Name: הערכה של תפקוד הלב Energetics בלבבות עכבר בודדות שימוש 31 P NMR ספקטרוסקופיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: למדו הערכת אנרגטיקה לבבית בלבבות עכבר מבודדים באמצעות ספקטרוסקופיית 31P NMR. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחר תפקוד לבבי ותכולת פוספטים בעלי אנרגיה גבוהה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים ברצונם להודות ל-Lynne Spencer על תמיכתה במהלך חלק ספקטרוסקופיית ה-NMR של הניסוי. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מה-National Institutes of Health קרנות R01 HL059246, R01 HL067970, R01 HL088634 (לד"ר Tian) ו-F32 HL096284 (לד"ר Kolwicz).

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים אלה, שתי מערכות נפרדות מנוצלים בעת ובעונה אחת. לרכישת ספקטרום P 31, מגנט 14T Bruker היא interfaced עם III Avance קונסולת מחשב המצויד בתוכנות טופספין v2.1. לקבלת הערכה של תפקוד הלב, זלוף אישית בנוי מערכת הלב interfaced עם PowerLab 4 / 30 רכישת נתונים, מצויד בתוכנה LabChartPro 6 לניתוח נתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הניסוי, 1 ליטר של חיץ קרבס-Henseleit מוכן כדלקמן: 0.5mm EDTA, 5.3mM KCl, 1.2 מ"מ MgSO 4, 118mM NaCl, ו 25mm NaHCO 3. תערובת הוא מבעבע אז עם 5% CO 2 / 95% O 2 במשך 10-15 דקות לפני תוספת של 2 מ"מ CaCl 2. לבסוף, מצעים, בצורה של גלוקוזה 10 מ"מ pyruvate 0.5mm, מתווספים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ויסות טמפרטורה במהלך הניסוי הוא קריטי. Circulators מחוממת משמשים כדי לשמור על טמפרטורה בין 37.0-37.5 ° C תוך הלב בתוך המגנט. טמפרטורה היא במעקב למשך הניסוי באמצעות בדיקה סיבים אופטיים הטמפרטורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ זלוף והלחץ החדר השמאלי מנוטרים באמצעות מתמרים ללחץ המצורפת מערכת נתונים הרכישה מוצג באמצעות תוכנה כלולה. אלו מכוילים עם מד לחץ דם רגיל לפני הניסוי. בנוסף, קווי לחץ סמוקות כראוי על מנת להסיר את כל בועות האוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגם סטנדרטי של 150 מ"מ פוספט נתרן (שהוא שווה ערך כוח יוניים של למאגר KH) משמש כדי "לכייל" את החללית לקראת הכניסה של הלב. זה מקל את האות מקטין את הזמן הדרוש כדי להתחיל את תקופת רכישת פעם את הלב ממוקם בתוך החללית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפחית קרישת, העכבר מוזרק עם 200 יחידות של ה-IP הפרין אחרי 5 דקות, pentobarbital נתרן (175 מ"ג / ק"ג) IP נתונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הלב הוא נכרת במהירות (עם הריאות התימוס שלם) ועצרו בקרח קר KH חיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמנם שמרה על הקרח, הריאות מוסרים במהירות. אונות התימוס מזוהים קלופים בעדינות לאחור כדי לחשוף את אבי העורקים. התימוס הוא הוסר. אבי העורקים הוא מבודד אז בקפידה על ידי הסרת כל הרקמה שמסביב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקרו תפירת מלקחיים המשמשים בעדינות להחזיק בשני קירות של האאורטה לחשוף את לומן. אבי העורקים ממוקם בזהירות על צינורית עשוי צינורות פוליאתילן OD 0.965 מ"מ (PE50). אבי העורקים נערכת במקום עם מהדק כלי מיקרו בעוד התפרים קשורות במהירות סביב האאורטה. הקליפ הוסר ואת מלקחיים המשמשים לבדוק היטב כי הצינורית הוא מעל שורש האאורטה. קשרים נוספים מתווספים ככל שיידרש כדי להחזיק את הלב במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל רקמה נוספת היא להסיר באמצעות מלקחיים microscissors. חתך קטן עשה אל החדר השמאלי. 0.61 מ"מ OD צינורות פוליאתילן (PE10) מוחדר בזהירות באמצעות אטריום שמאל, חלל LV, ועל דרך הקודקוד תוך בעדינות מחזיק את הלב. צינורות עודף חיתוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניכוי מלא מים בלון מוחדר דרך אטריום לתוך LV והוא מוחזק במקום באמצעות דבק או תפרים. מהירות המשאבה peristaltic הוא גדל בהדרגה כדי לספק זרימה מספקת ללב. עד הלב הוא המקום לתוך החללית NMR, הלב תמשיך להיות perfused עם זרם בלתי פוסק שווה ערך ל כ 2 מ"ל / דקה. הבלון מנופח LV היא עם נפח קטן באמצעות מזרק מיקרומטר כדי לוודא מתמר הלחץ LV מתפקד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הלב הוא מוכנס בזהירות לתוך צינור NMR 10 מ"מ. רחב נשא "טווה" משמש כדי להנחות את הצינור למקומו הנכון בתוך החללית. המנגנון כולו אז מחובר היטב "חבל הטבור" עם דבק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבל הטבור הוא הוריד לאט לתוך נשא העליון של מגנט עד הצינור לב / NMR נמצא בתוך סליל של בדיקה 10 מ"מ NMR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הלב במקום הנכון בתוך החללית, תזרים המשאבה peristaltic מותאם על מנת להשיג בלחץ זלוף של 80mmHg. (זכור, כי עד לנקודה זו את הלב היה perfused עם תזרים קבוע של כ 2 מ"ל / דקה). הלחץ זלוף נשמר אז על ידי הפעלת "להחזיק" מנגנון בבקר המשאבה. הלב הוא מותר אז תקופה איזון 15-20 דקות. במהלך תקופה זו, בהיקף של הבלון LV מותאם להשיג הלחץ סוף דיאסטולי של 80-10 מ"מ כספית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך התקופה איזון, יש צורך לייעל את הפרמטרים ספקטרומטר על מנת לקבל את האות זרחן הטוב ביותר האפשרי. מטרה זו מושגת על ידי הגדרת הדופק רדיו בתדר בו גרעין זרחן מהדהד ("כוונון") ועושה את השדה המגנטי אחיד ("shimming"). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופת איזון, מספר 31 P ספקטרום NMR ניתן להשיג. תקופת הרכישה עבור כל ספקטרום תלויה לאהוא שדה הכוח של המגנט, גודל המדגם, ואת יחס אות לרעש הדרוש לניסוי מסוים. ספקטרה מתקבלים באמצעות מגנט 14 Telsa ידי ממוצעים של האות המתקבל 256 תדירות פולסים של רדיו 20 μs עם זווית להעיף ועיכובים 60 מעלות של 2.0 שניות. ניסוי זה ידרוש כ 10 דקות. </li></ol> נציג תוצאות מתוך נתונים על רכישת חומרה ואת התוכנה LabChart, מספר פרמטרים של תפקוד הלב יכול להימדד בכל פרוטוקול הניסוי. למדוד הטיפוסי של תפקוד הלב, החדר השמאלי לחץ המפותחות (LVDevP), מתקבל על ידי הפחתת הלחץ סוף דיאסטולי (EDP) מן הלחץ הסיסטולי (איור 1). צעד זה יכול להשתנות בהתאם זן של העכבר ואת מצב הלב (כלומר, יתר לחץ). עם זאת, LVDevP לב נורמלי C57BL6 העכבר הוא בדרך כלל בין 100-110 מ"מ כספית בלחץ הדיאסטולי סוף קבוע של 80-10 מ"מ כספית. בנוסף, התוכנית מאפשרת LabChart למדידת קצב הלב המבוסס על מדידות מחזורית של גלי לחץ LV. שוב, צעד זה יכול להשתנות אבל הערכים האופייניים הם 350-400 פעימות לדקה כאשר לבבות מותר להכות בשיעורים מהותיים. עם זאת, הלב יכול להיות סטנדרטית באמצעות מערכת לצעוד בו קצב הלב נשמר על 420 פעימות לדקה. בנוסף, אמצעי contractility (+ DP / dt) והרפיה (-dP/dt) ניתן להעריך באמצעות הנגזרת הראשונה של גל הלחץ LV. במהלך פרוטוקול הניסוי קל להעריך את מנגנון סטרלינג על ידי שילוב מערכת יחסים הלחץ נפח. מטרה זו מושגת על ידי ביצוע חשיפה הדרגתית של נפח את הבלון LV ורשם LVDevP וכן EDP. ערכים אלה לאחר מכן ניתן להתוות כמתואר באיור 2. בעוד עקומת סטרלינג הוא אופטימלי, וציין את נפח הדרושים כדי להשיג EDP של 8-10 מ"מ כספית יכולה לתת מושג עקיפה מימד קאמרית LV. ניתן להשתמש במודלים של אבי העורקים banding כמו לבבות שגדלה יתר על המידה בדרך כלל ידרוש נפח בלון קטן בעוד לבבות מורחבים דורשים נפח גדול יותר בהשוואה לקבוצת הביקורת. טבלה 1 מציגה נתונים נציג תפקוד הלב רכשה במהלך הפרוטוקול זלוף. 31 P NMR הספקטרומטר יספק אותות של phosphocreatine (PCR) ושלושה פוספטים מן ה-ATP (γ-ATP, α-ATP, ו - β-ATP) וכן פוספטים אנאורגניים (PI) כפי שמוצג באיור 2. ניתוח של כל אחת מן הפסגות האלה מספק ערך עבור האזור מתחת לעקומה. כמות ה-ATP מוערך על ידי חישוב ממוצע γ-ATP ו - β-ATP אזורים. (Α-ATP אינו משמש כי מולקולות NAD לתרום חלק לא ידוע של האות סה"כ). המצב האנרגטי של הלב נקבע על ידי מנה של PCR אזורי ה-ATP (PCR: יחס ATP). ערך זה הוא בדרך כלל 1.5-1.7 בלב עכבר מסופק עם גלוקוז כמו המצע הראשוני. למרות 31 P התמ"ג אינו מספק אמצעי ישיר של ה-ATP או PCR, באזור של פסגות היא פרופורציונלית לסכום של זרחן המכיל תרכובות במדגם. ערכים עבור אותות אלה יכולים להיות מוערך על ידי שימוש בשיטות אחרות. לדוגמה, אמצעים ישירה של ה-ATP על ידי כרומטוגרפיה ביצועים גבוהים נוזלי (HPLC) במדגם של לבבות יכול להניב הריכוז הממוצע. ערך זה לאחר מכן ניתן להשתמש כדי לכייל את האזורים הממוצע ATP שנצפתה הספקטרום. ריכוז ה-PCR יכול להיות מחושב על בסיס אזור PCR יחסית לאזור ה-ATP. אפשר גם להעריך את רמת החומציות על ידי ניתוח שינוי כימי יחסית של פוספטים אנאורגניים (PI) אות לאות PCR. 1 שימוש אחר הדופק רדיו רצפים, מהירות התגובה קריאטין קינאז או את מהירות התגובה סינתזה ATP ניתן גם למדוד 2. <img src="/files/ftp_upload/2069/2069tab1.jpg" alt="טבלה 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="טבלה 1"> 1. Baseline טבלה תפקוד הלב מן הלבבות perfused מבודדים. LVDevP: הלחץ החדר השמאלי מפותח; LVEDP: החדר השמאלי בסוף הלחץ הדיאסטולי, HR: קצב הלב, RPP: הלחץ מוצר קצב; + DP / dt: לחץ first נגזרות LV חיובית; -dP/dt: לחץ first נגזרות LV שלילי; PP : לחץ זלוף: ק"פ: זרימה כלילית. <img src="/files/ftp_upload/2069/2069fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> 1. איור נציג הלחץ LV גלים מפני תוכנות LabChart Pro. <img src="/files/ftp_upload/2069/2069fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. עקומות נציג זרזיר מהשלט (קו מוצק) ואת אבי העורקים התאגדו (קו מקווקו) בעכברים. א) פונקציה הסיסטולי כפי שהוא מיוצג על ידי הגדלת נפח LV LVDevP כפי שנקבע על ידי היקף הבלון LV. ב) פונקציה הדיאסטולי כמו מיוצג על ידי EDP על הגדלת נפח LV כפי שנקבע על ידי עוצמת הקול של הבלון LV. LVDevP: הלחץ החדר השמאלי מפותח (סיסטולי ודיאסטולי מינוס pressure); EDP: סוף דיאסטולי לחץ. <img src="/files/ftp_upload/2069/2069fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> 3. איור 31 נציג P ספקטרום NMR של הלב מבודד עכבר perfused. שימו לב לשיא קטן יחסית Pi. בלב perfused aerobically מסופק עם חומצות שומן או pyruvate בנוסף גלוקוז, שיא זה צריך להיות מינימלי. בתקופות של איסכמיה, זה מגביר את השיא בזמן שיא PCR פוחתת. שימו לב כתף ימין של שיא α-ATP. זוהי תרומתו של מולקולות NAD. Pi: פוספטים אנאורגניים; PCR: phosphocreatine; ה-ATP: אדנוזין טריפוספט.

<ol><li>Nascimben, L., Ingwall, J. S., Lorell, B. H., Pinz, I., Schultz, V., Tornheim, K., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+for+increased+glycolysis+in+the+hypertrophied+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanisms for increased glycolysis in the hypertrophied rat heart.</a> Hypertension. 44, 662-667 (2004).</li>
<li>Spindler, M., Saupe, K. W., Tian, R., Ahmed, S., Matlib, M. A., Ingwall, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+creatine+kinase+enzyme+kinetics+in+diabetic+cardiomyopathy.+A%2831%29P+NMR+magnetization+transfer+study+of+the+intact+beating+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Altered creatine kinase enzyme kinetics in diabetic cardiomyopathy. A(31)P NMR magnetization transfer study of the intact beating rat heart.</a> J Mol Cell Cardiol. 31, 2175-2189 (1999).</li>
<li>Ingwall, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorus+nuclear+magnetic+resonance+spectroscopy+of+cardiac+and+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Phosphorus nuclear magnetic resonance spectroscopy of cardiac and skeletal muscles.</a> Am J Physiol. 242, H729-H744 (1982).</li>
<li>Ingwall, J. S., Javadpour, M. M., Miao, W. 31P NMR spectroscopy of the mouse heart. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aIngwall%2C+JS+%22Cardiovascular+physiology+in+the+genetically+engineered%22">Cardiovascular physiology in the genetically engineered</a>. Hoit, B. D., Walsh, R. A. , Kluwer. Boston. 151-163 (2002).</li>
<li>Luptak, I., Balschi, J. A., Xing, Y., Leone, T. C., Kelly, D. P., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+contractile+and+metabolic+reserve+in+peroxisome+proliferator-activated+receptor-alpha-null+hearts+can+be+rescued+by+increasing+glucose+transport+and+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Decreased contractile and metabolic reserve in peroxisome proliferator-activated receptor-alpha-null hearts can be rescued by increasing glucose transport and utilization.</a> Circulation. 112, 2339-2346 (2005).</li>
<li>Yan, J., Young, M. E., Cui, L., Lopaschuk, G. D., Liao, R., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+glucose+uptake+and+oxidation+in+mouse+hearts+prevent+high+fatty+acid+oxidation+but+cause+cardiac+dysfunction+in+diet-induced+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Increased glucose uptake and oxidation in mouse hearts prevent high fatty acid oxidation but cause cardiac dysfunction in diet-induced obesity.</a> Circulation. 119, 2818-2828 (2009).</li>
<li>Luptak, I., Shen, M., He, H., Hirshman, M. F., Musi, N., Goodyear, L. J., Yan, J., Wakimoto, H., Morita, H., Arad, M., Seidman, C. E., Seidman, J. G., Ingwall, J. S., Balschi, J. A., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+activation+of+AMP-activated+protein+kinase+remodels+metabolic+network+in+favor+of+cardiac+glycogen+storage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Aberrant activation of AMP-activated protein kinase remodels metabolic network in favor of cardiac glycogen storage.</a> J Clin Invest. 117, 1432-1439 (2007).</li>
<li>Xing, Y., Musi, N., Fujii, N., Zou, L., Luptak, I., Hirshman, M. F., Goodyear, L. J., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+metabolism+and+energy+homeostasis+in+mouse+hearts+overexpressing+dominant+negative+alpha2+subunit+of+AMP-activated+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Glucose metabolism and energy homeostasis in mouse hearts overexpressing dominant negative alpha2 subunit of AMP-activated protein kinase.</a> J Biol Chem. 278, 28372-28377 (2003).</li>
<li>Luptak, I., Yan, J., Cui, L., Jain, M., Liao, R., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+effects+of+increased+glucose+entry+on+mouse+hearts+during+normal+aging+and+ischemic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Long-term effects of increased glucose entry on mouse hearts during normal aging and ischemic stress.</a> Circulation. 116, 901-909 (2007).</li>
<li>Tian, R., Abel, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+GLUT4-deficient+hearts+to+ischemia+underscore+the+importance+of+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Responses of GLUT4-deficient hearts to ischemia underscore the importance of glycolysis.</a> Circulation. 103, 2961-2966 (2001).</li>
<li>Liao, R., Jain, M., Cui, L., D'Agostino, J., Aiello, F., Luptak, I., Ngoy, S., Mortensen, R. M., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac-specific+overexpression+of+GLUT1+prevents+the+development+of+heart+failure+attributable+to+pressure+overload+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac-specific overexpression of GLUT1 prevents the development of heart failure attributable to pressure overload in mice.</a> Circulation. 106, 2125-2131 (2002).</li>
<li>Tian, R., Musi, N., D'Agostino, J., Hirshman, M. F., Goodyear, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+adenosine+monophosphate-activated+protein+kinase+activity+in+rat+hearts+with+pressure-overload+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Increased adenosine monophosphate-activated protein kinase activity in rat hearts with pressure-overload hypertrophy.</a> Circulation. 104, 1664-1669 (2001).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

ספקטרוסקופיית 31P NMR בלב עכבר מבודד בביצוע פרפוזיה בשיטת Langendorff מספקת נתונים מהימנים וניתנים לשחזור.3, 4 עם זאת, חיוני לבצע את הקניולציה של האאורטה ואת השחלת הבלון לחדר השמאלי (LV) כראוי, כדי לאפשר תפקוד לבבי יציב בעת השהייה בתוך מבחנת ה-NMR. בנוסף, ויסות הטמפרטורה הוא בעל חשיבות עליונה להשגת תפקוד בסיס תקין. גורם חשוב להשגת ספקטראי NMR טובים וניתנים לניתוח הוא הגברת יחס האות לרעש. ניתן להשיג זאת על ידי הבטחת "כוונון" (tuning) ו"שימינג" (shimming) אופטימליים של הדגימה. כפי שצוין בטקסט הפרוטוקול, שימוש בדגימה סטנדרטית לפני השחלת הלב יכול להקל על תהליך זה. כמו כן, מומלץ להשתמש ב"דגימה" בגודל הולם. לבבות השוקלים פחות מ-100 mg מספקים בדרך כלל אותות PCr ו-ATP נמוכים יותר, ולכן יהיה צורך להגדיל את זמן הרכישה כדי לקבל ספקטראי זרחן טובים.
קיימות מספר דרכים לשנות את הפרוטוקול הקיים כדי להשיג מידע נוסף בנוגע לתפקוד הלב ולאנרגטיקה שלו. במעבדה שלנו, ביצענו פרפוזיה ללבבות עם תמיסות סובסטרט מעורבות, שעשויות לכלול שילובים שונים של חומצות שומן (בריכוזים נמוכים וגבוהים), לקטט, קטונים ואינסולין. באמצעות שימוש באיזוטופים יציבים בתמיסת הפרפוזיה (כלומר, סובסטרט המסומן ב-13C), יש לנו את היכולת להעריך את ניצול הסובסטרט על פי התרומה היחסית של acetyl CoA מסומן למחזור ה-TCA.5-7 ליישום זה, אנו מבצעים אנליזת איזוטופומרים של 13C3- ו- 13C4- glutamate באמצעות ספקטרוסקופיית 13C NMR. פעולה זו דורשת קיבוע בהקפאה (freeze-clamping) של הלב בסיום פרוטוקול הפרפוזיה וביצוע מיצוי מהרקמה הקפואה. זה יהיה ניסוי נוסף, שכן האנליזה דורשת שימוש בגרסון (probe) שונה עם פרמטרי הגדרה נפרדים. יישומים אחרים כוללים החלפת גלוקוז ב-deoxyglucose בתמיסה, תוך ניטור הצטברות תלוית-זמן של 2-deoxyglucose phosphate בלב באמצעות ספקטרוסקופיית 31P NMR. שיטה זו מאפשרת מדידה של ספיגת גלוקוז בשריר הלב.7, 8 בנוסף, המעבדה שלנו ניתחה תפקוד לב ואנרגטיקה בפרוטוקולי פרפוזיה הכוללים איסכמיה/reperfusion ואתגר של עומס עבודה גבוה.6, 8-10
לסיכום, ספקטרוסקופיית 31P NMR בלבבות עכברים מבודדים היא הליך מאתגר מבחינה טכנית הדורש שימוש בציוד מתוחכם. עם זאת, הנתונים שהיא מניבה הם בעלי ערך רב עבור החוקר המעוניין לנתח את התפקוד והאנרגטיקה של מודלים של עכברים בהנדסה ביוולוגית. עבור המעבדה שלנו, טכניקות אלו היו חיוניות להבנת ההשלכות של מגוון גורמי עקה על תפקוד הלב, האנרגטיקה והמטבוליזם.1, 11, 12

<table><tbody><tr><td>סולפט מагנזיום</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריץ'</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריך</td><td>E1644</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד אשלגן</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריך</td><td>P4505</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריץ'</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>כלוריד נתרן</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריך</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>כלסידם כלוריד די-הידרט</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריץ'</td><td>C5080</td><td></td></tr><tr><td>D-גלוקוז</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריץ'</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>פירובט נתרן</td><td>ריאגנט</td><td>סייגמה-אלדריך</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>ברוקר אולטרה שילד 600WB פלוס</td><td>ציוד</td><td>Bruker Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank"&gt;PowerLab 4/30&lt;/a&gt;</td><td>ציוד</td><td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML866/" target="_blank"&gt;ML866/P&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/software/research/LabChart-Software/" target="_blank"&gt;LabChart 6 Pro&lt;/a&gt;</td><td>ציוד</td><td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/software/research/LabChart-Software/" target="_blank"&gt;MLS260/6&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/FE224/" target="_blank"&gt;.Quad Bridge Amp&lt;/a&gt;</td><td>ציוד</td><td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/FE224/" target="_blank"&gt;ML224&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/research/product/ML175/" target="_blank"&gt;בקר משאבת STH&lt;/a&gt;</td><td>ציוד</td><td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/research/product/ML175/" target="_blank"&gt;ML175&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML172/" target="_blank"&gt;משאבת פריסטלטית Minipuls 3&lt;/a&gt;</td><td>ציוד</td><td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/ML172/" target="_blank"&gt;ML172&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT0699/" target="_blank"&gt;טרנסדיוסר חד-שימושי למדידת לחץ דם&lt;/a&gt;</td><td>ציוד</td><td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT0699/" target="_blank"&gt;MLT0699&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>צינורית NMR של 10 מ"מ</td><td>ציוד</td><td>Wilmad LabGlass</td><td>513-7PP-7</td><td></td></tr><tr><td>צינור פוליאתילן PE10</td><td>ציוד</td><td>BD Biosciences</td><td>427401</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT844/" target="_blank"&gt;מתמר לחץ פיזיולוגי&lt;/a&gt;</td><td>ציוד</td><td><a href="http://www.adinstruments.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> ADInstruments</a></td><td>&lt;a href="http://www.adinstruments.com/products/hardware/corporate/product/MLT844/" target="_blank"&gt;MLT844&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>צינור פוליאתילן PE50</td><td>ציוד</td><td>BD Biosciences</td><td>427411</td><td></td></tr><tr><td>סyrינג מיקרומטרי</td><td>ציוד</td><td>Gilmont Instruments</td><td>GS-1101</td><td></td></tr><tr><td>מלקחי מקפרסון</td><td>ציוד</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-949</td><td></td></tr><tr><td>מספרים מיקרוסקופיים קסטרוויהו</td><td>ציוד</td><td>חברת כלים ניתוחיים רובוז</td><td>RS-5650</td><td></td></tr><tr><td>ממיר אותות נאופטיקס</td><td>ציוד</td><td>Neoptix, Inc.</td><td>רפלקס - 1</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה של תפקוד הלב energetics בלבבות עכבר בודדות שימוש 31 p nmr ספקטרוסקופיה

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

מודלים העכבר bioengineered הפכו כלי מחקר רב עוצמה בקביעת קשרים סיבתיים בין שינויים ומודלים המולקולרי של מחלות לב וכלי דם. למרות הביולוגיה המולקולרית יש צורך בזיהוי שינויים מרכזיים מסלול איתות, זה לא פונדקאית עבור משמעות תפקודית. בעוד הפיזיולוגיה יכולה לספק תשובות לשאלה של פונקציה, תוך שילוב עם הפיזיולוגיה הערכה ביוכימיים של מטבוליטים של שלם, לב פועם מאפשר לקבל תמונה שלמה של תפקוד אנרגטיקה לב. במשך שנים במעבדה שלנו ניצלה perfusions לב מבודדים בשילוב עם ספקטרוסקופית תהודה מגנטית גרעינית (NMR) כדי לבצע משימה זו. תפקוד חדר שמאל נבחנת על ידי Langendorff מצב perfusions לב מבודדים תוך אנרגטיקה הלב נמדד על ידי ביצוע<sup&gt; 31</sup&gt; P ספקטרוסקופיית תהודה מגנטית של הלב perfused. בעזרת טכניקות אלו, מדדי תפקוד הלב בשילוב עם רמות phosphocreatine ו ATP ניתן למדוד בו זמנית לבבות פועמים. יתר על כן, פרמטרים אלה ניתן לנטר בזמן דחק פיזיולוגי או פתולוגי הם הנהיגו. לדוגמה, איסכמיה / reperfusion או גבוה אתגר פרוטוקולים עומס יכול להיות מאומץ. השימוש העורקים banding או דגמים אחרים של הלב הפתולוגיה נוטים גם כן. משנה גרסאות בתוך הפרוטוקול, משמעות תפקודית האנרגטי של שינויים מולקולריים של מודלים עכבר מהונדס ניתן לתאר באופן הולם, המוביל תובנות חדשות על מסלולים מטבוליים הקשורים האנזימטית. לכן,<sup&gt; 31</sup&gt; P NMR ספקטרוסקופיה בלב perfused מבודד היא טכניקה ערך מחקר בבעלי חיים למחלות לב וכלי דם.

פרופוזיה של לב מבודד במצב Langendorff, בשילוב עם ספקטרוסקופיית 31P NMR, מאחדת את תחומי הביוכימיה והפיזיולוגיה לניסוי אחד. הפרוטוקול מאפשר מדידה דינמית של תכולת פוספט בעלת אנרגיה גבוהה ומחזוריותה בלב, תוך ניטור סימולטני של התפקוד הפיזיולוגי. כאשר היא מבוצעת נכון, טכניקה זו מהווה כלי בעל ערך להערכת האנרגטיקה של הלב.

הערכה של תפקוד הלב Energetics בלבבות עכבר בודדות שימוש 31 P NMR ספקטרוסקופיה

מודלים של עכברים בהנדסה ביולוגית הפכו לכלי מחקר רב-עוצמה לקביעת קשרים סיבתיים בין שינויים מולקולריים לבין מודלים של...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לבחון את התפקוד הלבבי והאנרגטיקה בלב עכבר מבודד תחת פרפוזיה. דבר זה מושג על ידי ביצוע פרפוזיה ללב עכבר במצב LOR. בשלב שני, באמצעות בופר Krebs שנבחר ידנית והועשר בגלוקוז ופירובט, מוכנס בלון מלא במים לתוך החדר השמאלי (lv), מה שמאפשר ניטור רציף של התפקוד הלבבי במהלך הניסוי.בשלב הבא, הלב מוכנס לתוך מבחנת NMR של 10 מילימטרים ומוכנס למגנט כדי להעריך את האנרגטיקה הלבבית באמצעות תצפית על התהודות של פוספו-קראטין ושל פוספטים אנורגניים. התוצאות שהתקבלו מראות את התפקוד והאנרגטיקה הלבבית בהתבסס על גלי לחץ של ה-LV, P 31 ומספקטרוסקופיית מסות. שלום, אני סטיב קיץ ממרכז מטבוליזם לבבי של MIT במחלקה לאנשטיזיה באוניברסיטת וושינגטון. היום אראה לכם הליך של פרפוזיה של לב מבודד בשילוב עם ספקטרוסקופיית 31 PNMR.אנו משתמשים בנוהל זה במעבדה שלנו כדי להעריך את התפקוד והאנרגטיקה של הלב במודלים של עכברים בהנדסה ביולוגית. אז בואו נתחיל. כדי להתחיל בפרוטוקול זה, הכינו ליטר אחד של בופר kres, hence light או KH.החדירו בועות של 5%carbon dioxide ו-95%oxygen אל התערובת למשך 10 עד 15 דקות. לאחר מכן הוסיפו calcium chloride בריכוז של שני millimolar, ואחריו את הסובסטרטים, 10 millimolar glucose ו-0.5 millimolar pyruvate. בניסויים אלו, נעשה שימוש בשתי מערכות נפרדות בו-זמנית עבור כל רכישה של P 31 Spectra.מגנט BRUER 14 T מחובר לקונסולה מתקדמת של שלושה ומחשב המצויד בתוכנת top spin V 2.1 להערכת תפקוד הלב. מערכת פרפוזיית לב שנבנתה בהתאמה אישית מחוברת ל-power lab. ארבעה 30 דרישות נתונים.המערכת מצוידת בתוכנת lab chart PRO six לניתוח נתונים. מי apparatus לבשפומת הלב כולל משאבה פריסטלטית מסוג mini pulse three הנשלטת על ידי בקר משאבות STH המשמש להזרמת בופר KH אל הלב. ויסות הטמפרטורה במהלך ניסוי ה-NMR הוא קריטי. משתמשים בסירקולטורים מחוממים כדי לשמור על הטמפרטורה בין 37.0 ל-37.5 degrees Celsius בזמן שהלב נמצא בתוך המגנט, והטמפרטורה מנוטרת לאורך כל הניסוי באמצעות חיישן טמפרטורה מסיב אופטי.לאורך הניסוי, לחץ ה-LV ולחץ הפרפוזיה מנוטרים באמצעות מתמירים של לחץ המחוברים למערכת רכישת נתונים ומוצגים באמצעות התוכנה הנלווית. מתמר פיזיולוגי משמש לניטור לחץ ה-LV ומתמר לחץ דם חד-פעמי משמש לניטור לחץ הפרפוזיה. לבסוף, משתמשים בצינור טבורי כדי לספק לב גוף הלב את התמיכה (buffer) המחוממת והמחומצנת.לאחר הכניסה למגנט, ולפני תחילת הניסוי, יש לכייל את חיישני הלחץ באמצעות המנומטר הסטנדרטי: ראשית, ללא לחץ בחיישן, כדי לאפס את הכיול. לאחר מכן, יש לנפח את המנומטר ללחץ גבוה יותר. הזן ערך זה לתוכנת המחשב.לאחר מכן, ודאו כי חיישני הלחץ כוילו כראוי על ידי ניפוח מנומטר זה ללחצים ידועים ואימותם על מסך המחשב. ברגע שחיישני הלחץ כוילו, כילו את גשושית ה-NMR באמצעות מבחנה של NMR בנפח 10 מילימטר המכילה דגימה סטנדרטית של 150 מילימולרית של סודיום פוספט. בצעו את הכיול באמצעות תוכנת top spin.ראשית, בצעו כיוון (tune) של הדגימה כדי לקבוע את תדר התהודה של הפספורס. לאחר מכן, בצעו שימינג (shim) לדגימה כדי ליצור שדה מגנטי הומוגני. כיול ראשוני זה משפר את האות ומקצר את הזמן הדרוש לתחילת תקופת הרכישה.ברגע שהלב ממוקם בתוך הגשש כדי להתחיל את הוצאת לב העכבר, הזרק לעכבר 200 units של heparin באופן תוך-peritوني (intraperitoneal) כדי להפחית קרישה. לאחר חמש דקות, ניתן 175 mg/kg של sodium Penta barbital באופן תוך-peritوني. ברגע שהעכבר הרדים, הנח אותו על גבו והדבק את הזרועות והרגליים כדי לחשוף את אזור החזה.בצע צביטה בבהוות ה🦶 כדי לוודא שהעכבר נמצא תחת הרדמה מלאה. חתוך. פתח את חלל הפריטונאום ואת בית החזה בעזרת מספריים, והשתמש בפינצטה כדי לקלף לאחור את כלוב הצלעות ולחשוף את חלל בית החזה. אחז ברקמת הריאה והרם בעדינות את הלב בעזרת מספריים קמורות.חתכו את כלי הדם הגדולים מאחורי הלב והמשיכו באיטיות לכיוון ראש העכבר עד שהלב יהיה חופשי. עצרו מיד את פעולת הלב בבופר KH קר מאוד (קרח). השאירו את האיברים על קרח והוציאו במהירות את הריאות.זהו את אונוי הטימוס וקלפו אותם בעדינות לאחור כדי לחשוף את האאורטה. לאחר מכן, הסירו את הטימוס. לבסוף, בודדו את האאורטה על ידי הסרה זהירה של כל רקמה סביבה.באמצעות פינצטות מיקרו-תפרים, החזיקו בדרך כלל את שני דפנות האורטה כדי לחשוף את הלומן. לאחר מכן, הניחו בזהירות את האורטה על הקנולה. זו עשויה מצינור פוליאתילן בעל קוטר חיצוני של 0.965 millimeter.החזק את האורטה במקומה בעזרת תפס מיקרו-כלי דם וקשור במהירות תפרים מסביב לאורטה. לאחר קשירת התפרים, הסר את התפס. השתמש בפינצטה כדי לוודא בזהירות שהקנולה נמצאת מעל שורש האורטה.הוסיפו קשירות נוספות ככל שנדרש כדי להחזיק את הלב במקומו. הסירו רקמות עודפות באמצעות הפינצטה והמספריים המיקרוסקופיות. לאחר מכן, בצעו חתך קטן בתוך העלייה השמאלית.החזק את הלב בעדינות והחדר בזהירות צינור פוליאתילן בקוטר חיצוני של 0.61 millimeter דרך העלייה השמאלית, חלל החדר השמאלי, והוצא אותו דרך השיא (apex). גזור את עודפי הצינור. לאחר מכן, החדר בלון לא מנופח ומלא במים דרך העלייה אל החדר השמאלי.קבעו את הבלון במקומו באמצעות סרט דביק. לאחר מכן, הגבירו בהדרגה את מהירות משאבת הפריסטלטיקה כדי לספק זרימה מספקת ללב. המשיכו בביצוע פרפוזיה ללב עם בופר KH בזרימה קבועה השקולה לכ-2 mL לדקה, עד להנחת הלב בתוך גשש ה-NMR.נפחו את בלון ה-LV בנפח קטן באמצעות מזרק מיקרומטרי כדי לוודא שמתמר הלחץ של ה-LV פועל עבור ספקטרוסקופיית NMR. ראשית, הכניסו בזהירות את הלב לתוך מבחנה NMR של 10 מילימטר. ספינר רחב מוצב סביב מבחנת ה-NMR כדי לסייע בהכוונת המבחנה למקום הנכון.בתוך הגשושית, הצמד בחוזקה את כל המערך אל חבל הטבור באמצעות סרט דביק. לאחר מכן, הורד לאט את חבל הטבור אל תוך החור העליון של המגנט עד שצינור ה-NMR המכיל את הלב יימצא בתוך הסליל של גשושית ה-NMR בקוטר 10 millimeter. ברגע שהלב נמצא במיקום הנכון בתוך הגשושית, כוונן את ספיקת משאבת העזר כדי להשיג לחץ פרפוזיה של 80 millimeters of mercury.שמרו על לחץ הפרפוזיה על ידי הפעלת מנגנון השמירה (hold) בבקר המשאבה. אפשרו תקופת שיווי משקל של 15 עד 20 דקות עבור הלב. במהלך תקופת שיווי המשקל, כווננו את נפח בלון ה-LV כדי להשיג לחץ דיאסטולי סופי של 8 עד 10 millimeters of mercury.לאחר מכן, בצעו אופטימיזציה לפרמטרי הספקטרומטר על מנת להשיג את אות הפספורס הטוב ביותר האפשרי. כיילו את מכשיר ה-NMR על ידי הגדרת פולס הרדיו, כך שיתאים לתדר שבו הגרעין של הפספורס מהדהד. לאחר תקופת ההשתוויינות, בצעו shim לדגימה כדי להפוך את השדה המגנטי להומוגני.התחל רכישה של מספר ספקטרומי P 31 NMR. תקופת הרכישה עבור כל ספקטרום תלויה בעוצמת השדה של המגנט, בגודל הדגימה וביחס אות לרעש הנדרש עבור ניסוי ספציפי. כאן הספקטרומים מתקבלים באמצעות מגנט של 14 Tesla על ידי מיצוע האות שהתקבל מ-256 פולסי תדר רדיו של 20 microseconds עם זווית הפיכה של 60 מעלות והשהיות של 2.0 seconds.ניסוי זה יארך כ-10 דקות. מדד טיפוסי לתפקוד לבבי, הלחץ המפותח בחדר השמאלי (LV developed pressure), מתקבל על ידי חיסור הלחץ הדיאסטולי הסופי או EDP מהלחץ הסיסטולי. בעכבר C 57 black six רגיל, הלחץ המפותח ב-LV של הלב נע בדרך כלל בין 100 ל-110 millimeters of mercury בלחץ דיאסטולי סופי קבוע של 8 עד 10 millimeters of mercury.מוצגות עקומות עיצוב מייצגות מעכברי ביקורת ומעכברים עם קשירה של אבי העורקים (aortic banded). תפקוד סיסטולי מיוצג על ידי הלחץ המפותח ב-LV כפונקציה של נפחי LV עולים, כפי שנקבע על פי נפח בלון ה-LV. תפקוד דיאסטולי מיוצג על ידי EDP כפונקציה של נפחי LV עולים.ספקטרום NMR של P³¹ של לב עכבר בבידוד פרפוזיה מספק אותים של פוספוקריאטין (PHOSPHOCREATINE) או PCR, שלושת הפוספטים מ-TP ופוספט אנאורגני או pi. כאן, פיסגת ה-PI קטנה יחסית. זהו מצב טיפוסי ללב בפרפוזיה אירובית המוזן בפירובט או בחומצות שומן.בנוסף לגלוקוז במהלך תקופות של איסכמיה, שיא זה עולה בעוד ששיא ה-PCR יורד. הרגע הצגתי בפניכם כיצד להכין לב של עכבר לפרפוזיה, כך שניתן למדוד בו-זמנית הן את התפקוד הלבבי והן את האנרגטיקה במהלך הניסוי. חשוב לוודא שהלב מקבל פרפוזיה נאותה.אחרת, נתוני ה-NMR שלכם לא יהיו מהימנים. זהו זה. תודה ובהצלחה בניסוייכם.

assessment-cardiac-function-energetics-isolated-mouse-hearts-using

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

עבודה זו מתארת ​​את הנהלים הבסיסיים של פולשנית חיה MRI קטן...

פולשנית In vivo קטנים בעלי חיים MRI ו MRS: הפרוצדורות בסיסי

המטרה היא לפקח על המדינה חמזור המיטוכונדריה של לבבות בודדים בהקשר של preload פיזיולוגי ולחצים afterload. הלב biventricular לעבוד במודל ארנבת מוצג. רזולוציה גבוהה spatiotemporal הקרינה הדמיה של NADH משמש כדי לפקח על מצב חמזור המיטוכונדריה של הרקמה epicardial.

NADH Fluorescence הדמיה של Biventricular מבודדת עבודה לבבות ארנב

מחקר זה מדגים את ההקמה המוצלחת של הדמיית מיקרוסקופיה תהודה מגנטית ככלי לא פולשני להערכת הפרעות לב בעכברים הסובלים מדלקת שריר הלב האוטואימונית.  הנתונים מצביעים על כך שניתן להשתמש בטכניקה כדי לעקוב אחר התקדמות המחלה בבעלי חיים חיים.

הערכה לא פולשנית של לב חריגות בניסויית אוטואימוניות דלקת שריר לב על ידי תהודה מגנטית מיקרוסקופית הדמיה בעכבר

שיטה זו מתארת את השימוש בטומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת קוונטית (MicroCT) כדי להעריך את המורפולוגיה הלבבית, התפקוד, הזלוף, חילוף החומרים והכדאיות עם חומר ניגוד יוד בעכברים עם איסכמיה של שריר הלב המושרה בניסוי. ניתן ליישם את הטכניקה להדמיה אורכית לא הרסנית בתפוקה גבוהה in vivo של מודלים שונים של בעלי חיים של מחלות לב אנושיות.

In vivo כמותי הערכת מבנה שריר הלב, תפקוד, זלוף ואת הכדאיות שימוש טומוגרפיה לב מיקרו שחושב

כאן אנו מציגים שיטה לשימוש צנתר אופטי פנים-חדר בלבבות מעשה כדי לבצע ספקטרוסקופיה ספיגת על פני קיר הלב. הנתונים שהושגו מספק מידע חזק על מתח החמצן ברקמות, כמו גם ניצול מצע ופוטנציאל הממברנה במקביל עם ביצועים מדדים לב בהכנה זו בכל מקום.

מהצד הפנים-לב-אש קטטר אור עבור ניטור מטבוליזם הסלולר באמצעות בליעה בספיגת העבר של הלבבות המגברים

מחקר זה מתאר פרוטוקול הדמיית תהודה מגנטית לב וכלי דם מקיפה (CMR) כדי לכמת את הפרמטרים התפקודיים של החדר השמאלי של לב העכבר. הפרוטוקול מתאר רכישה, לאחר עיבוד וניתוח של תמונות CMR, כמו גם הערכה של פרמטרים תפקודיים לב שונים.

כימות של תפקוד החדר השמאלי של לב העכבר, זן שריר הלב וכוחות המודינמיים על ידי הדמיית תהודה מגנטית לב וכלי דם

אנו מתארים מערך ניסיוני לניהול מטבוליטים היפרפולריים 13בעלי תווית C במצב זילוח רציף ללב עכבר מבודד ומחורר. גישה ייעודית לרכישת 13C-NMR אפשרה לכמת את פעילות האנזים המטבולי בזמן אמת, וניתוח מולטי-פרמטרי של 31P-NMR איפשר לקבוע את תכולת ה-ATP וה-pH של הרקמה.

חקירת חילוף החומרים הלבבי בלב עכבר מבודד עם היפרפולריזציה [1-13C] פירובט וספקטרוסקופיית NMR 13C/31P

הפרוטוקול הנוכחי מתאר השגת הקשר לחץ-נפח באמצעות קצב טרנס-וושט, המשמש כלי רב ערך בהערכת תפקוד דיאסטולי במודלים עכבריים של אי ספיקת לב.

הליך מבוקר קצב להערכת תפקודים דיאסטוליים תלויי קצב לב במודלים של אי ספיקת לב מורין

מאמר זה מתאר את ההליכים להשתלת הידרוג'ל חדשני בלב כושל וכימות השפעתו על לחץ קיר חדר שמאלי ותפקוד. נהלים אלה יושמו בהצלחה בכלבים ובבני אדם.

ירידה במתח וול חדר שמאלי ושיפור בתפקוד בכישלון לבבות באמצעות Algisyl-LVR

לעומת זאת תהודה מגנטית לב משופרת (CMR) מאפשרת...

הערכה של תפקוד לב ומורפולוגיה שריר הלב באמצעות שחזור קטן בעלי חיים תראו-הלבשה היפוך (SALLI) בדיקת MRI בחולדות

למדו הערכת אנרגטיקה לבבית בלבבות עכבר מבודדים באמצעות ספקטרוסקופיית 31P NMR. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת אחר תפקוד לבבי ותכולת פוספטים בעלי אנרגיה גבוהה.

הערכה של תפקוד הלב Energetics בלבבות עכבר בודדות שימוש³¹ P NMR ספקטרוסקופיה

גלה סרטונים נוספים