ביטוי גנים באמצעות אלקטרופורציה של תא בודד בתרביות פרוסות היפוקמפוס של עכברים

התחל עם פרוסת היפוקמפוס ממוח עכבר שתורבת על תוספת תרבית בצלחת.

חותכים את התוספת המכילה את הפרוסה ומאבטחים אותה בתא אלקטרופורציה תחת מיקרוסקופ.

חדרו את החדר עם מאגר המכיל חוסם תעלות נתרן מגודר מתח כדי לעכב עירור יתר ולמנוע רעילות תאית.

מקם פיפטה המכילה פלסמידים עם הגן המעניין ליד הפרוסה.

שמרו על לחץ חיובי כדי למנוע סתימת פיפטה תוך התקרבות לנוירון מטרה בהיפוקמפוס עד שנוצרת גומת קרום.

עבור ללחץ שלילי כדי ליצור חותם עם הממברנה.

לסירוגין בין לחץ חיובי ושלילי כדי למזער את הנזק לתאים.

החל דופק אלקטרופורציה כדי לחדור את הממברנה באופן חולף, מה שמקל על כניסת פלסמיד.

משוך את הפיפטה תוך שמירה על לחץ חיובי, וחזור על אלקטרופורציה עבור נוירוני מטרה שכנים.

העבירו את הפרוסה החשמלית לתוספת טרייה ודגרו עליה כדי לאפשר ביטוי של הגן המעניין.

כדי להכין תרביות פרוסות לאלקטרופורציה, העבירו את תוספות התרבות המעניינות לצלחות פטרי בודדות של שלושה סנטימטרים עמוסות ב-900 מיקרוליטר של מדיום תרבית, והניחו את התרביות בחממת פחמן דו חמצני על השולחן. לאחר מכן, תוספות תרבית טרייה לפני הדגירה עם מיליליטר אחד של מדיום תרבית פרוסות לכל תוספת בצלחת פטרי של 3.5 סנטימטר למשך 30 דקות לפחות, ועיקרו את קווי אסדת האלקטרופורציה עם 10% אקונומיקה למשך חמש דקות.

בתום הזילוף, שטפו את הקווים במים המיוננים למשך 30 דקות לפחות לפני החדרה עם aCSF מ