בדיקת היווצרות כדור: שיטת מבחנה לזיהוי תאי גזע של סרטן הלבלב וטיפולי מסך

- אדנוקרצינומה של צינור הלבלב (PDAC) מכילה תת-קבוצה של תאי גזע סרטניים גידוליים בלבד (CSC). CSCs הם מתחדשים מעצמם, פלוריפוטנטיים ומסוגלים ליצור גידולים. הם מבטאים חלבונים אנטי-אפופטוטיים ומכילים גם גנים עמידים לתרופות רבות, מה שהופך אותם לעמידים בפני כימותרפיה. כדי לזהות תאי גזע סרטניים ולחקור את השפעת התרופות עליהם, אנו מבצעים בדיקת היווצרות כדורית.

ראשית, להשהות את תאי הגזע הסרטניים שחולצו בתווך תרבית התאים הרצוי. לאחר מכן, זרעו את השעיית התא לתוך צלחת מרובת בארות ודגרו למשך הזמן הרצוי. הוסף כמות נדרשת של תרופה מעניינת לכמה בארות ופלצבו בבארות אחרות כבקרה שלילית. לדגור על התאים למשך הזמן הרצוי. תאי גזע סרטניים יוצרים מושבות בצורת כדור בסביבת תרבית לא דבקה.

לאחר הדגירה, פיפטה כמות קטנה של תרחיף תאים על המוציטומטר ומניחים אותו לתוך מונה תאים אוטומטי. עכשיו, לספור את מספר הספירות שנוצרו. התאים המטופלים בתרופות מראים בדרך כלל ירידה משמעותית בגודל ובמספר הכדורים. בפרוטוקול הבא, נבצע בדיקת היווצרות כדור כדי לזהות תאי גזע סרטניים בלבלב ולהעריך את ההשפעה של מטפורמין.

- כדי להקל על היווצרות כדור הגידול להעשרת תאי גזע סרטניים, יש לדלל את התאים בנפח המתאים של תווך תאי גזע סרטניים לריכוז סופי של 2 כפול 10 עד 3 תאים למיליליטר, ולצנן אותם על קרח למשך מספר דקות. לאחר מכן, לאחר הוספת 500 מיקרוליטר של PBS לשורה הראשונה והאחרונה של צלחת תא חיבור 24 נמוכה במיוחד, להשעות מחדש את התאים על ידי פיפטה זרע 1 מיליליטר של תאים לכל באר לתוך בארות ריקות של הצלחת.

לטפל בארבע בארות של תאים עם התרופה המעניינת ולפחות ארבע בארות בקרה שליליות עם רכב. לאחר מכן לדגור על התאים ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני במשך שבוע אחד. אחת ליומיים, יש להוסיף טיפול או רכב טרי לכל אחת מהבארות.

ביום 5 או 7, להעריך את מספר כדורי הגידול שנוצרו עם מונה תאים אוטומטי המאפשר זיהוי של מבנים גדולים יותר. עבור מעבר סדרתי של כדורי הגידול, ביום 7, השתמש במסננת תאים של 40 מיקרומטר כדי לקצור את הכדורים. לאחר מכן, סובבו את הכדורים ודגרו עליהם במיליליטר אחד של טריפסין במשך 20 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי לנתק את הגלולה לתרחיף חד-תאי. לאחר מכן הרחיבו את התאים למשך שבעה ימים נוספים, כפי שהודגם זה עתה.