אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 2:45 דק׳ • March 31st, 2026
קח את C. תולעי elegans שגודלו על לוחות אגר עשירים בחומרים מזינים המכילות E. COLI למצב הביקורת ו-Pseudomonas aeruginosa למצב הפתוגן.
במהלך הדגירה, התולעים ניזונות מחיידקים המתיישבים בלומן המעיים.
במערכת הביקורת, האפיתל של המעי נשאר שלם, בעוד שהרעלים המשתחררים מהפתוגנים גורמים לנזק אפיתליאלי.
שטפו את התולעים עם בופר, והעבירו לצלחות עם מעקבים פלואורסצנטיים וחיידקים מנוטרלים בחום כמקור מזון.
במערכת הביקורת, מעקבים פלואורסצנטיים שנבלעו נשארים במעי, בעוד שבתולעים הנגועות בפתוגנים הם חוצים את האפיתל הפגוע ונכנסים לחלל הגוף.
שטפו את התולעים שוב והניחו אותן על צלחות טריות. לאחר מכן העבר אותם לפלטת בדיקה רב-בארית המכילה קיבע לשימור המבנה התאי.
הסר את הקיבוע. ואז הוסיפו מדיום התקנה להדמיה.
התבונן באמצעות מערכת הדמיה פלואורסצנטית.
פלואורסצנציה מוגברת בחלל הגוף של P. תולעים שנחשפו לאירוקינוזה מצביעים על חדירות מעיים הנגרמת על ידי הפתוגן.
שטפו את זחלי L4 המסונכרנים לגיל עם S-buffer, והעבירו כ-500 תולעים ללוחות ה-NGM המכילות חיידקים וכימיקלים שונים. לאחר מכן, דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות.
הכינו את הלוחות המושלמים ב-FITC dextran על ידי ערבוב 2 מיליליטר של E מושבת חום. קולי עם ארבעה מיליגרם של FITC-דקסטרן. הוסיפו 100 מיקרוליטר מהתערובת לכל אחת מ-20 צלחות אגר טריות ב-NGM, ותנו לצלחות להתייבש במשך שעה על שולחן מעבדה נקי. לאחר 48 שעות טיפול, שטפו את התולעים עם S-buffer, העבירו אותן לצלחות עם תוספת FITC-dextran ולפלטות NGM ללא FITC-dextran, ודגרו את הלוחות במהלך הלילה.
למחרת, שטפו את התולעים עם S-buffer, ותנו להן לזחול לתוך צלחת האגר הטרייה של NGM למשך שעה. הוסיפו 50 מיקרוליטר של פורמלדהיד 4% לכל באר של פלטה שחורה בעלת 96 בארות ותחתית שטוחה, והעבירו כ-50 תולעים לכל באר. לאחר דקה עד שתיים, הסר את כל הפורמלדהיד והוסיף 100 מיקרוליטר של מדיום התקנה לכל באר.