Name: Hyperinsulinemic-Euglycemic קלאמפ של עכברוש המודע (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-07T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 12 s
Description: למדו את שיטת הקלאמפ ההיפר-אינסולינמי-אאוגליקמי להערכת רגישות לאינסולין בעכברושים ערים וחופשיים. שיטה זו מאפשרת מדידה ישירה של קצבי סילוק גלוקוז בגוף כולו ברמות אינסולין פיזיולוגיות גבוהות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מכוני הבריאות הקנדי למחקר הגנום Canada.JS מחזיק תמיכה משכורת פרסים מן המחקר למורשת אלברטה רפואי Foundationfor, לב ושבץ קרן של Canadaand איגוד הסוכרת הקנדית. תודה מיוחדת לד&quot;ר דוד וסרמן Bracy Bingle להוראת נוהל זה למעבדה שירר.

<ol><li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+to+basal+and+insulin-stimulated+skeletal+muscle+glucose+uptake+in+the+high-fat-fed+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).</li>
<li>Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+to+muscle+glucose+uptake+due+to+high+fat+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding.</a> Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).</li>
<li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo%3A+advantages%2C+limitations%2C+and+appropriate+usage%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).</li>
<li>Cho, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+and+a+diabetes+mellitus-like+syndrome+in+mice+lacking+the+protein+kinase+Akt2+%28PKB+beta%29%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta).</a> Science. 292, 1728-1731 (2001).</li>
<li>Dubois, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+SHP-1+protein+tyrosine+phosphatase+negatively+modulates+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis.</a> Nat Med. 12, 549-556 (2006).</li>
<li>Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+to+glucose+tolerance+of+insulin-independent+vs.+insulin-dependent+mechanisms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).</li>
<li>Herbach, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dominant-negative+effects+of+a+novel+mutated+Ins2+allele+causes+early-onset+diabetes+and+severe+beta-cell+loss+in+Munich+Ins2C95S+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice.</a> Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).</li>
<li>Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet-induced+insulin+resistance+in+mice+lacking+adiponectin%2FACRP30%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.</a> Nat Med. 8, 731-737 (2002).</li>
<li>Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+spontaneously+hypertensive+rats+with+rosiglitazone+and%2For+enalapril+restores+balance+between+vasodilator+and+vasoconstrictor+actions+of+insulin+with+simultaneous+improvement+in+hypertension+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance.</a> Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).</li>
<li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li>
<li>Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lost+in+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Lost in translation.</a> Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).</li>
</ol>

נהלים אושרו על ידי האוניברסיטה של ​​טיפול בבעלי חיים קלגרי השתמש הוועדה לציית האגודה הקנדית למדעי המעבדה מנחים בעלי חיים לניסויים. המחברים אין אינטרסים מנוגדים או גילויים.

פיתחה בתחילה לחקירה של הרגישות לאינסולין אצל בני אדם, ההליך מהדק עתה מותאם מינים אחרים כולל חולדות מעבדה ועכברים. במודלים של בעלי חיים חקירות של תנגודת לאינסולין מספק סיוע משמעותי בהבנת הפתופיזיולוגיה של רגישות לאינסולין פתולוגיות הקשורות כמו גם זיהוי התערבויות טיפוליות כי יש 1,2 ערך קליני. מספר שיטות להערכת הרגישות לאינסולין אצל בעלי חיים כבר מועסק 3. טכניקות אלה כוללות וריאציות של בדיקות סבילות לגלוקוז (GTTs) וסובלנות בדיקות אינסולין (ITTs) 4-6, ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr valign="top"><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות (אופציונלי) </td></tr><tr valign="top"><td> Tubing Intramedic פוליאתילן (PE-50) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 14-170-12B </td><td> קוטר פנימי של 0.58 מ&quot;מ (0.023 &quot;) x קוטר חיצוני של 0.965 מ&quot;מ (0.038&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Dow Corning Silastic Tubing מעבדה </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 11-189-15C </td><td> קוטר פנימי של 0.76 מ&quot;מ (0.030 &quot;) x קוטר חיצוני של 1.65mm (0.065&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Tygon S-50-HL רפואי Tubing </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> PY2 72-1251 </td><td> קוטר פנימי של 3.2mm (0.125 &quot;) x קוטר חיצוני של 4.7mm (0.1875&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Loctite Super Glue </td><td> Grand &amp; Toy </td><td> 32237 </td><td> ג&#39;ל בקרה </td></tr><tr valign="top"><td> להב כירורגי סטרילי </td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Curved מלקחיים הביתור Micro </td><td> ג&#39;ורג&#39; Tiemann ושות&#39; </td><td> 160-20 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> מלקחיים הביתור מיקרו סטרייט </td><td> ג&#39;ורג&#39; Tiemann ושות&#39; </td><td> 160-15 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Curved Hemostat </td><td> ג&#39;ורג&#39; Tiemann ושות&#39; </td><td> 105-1135 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> סטרייט Hemostat </td><td> ג&#39;ורג&#39; Tiemann ושות&#39; </td><td> 105-1130 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> עצה Hemostat משמרות </td><td> רובינס מכשירים, Inc </td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> כירורגיה מספריים סטרייט </td><td> ג&#39;ורג&#39; Tiemann ושות&#39; </td><td> 105-402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECT Multi-Sample Luer מתאם </td><td> Terumo מוצרים רפואיים </td><td> 810127A </td><td> 21 מד, 1 פנימה </td></tr><tr valign="top"><td> צנתר סטרילי ההיכרויות </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14 מד בלאנט מחט </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 511310 </td><td> 14 מד, 2 פנימה </td></tr><tr valign="top"><td> תפר כירורגי סטרילי </td><td> ג&#39;ונסון &amp; ג&#39;ונסון מוצרים רפואיים </td><td> 1679H </td><td> משי, בגודל 3-0 </td></tr><tr valign="top"><td> לא סטריליים כירורגי תפר </td><td> Angiotech Pharmaceuticals, Inc </td><td> SP116 </td><td> משי, בגודל 4-0 </td></tr><tr valign="top"><td> ספוגיות כותנה </td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> גזה רפידות 4ply </td><td> VWR </td><td> CA43845-062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> בעלי חיים קטנים קליפרס Cordless </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Isoflurane </td><td> Halocarbon מוצרים קורפ </td><td> IPN-45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> הרדמה לעגלה </td><td> בנסון תעשיות רפואיות בע&quot;מ </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 70% אתנול </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> HC-1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> אנטיספטי בבטאדין פתרון </td><td> הפצה המערבי והתרופות מרכז בע&quot;מ </td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> דגם 11 פלוס משאבת מזרק </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubing נירוסטה מצמדים </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 72-4434 </td><td> 23 מד, 0.3 פנימה </td></tr><tr valign="top"><td> Tubing נירוסטה Plugs </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 72-4436 </td><td> 23 מד, 0.5 פנימה </td></tr><tr valign="top"><td> נירוסטה בלאנט מחטים </td><td> Instech Laboratories, Inc </td><td> LS22 </td><td> 22 מד </td></tr><tr valign="top"><td> 60 תואר ה-Y מחברים </td><td> חלקים קטנים </td><td> STCY-22-05 </td><td> 22 מד </td></tr><tr valign="top"><td> CritSpin Micro-המטוקריט צנטריפוגה </td><td> איריס עיבוד המדגם </td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> מיני צנטריפוגה </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> צנטריפוגה צינורות Micro </td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 50 מ&quot;ל צנטריפוגות צינורות פוליפרופילן </td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 1ml פלסטיק עצה סליפ מזרקים </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 3ml פלסטיק Luerlok מזרקים עצה </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> קרישה הפארין בהזרקה </td><td> הפצה המערבי והתרופות מרכז בע&quot;מ </td><td> 102824 </td><td> יצרן: ליאו פארמה בע&quot;מ קונצרט כלשהו. 1000 IU </td></tr><tr valign="top"><td> EDTA פתרון </td><td> Promega קורפ </td><td> V4231 </td><td> 0.5 מ &#39;, pH 8.0 </td></tr><tr valign="top"><td> מלוח </td><td> הפצה המערבי והתרופות מרכז בע&quot;מ </td><td> ABB7983154 </td><td> יצרן: נתרן כלוריד Hospira 0.9% </td></tr><tr valign="top"><td> 50% דקסטרוז </td><td> Vetoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Humulin-R </td><td> אלי לילי </td><td> HI-210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> אינסולין מזרקים 1ml </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * המטו-Seal איטום </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 02-678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Microhematocrit צינורות נימי </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra רצועות הבדיקה </td><td> LifeScan, Inc </td><td> AW 085-314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> אחת דם Ultra Touch גלוקוז Meter </td><td> LifeScan, Inc </td><td> 085 AW-314B </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Pentobarbitol נתרן </td><td> Ceva סנטה Animale </td><td> 1715 138 </td><td> קונצרט כלשהו. 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td> האדום מעבדה Tape תיוג </td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> סימון כחול מעבדה Tape </td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> לשקול את סולם </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> מערבולת </td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> שעון עצר </td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hyperinsulinemic-euglycemic קלאמפ של עכברוש המודע

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

סוכרת מסוג 2 (T2D) במהירות העולה שכיחות. מאופיין בייצור אינסולין או לקוי או חוסר היכולת לנצל מיוצר אינסולין, התוצאות T2D ברמות גלוקוז גבוהות בדם. &quot;תקן הזהב&quot; בהערכת הרגישות לאינסולין הוא מהדק hyperinsulinemic-euglycemic או מהדק אינסולין. בהליך זה, אינסולין הוא החדיר בקצב קבוע וכתוצאה מכך לירידת רמת הסוכר בדם. כדי לשמור על רמת הסוכר בדם ברמה קבועה, גלוקוז אקסוגניים (D50) הוא החדיר לתוך מחזור הדם הורידי. כמות הגלוקוז חדורים לשמור על הומאוסטזיס מעיד על הרגישות לאינסולין. כאן, אנו מציגים את ההליך מהדק בסיסי החולדה צינתור כרוניים, מעצורים מודע. מודל זה מאפשר לדם להיאסף עם מתח מינימלי לחיה. בעקבות אינדוקציה של הרדמה, חתך קו האמצע הוא עשה את עורק התרדמה השמאלי משותפת וריד הנכונים צינתור. קטטר מוכנס סמוקות עם מלוחים heparinized, exteriorized אז ומאובטחת. בעלי חיים מותר להתאושש במשך 4-5 ימים לפני ניסויים, עם עלייה במשקל במעקב יומיומי. רק בעלי חיים אלה להחזיר משקל טרום ניתוח רמות משמשים לניסויים. ביום הניסוי, חולדות הם צמו ומחובר משאבות אינסולין המכיל D50. גלוקוז Baseline מוערכת מקו עורקי ומשמש אמת מידה לאורך הניסוי (euglycemia). בעקבות זאת, אינסולין הוא החדיר בקצב קבוע לתוך מחזור הדם הורידי. כדי להתאים את ירידת רמת הסוכר בדם, הוא החדיר D50. אם קצב עירוי D50 עולה על שיעור ספיגת, עלייה ברמת הגלוקוז תתרחש. באופן דומה, אם שיעור אינו מספיק כדי להתאים את ספיגת הגלוקוז בגוף כולו, ירידה תתרחש. טיטרציה של גלוקוז ממשיך עד קריאות גלוקוז יציבה מושגות. רמות הגלוקוז ואת שיעורי עירוי גלוקוז יציבה בתקופה זו נרשמות ודיווח. תוצאות מספקים מדד של רגישות הגוף לאינסולין. הטכניקה יכולה להיות מעודן כדי לעמוד בדרישות הניסוי הספציפי. זה עוד יותר משופר על ידי שימוש קליעים נותבים רדיואקטיבי שיכול לקבוע אינסולין גירוי ספציפי רקמות ספיגת הגלוקוז, כמו גם המחזור כולו הגלוקוז בגוף.

מהדק hyperinsulinemic-euglycemic הוא &quot;תקן הזהב&quot; להערכת פעילות האינסולין. אינסולין הוא החדיר בקצב קבוע מגרה ספיגת הגלוקוז. כמות הגלוקוז אקסוגניים חדורים לפעול נגד זה טיפה מעיד על הרגישות לאינסולין. כאן ההליך מבוצע על חולדה, מודע מעצורים.

Hyperinsulinemic-Euglycemic קלאמפ של עכברוש המודע

השכיחות של סוכרת מסוג 2 (T2D) עולה במהירות. המחלה מאופיינת הן בייצור אינסולין בלתי מספיק והן בחוסר יכולת לנצל את האינסולין המיוצר, ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעריך רגישות לאינסולין בחולדה בהרהורי (conscious) ללא הגבלה תנועתית (unrestrained). מטרה זו מושגת תחילה על ידי השחלת קטטר לעורק הקרוטיד השמאלי. לאחר מכן, מושחל קטטר לוריד הג'וגולרי הימני כדי להבטיח תוצאות אופטימליות.שוטפים את הקטטרים מדי יום כדי לשמור על פתוחותם במהלך תקופת הבראה לאחר ניתוח שנמשכת חמישה ימים. בסופו של דבר, ניתן להפיק תוצאות מהקלמפ הגליקמי ההיפריאינסולינמי המראות שיעורי עירוי גלוקוז לגוף כולו. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לקבל מדידות ישירות של שיעורי פינוי גלוקוז מהגוף כולו ברמות אינסולין פיזיולוגיות גבוהות.יש להכין את הקטטרים העורקיים והורידיים לפני הפרוצדורה הכירורגית. על הקטטר להיות בעל קצוות קהים, להיות מלא בתמיסת מלח עם הפרין ולעבור עיקור באתנול, כאשר רצועת קשירה מחוברת היטב במרחק של 2.7 או 3.2 סנטימטרים מקצה אחד עבור קטטרים עורקיים וורידיים, בהתאמה. בפרוצדורה זו נעשה שימוש בחולדות Sprague Dawley זכרים בוגרים במשקל של כ-300 גרמים.רשמו את משקל ההתחלה של בעל החיים והשתמשו במשקל זה למעקב אחר העלייה במשקל לאחר הניתוח. עבדו באזור ניתוח סטרילי. הרדימו את החולדה באמצעות 3% isof fluorine על ידי הנחתה בתוך קופסת הרדמה.העבירו את בעל החיים הרחק מאזור הניתוח והכינו את אזור החתך על ידי הסרת שיער מסביב לצוואר ולכתפיים. לאחר הסרת השיער, הניחו את בעל החיים בקונוס לאף כדי לשמור על ההרדמה באמצעות כ-2% isof fluorine. קבעו את בעל החיים לשולחן הניתוח.יש לוודא שהחולדה נמצאת תחת הרדמה מלאה על ידי בדיקת רפלקסים של הכף או העין. נקה את אתר החתך באמצעות 70% ethanol, לאחר מכן בצע קרצוף עם Betadine, ושוב עם 70% ethanol. השלב הראשון של הפרוצדורה הוא ביצוע חתך אנכי קטן בקו האמצע, 10 millimeter מעל העצם הסטרנום (sternum).השתמשו בפינצטת מיקרו-דיסקציה קמורה כדי לבצע דיסקציה קהה של הרקמה ולהחשיף את שריר ה-sternal mastoid השמאלי. הסיטו שריר זה כדי לחשוף כסנטימטר אחד של העורק הקרוטיד השמאלי. הניחו פינצטת מיקרו-דיסקציה מתחת לעורק הקרוטיד כדי להחזיקו במקומו, תוך כדי הפרדה עדינה של רקמת חיבור.חשוב לבודד את עצב הוואגוס מהעורק מבלי לגרום נזק לעורק או לעצב. השתמשו בתפר משי סטרילי במידה 4-0 כדי לקשור את הקצה הצפלי (העליון). קבעו את כלי הדם באמצעות פינצטת מיקרו-דיסקציה משוררת.דקרו את האזור הקשור. השתמשו במתאם דגימה רב-פעמי (multis sample lure adapter) של מחט ונו-ג'קט (ven eject) בכיל 21. הסירו את פקק הפלדה אל-חלודה מהקטטר והשתמשו במנחה קטטר סטרילי כדי להחדירו אל העורק.השתמשו בפינצטה כדי לוודא שהקטטר מקובע. שחררו חלקית את פינצת המיקרו-דיסקציה, סגרו על העורק והמשיכו להחדיר את הקטטר עד לחרוז. בנקודה זו, קצה הקטטר אמור להימצא בקשת האאורטה.הדק שני תפריים מתחת לחרוז ואחד מעליו, ושטוף את הצינור עם 10 units per milliliter של סליין עם הפרין. כדי לוודא שהקתטר ידגום, חסום שוב את הקצה החיצוני של הקתטר באמצעות פקק פלדת אל-חלד. לאחר מכן, בצע דיסקציה קהה של הרקמה כדי לחשוף את הווריד jugular החיצוני הימני, בודד את הווריד בזהירות וקשור את הווריד ה-cephalic.סיימו בתפירה באמצעות תפר משי. נקבו את הווריד בעזרת מחט בכיסוי של 21 gauge. הוציאו את מתאם הדגימה הרב-דגימתי.הסר את פקק הפלדה שאינה מחלידה מהקטטר והשתמש במוליך קטטר סטרילי כדי להחדירו עד לחרוז. קבע שתי תפרים מתחת לחרוז ואחד מעליו. שטוף את הצינור עם תמיסת סלין קרה המכילה 10 units per milliliter heparin.כדי לוודא שהקטטר ידגום, יש לחסום שוב את הקצה החיצוני של הקטטר בעזרת פקק פלדת אל-חלד, להחדיר מחט קהה בכיול 14 gauge מתחת לעור, ולבצע חתך בגב בין השכמות. לאחר מכן, יש להשחיל את הקטטרים דרך המחט כך שיבלטו מגב החולדה. כ-4 cm מכל קטטר צריכים להיות גלויים.גזרו 0.5 סנטימטרים של צינור רפואי מסוג Tigon S 50 HL והניחו אותו סביב שני הקטטרים שהוצאו החוצה. קבעו אותו בעזרת סרט דביק כחול עבור הוורידים ואדום עבור העורקים. בדקו שוב את הקטטרים כדי לוודא שהם פתוחים, ולאחר מכן שטפו ומלאו אותם במי מלח עם הפרין בריכוז 150 units per milliliter למניעת קרישה.סגור את כל החתכים באמצעות תפר משי 3-0. הנח את החולדה בעמדת שכיבה על הבטן (prone position) בכלוב נקי ומחומם מראש, כאשר המזון נגיש בקלות. ברגע שהחולדה מחזירה לעצמה את יכולת התנועה והערנות המלאות, החזר אותה לכלוב המגורים.אפשרו לחולדה להתאושש במשך שלושה עד חמישה ימים, תוך ניטור יומי של זיהומים, כאבים ושינויים במשקל. חשוב לשמור על פתוחות הקטטר לאורך כל המחקר. בכל יום לאחר הניתוח, מלאו מזרקים בעלי קצה חלק (slip tip) של 1 ml במי מלח עם הפרין בריכוז של 150 units per milliliter, וסגרו אותם עם מחט קהה במידה 22 gauge.יש להחדיר את המחט הקהה לתוך 20 סנטימטרים של צינור PE 50 עם מחבר צינור פלדת אל-חלד במידה 23 gauge בקצה השני. ודאו כי כל בועות האוויר הוסרו מהקו. סגרו את קו העורק שהוצא החוצא מהחולדה באמצעות תפסים כירורגיים (hemostats), ממש מתחת לפקק.הסר את פקק קטטר הפלדה באמצעות זוג נוסף של פינצטות המוסטטיות. הכנס את מחבר הצינור המחובר למזרק אל תוך הקו העורקי ושחרר את הפינצטות ההמוסטטיות שחוסמות את הקטטר העורקי החיצוני. לאחר מכן, שאב את הדם העורקי מהקטטר אל תוך המזרק.אם הקטטר אינו שואב בקלות, ייתכן שיהיה צורך לדחוף בעדינות רבה כמות קטנה של תמיסה דרך הקטטר כדי לשחרר את הקצה. בנקודה זו הקטטר נחשב לפתוח. כאשר הדם מגיע למזרק, סגרו את צינור ה-P 50 הסמוך למזרק של 1 mL והשליכו את המזרק.החלף למזרק חדש מלא בתמיסת מלח קרה עם הפרין. שחרר את התפסן מהצינור ובזמן שהמזרק החדש מוחזק במצב אנכי, נקוש במזרק כדי להזיז בועות אוויר כלפי מעלה והרחק מהקו. הזרק תמיסת מלח עם הפרין עד שקו הקטטר יהיה נקי ונקי מדם.סגרו את קו העורק באמצעות תפס (Clamp) ממש מתחת למחבר הפיתול. הסירו את מחבר המזרק מקו הקתטר העורקי והחליפו אותו בפקק צינור מפלדת אל-חלד. שחררו את התפסים (hemostats) שחוסמים את הקתטר העורקי החיצוני.חזרו על הליך זה עבור הקו הוורידי. בשל לחץ ורידי נמוך, ייתכן שלא ניתן יהיה לבצע דגימה. באופן כללי, אם ניתן להזרים את התמיסה המלוחית ההפריניזית בהתנגדות מינימלית, סביר להניח שהקטטר ממוקם היטב בוריד.לפני תחילת הפרוצדורה, יש לשקול את החיות, להכין את התמיסות ולהרכיב את מערכת התפסנים. לאחר שקילת החיה ואישור פתוחות הקטטר, יש להניח אותה במיכל קטן עם מצע המגביל אך אינו חוסם את התנועה. החולדות המשמשות במחקר זה צמות למשך חמש שעות לפחות ועמדו בדרישות העלייה במשקל לאחר הניתוח. משקלה של החולדה קובע את כמות האינסולין הדרושה בשלב זה.מנה של ארבעה milli units לקילוגרם לדקה ניתנת בקצב של שני microliters לדקה. הכינו תמיסת dextrose בריכוז של 50% וודאו שקיימת כמות מספקת משני התמיסות שתספיק למשך כשעתיים; השתמשו במזרקים של שלושה מיליליטר. כעת ניתן להרכיב את מכשיר התקיפה.הגדירו את הצינורות ואת משאבות ההזרקה כפי שמוצג כאן. מקמו את מזרקי הגלוקוז והאינסולין על משאבת המזרקים. סגרו את הצינורות בעזרת תסמיכים ואפשרו לחולדה להירגע במשך 30 דקות לפני תחילת הניסוי.כדי להתחיל בפרוצדורה, קחו דגימת בסיס של אינסולין והמטוקריט; דגימת המטוקריט מבטיחה שנפח הדם נשמר לאורך כל הניסוי. באופן כללי, רמות ההמטוקריט לא צריכות לרדת ביותר מ-10% מהערך הראשוני. קחו דגימת בסיס של גלוקוז וקבעו את רמת הגלוקוז שיש להשמור במצב קבוע (clamp).כאן אנו מקבעים את רמת הגלוקוז בדם על 5 millimolar. לאחר כל דגימת דם, שטפו את הקו העורקי בנפח קטן של תמיסת סליין עם 10 units per milliliter של הפרין כדי למנוע קרישה. לאחר קביעת רמת הגלוקוז המיועדת לקיבוע, התחילו בעירוי של תמיסת אינסולין.יש לתעד את רמת הגלוקוז בדם במרווחים של 5 עד 10 דקות ולהתאים את קצב עירוי הגלוקוז לפי הצורך עד להשגת מצב יציב (steady state). זהו בדרך כלל תהליך של ניסוי וטעייה שיכול להימשך בין 30 דקות ליותר משעתיים. רמת הגלוקוז הנדרשת לשמירה על גליקמיה תלויה בפרוטוקול הניסויי.המינים והתנאים הנוכחיים כדי להיחשב כנמצאים במצב של קיבוע (clamped), שלוש קריאות רצופות חייבות להיות בתוך טווח מוגדר. שלוש קריאות בהפרש של כ-1 millimolar אחת מהשנייה מעידות על כך שרמות הגלוקוז הגיעו למצב יציב (steady state). קצב עירוי הגלוקוז הנדרש לשמירה על גליקמיה למשך תקופה של 30 דקות; במהלך זמן זה ניתן לדגום דגימות דם נוספות, לכל הפחות.יש לאסוף דגימה שנייה של הפטו-קריט אינסולין בפלסמה ברגע שפרוצדורת ה-clamp מסתיימת. ניתן להשתמש בבעלי החיים לבדיקות נוספות או להקריב אותם לצורך איסוף רקמות לניתוח המשכי. בהתאם לבעל החיים, קטטרים יכולים להישאר פתוחים למשך חמישה עד שבעה ימים כאשר הפעולה בוצעה נכון.ניתן להשתמש בפרוצדורת הקיבוע (clamp) למדידת רגישות לאינסולין במצב יציב. חיוני לתעד את רמות האינסולין והגלוקוז, כמו גם את קצבי עירוי הגלוקוז וערכי ההמטוקריט. מצב יציב מושג כאשר רמות הגלוקוז נותרות בטווח של מילימולר אחד אחת מהשנייה לאורך פרק זמן של 30 דקות.קצב עירוי הגלוקוז חושף את רמת הגלוקוז האקסוגנית הדרושה לשמירה על רמת סוכר בדם (U glycemia), כאשר במידת האפשר יש להציג את הקצב כגרף לאורך זמן ולא כנקודת זמן ממוצעת בודדת. יש לדווח על רמות האינסולין הן במצב צום והן במצב של קיבוע (clamped). מדדים אלו מאשרים כי האינסולין הוגש בהצלחה ויגלו כל הבדל בתגובת האינסולין בין קבוצות הטיפול. מדידת רמות ההמטוקריט בנקודת הבסיס, ושוב לאחר הפרוצדורה, מבטיחה שהרמות לא ירדו ביותר מ-5% מרמת הבסיס במהלך הניסוי בעקבות פרוצדורה זו.ניתן להשתמש בשיטות אחרות, כגון מתן סומן איזוטופי, כדי להעריך את ניצול הגלוקוז בכל הגוף וברקמות ספציפיות.

hyperinsulinemic-euglycemic-clamp-in-the-conscious-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מהדק hyperinsulinemic-euglycemic, או מהדק אינסולין, הוא תקן הזהב להערכת פעילות...

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps ב, עכברים מודעת בלתי מרוסנת

פרוטוקול לחליטות כרוניות של גלוקוז וIntralipid בחולדות מתואר. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעה של עודף חומרי מזון על תפקוד איברים ופרמטרים פיסיולוגיים.

דגם של עירוי מזין כרוני בחולדה

פרוטוקול זה לומד את התפקיד של ליגנד (מוטיב C-C) כימוקין 5 (CCL5) בהיפותלמוס על-ידי אספקת אנטגוניסט, MetCCL5, לתוך המוח העכבר באמצעות מערכת מיקרו-osmotic משאבת אינפוזיה המוח. זה עיכוב ארעית של פעילות CCL5 התפרץ היפותלמי אינסולין איתות, המוביל גלוקוז סובלנות ורגישות לאינסולין מערכתית היקפיים.

לומדים את האות ההיפותלמוס אינסולין סובלנות גלוקוז היקפי עם מערכת עירוי רציף סמים לתוך המוח העכבר

מהדק היפרגליקמי משמש למדידת שחרור אינסולין עם ריכוז גלוקוז גבוה יותר בדם. מהדק היפוגליקמי מיועד למדידת ייצור גלוקוז המושרה על ידי תגובות נגד ויסות. שתי השיטות משתמשות באותו הליך כירורגי. כאן, אנו מציגים טכניקת מהדק להערכת מטבוליזם גלוקוז מערכתי.

מהדק היפרגליקמי ומהדק היפוגליקמי בעכברים מודעים

ריאות perfused על ידי שני עורקי סימפונות המערכתיים ועורקי ריאה. ברוב מחל ריאה, היא מערכת כלי הדם המערכתית הקטנה המציגה neovascularization החזק. הפסקה של זרימת דם ריאתי מקדמת אנגיוגנזה סימפונות נמרצות. אנו מספקים פרטים ניתוחיים של גרימת איסכמיה עורק ריאה השמאלית שמקדמת neovascularization סימפונות.

באנגיוגנזה ריאות עכברוש איסכמי

מאמר זה מפרט כיצד Elvax 40W יכול לשמש כשיטת שחרור איטי לאספקת סמים לרשתית החולדה הבוגרת. הפרוטוקול להכנה, טעינה, ומספקים מורכב סמים שרף לעין מתואר.

משלוח שחרור איטי תרופות דרך Elvax 40W לרשתית העכברוש: ​​השלכות לטיפול במצבים כרוניים

גישות לכלי הדם למדידת המודינמיקה, אספקת נוזלים וביצוע דגימת דם חשובות לכל מחקר מודל של בעלי חיים קטנים. אנו מציגים טכניקה להשתלת קטטרים בעורק הצוואר ובווריד הצוואר המשותף בחולדה מורדמת לחיבור למערכת לביצוע ניטור, עירוי ודגימה.

צנתור של עורק התרדמה וצוואר הווריד לבצע צעדים המודינמית, חליטות ודגימת דם במודל עכברוש מודע

קביעת קצב הסינון הגלומרולרי (GFR) היא תקן הזהב להערכת תפקוד הכליות הכללי. עם זאת, הליכים מסורתיים למדידת פרמטר זה הם מסורבלים ודורשים השקעה גדולה של זמן. כאן אנו מתארים שיטה מהירה וזעיר פולשנית לקביעת GFR דרך העור.

הערכת Transcutaneous של תפקוד כלייתי במכרסמי Conscious

אנו מתארים שיטה ליצירת מודל חייתי של פיברוזיס בכבד בחולדה, ומעריכים את מידת הפיברוזיס על ידי בדיקה היסטולוגית של הכבד. המודל יכול לשמש לחקר התפתחות מחלות כבד וכן לבדיקת יעילותם של חומרים אנטי-פיברוטיים פוטנציאליים.

מודל הפיברוזיס Dimethylnitrosamine מושרה בחולדה

מודל מהדק hilar כבד עכברוש ייחודי שפותח עבור הבוחנים את שפעת מולקולות תרופתיות לטיוב פגיע reperfusion-איסכמיה. מודל זה כולל cannulation ישיר של אספקת הפורטל למגזר הכבד איסכמי באמצעות סניף של וריד השער, המאפשר למסירה כבדה ישירה.

שיטה של ​​המגזרים הישירים Intra-כבדית משלוח באמצעות מודל קלאמפ עכברוש הכבד hilar

למדו את שיטת הקלאמפ ההיפר-אינסולינמי-אאוגליקמי להערכת רגישות לאינסולין בעכברושים ערים וחופשיים. שיטה זו מאפשרת מדידה ישירה של קצבי סילוק גלוקוז בגוף כולו ברמות אינסולין פיזיולוגיות גבוהות.

Hyperinsulinemic-Euglycemic קלאמפ של עכברוש המודע

גלה סרטונים נוספים