Name: דגם orthotopic של סרטן שלפוחית השתן Murine (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-06T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: למדו כיצד ליצור דגם אורתוטופי של סרטן שלפוחית השתן בעכברות נקבות C57BL/6 באמצעות קטטריזציה וקוטריזציה מקומית. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של התנהגות הגידול ופיתוח טיפולים חדשים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי בפרס קרן המדע הלאומית הקריירה (CBET-0846395) ואת המחלקה לרפואה השוואתי, אוניברסיטת טוליין.

1. בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקבה C57BL/6J עכברים (Mus שריר) מאומתים ללא ectoparasites מדבקת, endoparasites helminth, ונוגדנים ל 17 וירוסים Murine על ידי הספק לפני המשלוח. עכברים הם שוכנו במתקן AAALAC-מוכר את החיה של אוניברסיטת טוליין בהתאם מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. 1 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן ספציפי, עכברים הם הקבוצה שוכנו (4-5 עכברים / לכלוב) צמרות פוליקרבונט מאוורר בנפרד cageswith microisolation לסנן על מצע עץ. הם סיפקו את המודעה מכרסם pelleted כרצונך מזון ומים מהברז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מותר 7 ימים להסתגל לפני תחילת המחקר. </li></ol> 2. תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קרצינומה של תא תא Murine מעבר לקו MB49 משמש לייצור גידולים בשלפוחית ​​השתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הם תאים בתרבית בינוני שונה Dulbecco של הנשר בתוספת סרום 10% שור עוברית, 100 יחידות / מ&quot;ל ​​פניצילין, ו 100 יחידות / מ&quot;ל ​​סטרפטומיצין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבויות מתוחזקים על 37 ° C ו 5% CO 2 עם התקשורת משתנה כל יומיים שלושה. </li></ol> 3. גידול בעלי חיים דגם orthotopic החדרה של המודל שלפוחית ​​השתן הגידול המתואר כאן הוא שינוי של ההליך שתואר על ידי גינטר ואח&#39; 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה מושרה עם 2% isoflurane (MWI / VetOne, מרידיאן, מזהה, חתול # 501017) חמצן ומתוחזק על 0.75-1.25%. (חיות מרובות ניתן לטפל בו זמנית, אשר יחייב עלייה ברמות isoflurane.) כדי למנוע התייבשות הקרנית, העיניים משומנים במשחה דמעות מלאכותיות עיניים. חום הגוף נשמר עם כרית מחוממת תחת לעטוף נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרווה של הגב התחתון נחתך כדי לקדם את הקשר עם לוחית מתכת הארקה, ואזור מגולח מצופה בג&#39;ל electroconduction. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר כל כך להציב בנפרד על צלחת הארקה מתכת recumbancy הגב, ואת שלפוחית ​​השתן היא באמצעות צינתור transurethrally משומנים 24-מד, 3 / 4 אינץ&#39;, Over-the-מחט קטטר IV עם stylet הסיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלפוחית ​​השתן מנוקז של שתן, חוט פלטינה מוחדר דרך קטטר לתוך שלפוחית ​​השתן משאיר חוט חשוף בכל צד של הקטטר כ - 2 מ&quot;מ על קצה lumenal של הקטטר. חוט עשוי פלטינה בגלל ההתנגדות של החומר חמצון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנוכחי 2.5 W מוחל אז שלפוחית ​​השתן לרגע כ 0.5 ידי נגיעה את החלק החיצוני של חוט עם יחידת electrocautery מוגדר קרישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חוט לאחר מכן מועבר למיקום השני שלפוחית ​​השתן ועוד תשלום 2.5 W מיושם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החוט מוסר, ו 100 μl של תאים MB49 בריכוז של 1x10 6 תאים / מ&quot;ל היא החדירו דרך קטטר לתוך שלפוחית ​​השתן באמצעות מזרק 1ml. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרקים הם שמאל המחוברים צנתרים כדי למנוע בזרימת של המתלים התא העכברים צינתור נשמרות תחת הרדמה במשך 90 דקות כדי לאפשר לתאים לצרף את האתרים לשרוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100-200 μl של תמיסת מלח סטרילית נורמלי הוא בזריקה IP עכבר אחד לפני התאוששות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתום תקופת הדגירה צנתרים מוסרים את בעלי החיים מותר להתאושש על משטח מחומם עד רפלקסים ליישר לחזור, ובנקודה העכברים מוחזרים כלובים לביתם. </li></ol> 4. אולטראסאונד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גידולים מותר לגדול במשך 3-5 ימים לפני העכברים לעבור בדיקת אולטרסאונד של שלפוחית ​​השתן כדי לפקח על הגידול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור בדיקות אולטרסאונד ראשוני, בעלי חיים מורדמים כמתואר לעיל. עכברים ממוקמים recumbancy הגב, הבטן והעור הוא הוכן על ידי גזירת הפרוות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קטטר 24 IV מד מוכנס לתוך transurethrally בשלפוחית ​​השתן. בשלב זה, שלפוחית ​​השתן ניתן לנקז שתן שנאספו לניתוח נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 μl של תמיסת מלח סטרילית נורמלי הוא החדירו לתוך שלפוחית ​​השתן באמצעות קטטר כדי לשפר את הנראות שלפוחית ​​השתן באולטראסאונד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הולכה ג&#39;ל אולטראסאונד מוחל על הבטן, אולטרסאונד מבוצע על מנת להעריך את קיר שלפוחית ​​השתן לומן. </li></ol> 5. נציג תוצאות: רקמת הגידול יתחילו להופיע 3-5 ימים לאחר innoculation. מניסיוננו, קבוצה של 12 עכברים, 50% או יותר שגרתי יש מסת רקמת לזיהוי בתוך השלפוחית ​​(0.5-1.0 μl, באמצעות V = π / 6 ° L ° W · H) על ידי חמישה ימים. בעת שימוש MB 49 תאים, גידולים ימשיכו לגדול המתת חסד יידרש על ידי 24 יום אם ללכת העכברים שלא טופלו. המתת חסד מומלץ כאשר העכברים להיות רדום או cachectic, להציג פרווה פרועות, מכנס, שאינם מגיבים התנהגות, או כאשר הם מאבדים 20% ממשקל הגוף הראשוני שלהן. &lt;/ P&gt; הגידולים לגדול במהירות יהיה מרכזי נמקי לאחר שהם מגיעים המוני של 200 מ&quot;ג או יותר, 3 לכאורה כי התאים בגידול בפיתוח מתרבים מהר יותר מאשר מה שניתן לתיקון על ידי אספקת הדם angiogenic. אפשר גם לעקוב אחר התקדמות הגידול בעקיפין דרך רמת hematurea, אשר קשורה כנראה אנגיוגנזה מהירה בתוך גידולים מתפתחות. צוין באופן עקבי כי שתן של נושאות גידולים עכברים שלא טופלו בחומר הכלול דם ביום 14. ריכוז כדוריות הדם האדומות הופיעו להגדיל לאורך זמן אצל עכברים אלו, הכרכים של שתן שנאספו פחתה. גידולים עודף של 50 מ&quot;ג יכול להיות גם מישש בקלות יחסית, בדרך כלל על ידי innoculation 14 ימים הודעה.

<ol><li>Institute of Laboratory Animal Resources. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).</li>
<li>Gunther, J. H., Jurczok, A., Wulf, T., Brandau, S., Deinert, I., Jocham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Zhang, X., Atala, A., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression-targeted+gene+therapy+for+the+treatment+of+transitional+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Expression-targeted gene therapy for the treatment of transitional cell carcinoma.</a> Cancer Gene Ther. 15, 543-552 (2008).</li>
</ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי טיפול המוסדי ועדת שימוש אוניברסיטת טוליין.

שיטה זו פולשנית של הקמת גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic הנשי יכול להיות מיושם גם על סוגי תאים אחרים מאשר MB49, למרות תוצאות שונות צריך להיות צפוי. כאשר פחות אגרסיבי תאים סרטניים נמצאים בשימוש, הגדלת חלשות במקצת (באמצעות במרווחים של 0.5 W להקים את אופטימלית חדש) תניב אזור נוח יותר מצורף תאים סרטניים, עוד הדגירה שלפוחית ​​השתן פעמים עבור התאים החדירו יניבו כמות גדולה יותר של תא מצורף באתרי לצרוב (נתונים שלא פורסמו). אף על פי פרוטוקולים מסוימים ממליצים על מתן 10 W דרך elec...

<table><tbody><tr><td>עכברי C57Bl/6J</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>בגיל 3-5 שבועות</td></tr><tr><td>כלובים מפוליקרבונט ומדף מאוורר</td><td>Lab Products</td><td>Super Mouse 750</td><td>327mm x&lt;br/&gt;190mm x&lt;br/&gt;143mm</td></tr><tr><td>מצע עץ קשה</td><td>Harlan Laboratories</td><td>SaniChips בדרגת מעבדה &amp;#8211;</td><td></td></tr><tr><td>תזונה למכרסמים</td><td>Harlan Laboratories</td><td>Rodent Diet 2019</td><td></td></tr><tr><td>קתטר IV</td><td>MWI Veterinary Supply</td><td>009231</td><td>24 G x &amp;#190; in. </td></tr><tr><td>יחידה לכיווץ חשמלי (Electrocautery)</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>Aaron 900</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר אולטרסאונד</td><td>Sonosite</td><td>180 Plus (Vet)</td><td></td></tr><tr><td>קו תאי MB49</td><td>Wake Forest University Baptist Medical Center</td><td>N.A.</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>21063-029</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (Fetal Bovine Serum)</td><td>Gemini Bio Products</td><td>100106 500A57B</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטפטומייסין</td><td>Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן murine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

בהליך זה פשוט, גידולים בשלפוחית ​​השתן הן הוקמה בשנת C57 נקבות עכברים באמצעות צנתור, צריבה המקומי, הידבקות התא הבאים. לאחר שלפוחיות השתן שלהם הם צינתור transurethrally והריק, בעלי חיים צינתור שוב כדי לאפשר החדרת חוט פלטינה לתוך שלפוחיות מבלי לפגוע השופכה או בשלפוחית ​​השתן. צנתרים עשויים טפלון לשמש כמבודד על חוט, אשר תנהל זרם חשמלי לתוך השלפוחית ​​כדי ליצור פגיעה לשרוף. יחידת electrocautery משמש כדי לספק 2.5W עד סוף חשוף של הכבל, שתשרוף את שכבות תאי ומתן אתרי מצורף קרצינומה של תאים, אשר נשלחו על ההשעיה לשלפוחית ​​השתן דרך צנתור מאוחר יותר. תאים נשארים בשלפוחית ​​במשך 90 דקות, שלאחריו צנתרים יוסרו שלפוחיות המותר כדי לנקז באופן טבעי. הפיתוח של הגידול מנוטר באמצעות אולטרסאונד. תשומת לב ספציפית משולמת טכניקת צנתור בסרטון הנלווה.

גידולים בשלפוחית ​​השתן הן הוקמה בשנת נקבות העכברים בצורה פולשנית דרך צנתור, צריבה המקומי, בעקבות הידבקות של תאים קרצינומה לאתרים לשרוף.

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

בנוהל פשוט זה, גדלים גידולי שלפוחית השתן בעכברים נקביים מסוג C57 באמצעות קטטירה, צריבה מקומית ו...

אני פרופסור WT Godbe, ויחד עם ד"ר Georgina Dobe, נרצה להציג שיטה להקמת מודל אורתוטופי של קרצינומה בשלפוחית השתן בעכברים. נתחיל בשלבים שאנו נוקטים כדי להכין את בעלי החיים לפרוצדורה זו. העכברים שאנו מציגים היום הם נקבות מסוג C 57 blacks שנרכשו מ-Jackson Laboratories.בחרנו בנקבות בשל קלות הקטטריזציה. העכברים הם בני שלושה עד חמישה שבועות, ומשקלם בדרך כלל נע בין 16 ל-20 גרם. העכברים הורדמו באמצעות מאוורר המכוון להגשת isoflurane בריכוז 2% בחמצן בקצב זרימה של 0.8 עד 1 ליטר לדקה. קצבי הנשימה מנוטרים באופן רציף כדי למנוע התייבשות של קרנית העין.במהלך הליך זה, הנמשך למעלה משעה וחצי, משמנים את העיניים באמצעות פומדת עינית של דמעות מלאכותיות שנמרחת ישירות על העיניים ולאחר מכן נמרחת פנימה לתוך העיניים. הפרווה בחלק התחתון של הגב נגזרת כדי לקדם מגע עם לוח ההארקה המתכתי, שישמש במהלך הליך האלקטרו-קוואטרציה שיגרום לפגיעת כוויה בתוך שלפוחית השתן. אתרי הכווייה עצמם ישמשו כנקודות היצמדות עבור תאי הגידול שיוחדרו לאחר מכן לתוך חלל השלפוחית. שאר הטכניקות המשמשות בפרוטוקול זה מסתמכות רבות על קטטריזציה, עבורה אנו משתמשים בקטטריזציה של IV במידה 24 gauge.לאחר שהסטילוס הוסר בבטחה ונזרק, משמנים את מעטפות הקטטרים בחומר כגון KY jelly או astroglide כדי לסייע בהחדרה ולמנוע טראומה לשופכה. לצורך הקטטריזציה, מחזיקים את

an-orthotopic-model-of-murine-bladder-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

שלפוחית ​​השתן עכבר הזרקת הקיר היא גישה יעילה orthotopically מחקר גזע שלפוחית ​​השתן התא וביולוגיה סרטן. שיטה זו microsurgical עדין ניתן לשלוט בטכניקה תרגול זהיר.

שלפוחית ​​השתן עכבר וול Injection

הקמת מודל orthotopic גידול בשלפוחית ​​השתן להעריך את ההשפעות נוגדות הגידולים של סרנה נמסר intravesically וצמיחה ניטור הגידול והדמיה על ידי אולטרסאונד bioluminescent.

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

בסרטון זה אנו מתארים השתלה אורתוטופית של אורגנואידים מגידול בשלפוחית השתן בתרבית לתוך שלפוחית השתן כדי לחקור את תפקידה של סביבת האיברים בהתפתחות גידולים.

מודל אורגנואיד של גידול בשלפוחית השתן: שיטה להשתלה אורתוטופית של אורגנואידים משלפוחית השתן למושתלת שלפוחית השתן

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך התוך-שלפוחית של העברת תאים סרטניים לשלפוחית השתן של מודל עכבר. הליך זה מסייע ליצור מודל גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן שניתן להשתמש בו לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

השתלה של תאים סרטניים לתוך האיבר ממוצא יכולה לשמש מודל פרה שימושי כדי להעריך את הטיפולים חדשניים. ניתן לגדל תאי קרצינומה של שלפוחית ​​השתן MB49 בתוך שלפוחית ​​השתן בעקבות החדרת שלפוחית. פרוטוקול זה מדגים צנתור של שלפוחית ​​השתן בעכבר לצורך השתלת גידול ואספקת adenoviral.

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג&#39;ין משלוח לימודים

N-בוטיל-N-(4-hydroxybutyl) ניטרוזמין-Induced מודל סרטן שלפוחית ​​השתן פותח בmucin האנושי 1 (MUC1) עכברים מהונדסים לצורך בדיקות MUC1 מכוון החיסוני. לאחר מתן חיסון פפטיד MUC1 ממוקד, תגובת הלימפוציטים T ציטוטוקסי לMUC1 אושרה על ידי רמות ציטוקינים בסרום ופעילות תאי T ספציפית מדידה.

אינדוקציה של קרצינומה של תאי מעבר שלפוחית ​​השתן פולשנית בMUC1 עכברים הטרנסגניים חיסוניים אנושיים שלמים: מודל לפיתוח חיסוני

הטכניקה המבוססת לחסן xenografts orthotopic פולשנית העיקרית לסרטן שלפוחית ​​השתן דורשת laparotomy והתגייסות של שלפוחית ​​השתן. הליך זה גורם תחלואה משמעותית בעכברים, הוא מאתגר מבחינה טכנית ודורש זמן רב. לפיכך, אנו פיתחנו דיוק גבוה, בגישה מלעורית ניצול הנחיית אולטרסאונד.

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic אצל נקבות עכברים C57BL / 6J ועל ניטור של הגידול.

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

פרוטוקול זה מתאר את הדור של החולה הנגזר הנושא מודלים מבע על ידי פנים-ומבחינה משפטית הקניית תאים קרצינומה של תא ברמה גבוהה urothelial או פנים-rectally הזרקת תאים סרטניים המעי הגס לתוך סוכרת שמנים/חמור משולב כשל חיסוני (הנהון/SCID) עכברים לגידול הגידול הראשוני גרורות מתחת להשפעה של תאים סטרומה בצומת הלימפה, אשר מחקה את ההתקדמות של מחלות גרורתית האדם.

מטופל-נגזר אורתוטופית מודלים של תאים האדם Urothelial קרצינומה של סרטן המעי הגס ואת הגידול גרורות ספונטנית

פרוטוקול זה מספק צעדים ניסיוני מפורט כדי ליצור תלת מימדי תרבות מבחנה של אורגנואידים גידול שלפוחית השתן נגזר מסרטן שלפוחית השתן מורטין ממורדית. שיטות תרבות כולל פאסאייג ', הנדסה גנטית, והשתלת אורתוטופית של אורגנואידים הגידול מתוארים.

תרבות, מניפולציה, והשתלת אורתוגרטופית של שלפוחית השתן של העכבר הגידול אורגנואידים

למדו כיצד ליצור דגם אורתוטופי של סרטן שלפוחית השתן בעכברות נקבות C57BL/6 באמצעות קטטריזציה וקוטריזציה מקומית. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של התנהגות הגידול ופיתוח טיפולים חדשים.

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

גלה סרטונים נוספים

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית השתן Murine