העלאת מינון: שיטה לפיתוח עמידות לתרופות בתאים סרטניים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:17 דק׳ • April 30th, 2023
- מעכבי טירוזין קינאז, TKI, חוסמים את קולטן הקינאז מלהיקשר ל-ATP, ומונעים את הזרחון. התחל עם ציפוי תאים סרטניים במצע גדילה. לאפשר להם להגיע לצפיפות נוחה, ולהעביר את התאים למספר בארות. לאחר גדילה של לילה, יש לפזר ריכוזי תרופות שונים במספר בארות ולתת לתאים לגדול למשך הזמן הרצוי. הוסיפו MTT, צבע מסיס במים, כדי למדוד את כדאיות התא. אנזימים מיטוכונדריאליים ממירים MTT לפורמזן סגול בלתי מסיס בתוך תאים חיים.
עצור את התגובה על ידי הוספת חומר מסיס מתאים ומדידת פורמזן ספקטרופוטומטרית. שיטה זו נקראת מבחן MTT. שרטט גרף של תאים חיים המסומנים על ידי פורמזן כנגד ריכוזי תרופות. חישוב ריכוז מעכב, IC50, על ידי מציאת ריכוז התרופה שהורגת 50% מהתאים באמצעות התוכנה.
לאחר מכן, לגדל תאים סרטניים במדיום הצמיחה ולהפיץ אותם בשלוש צלחות שונות. לאחר שהתאים מגיעים לתת-מפגש מוסיפים דילול של 1/10 מריכוז IC50. אפשרו לתאים לגדול ולבצע את בדיקת MTT. חזור על תהליך זה עם הגדלת מינון התרופה. תאים סרטניים מפתחים אט אט עמידות ל-TKIs עקב מוטציות ברצף החלבון.
הפרוטוקול הבא מראה התפתחות עמידות לאפטיניב בתאי PC9 על ידי הסלמת מינון.
- כדי לקבוע את ריכוז עמידות האפטיניב המתאים, תרבית תאי PC9 במדיום גידול בתרבית תאים של 10 ס"מ טיפלה בצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. להשעות מחדש את תאי PC9 ב 4 כפול 10 ל 4 תאי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים