Name: זיהום תת עורי של סטפילוקוקוס אוראוס עמיד Methicillin (MRSA) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-09T18:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 18 s
Description: למדו מודל זיהום תת-עורי בעכברים לחקר Staphylococcus aureus עמיד Methicillin (MRSA). השיטה מאפשרת הערכת וירולנטיות החיידק ותגובות חיסוניות של המארח באתרי הזיהום.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי פרס בורוז-Wellcome קריירה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענק AI074832 כדי GY ליו.

1. הכנת עבור זיהום MRSA (יומיים לפני הזיהום) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן loopful של MRSA מתרבות המניות אגר דם (אגר Trypticase סויה (TSA)) צלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הפנוטיפ המוליזה (אזור המושבה ברור סביב כל אחת) בצלחת אגר דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיק למושבה בעלת פנוטיפ המוליטית העולה בקנה אחד עם ניסויים אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן את המושבה לתוך 3 מ"ל טוד יואיט מרק (THB), עם אנטיביוטיקה לעצמו, כאשר הצורך, צינור 15 מ"ל Snap-כתרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על 37 מעלות צלזיוס לילה עם רועד בסל"ד 220. </li></ol> 2. הכנת עכברים לזיהום (יום לפני הזיהום) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לגודל של העכברים, לגלח את הפרווה מעל שטח 3 4 ס"מ בחלק האחורי של עכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ~ 5 מ"מ 3 מסיר שיער שמנת (שנרכשו מרקחת מקומי) לאזור מגולח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר קרם להסרת שיער כדי לדגור על פני העור דקות בערך 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגבות נייר רטוב עם DDH 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגבו את קרם להסרת השיער במגבת נייר רטוב. </li></ol> 3. הכנת עבור זיהום MRSA (ביום זיהום) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למהול את תרבית החיידקים לילה בשעה 1:500 ל 1:1000 עם 10 מ"ל של THB מראש התחמם, בתוך צינור 50 בורג הכתיר מ"ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך כ 2.5 שעות עם רועד בסל"ד 220 עד 540 מגיע ל 2.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף MRSA ידי צנטריפוגה XG ב 3225 ב 10 דקות 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה חיידקים פוספט 10 מ"ל של Dulbecco שנאגרו מלוחים (DPBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 3 ו -4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה חיידקים DPBS בריכוז הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סדרתי לדלל את ההשעיה של חיידקי ינואר 10 - אוגוסט 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט ההשעיה חיידקי מדולל על צלחות אגר דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה צלחות ב 37 ° C במשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצפות ולהקליט את הפנוטיפ המוליטית של inocula. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרוזן המושבה הקמת יחידות (CFU) מספר על הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב inocula מבוסס על מספר CFU על הצלחת. </li></ol> 4. זיהום תת עורי של MRSA (ביום זיהום ו 3 ימים לאחר ההדבקה) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק תת עורי 100 ההשעיה חיידקי μL באזור מגולח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו לב החיות במשך 3 עד 5 שעות לאחר ההזרקה כדי לוודא העכברים בחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את הנגע על הגב של החיות יום ולהקליט את אזור הנגע יומי כאשר הוא נחוץ. תצפית הנגע צריך לכלול הקלטה בגודל הנגע מורפולוגיה ו. גם העור ונגעים שריר נבדקת ונרשמת על ידי הכפלת אורך ורוחב של הנגע. נגעים לא סדיר בצורת צריך להיות שבור למטה לתוך חלקים סימטריים קטנות יותר, כל חתיכה נמדד באותה שיטה. מדידות הנגע יכול גם להשתמש בתוכנית בסיוע מחשב הערכה histomorphometric (ImageJ, קוד פתוח זמין מ-NIH ב <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a> ) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקורבן חיות ביום 3 שלאחר זיהום על ידי שאיפה של isoflurane ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצפות ולהקליט את הנגע על פני העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניק את העור עם זוג מספריים סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקלפים את עורו בזהירות לצפות ולהקליט את הנגע על השריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנגע והבלו ו כ 2-5 מ"מ של האזור שמסביב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף הטחול והכליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenize הרקמות באמצעות homogenizer רקמה או על ידי יישום חוזרות ונשנות של הבוכנה של מזרק 1 מ"ל לצינור microfuge המכיל את רקמות 100 μL של DPBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 900 μL של DPBS אל צינור אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> וורטקס דגימות דקות 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סדרתי לדלל את ההשעיה עם DPBS ינואר 10 - יוני 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט השעיות מדולל על צלחות THA. </li></ol> 5. נציג תוצאות: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לאחר כל הזרקה תת עורית, בועה יהיה שנצפה על פני העור כאשר הזיהום נעשה כראוי (איור 1 א). אם לא בועה הוא ציין על פני העור, הזרקה עלולה להיות עמוק מדי, זה עלול להשפיע על תוצאות הזיהום (בגודל הנגע, CFU). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השעיית חיידקי צריך להיות מדולל באופן סדרתי CFU את הצורך להיבדק על צלחות אגר דם עבור כל ניסוי. פעולה זו תניב מידע חשוב: 1) אם inocula יש פנוטיפ הומוגנית; 2) את הספירה המדויקת חיידקי קיימא עבור הזיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנגעים והישרדות חיידקי ניתן להעריך בנקודות זמן שונות לאחר הפגיעה. הנה, בחנו את זיהום ביום 3 שלאחר זיהום. גודל הנגע מנותחים על פני העור (1B איור: 1x 10 9; 1D איור: 1 x 10 7 CFU) ועל פני השטח את השריר (תרשים 1C: 1x 10 9 7 CFU). אזור הנגע שווה אורך (מ"מ) x רוחב (מ"מ) ניתן למדוד להערכת נזק לרקמות (איורים 2 A ו-B). תוצאה זו יכולה לעזור לקבוע את מידת הנזק לרקמות שנגרם על ידי גורם ארסיות נתון. בנוסף, נגעים הם נכרת, ומעורים ב DPBS, ואת מצופה כדי לכמת את מספר CFU (איור 2 ג), אשר מציין את הכדאיות של החיידקים באתר זיהום. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. העור ונגעים השריר. CD1 העכברים היו מחוסן תת עורית על צלע אחת עם MRSA (LAC). התמונות צולמו 0 זמן ביום 3 שלאחר זיהום. (א) זמן 0 שלאחר זיהום (PI), (ב) - (ז) 3 יום pi, ב ', ד' ו-F: נגעים בעור, C, E, ו-G: פצעים שריר, B ו-C: 1x 10 9 CFU נגוע, D ו-E: 1x 10 7 CFU נגוע, F ו-G: מדומה. <img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. הנגע בעור גודל וחיידקים קיימא לספור באתר זיהום ביום עור 3. שלאחר דלקת שריר נגעים על MRSA (LAC) CD1 עכברים נגועים. (א) גודל הנגע בעור. (ב) שריר גודל הנגע. (ג) סך CFU רקמות. H: 1 x 10 9 CFU inocula: L: 1 x 10 7 CFU inocula. * P &lt;0.05, Mann-Whitney הבדיקה.

<ol><li>Ahn, J. Y., Song, J. Y., Yun, Y. S., Jeong, G., Choi, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+Staphylococcus+aureus-infected+septic+mice+by+suppression+of+early+acute+inflammation+and+enhanced+antimicrobial+activity+by+ginsan%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunol+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Protection of Staphylococcus aureus-infected septic mice by suppression of early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 46, 187-197 (2006).</li>
<li>Girish, V., Vijayalakshmi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affordable+image+analysis+using+NIH+Image%2FImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Affordable image analysis using NIH Image/ImageJ.</a> Indian J Cancer. 41, 47-47 (2004).</li>
<li>Hahn, B. L., Onunkwo, C. C., Watts, C. J., Sohnle, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+dissemination+and+cutaneous+damage+in+a+mouse+model+of+staphylococcal+skin+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Systemic dissemination and cutaneous damage in a mouse model of staphylococcal skin infections.</a> Microb Pathog. 47, 16-23 (2009).</li>
<li>Hruz, P., Zinkernagel, A. S., Jenikova, G., Botwin, G. J., Hugot, J. P., Karin, M., Nizet, V., Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD2+contributes+to+cutaneous+defense+against+Staphylococcus+aureus+through+alpha-toxin-dependent+innate+immune+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">NOD2 contributes to cutaneous defense against Staphylococcus aureus through alpha-toxin-dependent innate immune activation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 12873-12878 (2009).</li>
<li>Ji, Y., Zhang, B., Van, S. F., Horn, P. W. arren, Woodnutt, G., Burnham, M. K., Rosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+critical+staphylococcal+genes+using+conditional+phenotypes+generated+by+antisense+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of critical staphylococcal genes using conditional phenotypes generated by antisense RNA.</a> Science. 293, 2266-2269 (2001).</li>
<li>Somerville, G. A., Beres, S. B., Fitzgerald, J. R., DeLeo, F. R., Cole, R. L., Hoff, J. S., Musser, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+serial+passage+of+Staphylococcus+aureus%3A+changes+in+physiology%2C+virulence+factor+production%2C+and+agr+nucleotide+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">In vitro serial passage of Staphylococcus aureus: changes in physiology, virulence factor production, and agr nucleotide sequence.</a> J Bacteriol. 184, 1430-1437 (2002).</li>
<li>Tseng, C. W., Kyme, P., Low, J., Rocha, M. A., Alsabeh, R., Miller, L. G., Otto, M., Arditi, M., Diep, B. A., Nizet, V., Doherty, T. M., Beenhouwer, D. O., Liu, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+Panton-Valentine+leukocidin+contributes+to+inflammation+and+muscle+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus Panton-Valentine leukocidin contributes to inflammation and muscle tissue injury.</a> PLoS One. 4, e6387-e6387 (2009).</li>
<li>von Kockritz-Blickwede, M., Rohde, M., Oehmcke, S., Miller, L. S., Cheung, A. L., Herwald, H., Foster, S., Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+mechanisms+underlying+the+genetic+predisposition+to+severe+Staphylococcus+aureus+infection+in+the+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological mechanisms underlying the genetic predisposition to severe Staphylococcus aureus infection in the mouse model.</a> Am J Pathol. 173, 1657-1668 (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העור Murine מודל זיהום ברקמות רכות הוא כלי רב עוצמה עבור בהערכת ארסיות vivo של הפתוגן. Pathogenicity ש aureus זיהום רקמת העור רך עשוי להשתנות בהתאם למספר פרמטרים. אלה כוללים את גודל inoculum, שלב התפתחות חיידקים, עומק של חיסון, גיל של עכברים, על רקע גנטי העכבר 7, 8. כאשר בוחנים את תפקוד ארסיות באמצעות מודל זה, חשוב לשלוט על פרמטרים אלה על מנת להבטיח כי התוצאות יהיו עקביים. למדנו זיהום MRSA עורו של מספר זנים של עכברים, ל...

<table><tbody><tr><td>THB</td><td>VWR international</td><td>95025-314</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (תמיסת סלק)</td><td>Invitrogen</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>מזרק של 1 מ"ל</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>מחט 27G1/2</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>אגר דם כבשים (TSA)</td><td>VWR international</td><td>90004-328</td><td></td></tr></tbody></table>

זיהום תת עורי של סטפילוקוקוס אוראוס עמיד methicillin (mrsa)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

MRSA הוא איום עולמי לבריאות הציבור, עור MRSA ו ברקמות הרכות זיהומים עכשיו להסביר יותר ממחצית כל רקמות רכות זיהומים בארצות הברית. בין הרקמות הרכות זיהומים, שררת, pyomyositis ו fasciitis necrotizing דווחו יותר ויותר עם MRSA הנובעים הקהילה העמותה. כדי להבין את יחסי הגומלין בין MRSA ו חסינות המארחת מובילה לזיהום חמור יותר, הזמינות של מודלים של בעלי חיים הוא קריטי, המתיר את המחקר של המארח גורמים חיידקיים. מודלים זיהום מספר הוכנסו להעריך את בפתוגנזה של ס aureus במהלך דלקת עור שטחית. כאן אנו מתארים מודל דלקת תת עורית אשר בוחן את העור, תת עורית, ו פתולוגיות שריר.

העור Murine מודל זיהום ברקמות רכות מנוצל להערכת תפקוד ארסיות של Staphylococcus aureus עמידים methicillin (MRSA) לבין התגובות החיסוניות המארח. כאן, הצגנו מודל זיהום תת עורי לעור זיהום ברקמות רכות.

זיהום תת עורי של סטפילוקוקוס אוראוס עמיד Methicillin (MRSA)

MRSA מהווה איום עולמי על בריאות הציבור, וזיהומי עור ורקמות רכות הנגרמים על ידי MRSA מהווים כעת למעלה ממחצית מכלל זיהומי הרקמות הרכות ב...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לבחון את ההישרדות וההפצה של *Staphylococcus aureus* עמיד למתיצילין או MRSA, וכן את רמות הכמוקינים והציטוקינים באתרי הזיהום. הדבר מושג על ידי הסרת הפרווה מגבם של עכברים כדי לאפשר אזור תצפית ברור. כשלב שני.MRSA בתגלוש יועבר לעכברים בהזרקה תת-עורית שלושה ימים לאחר ההדבקה; ניתן להעריך את הפתולוגיות של ההדבקה ואת ספירת החיידקים על ידי קביעת מספר יחידות יוצרות מושבות (CFU) מהומוגנאטים של רקמה על צלחות אגר. שלום, מה שלומך? שמי דה לורדון.אני חוקרת פוסט-דוקטורט. שלום, שמי מריאל סאנצ'ס. אני סטודנטית לדוקטורט ואני אנדריאה הודה.אני עמית מחקר, ואנו חלק מהמעבדה של George Lee במחלקה הפדיאטרית במרכז הרפואי Cedar-Sinai. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הרפואי, כגון מידול של זיהומים חמורים, כולל מיוזיטיס, פולימיוזיטיס ופסציטיס נמקית. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי זיהומי חירום חמורים, ניתן ליישמה גם על מערכות אחרות, כגון group A streptococcus ואורגניזמים אחרים.בנוסף, אנו יכולים לחקור את התפקוד והפתוגנזה של אורגניזמים אחרים הגורמים למיאוזיטיס (myositis) ולפולימיאוזיטיס (polymyositis). באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בהליך זה עשויים להיתקל בקשיים מכיוון שאחד הרגולטורים הגלובליים של אזורי ה-caucus הוא מוטבילי מאוד. אם לא יינקטו אמצעי זהירות, ייתכן שביانات שנאספו יציגו שונות משמעותית, דבר שיוביל לקושי בפירוש הנתונים.בואו נתחיל. במעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 2 (BSL 2), הכינו צלחת אגר דם כבשים על בסיס TSA ולולאה סטרילית באמצעות בלוק הקפאה. העבירו את תרבית המקור של Mercer מהאחסון בטמפרטורה של 80- מעלות צלזיוס.לאחר מכן, בעזרת לולאת ההעברה הסטרילית, השבירו שבב קרח קטן מתרבית המקור אל תוך הצלחת. מיד לאחר השגת שבב קטן של תרבית המקור של Mercer, העבירו את תרבית המקור בחזרה למקפיא כדי למנוע הפשרה, שכן הקפאה והפשרה חוזרות יפגעו בתרבית המקור. השתמשו בלולאה כדי לבצע זריעה על האגר, באופן שיסייע לצמיחה של מושבות Mercer בודדות.דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 37 °C למשך לילה ללא תוספת CO2. למחרת, הכינו וסמנו both דף ביצים דם חדש, צלחת TSA ומבחנה עם מכסה snap cap בנפח 15 milliliter המכילה 3 milliliter של THB.הוציאו את צלחת ה-M SSA שגודלה במהלך הלילה ובחנו את הפנוטיפ ההמוליטי של המושבות. בעזרת לולאה סטרילית, בחרו מושבה בעלת פנוטיפ העולה בקנה מידה עם מושבות מניסויים קודמיםים. זרעו את ה-THB עם המושבה שנבחרה באמצעות אותה שיטת זריעה בלולאה.דגרו את תמיסת ה-THB בצלחת בטמפרטורה של 37 °C למשך לילה, תוך ניעור במהירות של 220 rpm. חיידקים אלה ישמשו להרחלת התרבית עבור זיהום תת-עורי של העכברים בשלבים מאוחרים יותר. הניחו גם את צלחת אגר הדם באינקובטור.נשתמש בצלחת למחרת בבוקר כדי לוודא שהפנוטיפ ההמוליטי של החיידקים בתמיסת ה-THB תואם לזה של המושבה שנבחרה במקור. אם הפנוטיפ ההמוליטי אינו עקבי עם השבט המקורי, אין להתחיל בניסוי. העבר את העכבר לפלטפורמה וגלח את הפרווה מגבו.אם בעל החיים תוקפני מדי, ייתכן שיהיה צורך בטשטוש באמצעות isof fluorine. מרחו כחמישה מילימטרים מעוקבים של קרם להסרת שיער כגון NA על האזור הגולח. ניתן לרכוש NA בבית המרקחת המקומי.הקפידו לרכוש את קרם הסרת השיער המכיל שמן תינוקות, מכיוון שהמוצר ללא שמן התינוקות יהיה מגרה מדי עבור העכברים. השאירו את הקרם להשקיה על פני העור למשך כדקה אחת; בזמן שהקרם להסרת השיער פועל, הרטיבו מספר מגבות נייר במים מזוקקים כפולה. לאחר דקה, השתמשו במגבות הנייר הרטובות כדי לנקות את האזור שגולח.ודאו שהעור נקי מקרם להסרת שיער. חממו מראש 10 milliliters של THB בתוך מבחנה עם מכסה הברגה בנפח 50 milliliters בטמפרטורה של 37 degrees Celsius באינקובטור לבקטריות למשך ארבע עד 10 שעות. העבירו 20 microliters של תרבית בקטריות מהלילה ל-THB שחומם מראש. פעולה זו תדלל את ה-merc מהלילה.תים בדילול של 1:500. הנח את המבחנה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור שוקר במהירות של 220 סל"ד למשך כשלוש שעות עד שעתיים וחצי. השתמש ב-THB נוסף כדי לדלל את תרחיף החיידקים לדילול של 1:10 ומדוד את התרחיף באמצעות ספקטרופוטומטר.עם בליעה של 514 ננומטרים. המשך לדגרי את התושה ב-37 מעלות צלזיוס עם ניעור של 220 סיבובים לדקה עד שהתושה המדוללת ביחס של 1:10 תגיע ל-0.25. כדי לאסוף את ה-M er, סבב במ centri-fuge את המבחנה בנפח 50 מיליליטר ב-3,225 xg למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס, השלף את ה-supinate Resus.השעה את משקע החיידקים ב-10 milliliters של DPBS ושטוף את החיידקים שוב על ידי חזרה על שלב הסרטיפוגציה עבור מודל זיהום חמור זה. השעה מחדש את משקע החיידקים בכ-one milliliter של DPBS, כך שיתקבל ריכוז של כ-one times 10 to the 10 colony forming units per milliliter. הכן מצעי sheep blood A-R-T-S-A ובצע דילול סדרתי של החיידקים ב-DPBS מהדילול 10 to the one ועד 10 to the eightfold במצע.טפטפו 10 µL מהתמיסה הבקטריאלית המדוללת בסדרה על גבי צלחת blood agar בשלוש חזרות. דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 37 °C למשך לילה. לאחר דגירה של 16 עד 18 שעות, התבוננו ורשמו את פנוטיפ ההמוליזה של המוּשבות.ספרו את יחידות יוצרי המושבות (colony forming units) על הצלחות. ניתן יהיה לחשב את כמות האינוקולום להדבקה על בסיס מספר יחידות יוצרי המושבות על הצלחות.הכינו מזרק עם 100 µL של תרחיף החיידקים ב-DPBS שהוכן קודם לכן. לפני ההזרקה, יש להרגיע את העכברים כך שקצב הנשימה שלהם יהיה כפעם אחת בשנייה. לצורכי הדגמה, בסרטון זה מוצג עכבר שהורדם (euthanized).הזריקו את ה-M ser לצד אחד לאחר ההזרקה. העבירו את העכבר בחזרה לכלובו. עקבו אחר בעלי החיים למשך שלוש עד חמש שעות לאחר ההזרקה כדי לוודא שהעכבר חי לפני ההחזרה לחדר בעלי החיים.עקבו מדי יום אחר הנגעים על גבם של בעלי החיים לאחר שהוצאו מהניסוי. מדדו ורשמו את גודלם ואת מצבם של הנגעים על העור. שטחי הנגעים בעור ובשריר נמדדים על ידי הכפלת אורך הנגע ברוחבו במילימטרים.יש לפרק נגעים בעלי צורה לא סדירה לחלקים סימטריים קטנים יותר, ולמדוד כל חלק באותה שיטה. הכינו מבחנות מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 milliliter עם 100 microliters של DPBS לאיסוף הרקמה. בצעו חריץ בעור באמצעות להב תער סטרילי והוציאו את הנגע בעזרת מספריים סטריליים.בעת כריתת הנגע, ודאו כי נכרתות גם כ-2 עד 5 מילימטרים של עור בריא סביב האזור. העבירו את הנגע למבחנות איסוף הרקמה לצורך ניתוח נגעי השריר. קלפו את העור בזהירות כדי למדוד את הגודל ולתעד את מצב הנגע ברקמת השריר.אספו את הטחול והכליות. הניחו רקמות אלו במבחנות איסוף נפרדות. הומוגניזו את הרקמות על ידי ערבוב באמצעות מזרק של 1 mL למשך כ-30 שניות.הוסיפו 900 µL של DPBS לכל מבחנה. הרכיבו את פלטות ה-THA וערבלו במערבל וורטקס את דגימות הרקמה ההומוגניות למשך חמש דקות. בצעו דילול סדרתי לדגימה.יש לדלל את התרחיפים עד ליחס של 1:10⁶. בלוחות 96 באריים, יש להעביר 10 µL מכל תרחיף מדלל בסדרה אל הלוחות. יש להדגיר את הלוחות באינקובטור חיידקים בטמפרטורה של 37 °C למשך הלילה.בבוקר למחרת, ספרו את יחידות יוצרי המושבות מהצלחות וחשבו את מספר יחידות יוצרי המושבות על בסיס גורמי הדילול. אם ההדבקה בוצעה כהלכה, תיראה שלפוחית על פני העור מיד לאחר ההזרקה התת-עורית. אם לא נצפתה שלפוחית, ייתכן שההזרקה הייתה עמוקה מדי, מה שעלול להשפיע על תוצאות ההדבקה.ניתן להעריך את גודל הנגע ואת השרידות הבקטריאלית בנקודות זמן שונות לאחר ההדבקה ב-MSA. הנגעים הבאים בעור נבחנו ביום השלישי לאחר ההדבקה, והם מהווים דוגמאות לנגע בעכבר מסוג CD1 שהודבק בצד אחד ב-1×10⁷ colony forming units. נגעים בשרירים נמצאים בדרך כלל ברקמה שמתחת לנגעי העור.להלן דוגמאות לנגעי שריר משטחיים התואמים לתמונות נגעי העור שהוצגו קודם לכן. אלו הם נגעי שריר שנצפו ביום השלישי לאחר ההדבקה בעכבר שהודבק ב-1 $\times$ 10⁷ יחידות יוצרי מושבות (colony forming units). שטח הנגע נקבע כמידה של אורך כפול רוחב של הנגע כפי שנמדד במילימטרים, ויש למדוד אותו כדי להעריך את נזק הרקמה בעור.ניתן לכמת את מספר יחידות יוצרות המושבות של החיידקים הממוקמים באתר הזיהום בנגעי רקמה שהוצאו. ספירת יחידות יוצרות המושבות יכולה להצביע על כך אם גורם virulent מספק ל-MSA יתרון הישרדותי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להשתמש באמצעי הבטיחות הסטנדרטיים עקב השימוש במחטים ובמיקרובים פתוגניים מאוד בעקבות הליך זה.לבסוף, כמודל למשס, ניתן להשתמש במינון חידוק נמוך פי 1,000 בהשוואה למודל שלנו כדי לענות על שאלות נוספות, כגון אילו גורמי S מקדמים זיהום RSA מתמשך? זכרו כי עבודה עם מזרקים מלאים ב-Mars A עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט באמצעי זהירות כגון השלכה ישירה של המזרק למכל חפצים חדים, שכן חשוב למנוע דקירה מקרית על ידי המחט. כמו כן, עבור ניסוי זה, חשוב להישמע לפרוטוקולי BSO2 סטנדרטיים כדי להבטיח חיטוי נאות של אזור העבודה.זה הכל. תודה שצפיתם. היי. היי, להתראות.

subcutaneous-infection-methicillin-resistant-staphylococcus-aureus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

עכברוש ניסיוני אנדוקרדיטיס בשל methicillin עמיד...

אנדוקרדיטיס דגם ניסיוני של Methicillin עמיד<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; (MRSA) ב עכברוש

biosensors phage ממוסס וחרוזים נוגדנים מסוגלים להבחין בין Methicillin עמיד (MRSA) וחיידקים סטפילוקוקוס רגישים. לפאגים היו משותקים על ידי שיטת אנגמיור-Blodgett על גבי משטח של חיישן microbalance גביש קוורץ ועבדו כבדיקות סטפילוקוקוס מגוון רחבות. חרוזים נוגדנים לזהות MRSA.

Biosensor לאיתור של חיידקי סטפילוקוקוס עמידים לאנטיביוטיקה

גישה זו מתוארת זיהוי בזמן אמת של התגובה החיסונית מולדת ופצעו עורית, Staphylococcus aureus זיהום של עכברים. מאת LysM בהשוואת-EGFP עכברים (אשר מחזיקים נויטרופילים פלורסנט) עם LysM-EGFP crossbred immunodeficient עכבר זן, נוכל לקדם את ההבנה שלנו של זיהום ופיתוח של גישות כדי להילחם זיהום.

דגם העכבר כדי להעריך מולדת התגובה החיסונית לזיהום Staphylococcus aureus

הפרוטוקול הנוכחי מכין ומעריך את התכונות הפיזיקליות, התגובה החיסונית וההשפעה המגנה in vivo של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב חדשני.

הערכת התגובה החיסונית של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב נגד זיהום סטפילוקוקוס אאורוס עמיד למתיצילין (MRSA)

לסטפילוקוקוס זהוב (S. aureus) יש יכולת להתפשט בכל הגוף, ולגרום לזיהומים מתמשכים וחוזרים. כדי להבין טוב יותר את התהליכים הללו, מחקר זה מבסס מודל זיהום תוך-תאי עבור S. aureus. מודל זה יספק בסיס מכריע לחקירת המנגנונים העומדים מאחורי זיהומים תוך-תאיים.

פיתוח והערכה של מודלים של זיהום תוך-תאי לסטפילוקוקוס זהוב

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל עכבר המשתמש בהשתלת גב תת עורית כדי לחקור זיהומים הקשורים לשתל, המאפשר חקירה מקיפה של מנגנונים פתופיזיולוגיים ותומך בפיתוח קריטריונים אבחנתיים עם אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות.

מודל בעלי חיים של זיהומים הקשורים לשתלים בעכברים

הפרוטוקולים של ניצול לפתוח זרימת biofilms מערכת עם כורים זרימה טפטוף וסיבוב כורים דיסק מוצגים בפירוט.

השימוש זרימה טפטוף ו כורים דיסק סיבוב עבור Staphylococcus aureus Biofilm ניתוח

צמיחת סטפילוקוקוס אוראוס באמצעות ההמוגלובין אנושי כמקור ברזל

אנו מדגימים בדיקת PCR מולטיפלקס פשוטה לסינון והקלדה מהירים של כרומוזום קלטת סטפילוקוקלית (SCCmec) סוגים I-V עבור סטפילוקוקוס זהוב עמיד למתיצילין, ומספקים כמה מהשלבים החיוניים והניואנסים הפרוצדורליים שהופכים אותה למוצלחת בהתאמת בדיקה זו למעבדות בודדות.

Multiplex assay PCR ?????? ?? ???? Mec ???????? ???? Staphylococcal I ?V ?-methicillin<em&gt; ???????????</em

אנו מציגים שיטות כדי לחקור את ההשפעה של PSMs ורעלים אחרים המופרשים על...

חקר אינטראקציות של<em&gt; סטפילוקוקוס</em&gt; עם נויטרופילים ידי cytometry זרימה מיקרוסקופית וזמן לשגות

למדו מודל זיהום תת-עורי בעכברים לחקר Staphylococcus aureus עמיד Methicillin (MRSA). השיטה מאפשרת הערכת וירולנטיות החיידק ותגובות חיסוניות של המארח באתרי הזיהום.

זיהום תת עורי של סטפילוקוקוס אוראוס עמיד Methicillin (MRSA)

גלה סרטונים נוספים