גירוי תאי T Ex vivo בגידול הלבלב: שיטה להגברת ייצור הציטוקינים בתאי T
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:00 דק׳ • April 30th, 2023
- תאי T פעילים עוברים למיקרו-סביבה של גידול הלבלב, שם הם משחררים ציטוקינים כמו אינטרפרון-גמא, או גמא IFN, וגורם נמק גידולי-אלפא, או TNF אלפא, המסייע בתיווך תגובה אנטי-סרטנית יעילה. כאשר ציטוקינים יוצאים במהירות מתא T, הרמות התוך-תאיות יכולות להיות בלתי ניתנות לגילוי. לכן, תא T זקוק לגירוי כדי להגביר את ייצור הציטוקינים הבסיסיים לצורך לימוד תפקידם הטיפולי בגידול.
התחל על ידי לקיחת השעיה של תאים סרטניים מן הלבלב של העכבר. כעת, טפלו בתאי T הנמצאים בתרחיף התא באמצעות קוקטייל לגירוי ציטוקינים ודגרו על התערובת למשך הזמן הרצוי. קוקטייל זה מאפשר שחרור יוני סידן מהרשתית האנדופלסמית אל הציטופלסמה. רמות סידן גבוהות, בתורן, מפעילות גורמי שעתוק גרעיניים מסוימים, מה שמוביל לעלייה בייצור ציטוקינים בתאי T.
לאחר מכן, לטפל בתאים עם קוקטייל מעכב הובלת חלבון לדגור על הצינור. קוקטייל זה חוסם את העברת הציטוקינים מהרשתית האנדופלסמית לקומפלקס הגולג'י, וכתוצאה מכך הצטברות ציטוקינים בתוך התא. לבסוף, הכתימו את התאים באמצעות סמנים תוך-תאיים מתאימים לניתוח ציטומטריית זרימה. בפרוטוקול הבא נבצע גירוי תאי T כדי להעלות את הריכוז התוך-תאי של ציטוקינים.
- כדי להתחיל, השתמש במלקחיים כדי להעביר את הגידול על צלחת פטרי. אחסנו 5 מיליליטר של מדיום העיכול בצינור של 50 מיליליטר על קרח כדי למנוע את תחילת פעילות האנזים. קח al
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים