טיפול מופעל באור של ביופילמים חיידקיים באמצעות חומר קדם-רגיש לאור

התחל עם בארות מיקרופלט המכילות ביופילמים של חיידק פתוגני, המחולקים לארבע קבוצות ניסוי.

שאפו בעדינות את המדיום ושטפו עם בופר כדי להסיר תאים לא דביקו.

הוסף בופר המכיל קדם לפוטוסנסיטייזר לשתי קבוצות, בעוד ששתי הקבוצות הנותרות מקבלות בופר בלבד.

דגרו את כל הקבוצות בחושך כדי לאפשר לקדם-חומר להתפזר דרך הביופילם, להיכנס לתאי החיידקים, ולהתמזג לחומר פוטוסטייטיבי שמצטבר בתוך הציטופלזמה והממברנות.

לאחר הדגירה, חשפו קבוצה אחת שטופלה בפריקורסור וקבוצת בופר אחת בלבד לקרינה אורית.

בקבוצה שטופלה בקדום, האור מגרה את הפוטוסנסיטיטור, שמעביר אנרגיה לחמצן מולקולרי ומייצר מיני חמצן תגובתי (ROS).

ה-ROS משבש את הממברנות, מפרק חלבונים ומפרק את ה-DNA, מה שמוביל למוות תאי חיידקים.

שלושת התנאים האחרים אינם מייצרים ROS, שכן החומר או האור נעדרים, והביופילם נשאר ללא פגע.

כדי לייצר ביופילם בלוח באר 96, תחילה הוסירו חיסון אחד מינוס 80 מעלות צלזיוס של סטפילוקוקוס אוראוס ארה"ב שלוש מאות בשלושה ביופילם, תוך יצירת תרביות קליניות בצינורות עגולים של 14 מיליליטר המכילים חמישה מיליליטר של ציר טריפטון סויה, או TSB, מדיום, באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס עם ניעור לילה. כאשר התרביות מגיעות לשלב נייח, צנטריפוגות את תאי החיידקים ומשלים מחדש את הכדורים וה-PBS ליחידת יצירת המושבה התשיעית לריכוז של 2 כפול 10 למושבה התשיעית לכל ריכוז. מדלל את ההשענות החיידקיות הללו ביחס של 1 ל-200 ו-TSB בתוספת אפס נקודה חמש אחוז גלוקוז וזרע 200 מיקרוליטר של תאי חיידק בכל באר לשלוש בארות לכל זן לכל קבוצת ניסוי בתרבית תאי פוליסטירן שטופלה ב-96 בארות מיקרופלטה לדגירה של 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, עם חמצן, בלי לרעוד.

למחרת, שטפו בעדינות את הבארות שלוש פעמים עם PBS מבלי להפריע לביופילמים. לאחר מכן, הוסיפו 200 מיקרוליטר של ALA טרי לבארות הניסוי המתאימות, והניחו את הפלטה בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס למשך שעה מוגנת מפני אור. לאחר מכן הקרינו את הלוח עם דיודה פולטת אור בעוצמת אור של 100 מיליוואט לסנטימטר רבוע למשך שעה.