Name: השימוש במערכת תלייה משקל של איסכמיה כבד בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 53 s
Description: למד מודל עכברים חדשני לאיסכמיה כבדית באמצעות מערכת תלייה משקל. השיטה מאפשרת שליטה מדויקת בזמני איסכמיה ללא פגיעה ברקמת הכבד, ומסייעת בחקר פציעת רפרפוזיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחקרים הנוכחיים נתמכו על ידי ארצות הברית המכונים הלאומיים לבריאות מענק R01-HL092188, R01-DK083385 ו R01HL098294, ואת הקרן לחינוך ומחקר הרדמה (FAER) מעניקה HKE ו (דויטשה Forschungsgemeinschaft) DFG מחקר Fellowship (GR2121/1- 1) ו - American Heart Association מענק AG.

הערות כלליות. כל פעולות יש לבצע תחת מיקרוסקופ לנתח זקוף (לייקה) ועל ידי שימוש coagulator כירורגית. העכברים בקבוצות הניסוי ואת העמדת פנים יש להתאים בגיל ומשקל כדי להבטיח השוואה של התוצאות. הממשל, טמפרטורה לחץ דם, נוזל ההרדמה צריכה להיות יציבה להשגחה במהלך הניסוי כולו. 1. הרדמה כירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים C57BL / 6 צריך להיות בטווח גיל של 10 עד 16 שבועות, הם צריכים להיות מין בהתאמה בקבוצות, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים עם נתרן pentobarbital (70 מ"ג / ק"ג משקל גוף ה-IP) ולשמור הרדמה עם כ. 10 מ"ג / ק"ג / שעה נתרן pentobarbital. מינון יתר יכולה באופן משמעותי להוריד את לחץ הדם ולכן יכול לשנות את התוצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מקום על השולחן טמפרטורה מבוקרת מחוממת (RT, Effenberg, מינכן, גרמניה) עם בדיקה רקטלית מדחום מחובר משוב תרמיתבקר כדי לשמור על טמפרטורת הגוף על 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום עכברים בעמדה פרקדן על שולחן הניתוח, עם הגפיים העליונים והתחתונים הצמודות בטבלה עם סרט נשלף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרה של ניסויים הישרדות טכניקות אספטיים המתאימים כולל גזירת השיער, חיטוי העור עם iodophors בבטאדין (למשל), טיפול סטרילי של מכשירים autoclaved, ושימוש במסכות כמה כפפות סטריליות למנתח נדרשים. </li></ol> 2. פורטל שלישיה ספיגה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את אזור החתך עם שמן מינרלי כדי למנוע שאיפה של שיער העכבר על ידי חיתוך של העור ובכך למנוע את הסיכון לאלרגיות שיער העכבר. בצע laparotomy חתך קו האמצע של Linea alba עד הקצה העליון, כך שאתה יכול בקלות לחשוף את הכבד. אם אפשר לבצע את החתך עם אלקטרודה קרישה (Erbe, ICC50, Tuebingen, גרמניה) כדי למנוע דימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הטבלה חימום עם העכבר במצב שהזנב הוא direcטד למנתח. עמדה זו מספקת לך ההגדרה הטובה ביותר לתהליך הלוקליזציה של השלישיה ולהעמיד תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> את מקומו של המעי בצד ימין באמצעות ספוגית לחה עצה כותנה לחשוף את השלישיה הפורטל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קצת להזיז את האונה חציון שמאלה לכיוון הסרעפת ואת האונה הימנית לכיוון המעי. זה ייתן לך תצוגה ברורה של השלישיה הפורטל מעל הסתעפות של הזכות, חציון / שמאל אונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לבדוק את השלישיה פורטל והחזק את האונה הימנית בעדינות עם מלקחיים תפל. זה ייתן לך נוף יפה על השלישיה הפורטל השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שזוהו חזותית במקום מחט עם תפר (7/0 תפר ניילון; Ethicon, Norderstedt, גרמניה) באמצעות בעל מחט תחת שמאל פורטל השלישיה, כולל עורק הכבד, וריד הכבד, ואת צינור המרה מצד שמאל לצד ימין של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר צריך להיות הדוק תחת השלישיה. תפר עמוק יותר יכול לפגוע וקה הנבוב נחות הנמצא תחתהשלישיה. לכן להחזיק את אונה של הכבד ישר עם מלקחיים כדי לזהות את הווריד הנבוב לפני ביצוע תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את קצה המחט בצד ימין עם מלקחיים כמה ולמשוך אותו בעדינות מחוץ לאזור הכבד מבלי לפגוע בכבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף לסוף כל אחד תפר הצינור Eppendorf (כ 3 גרם, מלא מים) ומניחים תפר בשני הקצוות על בעלי תפר. מניחים את בעל תפר distally של תפר כך תפר לא מפריע השילוש הנכון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על ידי יישום משקולות השלישיה יהיה occluded באופן מיידי, גורמת הפרעה באספקת הדם האונות שמאל החציוני של הכבד. חסימה מוצלחת ניתן לאשר בקלות על ידי בדיקה ויזואלית של הלבנה החיוורת של האונות איסכמי. לעומת זאת, שינוי של צבע מיד נעלמת כאשר המשקולות התלויות משתחררים הקטבים ואת הכבד reperfused. מודל חלקי איסכמיה כבד נמנע עומס mesenteric באמצעות שמירה blooזרימת ד את אונה של הכבד הנכונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את המעי לחלל הבטן. שמור את הכבד חם המעי עם ספוגית לחה ספוגה במים על 37.0 ° C. כמו כן כדי לשמור על טמפרטורת גוף יציבה לכסות את העכברים עם גלישת מזון זמינים מסחרית לאחר סיום הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע איסכמיה כנדרש לפי פרוטוקול הניסוי. לאחר שחרור מוגדר בזמן איסכמיה את משקולות reperfusion של אונות כבד חציון שמאל יתחיל באופן מיידי. טכניקה זו מאפשרת לייצר איסכמיה הפיכה בעכברים. אם אין איסכמיה פעמים נוספות יבוצעו בזהירות להסיר את התפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף כ 400 נתרן כלורי μl לתוך חלל הבטן 15 דקות לפני מיד לאחר reperfusion. המשך להחליף נוזלים כל 30 דקות בסך של 100 μl לפצות אובדן הנוזלים בזמן reperfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור ניסויים הישרדות פצע כירורגי סגור באמצעות תפר מתמשך של קיר השרירים והעור Wiה תפר 4/0. </li></ol> 3. שינויים זלוף כבד הפרמטרים התוצאות הבאות מומלץ לקבוע פגיעה בכבד הכבד איסכמיה הבאה: לקבוע אנזימי הכבד (למשל ALT, AST) ואת הכבד היסטולוגיה (צביעת H &amp; E) איסכמיה הכבד הבא reperfusion 3,9. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/2550/2550fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> איור 1 מודל של מערכת התלייה משקל כבד על איסכמיה. מערכת המשקל תלוי הוקם כדי לגרום איסכמיה הכבד של האונה השמאלית חציון 3. (א) לכן באונה caudate וימין הופרדו בעדינות מהאונה השמאלית. האונה הימנית אז זז מעט כדי להציג בבירור את השלישיה הפורטל מעל הסתעפות של אונות, ימין ושמאל החציוני. תפר 8.0 ניילון הוטל השלישיה הכבד השמאלית. (ב) בסוף כל תפר קטן משקל (3 גרם Eppendorf ט"וBES מלאים מים) היה קשור ויישומי. איסכמיה הכבד גלוי על ידי שינוי צבע של האונה השמאלית החציוני מאדום בהיר. זה עיצוב ניסיוני מאפשר חסימה מדויק reperfusion של השלישיה הכבד השמאלי על ידי הפעלת ושחרור עומס המשקל. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/2550/2550fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. השפעת איסכמיה פעמים שונות כבד על אלאנין (ALT) ו aspartate (AST) aminotransferase בעכברים. איסכמיה חלקית פורטל השלישיה הושרה כמצוין (0-60 דקות איסכמיה). אחרי שעה 2 של reperfusion, ALT (א) ו AST (ב ') נמדדו. התוצאות באות לידי ביטוי כאמצעי ± SE של 6 - 7 עכברים / קבוצה. * P &lt;0.05 לעומת 0 דקות איסכמיה (דמה שליטה).

<ol><li>Rook, M., Rand, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+long-term+outcome+after+liver+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Organ.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Predictors of long-term outcome after liver transplant.</a> Curr. Opin. Organ. Transplant. 16, 499-504 (2011).</li>
<li>Henrion, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia%2Freperfusion+injury+of+the+liver%3A+pathophysiologic+hypotheses+and+potential+relevance+to+human+hypoxic+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Gastroenterol.+Belg%22%5BJournal%5D)">Ischemia/reperfusion injury of the liver: pathophysiologic hypotheses and potential relevance to human hypoxic hepatitis.</a> Acta. Gastroenterol. Belg. 63, 336-347 (2000).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Kohler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+hanging-weight+system+for+liver+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).</li>
<li>Schneider, M., Geyte, K., Fraisl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+or+silencing+of+the+PHD1+prolyl+hydroxylase+protects+livers+of+mice+against+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Loss or silencing of the PHD1 prolyl hydroxylase protects livers of mice against ischemia/reperfusion injury.</a> Gastroenterology. 138, 1143-1154 (2010).</li>
<li>Coriat, R., Leconte, M., Kavian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mangafodipir+Protects+against+Hepatic+Ischemia-Reperfusion+Injury+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mangafodipir Protects against Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Mice.</a> PLoS One. 6, e27005(2011).</li>
<li>Sakai, N., Van Sweringen, H. L., Schuster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+%28RANKL%29+protects+against+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) protects against hepatic ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. , (2011).</li>
<li>Zhang, J., Hu, W., Xing, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Protective+Role+of+CD59+and+Pathogenic+Role+of+Complement+in+Hepatic+Ischemia+and+Reperfusion+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">The Protective Role of CD59 and Pathogenic Role of Complement in Hepatic Ischemia and Reperfusion Injury.</a> Am. J. Pathol. 179, 2876-2884 (2011).</li>
<li>Beldi, G., Banz, Y., Kroemer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+CD39+on+natural+killer+cells+attenuates+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Deletion of CD39 on natural killer cells attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 51, 1702-1711 (2010).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+adenosine+production+by+ecto-5%27-nucleotidase+protects+during+murine+hepatic+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Extracellular adenosine production by ecto-5'-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning.</a> Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).</li>
<li>Beraza, N., Ludde, T., Assmus, U., Roskams, T., Vander Borght, S., Trautwein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte-specific+IKK+gamma%2FNEMO+expression+determines+the+degree+of+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte-specific IKK gamma/NEMO expression determines the degree of liver injury.</a> Gastroenterology. 132, 2504-2517 (2007).</li>
<li>Lentsch, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+and+function+of+hepatocyte+NF-kappaB+in+postischemic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation and function of hepatocyte NF-kappaB in postischemic liver injury.</a> Hepatology. 42, 216-218 (2005).</li>
<li>Luedde, T., Assmus, U., Wustefeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+IKK2+in+hepatocytes+does+not+sensitize+these+cells+to+TNF-induced+apoptosis+but+protects+from+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Deletion of IKK2 in hepatocytes does not sensitize these cells to TNF-induced apoptosis but protects from ischemia/reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 115, 849-859 (2005).</li>
<li>Kapitsinou, P. P., Liu, Q., Unger, T. L. Hepatic HIF-2 regulates erythropoietic responses to hypoxia in renal anemia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKapitsinou%2C+PP+%22Blood%22">Blood</a>. , (2010).</li>
</ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

המחקר הנוכחי מתאר את הטכניקה של ביצוע איסכמיה במודל murine באמצעות מערכת התלייה משקל על חסימה של השלישיה שמאל הכבד הפורטל. למרות זאת הוא שיטה קלה ללמוד את החסרונות הבאים יש לקחת בחשבון. טעות נפוצה מאוד בהתחלה הוא תפר עמוק הכולל את השלישיה פורטל הווריד הנבוב. קצב הנשימה והלב יהיה להאט תוך 15 דקות בשל התנגדות מוגברת ירידה חוזר הדם אל הלב והתוצאה היא מוות מוקדם של העכברים. הדרך הטובה ביותר למנוע כולל של הווריד הנבוב היא לתהליך הלוקליזציה של הווריד הנבוב לפני תפר ידי החזקת האונות ישר עם מלקחיים מספר. נושא חשוב נוסף הוא כי המשקולות הם לא כבדה אשר עלולה לגרום ללחץ רב מדי על משפט הפורטל על ימין ועל שמאל אשר גם מפסיק את זרימת הדם אל האונות המתאימות. לכן כמות המים צלוחיות Eppendorf יש להתאים את משקל העכבר שלבעלי uture צריך להיות ממוקם distally ממיקום תפר. ביום השני אם המשקולות הן לחץ דם נמוך אינו נעצר לחלוטין. טעויות שניהם בקלות לזיהוי על ידי שינוי צבע נוסף חיוור של האונה הימנית או שינוי צבע מספקת של האונות חציון שמאל, בהתאמה. לכן צבע הכבד שינוי בעקבות יישום משקולות צריך להיות נשלט על כל 10 דקות. עוד סיבוך ניתוחי נפוצה היא פגיעה של הכבד בעזרת מחט. לכן האונות את הזכות יש לקיים את עם מלקחיים תפל כך את קצה המחט ניתן לראות בקלות לקחת עם בעל מחט. אם אלה מלכודות בתחילת נלקחים בחשבון את מערכת התלייה משקל של איסכמיה הכבד מספק פגיעה לשחזור ביותר בשל איסכמיה ידי צמצום שונות של נזק לכבד הקשור לחיצה על השלישיה הפורטל. באמצעות מערכת התלייה משקל, השלישיה הפורטל היא מניפולציה רק ​​פעם אחת לאורך כלהליך כירורגי, גרימת נזק משמעותי פחות האונות בכבד. בנוסף, לא גודש בכבד או במעיים מתרחש עם טכניקה זו. הטראומה לרקמה יותר מתרחשת על ידי הסרת והחלפת מהדק כלי, במיוחד עם reapplication של מהדק במהלך מחזורי איסכמיה מרובים כמו במהלך נפשית מראש איסכמי. השימוש תלוי במשקל כי הם במיקום מרוחק מרקמת הכבד, על פי התצפיות שלנו, מספקת את היתרון של חסימה אמין תוך מניעת טראומה לרקמות עקב מניפולציה של אונה של הכבד על ידי reapplication של מהדק. יחדיו, המחקר הנוכחי מספק היתכנות של מערכת התלייה משקל עבור הפורטל השלישיה חסימה בזמן איסכמיה, מזעור שונות ומגבלות הקשורות מהדק. לכן טכניקה זו עשויה להיות עניין של חוקרים אחרים הרואים בלימוד איסכמיה הכבד.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> נתרן Pentobarbital (פלוס חמורה) </td><td> Vortech התרופות Ls בע&quot;מ </td><td> VPL 9372 </td><td> 4 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​של תמיסת מלח </td></tr><tr><td> תפר, Prolene 8.0 </td><td> Ethicon, ארה&quot;ב </td><td> M8739 </td><td> לשימוש חוזר </td></tr><tr><td> לנתח מיקרוסקופ </td><td> Leica </td><td> n / a </td><td> לשקול מרחק עבודה נדיבה </td></tr><tr><td> חימום טבלה </td><td> RT, Effenberger, גרמניה </td><td> n / a </td><td> רק אחד ספק </td></tr><tr><td> כירורגי מכשירים </td><td> WPI, דומון </td><td></td><td> מלקחיים, מחזיק מחט </td></tr><tr><td> Coagulator </td><td> Erbe, ICC50, Tuebingen, גרמניה </td><td> n / a </td><td> ספקים שונים של coagulators </td></tr></tbody></table> טבלה 1. ריאגנטים ספציפיים וציוד.

השימוש במערכת תלייה משקל של איסכמיה כבד בעכברים

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

פגיעה בכבד עקב איסכמיה חריפה עלולה להתרחש במהלך הליכים רפואיים שונים השתלת כבד כגון כריתת גידולים בכבד או תיקון הטראומה עלולה לגרום לאי ספיקת כבד שבו יש שיעור תמותה גבוה 1-2. מחקרים Murine ולכן איסכמיה של הכבד הפכו בתחום החשוב של מחקר על ידי מתן הזדמנות לנצל מחקרים פרמקולוגיים וגנטיים 3-9. באופן ספציפי, עכברים מותנה עם המחיקה רקמה ספציפית של גן (cre, flox המערכת) לספק תובנות לתוך התפקיד של חלבונים ברקמות מסוימות 10-13. בשל הקושי הטכני קשורה באופן ידני לחיצה השלישיה פורטל בעכברים, ביצענו הערכה שיטתית באמצעות מערכת התלייה משקל על חסימה השלישיה פורטל אשר תוארה בעבר 3. באמצעות מערכת התלייה משקל אנחנו שמים תפר סביב הענף השמאלי של השלישיה הפורטל מבלי לגרום כל נזק באונות הכבד, שכן גםמיטב מהדק הזמינים יכול לגרום נזק לרקמות הכבד בגלל המיקום הקרוב של רקמת הכבד על כלי. יתר על כן, ענף הימני של השלישיה הכבד הוא perfused עדיין ולכן אין גודש במעיים מתרחש עם הטכניקה הזו כמו את זרימת הדם אל האונות בכבד הנכונים נשמר. יתר על כן, השלישיה הפורטל היא מניפולציה רק ​​פעם אחת לאורך כל ההליך הכירורגי כולו. כתוצאה מכך, הליכים כמו מיזוג מראש, עם זמני קצרים של איסכמיה ו reperfusion, ניתן לבצע בקלות. בחינה שיטתית של מודל זה על ידי ביצוע איסכמיה שונה פעמים reperfusion גילה קשר הדוק זמן איסכמיה הכבד עם נזק כבד, כפי שהיא נמדדת על ידי אלאנין (ALT) ו aspartate (AST) רמות בסרום aminotransferase 3,9. יחדיו, מחקרים אלה מאשרים פגיעה בכבד לשחזור ביותר בעת השימוש במערכת התלייה משקל של איסכמיה הכבד reperfusion לסירוגין. כך, טכניקה זו עשויה להיות שימושית עניין חוקרים אחריםאד איסכמיה מחקרים כבד בעכברים. לכן את הסרטון מספק תיאור מפורט, שלב אחר שלב של הטכניקה הזו.

הקמנו מודל murine הרומן של המערכת תלוי במשקל עבור הפורטל השלישיה חסימה. טכניקה זו עשויה להיות שימושית לחקירות עתידיות של איסכמיה במודלים של הכבד Murine.

פגיעה חריפה בכבד עקב איסכמיה עלולה להתרחש במהלך מספר הליכים קליניים, כגון השתלת כבד, כריתת גידול בכבד או תיקון טראומה ו...

מטרת פרוצדורה זו היא להשרות איסכמיה בכבד לצורך חקר פגיעת רפרפוזיה (reperfusion injury). הדבר משיג תחילה על ידי חשיפת אונויות הכבד. השלב הבא הוא חשיפת השלישייה הכבדית השמאלית (left liver triad), הכוללת את הווריד הפורטלי, העורק הכבדי ותעלת המרה.לאחר הבידוד, תופר תפר סביב השלישייה השמאלית, ומערכת משקולות תלויה מיושמת כדי להשרות איסכמיה של הכבד. בנקודת זמן מסוימת לאחר האיסכמיה, המשקולות מורמות כדי להתחיל את הפרפוזיה. בסופו של דבר, ניתן לקבוע את היקף הפגיעה בכבד בעקבות איסכמיה ופרפוזיה על ידי מדידת LT ו-ST בדם וביצוע היסטולוגיה של הכבד. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון שימוש בתפסנים ליצירת איסכמיה של הכבד, הוא שהתפר אינו גורם לנזק לרקמת הכבד וכי תזמון האיסכמיה יכול להיות מדויק יותר.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שהמיקום המדויק של התפר הוא המפתח להשגת איסכמיה של הכבד הניתנת לשחזור ללא פגיעה ברקמה. התחילו בהכנת אזור הניתוח עם מכשירים סטריליים וכל שאר החומרים הדרושים לניתוח. כדי להתחיל, הניחו עכבר הרדומ במצב שכיבה על גב על שולחן חימום בעל בקרת טמפרטורה.הדק את הגפיים העליונות והתחתונות לשולחן באמצעות סרט דביק נשלף כדי להקל על איתור השילוש והנחת התפר. מקם את העכבר ואת שולחן החימום כך שהזנב פונה לעבר המנתח. לאחר מכן, הכנס גשש רקטלי המחובר לבקר משוב תרמי לשמירה על טמפרטורת הגוף.כסו את אזור החתך בשמן מינרלי כדי למנוע שאיפה של שערות עכבר ולהפחית את החשיפה לאלרגנים. לאחר שהחיה הוכנה כראוי, ודאו את עומק ההרדמה לפני ביצוע לפרוטומיה בקו האמצע. המשיכו לחתוך את ה-linea alba עד שהכבד יהיה חשוף בקלות.בשלב הבא, השתמשו במקלון צמר רטוב כדי להזיז את המעיים ולחשוף את השילוש הפורטלי (portal triad). כדי להשיג תצפית טובה יותר, הסיטו את האונה המדיאלית והשמאלית לכיוון הסרעפת ואת האונה הימנית לכיוון המעיים. השתמשו בפינצטה עדינה כדי להחזיק את האונה הימנית למטה ולהשיג מבט ברור של הפורטה השמאלית.השלישיה (Triad) והוריד הנבוב התחתון. השהלו בזהירות תפר סביב השלישיה הפורטלית השמאלית. זו כוללת את העורק הכבדי, הווריד הכבדי ותעלת המרה.השתמשו בפינצטה כדי לתפוס את קצה המחט מהצד הימני ומשכו בעדינות את התפר דרך הרקמה מבלי לפגוע בכבד. יש למקם את התפר ממש מתחת ל-triad; מיקום עמוק יותר עלול לגרום לפגיעה ב-vena cava inferior. לאחר שהתפר במקומו, חברו צינור eend orph עם משקולת לכל קצה.כאשר המשקולות מוכנות, הן יונחו מעל למחזיקי התפרים הממוקמים דיסטלית לתפר. כפי שניתן לראות כאן, כדי להתחיל את האיסכמיה, העבירו את שתי המשקולות מעל למחזיקי התפרים. השלישייה (triad) תיחסם באופן מיידי, מה שיגרום להפסקת אספקת הדם לאונות השמאלית והמרכזית של הכבד.חסימה מוצלחת מאושרת על ידי הבהרה (blanching) של האונה המדיאלית והאונה השמאלית של הכבד. מודל זה של איסכמיה הכבדית החלקית מונע גודש מזנטרי על ידי שימור זרימת הדם לאונות הכבד הימניות. עם סיומו של פרק הזמן האיסכמי שנקבע מראש, הרימו את המשקולות כדי לשחרר את המתח מהתפר.שינוי בצבע אמור להיות ניכר עם חזרת זרימת הדם (reperfusion) לכבד. החזיר את המעי לחלל הבטן ושמור על הכבד והמעי חמים באמצעות מקלון רטוב ספוג במים חמימים. לאחר תקופת reperfusion, ניתן לאסוף דם ורקמת כבד כדי להעריך את היקף הנזק הכבדי לאחר איסכמיה של הכבד.ניתן לקבוע את היקף הפגיעה בכבד על ידי צביעת הרקמה בהמטוקסילין ואאוזין. הרקמה הבריאה הנראית כאן מכילה פחות דגנרציה ונפיחות של ההפטוציטים בהשוואה לכבד האיסכמי. אנזימי הכבד, alanine aminotransferase (ALT) ו-aspartate aminotransferase (AST), הם סמנים נפוצים לנזק בכבד.הרמות של הן LT והן ST עלו כאשר פרק הזמן האיסכמי הואלץ. מאסטר אחד. ניתן לבצע טכניקה זו בתוך 10 דקות אם היא מבוצעת כראוי.ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון preconditioning איסכמי, כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע לפגיעה בכבד כתוצאה מאיסכמיה.

use-of-a-hanging-weight-system-for-liver-ischemia-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מודל Murine עבור איסכמיה בשריר הלב נפשית מראש איסכמי הוא כלי מחקר חשוב מנגנוני...

השימוש במערכת משקל תליה על חסימת העורקים הכליליים של עכברים

מודל Murine מדויק לפגיעה כליות חריפה (AKI) בשל איסכמיה הוא כלי חשוב לחקור פגיעה כליות חריפה ואולי אף למצוא כלים טיפולית לטיפול פגיעה כלייתית. מערכת המשקל תלוי מציעה כלי חסימה מיידית ואמינה reperfusion עורק הכליה מבלי לגרום גודש כליות.

השימוש במערכת תלוי במשקל עבור חסימת עורק הכליה מבודדת

טראומה ניתוחית גורם לתגובה דלקתית. ציטוקינים ligands אנדוגניים ידועים לווסת את גודל האוטם בשריר הלב בעקבות איסכמיה ו reperfusion. אנו מציגים שונה סגור החזה מודל של איסכמיה reperfusion Murine באמצעות משקולות תלויות כדי למזער את ההשפעות של פתיחת בית החזה.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

הסרט הזה מדגים כיצד לרכוש פרמטרים המודינמיים מערכתיים וכבדים בעכברים. כל הניטור כולל רכישה של פרמטרים חיוניים, לחץ מערכתי בדם, לחץ ורידים מרכזיים, קצב זרימת עורק כבד נפוץ, ולחץ וריד שער, כמו גם את קצב זרימת הפורטל בעכברים.

ניטור של פרמטרים מערכתיים והבדיה המודינמית בעכברים

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

אנו מתארים בפירוט קלינית המעי הגס הרלבנטי סרטן הכבד גרורות (CRLM) הגידול מודל ההשפעה של איסכמיה של הכבד reperfusion (I/R) גידול גרורות. מודל זה יכול לעזור להבין טוב יותר את המנגנונים בבסיס קידום הניתוח המושרה של צמיחה גרורתית הכבד.

מודל מורנה של גידולים גרורות בכבד בהגדרה של איסכמיה Reperfusion פציעה

הפרוטוקול מתאר שיטה פשוטה לכריתת כבד עכבר שלם למחקרים מטבוליים באמצעות זלוף ורידים פורטלי.

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

מערכת זילוח כבד נורמותרמית ex vivo (NEVLP) נוצרה עבור כבדי עכברים. מערכת זו דורשת ניסיון במיקרו-כירורגיה אך מאפשרת תוצאות זילוח הניתנות לשחזור. היכולת להשתמש בכבדים של עכברים מאפשרת לחקור מסלולים מולקולריים לזיהוי תוספי פרבוסט חדשים ומאפשרת ביצוע ניסויים המתמקדים בתיקון איברים.

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

קישור מחיצת כבד וקשירת ורידים פורטלית לכריתת כבד בשלבים (ALPPS) הוכח כגורם להתחדשות כבד יוצאת דופן לאחר מספר שבועות לאחר ניתוח בשלב הראשון. מודלים של בעלי חיים שעברו ALPPS פותחו כדי לחקור יכולת התחדשות פוטנציאלית של הכבד ולהשיג תוצאות קליניות חיוביות.

מודל עכברי של מחיצת הכבד המשויכת וקשירת ורידים פורטלית להליך כריתת כבד בשלבים בעזרת מיקרוסקופ

פרוטוקול זה מספק מידע טכני לשחזור כלי דם באמצעות טכניקת השרוול בהשתלת כבד אורתוטופית בעכבר.

שחזור כלי דם בטכניקת השרוול בהשתלת כבד אורתוטופית בעכבר

מודל העכבר של כריתת כבד חלקית 2/3 (66%) מתואר היטב בספרות, אך לעתים רחוקות נעשה שימוש בכריתת כבד ממושכת יותר המחקה תסמונת קטנה לגודל לאחר השתלת כבד. אנו מתארים הליך מורחב של 78% כריתת כבד במודל עכבר שמביא לכ-50% קטלניות לאחר הניתוח בעכברים בריאים.

כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר

למד מודל עכברים חדשני לאיסכמיה כבדית באמצעות מערכת תלייה משקל. השיטה מאפשרת שליטה מדויקת בזמני איסכמיה ללא פגיעה ברקמת הכבד, ומסייעת בחקר פציעת רפרפוזיה.

השימוש במערכת תלייה משקל של איסכמיה כבד בעכברים

גלה סרטונים נוספים