Name: מיקוד של מבנים מוחיים עמוקים עם Microinjections עבור משלוח של תרופות, וקטורים ויראליים, או השתלת תאים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-01T16:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: למדו שיטת מיקרו-הזרקה מדויקת למבנים מוחיים עמוקים באמצעות מחטי זכוכית בקוטר 50 מיקרומטר. טכניקה זו מפחיתה נזק מוחי ומאפשרת מסירה ממוקדת של תרופות, וקטורים ויראליים או השתלות תאים במודלים של מכרסמים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

OG-P נתמך על ידי מענק של CONACyT (CB-2008-101476) ו FRABA (686/10). AQ-H נתמך על ידי המכון הלאומי לבריאות בארה&quot;ב, הווארד יוז רפואי במכון, רוברט ווד ג&#39;ונסון קרן וקרן תא גזע מרילנד.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את מחטי הזכוכית לפני הניתוח העכבר: <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את שפופרת זכוכית נימי ב חולץ micropipette. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את האמצעי של צינור זכוכית כדי לרכך את שפופרת זכוכית באזור מקומי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למתוח את שפופרת זכוכית לאורך ציר האורך שלה על ידי מרחק ראשונית מספיק כדי לגרום לירידה בקוטר של צינור זכוכית באזור מקומי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור מתיחת שפופרת זכוכית עד שהיא נשברת. בדרך זו, שתי מחטים זהה חבית בודדת מתקבלים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את המחט זכוכית microforge. זווית 30 מעלות זה מספיק כדי שפוע קצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק תחת מיקרוסקופ כי מחט לכל הקוטר הפנימי הנכון. במשך רוב התרופות הידרופילי בקוטר 30-50 מיקרומטר פנימי אידיאלי (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו את המחט עם שמן מינרלי מהקצה הרחב ביותר של מחט זכוכית. בואו כי שמן מינרלי (MSDS, חתול. M7700) נכנס ידי קפילריות עד שהוא מגיע ~ 50% אורך הצינור נימי. שים גבוהה ואקום שומן (Dow Corning, חתול. 05054-AB) סביב הבוכנה לאטום את סוף רחב של המחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הבוכנה עד סוף רחב של המחט ולדחוף שמן מינרלי בעדינות עד טיפה קטנה של שמן נראה יוצא של קצה המחט זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את מחט זכוכית בעל microinjector. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם Avertin 2.5% (2,2,2-tribromoethanol + טרט-אמיל אלכוהול, 01:01 w / v). Dosis 25-30μL לכל intraperitoneal גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימי כרית חימום על המכשיר stereotactic לשמור על טמפרטורת הגוף של בעל החיים ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום ומאובטח ראש עכבר במכשיר stereotactic באמצעות מוטות האוזן בעל שיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקו את הראש עם העכבר פתרון 0.1% chlorhexidine gluconate, ואחריו 70% אתנול ו gluconate chlorhexidine 0.1% בפעם השנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את העור עם להב כירורגי # 15 מהאוזניים העכבר לקו הגולגולת Lamba. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפולנים את הגולגולת עם חילופי כותנה לייבש אותו ולמשוך העור מתוך בתחום כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קצה המחט זכוכית להצביע על הקודקוד של תפר גבחת. יש לך להגדיר את המיקום הראשוני של מזרק (לתאם "אפס"). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הצבע לקידוח ידי הזזת "X" ו - "Y" ציר של המכשיר stereotactic על הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקדחה בזהירות רבה חורים לתאם שנבחר. Microdrills וכלי מתכת אחרים עוקרו בעבר ב 250 מעלות צלזיוס למשך 60 שניות עם כוס יבש חרוז מעקר (קול פאלמר, חתול. מס 'EW-10779-00). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים בסדר להסיר בזהירות את השכבה העמוקה ביותר של עצם לשבור את קרום duramatter (תראה כמה נוזל השדרה מוחין דולף החוצה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא מחט יכול לעבור חורים שנקדחו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 1 μl של התרופה אתה רוצה להזריק והניח אותו על חתיכה קטנה של parafilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את parafilm על הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמצצי את התרופה על ידי מסובב את הגלגל microinjector, בעוד לך לבדוק תחת מיקרוסקופ כי הנוזל הולך לתוך מחט זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את parafilm מחדש להגדיר את לתאם אפס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את המחט עד הקואורדינטות שנבחרה, מחזיק מטה עד קצה מחט זכוכית בעדינות לגעת במשטח המוח להגדיר את "Z" לתאם אפס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הציגו את המחט לתוך כוס parenchyma המוח בעומק שנבחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את התרופה באיטיות בקצב של ~ 1 nl / sec. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר נפח רצון מוזרק, אפשר לפזר סמים לתוך parenchyma במשך 2 דקות. ואז להמשיך להוציא את המחט בצורה חלקה לאט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבק את הפצע כירורגי ולהסיר את החיה מהמכשיר stereotactic ולשים את חיה בכלוב מחומם מראש ובו מיטה נקייה להתאוששות הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לספק שיכוך כאבים שלאחר הניתוח חיות קיבלו 5 מ"ג / ק"ג תת עורית Ketorolac כל שעה 12 ל 24 ח </li></ol> נציג תוצאות: כאשר בעקבות פרוטוקול זה, הזרקה מדויקת מאוד מתקבל ומסלול מחט צר מאוד מצמצם פגיעה מוחית. כתוצאה מכך נציג של שיטה זו, אנו מזריקים lysophosphatidyl כולין (lysolecithin) לתוך כפיס המוח שמייצר demyelination של קטעי החומר הלבן 1-4. כדי למזער את הפגיעה המוחית המיוצר על ידי מחט זכוכית, אנו מזריקים רק 20 nl של lysolecithin אל כפיס המוח, אבל אם כרכים גבוה ככל הנדרש 200 nl יהיה ניתן להזריק בשיטה זהה. Demyelination הוא זוהה על ידי הנעדר של ביטוי חלבון המיאלין הבסיסי קטעי החומר הלבן (איור 2). <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. מחט זכוכית בקוטר של 50 מיקרומטר. מרחק בין שתי קרציות קצרבסולם מייצג באורך 50 מיקרומטר. <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> 2. איור Lysolecithin הזרקת כפיס המוח. Demyelination מוצג ביטוי לא חלבון המיאלין הבסיסי (שטח מקווקו). שים לב גודל קטן בדרכי מחט זכוכית (חיצים). בר = 100 מיקרומטר

<ol><li>Menn, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+of+oligodendrocytes+in+the+subventricular+zone+of+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain.</a> J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+Growth+Factor+Induces+the+Progeny+of+Subventricular+Zone+Type+B+Cells+to+Migrate+and+Differentiate+into+Oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes.</a> Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).</li>
<li>Hall, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+aspects+of+remyelination+after+demyelination+produced+by+the+intraneural+injection+of+lysophosphatidyl+choline%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline.</a> J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).</li>
<li>Webster, G. R., Thompson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+presence+of+lysolecithin+in+nervous+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues.</a> Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).</li>
<li>Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subventricular+Zone+Astrocytes+Are+Neural+Stem+Cells+in+the+Adult+mammalian+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain.</a> Cell. 97, 1-20 (1999).</li>
<li>Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGF+converts+transit-amplifying+neurogenic+precursors+in+the+adult+brain+into+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells.</a> Neuron. 36, 1021-1034 (2002).</li>
<li>Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+seizures+by+transplantation+of+cortical+GABAergic+interneuron+precursors+into+Kv1.1+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).</li>
<li>Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+cell+transplantation+for+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurg+Focus%22%5BJournal%5D)">Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy.</a> Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).</li>
<li>Alvarez-Dolado, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+inhibition+modified+by+embryonic+neural+precursors+grafted+into+the+postnatal+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain.</a> J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

שיטה הראו בסרטון הזה הוא מאוד שימושי כדי לספק את רוב סמים או וקטורים ויראליים למקומות מאוד מדויק לתוך המוח. חלק מן היתרונות העיקריים של השיטה הזו הן אמינות של נקודת המיקוד, את הדיוק של זריקות ואת גודל קטן של פגיעה מוחית ולנזק בדרכי 1, 2, 5, 6. לאחר הטכניקה היא סטנדרטית את טווח Mistargeting צריך 50 מיקרומטר או פחות 1, 2. השתלות תאים יכול להעשות גם באמצעות הרחבה, 100-150 מיקרומטר 7-9, מחטים. מסירה תאים יעיל לכן ניתן להפקיד לתוך ספציפיים מאוד מזעור הנ...

<table><tbody><tr><td>צינורית זכוכית קפילרית</td><td>Wiretrol I</td><td>5-000-1001</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר למשכה של מיקרופיפטות</td><td>Kopf Instruments</td><td>דגם 730</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-פורג' (Microforge)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>דגם 48000</td><td></td></tr><tr><td>שמן מינרלי</td><td>גיליון בטיחות חומרים (MSDS)</td><td>M7700</td><td></td></tr><tr><td>גריס לוואקום גבוה</td><td>Dow Corning</td><td>05054-AB</td><td></td></tr><tr><td>הרדמה: 2.5% Avertin</td><td></td><td></td><td>2,2,2-טריברומו&amp;#8211;אתנול + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v</td></tr><tr><td>פד חימום</td><td>Mastex</td><td>דגם 900</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקטי</td><td>Kopf Instruments</td><td>דגם Kopf-900</td><td></td></tr><tr><td>להב סכין כירורגי מס' 15</td><td>Medi-Cut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקדח מיקרו (Micro driller)</td><td>מקדח מיקרו אידיאלי</td><td>67-1000</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה עדינה</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-&amp;mu;מיקרופיפט L</td><td>Rainin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>ואסיוקופייה באמצעות מערכת Contraves</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מזרק</td><td>Narishige International</td><td>דגם MO-10</td><td></td></tr></tbody></table>

מיקוד של מבנים מוחיים עמוקים עם microinjections עבור משלוח של תרופות, וקטורים ויראליים, או השתלת תאים

Targeting of Deep Brain Structures with Microinjections for Delivery of Drugs, Viral Vectors, or Cell Transplants

Microinjections parenchyma לתוך המוח הם הליכים חשובים כדי לספק תרופות, וקטורים ויראליים או השתלות תאים. הנגע במוח מחט הזרקת מייצרת במהלך מסלולו הוא החשש העיקרי במיוחד במוח העכבר לא רק המוח הוא קטן, אבל גם לפעמים זריקות מרובות נדרשים. אנחנו מראים כאן שיטה לייצר מחטים נימי זכוכית עם 50 מיקרומטר לומן אשר מפחית באופן משמעותי את הנזק המוחי ומאפשרת מיקוד מדויק לתוך המוח מכרסמים. שיטה זו מאפשרת משלוח של בנפחים קטנים (20-100 nl), מפחיתה את הסיכון לדימום, וממזער דיפוזיה פסיבית של תרופות לתוך parenchyma המוח. באמצעות גודל שונים של צינורות זכוכית נימי, או שינוי לומן מחט, מספר סוגים של חומרים ותאי ניתן להזריק. Microinjections עם צינור זכוכית נימי מייצגים שיפור משמעותי טכניקות ההזרקה והמוח עמוק מיקוד עם נזק סביבתי מינימלי מכרסמים קטנים.

במאמר זה, אנו מציגים שיטה להפוך מחטים נימי זכוכית עם לומן 50 מיקרומטר. טכניקה זו מפחיתה באופן משמעותי את הנזק המוחי, ממזער דיפוזיה פסיבית של תרופות ומאפשרת מיקוד מדויק לתוך המוח מכרסמים.

מיקוד של מבנים מוחיים עמוקים עם Microinjections עבור משלוח של תרופות, וקטורים ויראליים, או השתלת תאים

מיקרו-הזרקות לסרט המוח (brain parenchyma) הן פרוצדורות חשובות להחדרה של תרופות, וקטורים נגיפיים או השתלות תאים. נגע המוח שנוצר בעקבות...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבצע הזרקות מיקרו מדויקות מאוד למבנים עמוקים במוח לצורך הובלה של תרופות, וקטורים ויראליים או השתלות תאים. מטרה זו מושגת תחילה על ידי ייצור מחטי קפילריה מזכוכית בעלות lumen של 50 micrometer. השלב השני של ההליך הוא מילוי של 50% מהמחט בשמן מינרלי באמצעות קפילריות והכנסת הבוכנה דרך הקצה הרחב של הצינור.השלב השלישי של הפרוצדורה הוא טעינת המחט בחומר או בתרחיף התאים שברצונך להזריק. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא החדרת קצה המחט והזרקת החומר בקצב זרימה נמוך מאוד אל תוך מבנה עמוק במוח. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות דיוק גבוה במיקוד של חומרים במוח באמצעות מיקרו-הזרקות עם צינור קפילרי מזכוכית.שלום, אני אוסקר גונזאלס מהמעבדה למדעי העצבים בבית הספר לפסיכולוגיה באוניברסיטת קולימה, מקסיקו. היום נראה לכם הליך לביצוע מיקרו-הזרקה באמצעות צינור קפילרי מזכוכית להחדרת תרופות למוח של עכבר. אנו משתמשים בהליך זה במעבדה שלנו כדי לחקור תאי גזע עצביים בבגרות.אם כן, בואו נתחיל. שימוש במחטי קפילריה מזכוכית עם חלל פנימי (lumen) של 50 מיקרומטר להזרקות מיקרוסקופיות לתוך המוח מפחית משמעותית את הנזק המוחי, ממזער דיפוזיה פסיבית של תרופות ומאפשר דיוק במיקוד ההזרקה במוח של מכרסמים. לפני שניתן לבצע את ההזרקות המיקרוסקופיות, יש להכין את מחטי הזכוכית.התחילו בהנחת צינורית זכוכית קפילרית לתוך אלקטרודה בעלת התנגדות גבוהה למשיכה של מכשיר למשיכת מיקרו-פיפטות. לאחר מכן, הפעילו את האלקטרודה של המכשיר. כדי לחמם את מרכז צינורית הזכוכית ולהרכיב אותה מקומית, מתוחו את צינורית הזכוכית לאורך הציר האורכי שלה במרחק ראשוני של שלושה עד חמישה מילימטרים, באופן המספיק כדי לגרום להפחתה בקוטר צינורית הזכוכית באזור הממוקד.המשיכו במתיחת צינור הזכוכית עד לשבירה. חזרו על שלבים אלו כדי ליצור שתי מחטים בעלות חבית בודדת וזהות. כעת, הניחו את מחטי הזכוכית בתוך כבשן מיקרו (micro forge).זווית של 30 מעלות מספיקה כדי לשייף את הקצה. לבסוף, הניחו את המחטים תחת המיקרוסקופ ובדקו שלשתיהן יש את הקוטר הפנימי הנכון. עבור רוב התרופות ההידרופיליות, קוטר פנימי של 30 עד 50 micrometer הוא אידיאלי עבור המחטים שהוכנו.בואו נראה כיצד להשתמש בהן להזרקות מיקרוסקופיות. ראשית, מלאו את המחט שהוכנה בשמן מינרלי מהקצה הרחב ביותר. הניחו לשמן המינרלי להיכנס באמצעות קפילריות עד שיגיע לכ-50% מאורך צינור הקפילריה.מרחו גריז לוואקום גבוה סביב הקצה הרחב ביותר של המחט והחדירו דרכו את הבוכנה. דחפו בעדינות את השמן המינרלי עד שטיפה קטנה תצא מקצה מחט הזכוכית. כעת, קבעו את המחט במחזיק של המיקרו-מזרק והתחילו בהכנת בעל החיים להזרקה.ראשית, הניחו פד חימום על מחזיק בעלי החיים הסטריאוטקטי כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של בעל החיים. בטמפרטורה של 37 °C, גלחו את ראשו של העכבר המורדם, ולאחר מכן מקמו אותו והדקו אותו בתוך המכשיר הסטריאוטקטי. באמצעות מוטות אוזניים ומחזיק שיניים, השתמשו בסכין כירורגית כדי לבצע חתך בעור מהאוזניים ועד לקו ה-Lambda של הגולגולת.יש להבריק את הגולגולת באמצעות מקלון צמר כדי לייבשה ולהרחיק את העור משדה הניתוח. לאחר מכן, השתמש בקצה מחט הזכוכית כדי לסמן את קודקוד תפר ה-bgma וקבע שם את נקודת ההזרקה הראשונית. כעת, הגדר את הנקודה על הגולגולת שיש לקדוח בה על ידי הזזת צירי ה-x וה-Y של המכשיר הסטריאוטקטי מעל הגולגולת.בעזרת מקדחה מיקרוסקופית למחקר, קדחו בזהירות חורים בקואורדינטות הנבחרות באמצעות פינצטה עדינה. הסירו בזהירות את שכבת העצם העמוקה ביותר והפריצו את קרום העטיפה של המוח (dura mater). תוכלו לראות מעט נוזל חוט השדרה (cerebral spinal fluid) דולף החוצה.כדי לוודא שהמחט יכולה לעבור דרך החורים שקדוחו, הורד lang="he" באיטיות את מחט הזכוכית באמצעות ציר ה-Z של המכשיר הסטריאוטקטי. כעת, שאיב עם פיפטה 1 µL מהתרופה להזרקה והנח אותה על פיסת פרפום קטנה. הנח את הפרפום על הגולגולת.שאבו את התרופה על ידי סיבוב גלגל המיקרו-מזרק, תוך בדיקה דרך המיקרוסקופ שהנוזל עולה אל תוך מחט הזכוכית. הסירו את ה-parafilm ואפסו את קואורדינטת האפס. כעת העבירו את המחט לקואורדינטות הנבחרות והורידו את התפס עד שקצה מחט הזכוכית נוגע בעדינות במשטח המוח, ואפסו את ה-Z.Coordinate.החדירו את מחט הזכוכית אל פטמה של המוח (brain parenchyma) לעומק הרצוי. מזקו את התרופה באיטיות בקצב של כ-one nanoliter לשנייה. לאחר שהנפח הרצוי הוזרק, המתינו שתי דקות כדי לאפשר לתרופה להתפשט בתוך הפטמה, ולאחר מכן הוציאו את המחט בתנועה חלקה ואיטית.לבסוף, הדביקו את הפצע הכירורגי והוציאו את החיה מהמכשיר הסטריאוטקטי. העבירו את החיה לכלוב מחומם מראש להתאוששות מההרדמה. כעת נציג מספר תוצאות של מיקרו-הזרקה.lyin או Lysophosphatidylcholine הוזרקו לתוך ה-corpus callosum כדי לגרום לדמילניזציה של מסלולי החומר הלבן, במטרה למזער את הפגיעה המוחית הנגרמת מהמחט מזכוכית. הוזרקו 20 µL בלבד של lyin. הדמילניזציה באה לידי ביטוי בהיעדר ביטוי של myelin basic protein במסלולי החומר הלבן; הזרקה מדויקת מאוד הושגה, ומסלול מחט צר מאוד מזעיר את הפגיעה המוחית.הרגע הצגנו בפניכם כיצד להכין מחטי זכוכית לביצוע הזרקות מיקרוסקופיות למבנים עמוקים במוח. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להכין את כל הציוד והחומרים לשימוש בחדר הניתוח. וזהו זה.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

targeting-deep-brain-structures-with-microinjections-for-delivery

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בקרה וניתוח של מעגלים...

Scalable Fluidic Injector מערכים עבור ויראלי הכוונת של 3-D מעגלים פגוע המוח

מקור: Poland, R. et al. מיקרו-הזרקת מוח מכרסם לחקר מצעים מולקולריים של התנהגות מונעת. J. Vis. Exp. (2015)בסרטון זה, מערך מיקרו-הזרקה מלא במים המורכב ממזרק וצינורות מיקרו-מזרק משמש לאספקת תרופות מדויקת. חולדה עם צינורית הנחיה מושתלת מראש עוברת מיקרו-הזרקה ממוקדת למוח, המאפשרת מתן מדויק של חומרים טיפוליים בבעלי חיים ערים עם נזק מינימלי לרקמות.

הזרקה מבוססת מיקרו-הזרקה של חומר טיפולי למוח מכרסם ער

שיפורים אחרונים בתכשירים אורגנוטיפיים של פרוסות מוח אפשרו את ניצולם ליישומים ביוטכנולוגיים. פרוסות אורגנוטיפיות שומרות על מאפיינים מבניים מקומיים של ביולוגיה in vivo, כולל קשרים סינפטיים פונקציונליים. כאן אנו מציגים שיטת אספקה ביוליסטית רגיוסלקטיבית לתיוג ומניפולציה גנטית של פרוסות אלה.

Regioselective Biolistic המיקוד בOrganotypic פרוסות המוח באמצעות אקדח ג&#39;ין השתנה

המנגנון העומד בבסיס ההשפעות הטיפוליות של ניתוח גירוי מוחי עמוק (DBS) זקוק לחקירה. השיטות המוצגות בכתב יד זה מתארות גישה ניסיונית לבחינת האירועים התאיים המופעלים על ידי DBS על ידי ניתוח פרופיל ביטוי הגנים של גנים מועמדים שיכולים להקל על נוירוגנזה לאחר ניתוח DBS.

ניתוח שינויי ביטוי הגנים בהיפוקמפוס העכברוש לאחר Deep Brain Stimulation של Anterior התלמוס הגרעין

MicroRNAs ממלאים תפקידים מכריעים במוח ומהווים מטרות פוטנציאליות למידול ניוון עצבי. עם זאת, הפרעה ברמות ה-miRNA היא מאתגרת בשל האורך הקצר של ה-miRNA וחוסר הנגישות של רקמת המוח. סרטון זה מציג שיטה לעיצוב אנטגומיר והעברה ספציפית למוח באמצעות נוירופפטיד בעכברים.

חלופה פשוטה להזרקת stereotactic למציאה ספציפית המוח של מירנה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקת עירוי מיקרו-כירורגית של עכבר, המעבירה ביעילות חומרים ישירות למוח דרך עורק הצוואר הפנימי.

טכניקה אינפוזיה Microsurgery עכבר למשלוח ואלכוהול ממוקד לתוך מערכת העצבים המרכזית דרך עורק התרדמה הפנימי

מטרת הפרויקט היא לפתח של צינור דוגמנות אינטראקטיבי, מטופל ספציפי כדי לדמות את ההשפעה של גירוי מוחי עמוק, ליד בזמן אמת ולספק משוב משמעותי לגבי כמה התקנים אלה משפיעים על פעילות עצבית במוח.

פילוח סיבים עצביים ספינלי לטיפול גירוי מוחי עמוק באמצעות דגמים אינטראקטיביים, מטופל ספציפי

פרוטוקול זה מתאר ערכה של שיטות לזיהוי הקישוריות הפונקציונלית הספציפית של כניסות לטווח ארוך מאזורי מוח רחוקים באמצעות הגירוי בתוך המוח בפרוסות מvivo לשעבר.

בזריקות Vivo גרם סטריאוטקאית לגירוי מגנטי של תשומות לטווח ארוך בפרוסות המוח של העכבר

פרוטוקול זה מתאר את השלבים הדרושים להעברת הגן באמצעות פתיחה ממוקדת של מחסום דם במוח (BBB), הערכה של ביטוי הגנים המתקבל ומדידת פעילות נוירומודולציה של קולטנים כימוגנטיים באמצעות בדיקות היסטולוגיות.

אולטרסאונד ממוקד המושרה פתיחת מחסום דם-מוח למיקוד מבנים במוח והערכת נוירומודולציה כימוגנטית

אלקטרופורציה של אורגנואידים מוחיים של פרימטים מספקת גישה מדויקת ויעילה להחדרת שינויים גנטיים חולפים לסוגי אבות ונוירונים שונים במערכת מודל הקרובה להתפתחות ניאו-קורטקס פיזיולוגי של פרימטים (פתו). זה מאפשר את המחקר של תהליכים נוירו-התפתחותיים ואבולוציוניים והוא יכול להיות מיושם גם עבור מודלים המחלה.

מיקרו-הזרקה ממוקדת ואלקטרופורציה של אורגנואידים מוחיים פרימטים לשינוי גנטי

למדו שיטת מיקרו-הזרקה מדויקת למבנים מוחיים עמוקים באמצעות מחטי זכוכית בקוטר 50 מיקרומטר. טכניקה זו מפחיתה נזק מוחי ומאפשרת מסירה ממוקדת של תרופות, וקטורים ויראליים או השתלות תאים במודלים של מכרסמים.

מיקוד של מבנים מוחיים עמוקים עם Microinjections עבור משלוח של תרופות, וקטורים ויראליים, או השתלת תאים

גלה סרטונים נוספים