ה-28 מותאמים לבסיס. (E) סוגים (genera) נבחרים ביום ה-28: מבחני Welch עם תיקון Benjamini–Hochberg עבור שלושת הסוגים המוצגים; מוצגים הן ערכי P נומינליים והן ערכי q. (F) רכיבי תגובה: מבחני chi-square של Pearson. כל ערכי P הם דו-צדדיים; לא נעשה שימוש בסממני מובהקות. IL-6, interleukin-6; LPS, lipopolysaccharide; SCFA, short-chain fatty acid; SD, standard deviation. אנא לחצו כאן להצגת גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 5: קשרים חקרניים ברמת המשתתף. (A) שינוי ב-Butyrate לעומת שינוי ב-NIHSS (n = 117). (B) שינוי ב-IL-6 לעומת שינוי ב-NIHSS (n = 117). (C) שינוי ב-LPS לעומת שינוי ב-IL-6 (n = 128). הקוים מוצגים לצורכי ויזואליזציה בלבד ואינם מייצגים הסקה מבוססת רגרסיה. ההסקה הסטטיסטית התבססה על Spearman's rho עם 5,000 דגימות bootstrap חוזרות. (D) אומדני Spearman עם רווחי סמך 95% של 5,000 דגימות bootstrap חוזרות, כולל שינוי ב-Shannon לעומת שינוי ב-NIHSS (n = 117). אף קשר לא עמד בקריטריון P < 0.05; לפיכך, לא בוצע ניתוח תיווך. לא נעשה שימוש בסמלים למשמעות סטטיסטית. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.
| משתנה | קבוצת ביקורת (n = 64) | קבוצת ההתערבות (n = 64) | ערך p |
| גיל, שנים | 65.1 ± 8.7 | 64.6 ± 9.0 | 0.775 |
| מין זכר, n (%) | 40 (62.5) | 39 (60.9) | 0.855 |
| מההתחלה ועד להקצאה אקראית, שעות | 41.7 ± 14.9 | 40.9 ± 15.7 | 0.773 |
| ציון NIHSS בקו הבסיס | 8.6 ± 2.6 | 8.4 ± 2.9 | 0.665 |
| מדד ברטל בנקודת הבסיס | 43.5 ± 13.2 | 44.8 ± 12.7 | 0.573 |
| יתר לחץ דם, מספר (%) | 42 (65.6) | 41 (64.1) | 0.855 |
| סוכרת, n (%) | 18 (28.1) | 17 (26.6) | 0.839 |
| תרומבוליזה תוורידית, מספר (%) | 16 (25.0) | 18 (28.1) | 0.690 |
| תרומבקטומיה מכנית, מספר (%) | 4 (6.3) | 5 (7.8) | 0.732 |
| hs-CRP, mg/L | 7.21 ± 4.18 | 7.04 ± 4.03 | 0.813 |
| IL-6, pg/mL | 24.03 ± 10.14 | 23.62 ± 9.96 | 0.817 |
| TNF-alpha, pg/mL | 30.5 ± 11.2 | 30.0 ± 11.0 | 0.799 |
| מדד שנון | 2.84 ± 0.55 | 2.86 ± 0.56 | 0.833 |
| בוטיראט בצואה, µmol/g | 8.41 ± 3.99 | 8.53 ± 4.04 | 0.859 |
| LPS, EU/מ"ל | 0.94 ± 0.34 | 0.93 ± 0.35 | 0.870 |
| זונולין, ננוגרם/מ"ל | 54.50 ± 15.60 | 54.11 ± 15.08 | 0.885 |
טבלה 5: מאפיינים דמוגרפיים, קליניים ומדדי ביולוגים (biomarkers) בבסיס. טבלה זו מסכמת מאפיינים דמוגרפיים, קליניים, מאפיינים הקשורים לטיפול ומדדי ביולוגים בקבוצת הביקורת ובקבוצת ההתערבות. הערכים הם ממוצע ± SD או n (%). תרומבוליזה תוך-ורידית ותרומבקטומיה מכנית מדווחות כקטגוריות נפרדות של טיפול סטנדרטי.
| תוצאת בטיחות | קבוצת ביקורת (n=64) | קבוצת התערבות (n=64) | ערך P |
| כל אירוע חריג, n (%) | 8 (12.5) | 11 (17.2) | 0.456 |
| סימנים כחולים באתר הדקירה, n (%) | 0 | 5 (7.8) | 0.023 |
| אי-נוחות גסטרו-אינטסטינלית קלה, n (%) | 3 (4.7) | 6 (9.4) | 0.3 |
| סחרחורת חולפת, n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| פריחה קלה, n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| תפקוד כבד חריג, n (%) | 1 (1.6) | 2 (3.1) | 0.56 |
| תפקוד כלייתי חריג, n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
| תנודות בלחץ הדם, n (%) | 2 (3.1) | 3 (4.7) | 0.648 |
| דפיקות לב, n (%) | 0 | 1 (1.6) | 0.315 |
| אירוע חריג חמור, n (%) | 3 (4.7) | 2 (3.1) | 0.648 |
| אירוע חריג חמור הקשור להתערבות, n (%) | 0 | 0 | -- |
| מוות מכל סיבה, n (%) | 1 (1.6) | 1 (1.6) | 1 |
טבלה 6: אירועים חריגים ואירועים חריגים חמורים. טבלה זו מסכמת אירועים חריגים, אירועים חריגים חמורים, אירועים חריגים חמורים הקשורים להתערבות, ומקרי מוות מכל סיבה שהיא בקבוצת הביקורת ובקבוצת ההתערבות. הערכים מוצגים כ-n (%).
זמינות נתונים:
נתונים ברמת המשתתף לאחר הסרת פרטים מזהים, התומכים בניתוחי הקליניקה, הביומארקרים, המיקרוביום, ההיענות והבטיחות שדווחו, זמינים לציבור ב-Zenodo (https://zenodo.org/records/22725409).
טבלה נלווית 1: מעקב, היענות ותוצאות קליניות. אוכלוסיות ניתוח נצפות ומושלמות (imputed) מסומנות בנפרד. האומדן הראשוני משתמש ב-30-fold multiple imputation וב-ANCOVA המותאמת ל-NIHSS בבסיס, גיל, מין, reperfusion וזמן מההתחלה ועד לאקראיות. CI, רווח בר סמך; IQR, טווח בין-רבעוני; mRS, סולם Rankin המותאם; NIHSS, סולם השבץ של המכונים הלאומיים לבריאות (National Institutes of Health Stroke Scale).אנא לחצו כאן להורדת קובץ זה.
טבלה משלימה 2: תוצאות חקר של סמנים ביולוגיים. הערכים הם ממוצע ± SD או n (%). קיימת הבחנה בין ערכי P נומינליים לבין ערכי q מותאמי FDR. התגובה המורכבת דרשה לפחות שניים מארבעה שינויים שהוגדרו מראש ואינה מתוקפת קלינית. ניתוחי מתאם הם לצורכי חקר; ניתוח תיווך לא בוצע מכיוון שהקשרים המוקדמים ברמת המשתתף לא היו מובהקים.אנא לחץ כאן להורדת הקובץ.
קובץ משלים 1: הנתונים הגולמיים המתאימים לאיורים ולטבלאות.אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.
דיון
הפרוטוקול המשולב הניב שיפור מתון בגירעון נוירולוגי מוקדם, כאשר ANCOVA עם השלמה מרובה (multiple-imputation) העריכה הפרש של −1.30 נקודות במדד NIHSS ביום ה-28. גם מדד Barthel ביום ה-28 וסממנים ביולוגיים נבחרים ביום ה-28 היו שונים, בעוד שתוצאות היום ה-90 לא הגיעו למשמעות סטטיסטית. ממצאים אלו תומכים בהערכת ההתערבות המשולבת כתוספת ולא כתחליף לפרפוזיה מחדש (reperfusion), טיפול אנטי-תרומבוטי, שיקום או טיפול סטנדרטי אחר.
ההשפעה הקלינית שנצפתה בניסוי זה עולה בקנה אחד עם התפיסה הגוברת לפיה דיקור עשוי לתרום להחלמה לאחר שבץ מעבר לוויסות סימפטומטי. עבודות קודמות הראו כי דיקור עשוי לשפר את התפקוד הנוירולוגי ולהפחית פעילות דלקתית בשבץ איסכמי חריף, אם כי עוצמת התועלת ועמידותה נותרו משתנות בין מחקרים שונים21. התוצאות הנוכחיות מרחיבות קו ראיות זה על ידי בחינת הדיקור כחלק מהתערבות משולבת עם פורמולה צמחית סטנדרטית, ועל ידי קישור ההשפעה הקלינית לסמנים ביולוגים שהוגדרו מראש הקשורים לציר מוח-מעי. גודל האפקט היה מתון ולא דרמטי, עובדה החשובה לצורך הפרשנות. הבדל מתוקנן של נקודה אחת ב-NIHSS עשוי להיות משמעותי בשבץ קל עד בינוני כאשר הוא מלווה באותות תפקודיים וביולוגיים, אך אין לפרש זאת כראיה לכך שההתערבות לבדה קובעת את ההחלמה. השלבים הרגישים ביותר לשחזור הם תזמון עקבי של קביעת הזכאות, הקצאה מסווגת, דיקור בטוח, חשיפה סטנדרטית למרקחת (decoction), הערכת תוצאות עיוורת, ועיבוד מהיר של הדגימות תחת בקרת טמפרטורה. בעיות תפעוליות נפוצות כוללות החמצה של מפגשי דיקור, בליעה לא בטוחה, עיכוב בייצור צואה, והפשרה במהלך ההובלה. בעיות אלו טופלו על ידי תיעוד דחיות, השהיית הטיפול הפומי כאשר זה לא היה בטוח, איסוף הצואה הספונטנית הבאה ללא שימוש במשלשלים למטרות מחקר בלבד, תיעוד עצירות ועיכוב באיסוף, ומעקב אחר היסטוריית העיבוד וההפשרה-הקפאה.
ההבדלים ביום ה-28 במדד גיוון שאנון (Shannon diversity), בבוטיראט (butyrate), ב-IL-6 וב-LPS היו קשרי התאמה חקרים ברמת הקבוצה. ניתוחים חקרים ברמת המשתתף של קשרי Butyrate–NIHSS, IL-6–NIHSS, LPS–IL-6 ו-Shannon–NIHSS לא תמכו במערכות היחסים המקדימות הנדרשות לניתוח תיווך; לפיכך, לא בוצע ניתוח תיווך, והנתונים אינם מבססים מסלול סיבתי בין המוח למעי. גישות חלופיות, הכוללות מטגנומיקה בשיטת shotgun, מטבולומיקה ממוקדת עם סטנדרטים מסומני איזוטופים, רישומי תזונה סדרתיים ודגימה חוזרת של סמנים ביולוגיים, יאפיינו את התפקוד ואת הסדר הכרונולוגי באופן ישיר יותר מאשר רצף 16S rRNA ושתי נקודות זמן לדגימת צואה22,23,24.
הפרשנות מוגבלת בשל הדגימה ממרכז יחיד, היעדר סמיות של המשתתפים, היעדר רישום של ניסוי פרוספקטיבי לפני הגיוס, ומערך התערבות משולב ללא קבוצות של דיקור בלבד או מרשם צמחים (decoction) בלבד. לפיכך, המערך אינו יכול לייחס את ההשפעות לרכיב אחד או לסינרגיה. תזונה שגרתית, חומרת הדיספגיה, הזנה אנטרלית, שימוש באנטיביוטיקה לאחר הרנדומיזציה, שימוש במעכבי פומפת פרוטון, עצירות, עוצמת השיקום ומשך האשפוז עשויים להוות גורמים מתבלבלים (confounders) בתוצאות המיקרוביום. גורמים אלו לא נכללו במודלים המתואמים של המיקרוביום ולכן נותרים כגורמי בלבול שיוריים פוטנציאליים. תיקון ה-FDR עבור הסוגים (genera) הנבחרים הוגבל לשלושת הסוגים המוצגים, וספי סף התגובה החקרים לא תוקפו חיצונית. ניתוחי הסמנים הביולוגיים היו חקרים; חלק מהריכוזים של IL-6 ו-TNF-alpha היו נמוכים מטווחי הבדיקה הנומינליים של היצרנים ויש לפרשם בזהירות.
עבודות עתידיות צריכות להשתמש ברישום פרוספקטיבי, גיוס ממספר מרכזים, תכנון פקטוריאלי, נתוני התערבות נלווית מאומתים מהמקור, תיעוד סטנדרטי של תזונה/חשיפה, וקווי עיבוד (pipelines) למסלולי מיקרוביום ומטבוליזום הניתנים לשחזור באופן עצמאי. דרושים מדגמים גדולים יותר ודגימות תכופות יותר לפני בדיקת תיווך, השפעות של רכיבי טיפול, או בחירת טיפול המוגדרת על ידי המיקרוביום. ניטור הבטיחות לא זיהה אף אירוע לוואי חמור שקשור בוודאות להתערבות, אך המדגם היה קטן מדי כדי לשלול נזקים נדירים. יש להקדיש תשומת לב מיוחדת לסיכון לדימום, בטיחות בליעה, אי-סבילות גסטרו-אינטסטנלית, תפקוד כבדי/כלייתי, לחץ דם והפרעות בקצב הלב (arrhythmia) בעת שילוב של דיקור וטיפול בצמחים עם טיפול בשבץ מוחי חריף.
לסיכום, דיקור סיני סטנדרטי בתוספת מרשם Xiaoxuming Decoction שונה נקשרו לשיפור נוירולוגי מתון ביום ה-28 ולהבדלים בסממנים ביולוגיים נבחרים כאשר טיפול זה התווסף לטיפול הסטנדרטי. התוצאות הביולוגיות מעוררות השערות ואינן מוכיחות מנגנון סיבתי של ציר מוח-מעי.
גילויים
המחברים מצהירים כי אין ניגודי אינטרסים.
תרומות המחברים:
Zhiqiang Huang תרם להמשגה, למתודולוגיה, למחקר, לאוצרות נתונים ולכתיבת הטיוטה הראשונה; Bo Wang תרם לניתוח פורמלי, לתוכנה, לוויזואליזציה ולכתיבה – ביקורת ועריכה; Zhen Chen תרם למחקר, למשאבים ולאימות; Aiping Wang תרמה למחקר, לאוצרות נתונים ולניהול הפרויקט; ו-Longhai Wang תרם להמשגה, לפיקוח, לניהול הפרויקט ולכתיבה – ביקורת ועריכה. כל המחברים אישרו את כתב היד הסופי
תודות
המחברים מודים בכנות לצוות הקליני והמעבדתי בבית החולים לרפואה סינית מסורתית ורפואה מערבית בעיר Dazhou, מחוז Sichuan, על תמיכתם במהלך גיוס המשתתפים, הטיפול הקליני ואיסוף הנתונים. המחברים מודים גם למטופלים ולבני משפחותיהם על השתתפותם בניסוי מבוקר זה עם הקצאה אקראית. מחקר זה לא קיבל מענק ספציפי מכל סוכנות מימון במגזר הציבורי, המסחרי או ללא מטרת רווח.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| חומצה 4-מתילולרית | Sigma-Aldrich, ארה"ב | 142342 | סטנדרט פנימי עבור GC-MS |
| פריימרים לגן 16S rRNA (V3–אזור V4) | Sangon Biotech, סין | סינתזה מותאמת אישית | זוג הפריימרים 341F/806R |
| מחטי דיקור | Hwato (Suzhou Medical Appliance Factory), סין | 0.25 × 40 מ"מ | מחטים חד-פעמיות סטריליות מפלדת אל חלודה |
| הערכה באמצעות מדד ברטל (Barthel Index) | לא רלוונטי | לא רלוונטי | הערכת פעולות היומיום |
| מבחנות קריוגניות | Corning, USA | 430659 | אחסון דגימות צואה |
| אתיל אצטט (בדרגת כרומטוגרפיה) | Merck, גרמניה | 109623 | ממיס מיצוי אורגני |
| טיפים למסננת פיפטה | Axygen, USA | שונים | נטול RNase/DNase |
| כרומטוגרף גזי | Agilent Technologies, ארה"ב | 7890B GC | מערכת הפרדה ב-GC |
| ערכה ל-ELISA של IL-6 אנושי | R&D Systems, USA | D6050 | כימות IL-6 בסרום |
| ערכה לבדיקת ELISA של ליפופוליסכריד (LPS) אנושי | Cusabio, סין | CSB-E13066h | כימות LPS בסרום |
| ערכה לבדיקת TMAO בבני אדם | Sigma-Aldrich, USA | MAK264 | כימות TMAO קולורימטרי/פלואורימטרי |
| גלאי סלקטיבי למסה | Agilent Technologies, ארה"ב | 5977B MSD | ספקטרומטר מסות קוואדרופול |
| תוכנת תחנת העבודה MassHunter | Agilent Technologies, ארה"ב | G1701EA | רכישה וניתוח נתונים ב-GC-MS |
| מיקרופיפטים | Eppendorf, גרמניה | סדרת Research plus | טיפול בנוזלים במעבדה |
| MiSeq Reagent Kit v3 (600 cycles) | Illumina, ארה"ב | MS-102-3003 | Paired-end 2 × ריצוף של 300 bp |
| מערכת MiSeq | Illumina, ארה"ב | SY-410-1003 | פלטפורמת ריצוף מקצות זוגיים; 2 × כימיה של ריצוף ל-300 bp |
| הערכה באמצעות סולם רנקין המבצעי המודע (mRS) | לא רלוונטי | לא רלוונטי | הערכת תוצאות תפקודיות ביום ה-90 |
| מרשם שיאו-שיומינג משונה (נוסחה צמחית) | בית המרקחת של בית החולים, בית החולים לרפואה סינית מסורתית ורפואה מערבית בעיר דאג'ו (Dazhou) | לא רלוונטי | הוכן בהתאם לסטנדרטים של בית המרקחת המוסדי; אומת והופץ על ידי רוקחים בבית החולים |
| טופס הערכה של מדד השבץ של ה-NIH (NIHSS) | המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי | לא רלוונטי | כלי הערכה קליני סטנדרטי |
| NumPy | מפתחי NumPy | RRID: SCR_008633 | גרסה 1.26.x |
| pandas | צוות הפיתוח של pandas | RRID: SCR_018239 | גרסה 2.1.x |
| חומצה זרחית | Sigma-Aldrich, USA | 79619 | ריאגנט בדרגת אנליטית |
| פייתון | Python Software Foundation | RRID: SCR_008394 | גרסה 3.11.x |
| QIAamp PowerFecal Pro DNA Kit | Qiagen, גרמניה | 51804 | מיצוי DNA של מיקרוביומה מצוואה |
| QIIME 2 | צוות הפיתוח של QIIME 2 | RRID: SCR_008249 | גרסה 2024.5 |
| ערכה לבדיקת Qubit dsDNA HS Assay | Thermo Fisher Scientific, ארה"ב | Q32851 | כימות DNA מבוסס פלואורסצנציה |
| scikit-learn | מפתחי scikit-learn | RRID: SCR_002577 | גרסה 1.4.x |
| SciPy | מפתחי SciPy | RRID: SCR_008058 | גרסה 1.11.x |
| מאגר הנתונים SILVA rRNA | פרויקט SILVA | RRID: SCR_006423 | גרסה 138.1 |
| מקפיא בטמפרטורה נמוכה במיוחד | Thermo Fisher Scientific | TSX60086A | −80 °C אחסון |
מקורות
- GBD 2019 Stroke Collaborators. Global, regional, and national burden of stroke and its risk factors, 1990-2019: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. Lancet Neurol. 2021;20(10):795-820. doi:10.1016/S1474-4422(21)00252-0.
- Campbell BCV et al. Ischaemic stroke. Nat Rev Dis Primers. 2019;5(1):70. doi:10.1038/s41572-019-0118-8.
- Iadecola C, Anrather J. The immunology of stroke: from mechanisms to translation. Nat Med. 2011;17(7):796-808. doi:10.1038/nm.2399.
- Benakis C et al. Commensal microbiota affects ischemic stroke outcome by regulating intestinal gamma delta T cells. Nat Med. 2016;22(5):516-523. doi:10.1038/nm.4068.
- Xia GH et al. Stroke Dysbiosis Index (SDI) in gut microbiome are associated with brain injury and prognosis of stroke. Front Neurol. 2019;10:397. doi:10.3389/fneur.2019.00397.
- Dalile B, Van Oudenhove L, Vervliet B, Verbeke K. The role of short-chain fatty acids in microbiota-gut-brain communication. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2019;16(8):461-478. doi:10.1038/s41575-019-0157-3.
- Tsai CY et al. Acupuncture improves neurological function and anti-inflammatory effect in patients with acute ischemic stroke: a double-blinded randomized controlled trial. Complement Ther Med. 2024;82:103049. doi:10.1016/j.ctim.2024.103049.
- Cao JP et al. Acupuncture as adjunctive therapy for acute cerebral infarction: a randomized clinical trial. Front Neurol. 2025;16:1509204. doi:10.3389/fneur.2025.1509204.
- Fu DL et al. Xiaoxuming decoction for acute ischemic stroke: a systematic review and meta-analysis. J Ethnopharmacol. 2013;148(1):1-13. doi:10.1016/j.jep.2013.04.002.
- Li DH et al. A network pharmacology-based identification study on the mechanism of Xiao-Xu-Ming Decoction for cerebral ischemic stroke. Evid Based Complement Alternat Med. 2020;2020:2507074. doi:10.1155/2020/2507074.
- Winek K, Dirnagl U, Meisel A. The gut microbiome as therapeutic target in central nervous system diseases: implications for stroke. Neurotherapeutics. 2016;13(4):762-774. doi:10.1007/s13311-016-0475-x.
- Moher D et al. CONSORT 2010 explanation and elaboration: updated guidelines for reporting parallel group randomised trials. BMJ. 2010;340:c869. doi:10.1136/bmj.c869.
- Brott T et al. Measurements of acute cerebral infarction: a clinical examination scale. Stroke. 1989;20(7):864-870. doi:10.1161/01.STR.20.7.864.
- Powers WJ et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: 2019 update to the 2018 guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke. Stroke. 2019;50(12):e344-e418. doi:10.1161/STR.0000000000000211.
- Chen L et al. Additional effects of acupuncture on early comprehensive rehabilitation in patients with mild to moderate acute ischemic stroke: a multicenter randomized controlled trial. BMC Complement Altern Med. 2016;16:226. doi:10.1186/s12906-016-1193-y.
- Lan R et al. Xiao-Xu-Ming Decoction protects against blood-brain barrier disruption and neurological injury induced by cerebral ischemia and reperfusion in rats. Evid Based Complement Alternat Med. 2013;2013:629782. doi:10.1155/2013/629782.
- Broderick JP, Adeoye O, Elm J. Evolution of the Modified Rankin Scale and its use in future stroke trials. Stroke. 2017;48(7):2007-2012. doi:10.1161/STROKEAHA.117.017866.
- Battaglini D et al. Gut microbiota in acute ischemic stroke: from pathophysiology to therapeutic implications. Front Neurol. 2020;11:598. doi:10.3389/fneur.2020.00598.
- Xu M, Li D, Zhang S. Acupuncture for acute stroke. Cochrane Database Syst Rev. 2018;3(3):CD003317. doi:10.1002/14651858.CD003317.pub3.
- Vickers AJ, Altman DG. Statistics notes: analysing controlled trials with baseline and follow up measurements. BMJ. 2001;323(7321):1123-1124. doi:10.1136/bmj.323.7321.1123.
- Yu F et al. Usage, anti-inflammatory effect and safety of adjunctive acupuncture for cerebral infarction: an Apriori algorithm-based data mining and meta-analysis. Front Neurol. 2025;16:1546194. doi:10.3389/fneur.2025.1546194.
- Iadecola C, Buckwalter MS, Anrather J. Immune responses to stroke: mechanisms, modulation, and therapeutic potential. J Clin Invest. 2020;130(6):2777-2788. doi:10.1172/JCI135530.
- Tan C et al. Dysbiosis of gut microbiota and short-chain fatty acids in acute ischemic stroke and the subsequent risk for poor functional outcomes. JPEN J Parenter Enteral Nutr. 2021;45(3):518-529. doi:10.1002/jpen.1861.
- Zhang W, Dong XY, Huang R. Gut microbiota in ischemic stroke: role of gut bacteria-derived metabolites. Transl Stroke Res. 2023;14(6):811-828. doi:10.1007/s12975-022-01096-3.
- Zhang Q et al. Xiaoxuming Decoction: a traditional herbal recipe for stroke with emerging therapeutic mechanisms. Front Pharmacol. 2021;12:802381. doi:10.3389/fphar.2021.802381.