Name: דלדול של אוכלוסיות תאים ספציפיים על ידי דלדול משלים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: למד את שיטת דלדול המשלים לבידוד תאי T עם ניקוד גבוה של 95-100% באמצעות נוגדנים מונוקלונליים ומערכת המשלים. שיטה זו מאפשרת טיהור אוכלוסיות תאים חיסוניים לניסויים ביולוגיים שונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אני רוצה להודות Sreemanti Basu לספק את הנתונים בתרשים 1. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי NIH מענק AI069358 וקרן מחקר BloodCenter.

א השלימו את הארנב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארנב משלימים במלאי יש להפשיר בטמפרטורת החדר, ואת aliquoted מכן לתוך 0.5 ו / או 1 מ&quot;ל כרכים קפואים ב -20-80 מעלות לאחסון ארוך טווח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרבה כל אחד משלים צריך להיות טיטרציה כדי לקבוע את ריכוז העבודה האופטימלית. בדרך כלל, דילול של 1:10-01:20 הוא אופטימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משלימים הארנב אינו presterilized תמיד לפני המכירה, בהתאם לשימוש הסופי של התאים, להשלים את צריכה להיות מסוננים מעוקרים כאשר aliquoted קפואים או לפני כן על התאים. </li></ol> ב בחירה נוגדן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לא כל הנוגדנים יעילים בכל ההפעלה משלימים, ולכן נוגדנים תחילה להיבדק על הפעילות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שניהם עכבר חולדה MAB יעילים בכל ההפעלה משלימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוגדני IgM הם בדרך כלל היעילה ביותר לשימוש תמוגה-Induced משלימים תא ואחריו IgG. Isotypes IgG ההפעלה הטובה ביותר עבור להשלים להשתנות בין המינים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוגדן כל צריך להיות טיטרציה לשימוש אופטימלי בצפיפות תא של 10 7 תאים / מ&quot;ל. </li></ol> ג יסוד פרוטוקול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את אוכלוסיית התאים מתחילים 5 x 10 7 תאים / מ&quot;ל במדיום חום FCS המכיל מומת. היקף הסופי של התאים יהיה כפול נפח ההתחלה. זכור לשמור כמה תאים כך דלדול ניתן לכמת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל נוגדן יש להוסיף את ההשעיה התא בריכוז הדילול מראש תקין או. מערבבים היטב את התאים על ידי היפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את כמות משלימים הצורך. ההפשרה המניות משלימות בטמפרטורת החדר. אם משלימים אינו סטרילי, לעקר אותו באמצעות חלבון נמוך מחייב מזרק מסנן קצה. כדי המזרק, להוסיף כמה מ&quot;ל של מדיום לפני תוספת של להשלים את ולסנן ישירות לתוך שפופרת המכילה את התאים נוגדנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאמת עוצמת השמע הסופי בצינור כך התאים ב 1 x 10 7 תאים / מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים ב 37 ° C למשך שעה אחת, ערבוב כל 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה את התאים להתעלמות supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף עם המדיום פעמיים. פסולת התא ידבק לצד צינורות קלקר. תאים מתים ופסולת ניתן למנוע בעזרת מסננת התא או על ידי צנטריפוגה שיפוע צפיפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את תא טוהר על ידי השוואה בין אוכלוסיית תאים של עניין לפני ואחרי דלדול. Cytometry זרימה אימונוהיסטוכימיה שתי שיטות טובות קביעת טוהר התא. </li></ol> נציג תוצאות בעת שימוש MAB היא היעילה ביותר בכל הפעלה, משלימים דלדול תא אחרי סיבוב אחד גדול אז 95%. זה שמוצג באיור 1 בו התחלנו עם splenocytes העכבר מורכב בתאי T 32.2% αβ כפי זוהה על ידי ביטוי TCRβ (eBioscience, סן דייגו, קליפורניה) על ידי cytometry הזרימה. אנחנו מתרוקנים שתאי T ספציפיים באמצעות מב עבור Thy1, חלבון לידי ביטוי כל ותאי T, אבל לא לויקוציטים אחרים. הנוגדן השתמשנו היה Y-19 עכברוש IgG2c 2. בעקבות ההליך המתואר, האוכלוסייה TCRβ צומצם 1.56%, ירידה גדולה יותר מאשר 95%. <img src="/files/ftp_upload/1487/1487fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. דלדול thy1 + בתאי T הטחול על ידי הפעלת המשלים. Splenocytes עכבר סך הכל התקבלו על ידי homogenization של הטחול ואת תמוגה של RBC. Anti-thy1 ו ארנב תינוק משלימים בריכוזים מראש נוספו ההשעיה תא בודד של splenocytes כזה ריכוז התא האחרון היה 1 x 10 7 תאים / מ&quot;ל. לאחר הדגרה במשך שעה 1 ב 37 ° C, התאים נשטפו פעמיים הוערכו על ידי הרחקה trypan כחול כדאיות התא. היעילות של דלדול הוערכה על ידי זרימת cytometry השוואת אחוז + תאים TCRβ לפני דלדול (פאנל משמאל) לאחר דלדול (פאנל מימין). הפס האופקי מציין מכתים חיובי ומספר מעל הבר הוא אחוז חיובי.

<ol><li>Janeway, C., Travers, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Immune+System+in+Health+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">The Immune System in Health and Disease.</a> Immunobiology. , Current Biology Limited; Garland Pub. Inc. London; San Francisco; New York. (1994).</li>
<li>Jones, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+activities+of+antibodies+against+brain-associated+T+cell+antigens+II.+Stimulation+of+T+cell-induced+B+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Functional activities of antibodies against brain-associated T cell antigens II. Stimulation of T cell-induced B cell proliferation.</a> Eur J Immunol. 12, 30-37 (1982).</li>
</ol>

טיהור של אוכלוסיות תאים היא הליך שכיח נדרש ללמוד את תפקידם. כאן אנו מתארים שיטה מהירה ויעילה של depleting אוכלוסיות תאים באמצעות אנטיגן ספציפי לערמונית נוגדנים דלדול משלימים. דלדול האוכלוסייה בכל תא ניתן להשיג אם נוגדן משלימים-הפעלת זמין סמן מסוים בשושלת. כאן אנו הדגימו את דלדול של תאים T באמצעות ספציפי עבור MAB Thy1, חלבון לידי ביטוי בעצם כל אוכלוסיות תאים טי. אנחנו מתרוקנים מעל 95% של תאים T αβ ואת splenocytes הנותרים עלה מ% 68 ל% 98. רמה זו של תא טוהר דומה אסטרטגיות טיהור אחרים, כולל FACS והפרדה חרוז מגנטי. דלדול משלים היא טכניקה מהירה שניתן לבצע ב 1.5 שעות פעם את האוכלוסייה התא החל מתקבל. יתרון נוסף של דלדול משלימים זה במעבדה כל יכול לבצע את הטכניקה, כי היא אינה דורשת ציוד יקר ריאגנטים. רק החלקים העיקריים של הציוד הנדרש הם אמבט מים צנטריפוגות. משלימים הארנב ניתן לרכוש ממגוון רחב של ספקים במחיר סביר (ראה טבלה של ריאגנטים) ו מב רבים ניתן לרכוש ATTC גדל באופן מקומי כדי לשלוט בעלויות. לעומת זאת, FACS דורש cytometer לזרום עם קיבולת מיון התא יעלה בששת דמויות MAB מתויג fluorescently יקר. הפרדה חרוז מגנטי במחיר בינוני, אך דורש רכישת מגנט, חרוזים מגנטיים, אשר יכול להיות יקר. בנוסף, כמה אסטרטגיות מגנטי ההפרדה חרוז גם דורשים רכישה של עמודות. אבן הנגף העיקרית לשימוש משלימים עבור דלדול התא הוא הזמינות של השלמה עם הפעלת MAB סגוליות את האנטיגן הנדרשת. למרות נוגדנים אנושיים עכבר חולדה כל יש את היכולת לתקן משלימים, isotypes כמה טובים יותר מאחרים. למרות IgM מכל שלושה מינים הוא יעיל מאוד בתיקון להשלים את isotypes IgG להשתנות. כך מב כל חייב להיות הראשון נבדק במחקר ניסיוני כדי לקבוע את יעילותו. עבור נוגדנים שאינם היעילה ביותר, שני סבבים של דלדול משלימים ניתן לבצע מבלי להשפיע על הכדאיות של אוכלוסיות תאים הנותרים. כמו חיסכון בעלויות, נוגדנים יש טיטרציה עבור יעילות אופטימלית. בנוסף, נוגדנים בשימוש לא צריכים להיות מטוהרים. Hybridoma supernatants ו מיימת עבודה נוזל בדיוק כמו יעילה, אשר נוח במיוחד עבור נוגדנים IgM, אשר קשה לטהר. כמו עם הנוגדנים, קיים הכרח כי המשלים להיות טיטרציה במחקר פיילוט. ריכוז גבוה מדי תגרום לאובדן של הכדאיות של הלא ממוקד אוכלוסיות תאים. חשוב גם הוא כי זמן דגירה אינו עולה על 60 דקות. בפרוטוקול שלנו, אנחנו עמיתים דגירה הנוגדנים ואת משלימים ביחד. עם זאת, התאים יכולים להיות מתויג עם נוגדן עבור 15-30 דקות, לשטוף לפני תוספת של השלמה. כאשר משתמשים באסטרטגיה זו, הקפד לבצע את incubations נוגדן על הקרח כדי למנוע אובדן של האנטיגן התא על פני התא, כפי שקורה עם חלבונים מסוימים על ידי תיקון ו מכסת או הפנמה הקולטן. למרות היעילה ביותר, החיסרון העיקרי כדי להשלים את דלדול בהשוואה לשיטות אחרות היא שזה לא יכול לשמש סלקציה חיובית. לכן קשה להשיג subpopulations של תאים. לדוגמה, קשה יהיה לטהר את שולי B אזור תאים תאים B פוליקולרית, אשר היה הטוב ביותר לעשות זאת על ידי FACS. במצב זה, הפעלת המשלים יכול לשמש כדי לרוקן בתאי T כדי להפחית את מספר התאים להיות מיון. אסטרטגיה זו תפחית את הזמן למיין, אשר היה לחסוך כסף יהיה פחות קשות על התאים. מאז הטיהור של אוכלוסיות תאים ספציפיים היא דרישה נפוצה מספר אסטרטגיות פותחו. היתרונות העיקריים של האסטרטגיה דלדול משלימים הם, בפשטות שלה affordability טכני חיסכון בזמן.

<table><tbody><tr><td>משלים מארנב צעיר בן 3-4 שבועות</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>31061-3</td><td></td></tr><tr><td>בן-מאט</td><td>שונים</td><td>שונים</td><td>ניתן להשתמש גם באינקובטור המכוון ל-37 &amp;#x00B0;C.</td></tr></tbody></table>

דלדול של אוכלוסיות תאים ספציפיים על ידי דלדול משלים

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

טיהור של אוכלוסיות תאים חיסוניים נדרש לעתים קרובות כדי ללמוד פונקציות הייחודיים שלהם. ב, גישות מסוים מולקולרית כגון בזמן אמת PCR וניתוח microarray דורשים בידוד של אוכלוסיות תאים עם טוהר גבוהה. אסטרטגיות טיהור נפוצים כוללים תא פלורסנט מיון מופעל (FACS), הפרדה חרוז מגנטי דלדול משלימים. מבין שלוש אסטרטגיות, דלדול משלימים מציע את היתרונות של להיות מהר, לא יקר, עדין על תאים תא תשואה גבוהה. המערכת השלמה מורכבת ממספר רב של חלבונים פלזמה שכאשר מופעל ליזום מפל proteolytic שהגיעה לשיאה היווצרות של מורכבות קרום התקף המהווה הנקבוביות על פני שטח התא והתוצאה היא מוות של תאים<sup&gt; 1</sup&gt;. מסלול קלאסי מופעל על ידי נוגדנים IgM ו IgG ו תוארה לראשונה כמנגנון להרוג חיידקים. עם הדור של נוגדנים חד שבטיים (מב), מפל משלימים שניתן להשתמש בהם כדי lyse כל האוכלוסייה התא באופן אנטיגן ספציפי. דלדול של תאים על ידי מפל השלמה מושגת על ידי תוספת של תיקון משלימים אנטיגן ספציפי נוגדנים ומשלימים ארנב לאוכלוסייה תא ההתחלה. התאים מודגרת למשך שעה אחת בכל 37 ° C ו התאים lysed יוסרו לאחר מכן על ידי שני סבבים של כביסה. מב עם יעילות גבוהה עבור קיבוע משלים בדרך כלל לרוקן 95-100% מהאוכלוסייה תא ממוקד. בהתאם לאסטרטגיה טיהור לאוכלוסייה תא ממוקד, דלדול משלימים ניתן להשתמש לטיהור התא או להעשרה של אוכלוסיות תאים כי אז יכול להיות מטוהרים נוסף בשיטה הבאים.

כדי ללמוד ביעילות את הפונקציה של אוכלוסיות תאים חיסוניים טיהור שלהם נדרש לעתים קרובות. דלדול משלים היא טכניקה מהירה וזולה עבור בידוד של אוכלוסיות תאים חיסוניים עם טוהר גבוהה.

טיהור של אוכלוסיות תאי חיסון נדרש לעיתים קרובות על מנת לחקור את תפקודיהם הייחודיים. בפרט, גישות מולקולריות כגון...

דילול משלימה (Complement depletion) היא שיטה מהירה, יעילה וזולה לניקוי אוכלוסיות של תאי מערכת החיסון. דילול משלימה מתחיל כאשר נוגדני IGM או IgG מונוקלונליים מתווספים לאוכלוסיית תאים, ובכך הם מטרגים סוג תא ספציפי. בדוגמה זו, נטרג תאי T לצורך דילול.לאחר מכן מוסיפים את מערכת המשלב (complement system) העוברית קסקדת פרוטאוליטית, המובילה למות תאי T. אוכלוסיית התאים עוברת שטיפה באמצעות סנטריפוגה וסינון כדי להסיר תאים מתים ושיירי תאים. שיטה זו של דילול משלב מובילה בדרך כלל להסרה של 95 עד 100% מאוכלוסיית התאים המיועדת.שלום, אני בוני דיטל. אני חוקרת במכון למחקרי דם של מרכז הדם של ויסקונסין הממוקם במילוואקי. היום אראה לכם את טכניקת דילול במשלים (complement depletion), שיטה מהירה וזולה לדילול של אוכלוסיות תאים ספציפיות.אנו משתמשים בטכניקה זו במעבדה שלי כדי להעשיר באופן משמעותי אוכלוסיות של תאי מערכת החיסון, המשמשות אותנו לאחר מכן למספר מבחנים ביולוגיים, כולל כאלו העוסקים בהפעלת תאים ובניתוח ביטוי חלבונים. אז בואו נתחיל. לפני תחילת הניסוי, הכינו אליקוטים של 0.5 או 1 milliliter של משלים של ארנבת ואחסרו אותם במקפיא של 20- או 80- מעלות צלזיוס.יש לוודא שביצעתם טיטרציה של המשלים כדי להגיע לדילול אופטימלי שבין 1:10 ל-1:20. מקור מסחרי מצוין למשלים שאנו משתמשים בו באופן שגרתי להליך זה הוא Pereze biologicals; נוגדנים מונוקלונליים של עכבר ונחש הם בדרך כלל יעילים להפעלה של המשלים, אך לא כל הנוגדנים יהיו מתאימים. נוגדני IgM הם בדרך כלל היעילים ביותר עבור ליזיס של תאים המושרה על ידי המשלים.נוגדני IgG הם השניים ביעילותם ובדרך כלל נעשה בהם שימוש מכיוון שרוב הנוגדנים המונוקלונליים הם IgG; יש לבצע תיתור (titration) לכל נוגדן כדי להגיע לשימוש אופטימלי בצפיפות תאים של 10⁷ תאים למילליליטר, הנקבעת באופן אמפירי. רוב הנוגדנים נמצאים בשימוש בטווח של 0.1 עד 10 מיקרוגרם למילליליטר. לצורך דילול (depletion) של תאי T מהטחול, אנו משתמשים בנוגדן מונוקלונלי ספציפי ל-TH1.כדי להתחיל בתהליך של דלל משלים (complement depletion), יש לדלל את התאים במצע גידול תאים המכיל 5% סרום של עגל עובר שעבר אינאקטיבציה תרמית, כך שאוכלוסיית התאים ההתחלתית תהיה 2×10⁷ תאים למיליליטר. לדוגמה, יש לדלל 5×10⁷ תאים ב-2.5 מיליליטר של מצע. נפח תאים זה מהווה מחצית מהנפח הסופי, ולפיכך הוא כפול מריכוז התאים המשמש במהלך הדלל, אשר יהיה 1×10⁷ תאים למיליליטר.בשלב זה, שמרו עד 10⁶ תאים כדי שניתן יהיה לכמת את הדלדול בסוף הניסוי. בנוסף, הפשיתו את כמות המשלים (complement) הדרושה בטמפרטורת החדר. מצאנו שדילול של 1:15 הוא מתאים בעת שימוש ב-Pereze Biologicals rabbit complement עבור 5×10⁷ תאים; 1.5 milliliters של Eloqua קפוא מספיקים.כעת הוסיפו את כמות הנוגדן המתאימה לתשסוף התאים וערבבו. כדי לעקר את המשליש, השתמשו במסנן קצה למזרק בעל קישור חלבון נמוך. מלאו את המזרק בשני עד שני מיליליטר של מדיום.לפני הוספת המשלים עבור 5×10⁷ תאים, נזדקק ל-340 מיליליטר של משלים בדילול של 1:15. לאחר מכן, סננו את המשלים ישירות אל המבחנה המכילה את התאים והנוגדן. כעת, התאימו את הנפח הסופי במבחנה כך שהתאים יהיו בריכוז של 1×10⁷ תאים למיליליטר.לאחר מכן, יש להקרין את התאים ב-37 degrees Celsius באמבט מים למשך שעה אחת. זכרו לערבב את התאים בכל 15 דקות באמצעות היפוך עדין. לאחר האינקובציה, סבב את התאים בצנטריפוגה במהירות שלא תפגע בחיוניותם.לאחר מכן, חזרו למנדף והסילו את הנוזל העליון (supernatant). לאחר מכן, שטפו את התאים פעמיים עם 10 milliliters של מצע גידול. שימו לב כיצד שיירי התאים נאספים, כאשר חלקם נדבקים לדפנות של מבחנות הפוליסטירן.לאחר השטיפה האחרונה, סננו את התאים באמצעות מסנן תאים סטרילי מניילון של 70 micron. לבסוף, בדקו את טוהר התאים על ידי השוואת אוכלוסיית התאים הרלוונטית לפני ואחרי ה-depletion flow.ציטומטריה ואימונוהיסטוכימיה הן השיטות המועדפות לקביעת טוהר התאים לפני הניסוי. כאשר משתמשים בנוגדן מונוקלונאלי בעל יעילות גבוהה בהפעלת משלימה, הסבב הראשון של דילול המשלימה יסלק יותר מ-95% מהתאים. כדוגמה, בשימוש בציטומטריה של זרימה למדידת אחוז תאי alpha beta T בהכנה של תאי ple cyte מעכבר, מצאנו כי הם הכילו 32.2% תאי alpha beta T לאחר דילול משלימה עם anti five one, המובע על ידי כל תאי ה-T, אך לא על ידי לוקוציטים אחרים. אוכלוסיית TCR beta הופחתה ב-95% לריכוז סופי של 1.56%.הרגע הצגתי בפניכם שיטה מהירה ויעילה לדילול אוכלוסיות תאים ספציפיות באמצעות נוגדנים ספציפיים לאנטיגן בדילול באמצעות מחמאה. בעת ביצוע הליך זה, זכרו לבחון את היעילות של כל נוגדן ולבצע תיתוּר של המחמאה בניסוי חלוצי לפני שתתחילו. זהו הכל.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

depletion-of-specific-cell-populations-by-complement-depletion

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מקרופאגים לשחק תפקיד מרכזי הומאוסטזיס והפתולוגיה ברקמות רבות. הפרוטוקול המובא כאן מתאר שיטות ומכלה...

דלדול המשאבים ואת הכינון מחדש של מקרופאגים בעכברים

כאן אנו מתארים שני מבחני למדידת הפעלת משלימים הנגרמת על ידי נוגדנים כנגד תאי דם אדומים. היתרון הגדול על פני מבחני הנוכחיים הוא מטבעם כמוני וקל לפרש.

שיטות כמותיות לאיתור של הפעלת משלים-Induced נוגדן בתאי דם אדומים

הנחיות מוצגות עבור הדור של אנטיגן המלאכותי רוצח הצגת תאים, KaAPC, כלי יעיל לדלדול במבחנה של תאי T אנטיגן ספציפי לאדם ולפתרון חלופי לטיפול חיסוני תאי לטיפול במחלות אוטואימוניות בתיווך תא T בantigen- אופנה ספציפית מבלי להתפשר על המערכת החיסונית שנותרה.

תאי מציגי הרוצח המלאכותי Antigen (KaAPC) ליעיל במבחנה דלדול של תאי T אנושי אנטיגן ספציפי

מיקרוגליה יכולה להשפיע על נוירונים וגליה אחרת בתרבית על ידי מנגנונים אוטונומיים שונים שאינם תאים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדלדול סלקטיבי של מיקרוגליה מתרביות עצביות ראשוניות. לשיטה זו יש פוטנציאל להבהיר את תפקידן של אינטראקציות מיקרוגליאליות-עצביות, עם השלכות על מצבים ניווניים שבהם דלקת עצבית היא מאפיין סימן היכר.

דלדול סלקטיבית של Microglia מתא תרבויות המוח הקטן גרגיר שימוש L-לאוצין התיל אסתר

Xenografts הסרטני האנושי הוא vascularized ו הסתננו תאים ממוצא העכבר במהלך שלב צמיחת in vivo. כדי לעקוף את ההטיה הנגרמת על ידי תאי זיהום אלה במהלך ניתוח במורד זרם, פתחנו שיטה המאפשרת דלדול מקיף של כל תאי העכבר על ידי מיון תא מגנטי.

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

נדגים כיצד לזהות ולבודד 6 קבוצות משנה של אבות מיאלואידית ממח העצם מאתר באמצעות שילוב של מגנטי קרינה פלואורסצנטית מיון (מקינטוש ו- FACS). פרוטוקול זה יכול לשמש in vitro לקשרי תרבות מבחני (תרבויות methylcellulose או נוזל), ויוו המאמצת העברת הניסויים של RNA/חלבון ניתוחים.

זיהוי ובידוד של Oligopotent, ביצע לשושלת אבות מיאלואידית ממח העצם העכבר

אנו מתארים כאן הזרימה cyvivo try מבוסס בתוך שיטת ההרג המאפשרת לבדוק את החיסונית של האימונוטוקסיט T לימפוציטים (CTL) התגובות של הגידול מודל אנטיגן. אנו מספקים דוגמאות לאופן השימוש בבחינה אלגנטית זו למחקרים מכניסטיים ולבדיקת יעילות בסמים.

תפירה Vivo ציטורעילות Assays ללמוד אימונומימינינס ב-CD8 התגובות הספציפיות לגידול של תאים

פרוטוקול זה מתאר בפירוט את כל השלבים הכרוכים בהשגת CD34+ hematopoietic שמקורם ב- leukofilter ואת בידול המבחנה וההתבגרות שלהם למגקריוציטים נושאי פרופלטלט המסוגלים לשחרר טסיות דם במדיום התרבותי. הליך זה שימושי לניתוח מעמיק של מנגנונים תאיים ומולקולריים השולטים megakaryopoiesis.

תאי CD34+ שמקורם במסנני לויקודלציה כמקור לתא לחקר בידול מגהקריוציט והיווצרות טסיות דם

כאן, אנו מתארים שיטה ליצירת טיפות תחליב כפולות המכילות תא T אחד ותא מטרה סרטני כדי לבחון הרג תאים ברמת התא הבודד. שיטה זו מאפשרת כימות כפול הן של מולקולות ציטוטוקסיות והן של אפופטוזיס של תאי מטרה בתוך אוכלוסייה גדולה של תאי T.

בדיקת ציטוטוקסיות מבוססת טיפות להערכת תאי T קולטני אנטיגן כימריים ברמת התא הבודד

מדווח כאן על פרוטוקול לאבלציה סלקטיבית של מקרופאגים כלייתיים כדי לחקור את התחדשותם באמצעות כלי אבלציה של תאי CD59/intermedilysin אנושיים. שיטה זו ישימה גם לחקר התפקוד וההתחדשות של אוכלוסיות תאים אחרות בכליות, בכבד וברקמת השומן.

דלדול מהיר של מקרופאגים כלייתיים באמצעות כלי אבלציה של תאים CD59/Intermedilysin אנושי

למד את שיטת דלדול המשלים לבידוד תאי T עם ניקוד גבוה של 95-100% באמצעות נוגדנים מונוקלונליים ומערכת המשלים. שיטה זו מאפשרת טיהור אוכלוסיות תאים חיסוניים לניסויים ביולוגיים שונים.

דלדול של אוכלוסיות תאים ספציפיים על ידי דלדול משלים

גלה סרטונים נוספים