Name: בידוד של תאים עכבר פריטוניאלית חלל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-28T16:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: למד שיטה לבידוד תאים מחלל הפריטונאום בעכברים לחקר תגובות חיסוניות וניתוח אוכלוסיות תאי B, מאקרופאגים ותאי T. השיטה מבטיחה שלמות תאים לניסויים אימונולוגיים מדויקים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי NIH מענק AI069358 וקרן מחקר BloodCenter.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שמתחילים את התהליך, את הפריטים הבאים צריכים להיות מוכנים אסף: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קרח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק 5 מ&quot;ל עם מחט 27g </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק 5 מ&quot;ל עם מחט 25 גרם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלוק קלקר וסיכות להרכבה על העכבר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגש שעליו לחסום הרכבה ניתן למקם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספריים ומלקחיים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוסף צינורות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70% אתנול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PBS עם 3% עגל בסרום עוברי (FCS) (Pre צונן ושמרה על הקרח) </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר, לרסס אותו עם 70% אתנול ו לעלות אותו על בלוק קלקר על גבו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים מלקחיים לחתוך את העור החיצונית של הצפק בעדינות למשוך אותו לאחור כדי לחשוף את העור הפנימית רירית חלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 5 מ&quot;ל של קרח קר PBS (עם FCS 3%) לתוך חלל הצפק באמצעות מחט 27g. דחוף את המחט לאט הצפק נזהרים שלא לנקב כל האיברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ההזרקה, בעדינות לעסות את הצפק כדי לסלק את כל התאים מחוברים אל הפתרון PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 25 גרם, שפוע המחט, מצורף מזרק 5 מ&quot;ל ב הצפק לאסוף את הנוזל תוך כדי תנועה את קצה המחט בעדינות, כדי למנוע סתימת על ידי רקמת שומן או איברים אחרים. כמו איסוף הנוזלים כמה שניתן להפקיד את ההשעיה תא שנאספו צינורות שמרה על הקרח לאחר הסרת המחט של המזרק. אופציונלי: חזור על שלב 4-6 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושים חתך בעור הפנימי של הצפק ובעוד מרים את העור עם מלקחיים להשתמש פיפטה פסטר מפלסטיק כדי לאסוף את הנוזלים הנותרים מחלל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם בשלב 6 או 7 זיהום דם גלוי מזוהה אז המדגם מזוהמים צריך להיות מושלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין על השעיית התא נאספים 1500 סל&quot;ד במשך 8 דקות, לבטל את supernatant ו resuspend התאים התקשורת הרצוי או PBS עבור הספירה. </li></ol> פרוטוקול אלטרנטיבית להשיג thioglycollate שהושרו מקרופאגים: שיטה זו משמשת כדי להשיג תשואה גבוהה יותר של מקרופאגים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 5 מ&quot;ל של 3% (w / v) ברואר thioglycollate בינוני (7) לתוך חלל הצפק של עכבר אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן 3-5 ימים, המשך לשלב 1 לעיל לאיסוף של התאים. </li></ol> לעומת הגישה nonelicited, כ 10 פעמים יותר מקרופאגים ניתן לאסוף. החשש היחיד הוא מתקבל על ידי מקרופאגים הליך זה שונה בכמה מאפיינים פיזיולוגיים שלהם. נציג התוצאות: מתוך עכבר unmanipulated, 5-10000000 התאים חלל הצפק ניתן להשיג עם פרוטוקול בידוד טוב. בין כל תאים חיים, 50-60% הם תאים B, מקרופאגים ~ 30% ו 5-10% הם תאים T (איור 1). <img src="/files/ftp_upload/1488/1488fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. הפנוטיפ של תאים בודדים מתוך חלל הצפק. הבידוד בעקבות התאים חלל הצפק הם הוכתמו עכבר אנטי TCRβ-FITC, B220-PE-טקסס אדום, כחול פסיפיק CD11b, CD23-PE-Cy7 CD5 ו-APC. מגרשים תזרים נציג cytometric להראות אחוזים של תאים B ו-T (א), מקרופאגים (ב), B1 ו-B2 תאים (ג) ו B1a ו B1b תאים (ד).

<ol><li>Zhang, X., Goncalves, R., Mosser, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+and+characterization+of+murine+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">The isolation and characterization of murine macrophages.</a> Current Protocols in Immunology. , (2008).</li>
<li>Boes, M., Prodeus, A. P., Schmidt, T., Carroll, M. C., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+of+natural+immunoglobulin+M+in+immediate+defense+against+systemic+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A critical role of natural immunoglobulin M in immediate defense against systemic bacterial infection.</a> J. Exp. Med. 188, 2381-2386 (1998).</li>
<li>Mc Daniel, L. S., Benjamin, W. H., Forman, C., Briles, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+clearance+by+anti-phosphocholine+antibodies+as+a+mechanism+of+protection+in+experimental+pneumococcal+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Blood clearance by anti-phosphocholine antibodies as a mechanism of protection in experimental pneumococcal bacteremia.</a> J. Immunol. 133, 3308-3312 (1984).</li>
<li>Paciorkowski, N., Porte, P., Shultz, L. D., Rajan, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B1+B+lymphocytes+play+a+critical+role+in+host+protection+against+lymphatic+filarial+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">B1 B lymphocytes play a critical role in host protection against lymphatic filarial parasites.</a> J. Exp. Med. 191, 731-736 (2000).</li>
<li>Mercolino, T. J., Arnold, L. W., Hawkins, L. A., Haughton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+mouse+peritoneum+contains+a+large+population+of+Ly-1%2B+%28CD5%29+B+cells+that+recognize+phosphatidyl+choline%3A+relationship+to+cells+that+secrete+hemolytic+antibody+specific+for+autologous+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Normal mouse peritoneum contains a large population of Ly-1+ (CD5) B cells that recognize phosphatidyl choline: relationship to cells that secrete hemolytic antibody specific for autologous erythrocytes.</a> J. Exp. Med. 168, 687-698 (1988).</li>
<li>O'Garra, A., Chang, R., Go, N., Hastings, R., Haughton, G., Howard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ly-1+B+%28B-1%29+cells+are+the+main+source+of+B+cell+derived+interleukin+10%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ly-1 B (B-1) cells are the main source of B cell derived interleukin 10.</a> Eur. J. Immunol. 22, 711-717 (1992).</li>
<li>Hoover, D. L., Nacy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+to+kill+Leishmania+tropica%3A+Defective+intracellular+killing+of+amastigotes+by+macrophages+elicited+with+sterile+inflammatory+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation to kill Leishmania tropica: Defective intracellular killing of amastigotes by macrophages elicited with sterile inflammatory agents.</a> J. Immunol. 132, 1487-1491 (1984).</li>
<li>Austin, P. E., McCulloch, E. A., Till, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+factor+in+L-cell+conditioned+medium+capable+of+stimulating+colony+formation+by+mouse+marrow+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the factor in L-cell conditioned medium capable of stimulating colony formation by mouse marrow cells in culture.</a> J. Cell Physiol. 77, 121-134 (1971).</li>
<li>Stanley, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macrophage+colony-stimulating+factor%2C+CSF-1%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The macrophage colony-stimulating factor, CSF-1.</a> Methods Enzymol. 116, 564-587 (1985).</li>
<li>Baumgarth, N., Chen, J., Herman, O. C., Jager, G. C., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+B-1+and+B-2+cells+in+immune+protection+from+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of B-1 and B-2 cells in immune protection from influenza virus infection.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 252, 163-169 (2000).</li>
<li>Baumgarth, N., Herman, O. C., Jager, G. C., Brown, L. E., Herzenberg, L. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B-1+and+B-2+cell-derived+immunoglobulin+M+antibodies+are+nonredundant+components+of+the+protective+response+to+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">B-1 and B-2 cell-derived immunoglobulin M antibodies are nonredundant components of the protective response to influenza virus infection.</a> J. Exp. Med. 192, 271-280 (2000).</li>
<li>Berland, R., Wortis, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+functions+of+B-1+cells+with+notes+on+the+role+of+CD5%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Origins and functions of B-1 cells with notes on the role of CD5.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 253-300 (2002).</li>
</ol>

בידוד של תאים חלל הצפק היא טכניקה חשובה למחקר של תאים חיסוניים שונים, בעיקר מאקרופאגים ספציפי תת תא B. אמנם זה תהליך פשוט, יש כמה שלבים קריטיים מעורב. נוכחות של זיהום בדם במדגם שנאסף יש להימנע להשיג תא טהור חלל הצפק האוכלוסייה. המתת חסד על ידי נקע בצוואר הרחם צריך להיעשות בזהירות כדי למנוע זיהום דם בתוך חלל הבטן. לחילופין CO 2 יכול לשמש. בנוסף, במהלך הטיפול בהליך תקין יש לנקוט כדי למנוע ניקוב השלפוחית ​​או לאיברים אחרים בתוך חלל הבטן. שחזור ביותר של הנוזל מוזרק חשוב גם תשואה התא. הליך זה נעשה שימוש נרחב ללמוד ביולוגיה macrophage מאז מספרים מתונה של תושב, מקרופאגים unstimulated יכול בקלות להיות המתקבל חלל הצפק, בניגוד המשימה המפרכת להבדיל ובתאים מיאלואידית לתוך מקרופאגים בוגרת במבחנה, באמצעות המושבה macrophage גורם מגרה (8 , 9). התשואה macrophage מתוך חלל הצפק ניתן לשפר על ידי שימוש בשיטת התמחרות thioglycollate, למרות השימוש thioglycollate עשוי לשנות את המאפיינים הפיזיולוגיים של מקרופאגים (7). בתאי B הם חלק חשוב של המערכת החיסונית שלנו משחקת תפקיד מכריע הן חסינות מולדת ובעלי כושר הסתגלות. בין תאים שונים subpopulations B, תאים B1 מהווים קבוצת משנה ייחודית של תאים B המעורבים חסינות אוטואימוניות מולדת, תקנה החיסונית. בתאים B1 ממוקמים בעיקר חלל הצפק הם חידוש עצמי. הם אחד היצרנים העיקריים של IgM טבעי המספק את השורה הראשונה של הגנה כנגד מספר וירוסים וחיידקים (10-12). בתאים B1 הם גם מקור עיקרי של IL-10 (6), המהווה ציטוקינים חשוב המעורב בויסות החיסון. למרות מספר מחקרים כבר נרדף עם התאים B1, עדיין יש מרחב לצורך הערכה נוספת של פונקציות מנוגדות שלהם, במיוחד תפקיד הפיקוח שלהם. חלל הצפק תא שיטת בידוד מספק הזדמנות ייחודית ללמוד את הפונקציות של תאים B1.

<table><tbody><tr><td>מצע תיוגליקולאט, מושגב על ידי Brewer</td><td>BD Biosciences</td><td>211716</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד של תאים עכבר פריטוניאלית חלל

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

חלל הצפק הוא קרום חלל הבטן, כפות מלאות נוזל של יונקים, אשר מכיל את הכבד, הטחול, רוב דרכי העיכול ואת הקרביים האחרים. זה מכיל מספר תאים חיסוניים כולל מקרופאגים, תאים B ותאי T. נוכחות מספר גבוה של מקרופאגים נאיבי חלל הצפק שהופך אותו לאתר מועדף לאיסוף נאיבי תושב מקרופאגים ברקמה (1). חלל הצפק חשוב גם במחקר בתאי B בגלל נוכחות של תת קבוצה ייחודית חלל הצפק תושב B לתא המכונה התאים B1 בנוסף התאים B2 קונבנציונאלי. בתאים B1 מחולקים לתאים B1a ו B1b, אשר יכול להיות מכובדת על ידי ביטוי את פני השטח של CD11b ו CD5. בתאים B1 הם מקור חשוב של IgM טבעי מתן הגנה מוקדם ממגוון רחב של פתוגנים (2-4). תאים אלה הם autoreactive בטבע (5), אבל איך הם נשלטים על מנת למנוע אוטואימוניות עדיין אינה מובנת לחלוטין. להיפך, CD5<sup&gt; +</sup&gt; B1a תאים בעלי מאפיינים מסוימים הרגולציה מכוח יכולתם לייצר IL-10 (6). לכן, חלל הצפק בתאים B1 הם אוכלוסיית תאים מעניין ללמוד כי תפקוד מגוונים שלהם unaddressed שאלות רבות הקשורות התפתחותם ורגולציה. הבידוד של חלל הצפק תאים תושב החיסונית היא בעייתית בשל היעדר מבנה מוגדר בתוך חלל הצפק. פרוטוקול שלנו יתאר הליך לקבלת תאים חיסוניים קיימא מתוך חלל הצפק של עכברים, אשר לאחר מכן ניתן להשתמש לצורך ניתוח פנוטיפי ידי cytometry זרימה ועל מבחני ביוכימיים שונים החיסונית.

חלל הצפק ביונקים מכילה אוכלוסיות תאים שונות החיסונית חיוני תגובות חיסוניות מולדות. שיטת בידוד יעיל נדרש ניתוח ביוכימי ותפקודי של תאים אלה. כאן אנו מספקים שיטה מקיפה עבור בידוד של תאים חלל הצפק בתוך העכבר.

חלל הפריטון (הperitoneum) הוא חלל בטני של יונקים, עטוף קרומים ומלא בנוזל, המכיל את הכבד, הטחול, את מרבית מערכת העיכול...

בידוד תאים מחלל הפריטונאום מתחיל בהנחתו של עכבר שעבר הריגה על גבו. העור החיצוני של הפריטונאום נחתך ומוסת בעדינות כדי לחשוף את העור הפנימי. PBS עם 3% FBS מוזרק לחלל הפריטונאום, ולאחר מכן מעסים בעדינות את הפריטונאום. הנוזל המכיל את תאי הפריטונאום נאסף ומונח בשפור של 15 מיליליטר על קרח.את התאים שוטפים פעם אחת וסופרים באמצעות המוציטומטר (hemo cytometer). היי, אני אוג'י מהמעבדה של ד"ר בון במכון למחקרי דם של מרכז הדם של ויסקונסין. היום נראה לכם פרוצדורה לבידוד תאים מחלל הפריטונאום של עכבר.אנו משתמשים בנוהל זה במעבדה שלנו כדי להשיג תאים עבור בדיקות פנוטיפיות, ביוכימיות ואימונולוגיות שונות. בעיקר, אנו מעוניינים באוכלוסיות של תאי B פריטוניאליים. אז בואו נתחיל.לפני תחילת בידוד תאי מערכת החיסון מחלל הפריטונאום, הכינו את כל החומרים הדרושים. התחילו באיסוף דלי קרח, מזרק של 5 ml עם מחט בכיול 27G, מזרק של 5 ml עם מחט בכיול 25G, בלוק קלקר וסיכות לקיבוע העכבר. הכינו מגש להחזקת בלוק הקיבוע, מספריים, פינצטה ומבחנות איסוף לפני תחילת הניתוח.קררו מראש PBS המכיל 3% fetal calf serum. שמרו את התמיסות הללו ואת מבחנות האיסוף על קרח לאורך כל הניסוי. לאחר מתן חומר הרדמה והמתנסה מתאימה, רססו את העכבר ב-70% ethanol והניחו אותו על גבו מעל בלוק styrofoam או משטח ניתוח. באמצעות פינצטה ומספריים, חתכו את העור החיצוני של הפריתונאום.משכו בעדינות את העור לאחור כדי לחשוף את העור הפנימי המצפה את חלל הפריטונאום. תוך הקפדה לא לנקב איברים כלשהם, דחפו לאט מחט בנחיר 27 לתוך הפריטונאום. הזריקו חמישה milliliters של PBS קר מאוד לתוך חלל הפריטונאום.כעת עסו בעדינות את הפריטונאום (peritoneum) כדי לעודד את התאים להיפרד מדופן הפריטונאום וליפול לתוך תמיסת ה-PBS. לאחר מכן, הרכיבו על מזרק של 5 mL מחט בכיול (gauge) 25 כאשר צד השפית פונה כלפי מעלה, והחדירו את המחט אל הפריטונאום. אספו כמה שיותר נוזל כדי להגדיל את תנובת התאים.בזמן ביצוע פעולה זו, הזיזו בעדינות את הקצה כדי למנוע מרקמת שומן או מאיברים אחרים לחסום את המחט. הוציאו את המחט ורוקנו את תרחיף התאים לתוך מבחנות איסוף מפוליפרופילן. אספו את שארית הנוזל מהחלל על ידי ביצוע חתך בעור הפנימי של הפריטונאום.השתמשו בפינצטה כדי להפריד את העור בזמן שאתם משתמשים בפיפטה פלסטית אחורית לאיסוף כל נוזל שנותר. לבסוף, סבבו את תרחיף התאים בצנטריפוגה למשך שמונה דקות במהירות של 1500 RPM, השליכו את הסופרנאטנט והשעיקו מחדש את התאים ב-5 milliliters של PBS. ספירה של התאים באמצעות המוציטומטר.שימוש בשיטת הדחת trypan blue יאפשר את קביעת מספר התאים. בדרך כלל ניתן לבודד בין 5 ל-10 מיליון תאים מהחלל הפריטונאלי של עכבר שלא עבר מניפולציה. 50 עד 60% מכלל אוכלוסיית התאים יהיו תאי B.כ-40% יהיו מקפגים ותאים גרנולוציטיים, וחמישה עד 10% יהיו תאי T. הרגע הצגנו בפניכם כיצד לבודד תאים מחלל הפריטונאום של עכבר. בעת שימוש בפרוצדורה זו, חשוב להגביל את כמות הדם באוכלוסיית התאים של חלל הפריטונאום על ידי ביצוע דה-יוטנזיה זהירה לעכברים והימנעות מניקור של איברים כלשהם בחלל הפריטונאום.הקפידו להשליך כל דגימה שזוהמה בדם. זהו כל הפרוטוקול. תודה שצפיתם, ובהצלחה בניסוייכם.

isolation-of-mouse-peritoneal-cavity-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הכנה מטוהרים של ריאות תאים דנדריטים עכבר מתואר. דגש ספציפי ניתנת הבידוד של תת קונבנציונאלי תאים דנדריטים.

בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר

בסרטון זה, אנו מדגימים את הבידוד של לימפוציטים ממדבקה של עכבר שנקטף. הלימפוציטים המבודדים יכולים לשמש לניתוח נוסף.

בידוד לימפוציטים ממדבקה של עכבר

סרטון זה מדגים שיטת שטיפת הצפק לבידוד תאי פיטום בוגרים מסוג רקמת חיבור מחלל הצפק של עכברים בוגרים. עם בידוד תערובת של תאי חיסון ראשוניים מחלל הצפק, מתבצעת התרבות סלקטיבית של תאי פיטום בתנאי תרבית מתאימים.

טכניקה לבידוד תאי פיטום ראשוניים מחלל הצפק המורין

יש התעניינות הולכת וגובר בהבנת הפונקציות החיסוניות של אוכלוסיות מסוימות של תאים בתיקונים של Peyer (PPS), אתרים אינדוקטיביים העיקריים של רקמות הלימפה מעיים כרוכות בכך. כאן אנו מתארים פרוטוקולים מקבילים להכנת PP הכנות תא בודדות לניתוח cytometric זרימה וcryosections PP לimmunostaining.

וגם בידוד Immunostaining ימפוציטים ותאי דנדריטים מהתיקונים של Peyer Murine

אנו מתארים כאן פרוטוקול פשוט לבידוד מקרופאגים צפקיים של עכברים. לאחר הליך זה מיצוי RNA לביצוע ניתוח ביטוי גנים על גירוי קולטנים דמויי טול.

בידוד של הצפק Murine המקרופאגים לבצע ניתוח ביטוי גנים בעת ביצוע כמו אגרה רצפטורים הגירוי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבודד ולטפח מאתר תאי פיטום הצפק. אנו גם מתארים שני פרוטוקולים עבור שלהם אפיון פונקציונלי: הדמיה פלורסנט תאיים חינם Ca2 + ריכוז ואת וזמינותו degranulation בהתבסס על ערכי צבע מוחלטים כימות β-ההקסוזאמינידאז שוחרר.

בידוד של תאי פיטום, נגזר צפק ואיפיונן פונקציונלי עם Ca2 +-הדמיה, מבחני Degranulation

תאים Enterochromaffin (EC) מהווים תת קבוצה קטנה של מערכת העיכול תאים אפיתל. תאים EC חשמלית טמפרמנט, לשחרר סרוטונין, אך קשיים culturing זיהוי תאים EC מוגבלת מחקרים פיזיולוגיים. השיטה המוצגת כאן יוצר מודל תרבות ראשי לבצע בדיקה של תאים בודדים EC מאת אלקטרופיזיולוגיה.

אלקטרופיזיולוגיה התא כולו של ראשי Enterochromaffin מאתר בתרבית תאים

כאן אנו מתארים ומדגימים פרוטוקול לבידוד תאי אנדותל סינוסואידליים ראשוניים בכבד עכבר (LSEC). הפרוטוקול מבוסס על זלוף קולגן בכבד, טיהור תאים לא-פרנצ'ימליים על ידי צנטריפוגה במהירות נמוכה ובחירת חרוזים מגנטיים CD146. אנו גם מנצלים את הפנוטיפ ומאפיינים את ה-LSECs המבודדים הללו באמצעות ציטומטריית זרימה ומיקרוסקופ אלקטרונים סורק.

בידוד ואפיון של תאי אנדותל סינוסואידליים ראשוניים בכבד של עכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד mesenchyme המעי murine, כולל telocytes. אלה יכולים לשמש למספר יישומים, כגון תרבות משותפת עם עכבר או אורגנואידים שמקורם בבני אדם, כדי לתמוך בצמיחה ולשקף טוב יותר את המצב ברקמה המקורית.

בידוד של מזנכימה במעי מורין וכתוצאה מכך תשואה גבוהה של טלוציטים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הבידוד והתרבית של מקרופאגים שמקורם במח עצם מעכברים.

בידוד ותרבית של מקרופאגים שמקורם במח עצם מעכברים

מאמר זה מתאר שיטה לבידוד מבוסס חרוזים מגנטיים של תאי אנדותל מורין מנימי לימפה עוריים. תאי האנדותל הלימפטיים המבודדים יכולים לשמש לניסויים במבחנה במורד הזרם ולניתוח ביטוי חלבונים.

Murine Dermal Lymphatic Endothelial Cell Isolation

למד שיטה לבידוד תאים מחלל הפריטונאום בעכברים לחקר תגובות חיסוניות וניתוח אוכלוסיות תאי B, מאקרופאגים ותאי T. השיטה מבטיחה שלמות תאים לניסויים אימונולוגיים מדויקים.

בידוד של תאים עכבר פריטוניאלית חלל

גלה סרטונים נוספים