Name: חוט השדרה Electrophysiology II: ייצור תאי אלקטרודה יניקה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-20T23:59:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: למד כיצד לייצר אלקטרודות יניקה תוך-תאיות למדידת פעילות חשמלית בחוטי שדרה של מכרסמים ניאונטליים. השיטה משתמשת בצינורית פלסטיק PE 90 ובמנורת אלכוהול לחימום ועיצוב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

סמואל ל Pfaff הוא פרופסור במעבדות ביטוי גנים במכון סאלק למחקרים ביולוגיים החוקר את הווארד יוז רפואי במכון. עבודה זו נתמכה על ידי כריסטופר ודנה ריב קרן. ג&#39;ו Belcovson, קנט Schnoeker ומייק סאליבן ב משאבי מולטימדיה במכון סאלק סיוע בצילום ועריכה.

הקלטות אלקטרו של מיתרי השדרה מבודד יכול לגלות שינויים גנטיים והתפתחותיים על המעגלים העצביים 1. אנחנו קודם לכן הפגינו שיטה לנתח מיתרי עכבר בילוד השדרה 2. כאן אנו מציגים שיטה להכנת אלקטרודות יניקה שימושי הקלטה תנועה פיקטיבי של מיתרי השדרה מבודד 3. קצה אלקטרודה צינורות פלסטיק ניתן להסיק עד קצה דק מאוד ביד באמצעות מנורה בטמפרטורה נמוכה אלכוהול 3-5. צינורות הפלסטיק (PE90, קליי אדמס Intramedic TM) מוחזק על הלהבה כדי לרכך את צינורות לצורה נזיל. כמו צינורות מתחיל להתמוסס והופך שקוף יותר הוא מוסר ממקור החום מסתיים הם משכו בעדינות לגזרים. העיתוי של הוצאת צינור מהאש חשוב להבטיח הפלסטיק לא יקרוס או לפצל בעוד נמשכים. החלק הדק של הצינור הוא חתך בסכין גילוח לפי קוטר פנימי הרצוי, כמו מוכתב על ידי גיל הדגימה או רמת סגמנטלי של חוט. על מנת להקל על ביצוע O-טבעת על צינורות, חתך 45 ° נעשית בסוף עבה של צינורות עם סכין גילוח. טבעת חזוק A ו-O-טבעת מותקנים על קצה עבה לצרף את קצה האלקטרודה על חבית של האלקטרודה. כדי לאפשר אלקטרודות בגודל ספציפי למנוע את הקשיים של יד משיכת טיפים אלקטרודה, אלקטרודות ניתן לבנות באמצעות צינור קטן מוחדר צינור עבה (PE90). אורכי בצינור הן ספציפיות לדרישות של הגדרת הקלטה משתנה. אנו מציגים את המדידות השתמשו בניסויים שלנו 1-3,5. אורך 1cm של צינורות PTFE קנס (זאוס, חלקים קטנים) ו - 10 ס"מ אורך של צינורות PE90 נחתכים בסכין גילוח. קצוות של צינורות קטנים צריכים להיבדק כדי לוודא שהם אינם כתוש או סגור. הם יכולים להיפתח באמצעות סיכה חרקים (כלים המדע פיין). ירידה של דבק (JB וולד) ממוקמת על נקודת האמצע של צינורות PTFE. צינורות PTFE דבק נמשכים לתוך צינורות PE90 באמצעות יניקה הפה על צינורות PE90. לחתוך 45 ° נעשית בסוף עבה של צינורות ועל טבעת חזוק ו O-טבעת מחוברים, כמו הקודם. מחבר BNC ו טבעת חזוק הם פירק מן אלקטרודה יניקה מסחרי. מחבר BNC היא ספוגה קסילן במשך שעה אחת כדי להסיר את חותם השעווה. מחבר היא שטפה אז במים יבשים. נמל התחתון בצד זווית חייבת להתבצע בצד של החבית. מוט מתכת מחומם באמצעות מבער בונזן ולחץ לתוך החור הקיים בצד של הקנה בזווית נמוכה. אורך 15 ס"מ של חוט כסף 0.010 אינץ' (AM Systems) היא לגזור טבול באקונומיקה במשך רבע שעה. זה נעשה כדי ליצור ציפוי כסף כלוריד המסייע הולכה אות 6. חוט היא שטפה עם מים, יבשים, מולחמים אז על המחבר BNC. חוט מחבר BNC וכסף מוכנסים לתוך חבית יניקה אלקטרודה עם מספיק מקום מחבר BNC להישאר בצד של החבית. צינורות יניקה מוכנס לתוך הנמל בצד 2-3 ס"מ. סיליקון איטום מוזרק לתוך החבית כ 2-3 ס"מ. מחבר BNC הוא מושחל לתוך חבית של האלקטרודה דוחפים את איטום קדימה. קצה האלקטרודה הוא מושחל לתוך עכשיו הקצה הקדמי של האלקטרודה. צינורות הפסיכולוג ניתן גם להוסיף ולחזק את קו יניקה מנמל לוואי. אלקטרודות הם רכובים על micromanipulators המצורפים עומד מגנטי, והניח ליד צלחת את ההקלטה. כבלים קואקסיאליים BNC מחוברים headstage שהוא מחובר למגבר. המגבר מחובר למתאם (Polyview) שמחובר אנלוגי לדיגיטלי כרטיס (מכשירים הלאומי) על מחשב PC עם תוכנת רכישת נתונים (Polyview). בעת הקלטת נתונים אלקטרו, יש צורך לסלק את כל התערבות חיצונית. המנה הקלטה, מגבר, בשלב הראש מונחות על שולחן האוויר בתוך כלוב פאראדיי כדי למנוע הפרעה חשמלית מכנית, בהתאמה. נציג תוצאות: <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. אלקטרודה יניקה זמינים מסחרית ניתן לשנות על ידי הוספת כסף כבד מד תיל טיפ פלסטיק כי הוא נמשך על יד מנורת אלכוהול, או לבנות עם צינורות פלסטיק זמינים מסחרית בגדלים ספציפיים. בנוסף, איטום פרפין מוחלף יותר סיליקון איטום עמיד קולק. <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. סכימטי של האלקטרודה יניקה ביחס שולחן אוויר (עבור בידוד מכני), כלוב פאראדיי (חשמל isolatiב), מגבר ומחשב. יצוין כי קיימת קרקע הפניה אל צלחת הקלטה קרקע השני הוא הפניה אל שולחן אוויר כלוב פאראדיי.

<ol><li>Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+rhythmic+locomotor+burst+patterns+using+a+continuous+wavelet+transform%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform.</a> Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).</li>
<li>Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Spinal cord electrophysiology.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Gallarda, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+axial+motor+and+sensory+pathways+via+heterotypic+trans-axonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling.</a> Science. 320, 233-236 (2008).</li>
<li>Landmesser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+motor+projection+patterns+in+the+chick+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The development of motor projection patterns in the chick hind limb.</a> J Physiol. 284, 391-414 (1978).</li>
<li>Myers, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+input+is+required+during+embryonic+development+to+mediate+proper+assembly+of+spinal+locomotor+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits.</a> Neuron. 46, 37-49 (2005).</li>
<li>Chanin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+chloride+by+use+of+the+silver-silver+chloride+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode.</a> Science. 119, 323-324 (1954).</li>
<li>Goulding, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circuits+controlling+vertebrate+locomotion%3A+moving+in+a+new+direction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

התפתחות מערכת העצבים ניתן ללמוד באמצעות מיתרי מכרסם מבודד השדרה. בנוכחות של נוירוטרנסמיטורים, תנועה פיקטיבי יכול להיווצר מתוך חוט השדרה בצורת פעילות בדוגמת חשמל 1,3. התפרצויות אלה קצבית מיוצרים הרץ 0.2-0.5 ו - הם בדוגמת ב החילופים משמאל לימין ו-extensor מכופף. בשלבים התפתחותיים שונים, את החוסן ואת דפוסי פעילות זו משתנה 1. מוטציות גנטיות יכול גם להפריע דפוסים של פעילות זו 3,5,7. מחקרים טראנסגנטי והתפתחותית פעילות זו לספק תובנות הארגון של המעגלים דפו...

<table><tbody><tr><td>צינור PTFE Sub Lite Wall (צינור קטן)</td><td>Zeus</td><td>36AWG</td><td>0.005&amp;#8221;ID x 0.003&amp;#8221; Wall (חלקים קטנים) זמין גם ב-0.003&amp;#8221; עד 0.006&amp;#8221;</td></tr><tr><td>צינור גדול (0.86mm (0.34&amp;#8221;))</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td>0.86mm (0.34&amp;#8221;) O.D. 1.27mm (.050&amp;#8221;)</td></tr><tr><td>גוף אלקטרודה</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td></td></tr><tr><td>דבק</td><td>JB Weld</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דבק: סיליקון איטום</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>בדיל ומלחם</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מים עם הכלור</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>חוט כסף: 0.010&amp;#8221;</td><td>A-M Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סיכות לחרקים: Austerlitz 0.1mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>מעמד מגנטי</td><td>Narishige International</td><td>GJ-8</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מניפולטור</td><td>Narishige International</td><td>MN 151</td><td></td></tr><tr><td>לוח קטן (Headstage)</td><td>Grass Technologies</td><td>F-15EB/B1</td><td></td></tr><tr><td>יחידת מתאם Polyview</td><td>Grass Technologies</td><td>PVA 8</td><td></td></tr><tr><td>מגבר Physiodata נייד דו-קוטבי</td><td>Grass Technologies</td><td>15LT</td><td></td></tr><tr><td>כרטיס המרה מאנלוגי לדיגיטלי</td><td>National Instruments</td><td>6035E</td><td></td></tr><tr><td>שולחן אוויר; Vibraplane</td><td>Kinetic Systems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

חוט השדרה electrophysiology ii: ייצור תאי אלקטרודה יניקה

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

פיתוח circuitries עצבי תנועה ניתן ללמוד באמצעות מכרסם בילוד חוט השדרה המרכזי דפוס גנרטור (CPG) התנהגות. אנו להדגים שיטה לייצר אלקטרודות שאיבה המשמשים לבחינת פעילות CPG, או תנועה פיקטיבי, על מיתרי מכרסם גזור השדרה. מיתרי מכרסם השדרה ממוקמים הנוזל השדרתי מלאכותי לשורשי הגחון נמשכים אל האלקטרודה יניקה. אלקטרודה בנויה על ידי שינוי אלקטרודה יניקה זמינים מסחרית. חוט כסף כבד משמש במקום חוט תקן שניתן על ידי האלקטרודה זמינים מסחרית. קצה הזכוכית על האלקטרודה מסחרי מוחלף עם קצה פלסטיק עמידות מוגברת. אנחנו מכינים אלקטרודות נמשך יד אלקטרודות עשויות בגדלים מסוימים של צינורות, המאפשר שחזור עקביות. הנתונים נאספו באמצעות מגבר ורכישת תוכנה neurogram. הקלטות מבוצעות על שולחן האוויר בתוך כלוב פאראדיי כדי למנוע הפרעות מכניות וחשמליות, בהתאמה.

הפגנה של ייצור ושימוש אלקטרודה יניקה תאיים המשמשת למדידת אלקטרו הקלטות של מיתרי מכרסם השדרה בילוד<em&gt; במבחנה</em

חוט השדרה Electrophysiology II: ייצור תאי אלקטרודה יניקה

ניתן לחקור את התפתחותן של מעגלים עצביים ואת התנועה באמצעות התנהגות של מחולל תבניות מרכזי (CPG) בחבל השדרה של מכרסמים בניו born. אנו מדגימים...

שלום. שמי Resh Gary Dory, ואני עוזר מחקר במעבדה faf של מכון סאלק למחקרים ביולוגיים. היום אראה לכם כיצד לייצר אלקטרודות יניקה חוץ-תאיות באמצעות שתי שיטות. ניתן להשתמש באלקטרודות אלו לביצוע הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של חוט השדרה in vitro.השתמשו במנורת אלכוהול כמקור חום כדי להמיס את צינור הפלסטיק PE 90 לרוחב הרצוי. החזיקו את הצינור מעל הלהבה הדולקת והסירו אותו ברגע שיתחיל להמיס, משכו בעדינות את הקצוות לצדדים, תוך הקפדה לא לשבור את מרכז הצינור. תהליך זה מוצג שוב.הסרו את הפיתול ברגע שהוא מתרכך ונמס ומשכו בעדינות את הקצוות לצדדים. חתכו את הפיתול בעזרת להב תער חדה בנקודה התואמת לרוחב המשוער של הדגימה שתימדד בקצה העבה של הפיתול. בצעו את החיתוך בזווית של 45 מעלות.כעת יש להתקין פרה (ferrule) ואטם O-ring על הקצה העבה. הכניסו קצה זה של הצינור דרך הפתח המשושה של הפרה. לאחר מכן, הכניסו את קצה הצינור אל תוך אטם ה-O-ring הגומי.מערך זה יסובב באמצעות בורג לחלקו הקדמי של האלקטרודה. חתכו קטע של סנטימטר אחד של צינור Zeus קטן בעזרת להב תער חד, ובדקו שהקצוות חתוכים באופן נקי והחור פתוח. חתכו קטע של 10 סנטימטרים של צינור PE 90 באמצעות להב תער חד. הניחו טיפה של JB weld במרכז הצינור הקטן באמצעות שאיבה עם הפה.משכו את הצינורית הקטנה ואת הריתוך אל תוך החור של הצינורית הגדולה והניחו למערך זה להתקשות למשך לילה. ל

spinal-cord-electrophysiology-ii-extracellular-suction-electrode

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הפגנה של בידוד של חוט השדרה בילוד עכבר ללימודי אלקטרו.

חוט השדרה Electrophysiology

הטכניקה מתוארת עבור השתלה...

אלקטרודה ייצור השרשה ב Aplysia californica עבור הקלטות רב ערוצי עצבית ושרירי ב, חיים שלמים חופשי מתנהג

סרטון זה מציג הקלטות אלקטרופיזיולוגיות מתרביות אורגנוטיפיות של פרוסות חוט השדרה, שצולמו באמצעות מערך מרובה אלקטרודות או מכשיר MEA. הקלטות אלה מעריכות התחדשות עצבית בין הפרוסות. הפעילות החשמלית המסונכרנת שנצפתה מאשרת רגנרציה עצבית מוצלחת.

רישומים אלקטרופיזיולוגיים להערכת התחדשות עצבית בפרוסות חוט שדרה בתרבית משותפת

סרטון זה מדגים ייצור של אלקטרודה שטוחה העוטפת עצבים. הוא מציג את השילוב של מתכת מיגון ושכבות פולימריות מדויקות למשטח הקלטה יעיל. התהליך כולל חיבור, ריפוי, חיתוך וחיתוך שכבות פולימר למגע עצבי אופטימלי והקלטת אותות מדויקת.

ייצור אלקטרודות עצב בממשק שטוח לרישום פעילות עצבית

סרטון זה מדגים את השיטה להשתלת מערכת אלקטרודות על הראש בחולדה מורדמת לצורך זיהוי פרכוסים בזמן אמת. ההליך כולל הצבת אלקטרודות גירוי והקלטה, אבטחתם במלט דנטלי וחיבורן למגבר המותקן על הראש.

השתלת מערכת אלקטרודות על הראש במודל חולדה לזיהוי פרכוסים בזמן אמת

בבעלי חיים עם נוירונים שזוהו גדולים...

Extracellularly זיהוי תאי עצב מוטורי לשריר בברכת מוטור<em&gt; Aplysia californica</em

מאמר זה מספק תיאור מפורט על תהליך הייצור של אלקטרודה עצב ממשק שטוח קשר בצפיפות גבוהה (FINE). אלקטרודה זה ממוטב עבור הקלטת מגרת פעילות עצבית באופן סלקטיבי בתוך עצבים היקפיים.

המצאה של צפיפות לתקשר גבוהה, אלקטרודות עצב שטוח ממשק עבור יישומי הקלטת הגירוי

פרוטוקול מפורט זה מתאר טראנס גירוי אלקטרודה השמה על העצם הטמפורלית במטרה לחקור קצר - ארוכת ההשפעות של גירוי חשמלי טראנס ב בחופשיות העברת חולדות.

גירוי חשמלי טראנס כרונית והקלטה Intracortical בחולדות

המוצג כאן הוא פרוטוקול עבור ייצור של מערכת הוהשתלות עבור בהקלטה vivo כרונולוגי של פוטנציאל אלקטרומגנט מעורר וספונטני. המערכת חלה על חקירת שימור של שרירי הגרון לאחר פגיעת העצבים.

מערכת ולוהשתלות לכרוני בVivo האלקטרומגרפיה

פרוטוקול זה מתאר שיטה המשתמשת במהדק טלאי כדי לחקור את התגובות החשמליות של נוירונים מוטוריים לגירוי חוט השדרה (SCS) ברזולוציה מרחבית-זמנית גבוהה, אשר יכולה לסייע לחוקרים לשפר את כישוריהם בהפרדת חוט השדרה ובשמירה על קיום התא בו זמנית.

הכנת Ex vivo של פרוסת חוט השדרה להקלטת מהדק טלאי של כל התא בנוירונים מוטוריים במהלך גירוי חוט השדרה

מטרתנו הייתה לספק מדריך מעודכן וקל למעקב על ייצור ובדיקה של אלקטרודות אלקטרומיוגרפיה אפימיסיאליות. לשם כך, אנו מספקים הוראות למיקור חומרים והדרכה מפורטת של תהליך הייצור והבדיקה.

פיתוח אלקטרודת אלקטרומיוגרפיה אפימיסיאלית בעלות נמוכה: זרימת עבודה פשוטה לייצור ובדיקה

למד כיצד לייצר אלקטרודות יניקה תוך-תאיות למדידת פעילות חשמלית בחוטי שדרה של מכרסמים ניאונטליים. השיטה משתמשת בצינורית פלסטיק PE 90 ובמנורת אלכוהול לחימום ועיצוב.

חוט השדרה Electrophysiology II: ייצור תאי אלקטרודה יניקה

גלה סרטונים נוספים