Name: העקרונות הבסיסיים של טיהור באמצעות כרומטוגרפיה לנוזל סופר - פרסומת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: למד את העקרונות הבסיסיים של טיהור באמצעות כרומטוגרפיה לנוזל סופר-קריטי. גלה כיצד קצב זרימה, ממסי התמסה וסלקטיביות עמודות משפיעים על בידוד תרכובות ומאפשרים מעבר יעיל מניתוח אנליטי לטיהור פרסומתי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. לדוגמא הכנה <ul class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתחם תערובת 1: coumarin, איבופרופן, ו קרבמזפין, 20 מ"ג / מ"ל ​​כל מתנול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתחם תערובת 2: איבופרופן קרבמזפין, 20 מ"ג / מ"ל ​​כל מתנול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתחם תערובת 3: איבופרופן קרבמזפין, 20 מ"ג / מ"ל ​​כל DMSO (sulfoxide דימתיל) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתחם תערובת 4: 10 מ"ג / מ"ל ​​Fenoprofen, 15 מ"ג / מ"ל ​​Ketoprofen, 20 מ"ג / מ"ל ​​Flavone, 20 מ"ג / מ"ל ​​איבופרופן, ו 20 מ"ג / מ"ל ​​coumarin של מתנול </li></ul> 2. ניסיוני תנאי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנליטי כרומטוגרפיה בוצעה על מערכת תחנת שיטת ווטרס SFC. טור: Viridis SFC 2-Ethylpyridine טור, 5 מיקרומטר, 4.6 x 150 מ"מ, חלק מספר 186004937. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Preparative כרומטוגרפיה בוצעה על מערכת Prep ווטרס SFC 100 UV בימוי. עמודות: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Viridis SFC 2-Ethylpyridine טור OBD, 5 מיקרומטר, 150 x 19 מ"מ, מספר חלק 186004945 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Viridis OBD עמודה SFC סיליקה, 5 מיקרומטר, 150 x 19 מ"מ, מספר חלק 186004918 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Viridis SFC 2-Ethylpyridine טור OBD, 5 מיקרומטר, 100 x 19 מ"מ, מספר חלק 186004944 </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטה פרמטרים אחרים: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טמפרטורה טור: 40 ° C </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתנול: Cosolvent </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נפח הזרקה, ספיקה, והדרגות: מדווחות במספרים </li></ul></li></ol> 3. נציג תוצאות קצב הזרימה קצב זרימת בשימוש הפרדות preparative LC מוגבלת על ידי מספר גורמים, כולל אורך ו קוטר של הטור, גודל החלקיקים ואת backpressure המערכת. צמיגות נמוכה פחמן דו חמצני, המרכיב העיקרי של השלב ניידים SFC, מאפשרת את השימוש ספיקות גבוהות יותר מאלה המשמשים בדרך כלל כרומטוגרפיה נוזלית. Backpressure הקשורים אורך הטור הוא גם נמוך יותר, המאפשר שימוש של עמודות יותר כדי להגדיל את הרזולוציה. ספיקה גבוהה להגדיל את התפוקה על ידי הפחתת כמות של זמן כדי להשלים ההפרדה. כפי שמוצג באיור 1, הפרופיל chromatographic זהה ברמות ספיקה שונה ובלבד שיפוע שיפוע לידי ביטוי השינוי אחוזים נפח הטור נשאר קבוע .. מטרה זו מושגת על ידי הפחתת הזמן לרוץ בשיעור זהה את קצב הזרימה הוא גדל. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="איור 1"> לדוגמה פירוק וטעינה מרכך בידוד תרכובות מתערובות דורש כי המדגם להיות מסיס לחלוטין לפני הזריקה. מתנול, הנפוצים ביותר שיתוף ממס ב SFC, לא solubilize כל דגימות על ריכוזים גבוהים נדרש בדרך כלל טיפוסי הפרדות preparative. כמויות גדולות של ממיסים כמו מתנול יכול להגביל את היכולת של מסה הטור בשל תופעות ממס חזק שיכול לעוות את כרומטוגרפיה. הנחל משנה זריקה, פטנט התצורה הסטנדרטי של כל הכנה מערכות ווטרס SFC, נועדה להפחית את האפקט הזה ממס. דימתיל sulfoxide (DMSO) משמש באופן קבוע במעבדות טיהור solubilize הרבה סוגים שונים של תרכובות. איורים 2, 3 להמחיש עד כמה זריקות DMSO ב SFC יכול לגרום העמסה גבוהה רזולוציה טובה יותר עבור יישומים achiral לעומת דגימות מוזרק מתנול. הערה: לקבלת יישומים כיראליות, זהירות צריך להיחשב DMSO יכול לפגוע קשות שלב המסורתית מצופה נייח כיראליות. אם DMSO צריך להידרש מסיסות המדגם, טור כיראלי משותקת יש לבחור. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="איור 2"> <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="איור 3"> בררנות ב SFC, מספר עמודות נבדקים באופן שגרתי כדי לקבוע אשר מספק את הפתרון הטוב ביותר ובצורה שיא עבור רכיבים בתערובת. רזולוציה טובה בין תרכובות מוביל isolations של תרכובות מטרה עם טוהר גבוהה. בדוגמה הבאה, העמודה 2-ethylpyridine מראה הפרדה מעולה של כל חמשת תרכובות בתערובת המדגם. תערובת מדגם זהה לנתח על עמודה סיליקה מראה רק שלוש פסגות רכיב כי יש לו סלקטיביות שונה. Coumarin ואיבופרופן coelute בערך 0.8 דקות flavone ו fenoprofen coelute מעט מאוחר יותר. Flavone ואיבופרופן גם לשנות את סדר elution על הטור סיליקה. Ketoprofen היטב להפריד בין כל הפסגות האחרות הן על עמודות. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig4.jpg" alt="איור 4" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="איור 4"> דרוג תערובות מדגם גולמי מנותחים בדרך כלל עם שיפוע הקרנה שמתחיל מ - אחוז נמוך של ממיס אורגני ומסתיים אחוז גבוה יותר של ממיס אורגני תוך זמן קצר יחסית. אם תרכובות עניין נפתרות היטב, שיפוע עשוי להיות מדורגים ישירות לטיהור. כאשר תרכובות כל elute לפני ההשלמת הדואר של שיפוע והם נפתרה במלואה, ירידה פשוטה אורך השיפוע מקובל. שיעורי זרימה מהירה בשימוש SFC בשילוב עם מילויים שונה משמעותית לקצר את הזמן הנדרש לטיהור מוחלט של תרכובות מטרה. הפרדות קנה מידה מחייב התאמת כימיה עמודה גודל החלקיקים וכן כרכים הזרקת מדורגים בהתאם והדרגות. ווטרס preparative עמודות SFC עמוסים טכנולוגיה OBD, הבטחת יציבות המיטה מעולה וביצועים דומים ווטרס עמודות אנליטי SFC. OBD עמודות preparative ארוזים לישון בצפיפות אשר תואם את הטור אנליטית המקבילה. הליך חדשני מייצרת עמודות preparative עם יציבות reproducibility מעולה, ויעילות. המחקר טוען מתבצעת בקנה מידה קטן כדי לקבוע כמה המונית מדגם ניתן לטעון על הטור. המטרה היא למקסם את העומס מבלי להתפשר על הרזולוציה. רזולוציה משופרת שיא מוביל המון גבוה וטוהר טוב יותר עבור תרכובות מבודדות. טעינת עמודה גבוהה מפחיתה את מספר ריצות נדרש לקבלת חומר די לניסויים הבאים. כרומטוגרפיה מן המחקר טוען מתואר באיור 5. נפח שמרנית 35 הזרקה μL מציג רזולוציה טובה בין כל התרכובות בתערובת והיא מדורגים לאחר מכן לטווח preparative על העמודה גדול. בהיקף כולל של 600 μL היה מוזרק על 19 x 150 מ"מ טור SFC preparative. איור 6 משווה את כרומטוגרפיה באמצעות צבע שונה בקנה מידה קטן בעומס המקסימלי עם כרומטוגרפיה בקנה מידה גדול המשמש לבידוד. הסלקטיביות היא זהה, גורם קריטי בעת שימוש כרומטוגרפיה אנליטית ככלי צופיות עבור בידוד הבדלים purification.The בזמן שימור ברזולוציה בין אנליטיות preparative chromatograms ניתן לייחס גורמים שונים, לרבות אמצעי אחסון של המערכת למצב זריקה. בפרט, המגביל פטנט זרם הזרקה * מצב מועסק לכל preparative מערכות ווטרס SFC, למזער את השפעת הממס ולכן שיפור התפוקה והיעילות. * פטנט אמריקאי # 6576125 <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig5.jpg" alt="איור 5" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="איור 5"> <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig6.jpg" alt="איור 6" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="איור 6">

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

<ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העקרונות הבסיסיים של כרומטוגרפיה נוזלית ניתן ליישם כרומטוגרפיה לנוזל סופר (SFC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כרומטוגרפיה נוזל סופר קריטי ניתן לרוץ בקצב זרימה מוגברת עושה isolations מהר יותר והעלאת התפוקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות עם מסיסות מוגבלת יכול להיות מומס sulfoxide דימתיל וטיהר באמצעות SFC. שימוש DMSO לפירוק מדגם הופך את תהליך טיהור קל יותר על ידי צמצום חוסר הוודאות הקשורים מסיסות המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלטה וטעינה של דגימות מומס DMSO ניתן לשפר לעומת דגימות אותו מומס מתנול. רזולוציה טובה יותר מדגם מוביל מוצרים עם טוהר גבוה. העמסה גבוהה משפרת את היעילות של תהליך טיהור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסלקטיביות טור משפיע על הפרדת מרכיבי התערובת. הקרנת עמודות שונות עם מילויים מהיר מוביל החלטה על איזו עמודה preparative להשתמש עבור בידוד תרכובות במדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היכולת בקנה מידה בין אנליטיות preparative עמודות OBD מוביל הפרדות זהה בשני סולמות קטנים וגדולים, ובלבד נפח הזרקה, מדרון, שיפוע וזמן הם מדורגים נכון את הכימיה ואת גודל החלקיקים נשארים קבועים. מדרגיות טור מסיר את אי הוודאות זיהוי השיא, ובכך להקל על תהליך יעילות גבוהה יותר לטיהור. </li></ul>

<table><tbody><tr><td>תחנת שיטה SFC מערכת</td><td>מים</td><td>מידע נוסף זמין ב www.waters.com</td><td>מערכת SFC אנליטית</td></tr><tr><td>SFC-UV Prep 100</td><td>מים</td><td>מידע נוסף זמין ב www.waters.com</td><td>מערכת SFC הכנה</td></tr><tr><td>Viridis & #8482; SFC 2-אתילפירידין, 4.6 x 150 מ"מ, 5 &mu; m</td><td>עמודת מים</td><td>186004937</td><td>כרומטוגרפיה אנליטית SFC עמודה</td></tr><tr><td>Viridis&#8482; SFC 2-אתילפירידין OBD&#8482;, 19 x 150 מ"מ, 5 &mu; m עמוד</td><td>מים</td><td>186004945</td><td>הכנה SFC כרומטוגרפיה עמודה</td></tr><tr><td>Viridis&#8482; SFC סיליקה OBD&#8482;, 19 x 150 מ"מ, 5 &mu; m עמוד</td><td>מים</td><td>186004918</td><td>הכנה SFC כרומטוגרפיה עמוד</td></tr><tr><td>Viridis&#8482; SFC 2-אתילפירידין OBD&#8482;, 19 x 100 מ"מ, 5 &mu; m עמודת</td><td>מים</td><td>186004944</td><td>עמודת כרומטוגרפיה SFC הכנה</td></tr></tbody></table>

העקרונות הבסיסיים של טיהור באמצעות כרומטוגרפיה לנוזל סופר - פרסומת

Basic Principles for Purification Using Supercritical Fluid Chromatography - ADVERTISEMENT

למרות כרומטוגרפיה לנוזל סופר (SFC) אינה שיטה חדשה, preparative SFC הופך יותר ויותר פופולרי יותר עם התקדמות תוכנה מכשור, וכימיה. עקרונות יסוד לבידוד תרכובות עם SFC דומים כללי היסוד של כרומטוגרפיה preparative בקנה מידה גדול נוזלי. במחקר זה, אנו ממחישים את השפעת קצב הזרימה, פירוק מדגם ממס, סלקטיביות טור על הבידוד של תרכובות מתערובת. עמודות ארוז עם צפיפות מיטה אופטימום (OBD) טכנולוגיה 1 ועם כימיה התאמת להבטיח הרחבה קל וצפוי של סולם קטן יותר הפרדות preparative.

עקרונות יסוד להפרדת תרכובות מתערובות באמצעות כרומטוגרפיה לנוזל סופר (SFC) דומים יסודות כרומטוגרפיה נוזלית preparative.

Although supercritical fluid chromatography (SFC) is not a new technique, preparative SFC is becoming increasingly more popular with advances in ...

basic-principles-for-purification-using-supercritical-fluid

Without Section

הרכב תמציות השומנים הקוטב הרכב חומצות שומן של glycerolipids הפרט נקבעים ניסוי פשוט חזקים פרופיל השומנים. לענין זה, glycerolipids מבודדים על ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה נתונה transmethylation של קבוצות acyl שלהם. Methylesters acyl שומן הם לכמת ידי כרומטוגרפיה גז נוזלי.

Thaliana ארבידופסיס פולאר Glycerolipid פרופיל ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC) יחד עם כרומטוגרפיה גז נוזלי (GLC)

השיטה מתוארת למדוד סמנים ביוכימיים של הילוד היפוקסיה, איסכמיה. הגישה מנצל גבוהה כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ (HPLC) וגז כרומטוגרפיה ספקטרומטריית מסה (GC / MS).

מדידה ביוכימית של היפוקסיה ילודים

שיטה אוטומטית לזיהוי מתאימים הידרופובי כרומטוגרפיה אינטראקציה (היק) התקשורת כדי לשמש בתהליך של טיהור חלבון מוצג. השיטה משתמשת בינוני הלחץ כרומטוגרפיה נוזלית כולל מערכת מיזוג חיץ אוטומטי, הזרקת לולאה דגימה דינמי, בחירת העמודה רצף, רב גל ניתוח, חלק פיצול אוסף eluate.

הידרופובי אוטומטי אינטראקציה כרומטוגרפיה טור בחירה עבור שימוש ב טיהור חלבון

כאן אנו מתארים פרוטוקול לטיהור מאוד פעיל Hsp104, AAA hexameric + חלבון מן שמרים, אשר זוגות הידרוליזה ל-ATP disaggregation חלבון. תכנית זו מנצל לבנות His6-tagged לטיהור זיקה...

טיהור Hsp104, Disaggregase חלבון

פרוטוקול זה ידגים מיצוי וניתוח של חומצות שומן ביו-אקטיביות חופשיות ואסטריות מהתאים. חומצות שומן מכומתות במדויק באמצעות דילול איזוטופים יציב, כרומטוגרפיה נוזלית כיראלית, לכידת אלקטרונים, יינון כימי אטמוספרי, ספקטרומטריית מסה לניטור תגובות מרובות (SID-LC-ECAPCI-MRM/MS).

ליפידים מיצוי נייד עבור דילול ממוקד איזוטופ יציב ניתוח כרומטוגרפיה נוזלית ספקטרומטריית-Mass

השיטה המהירה לניתוח מתחם נדיפים בפרי מתואר. התרכובות נדיפים הנמצאים אמיץ של homogenate המדגם מופרדות במהירות זוהה עם כרומטוגרפיה אולטרה מהיר גז (GC) יחד עם גל משטח אקוסטי (SAW) חיישן. נוהל לטיפול נתונים וניתוח נדון גם.

פרי ניתוח נדיפים באמצעות האף האלקטרוני

פרוטוקול בסיסי להפריד את שברי דנ"א באמצעות אלקטרופורזה agarose ג'ל מתואר.

ג&#39;ל אלקטרופורזה agarose להפריד את קטעי ה-DNA

רמזי ריח לתווך התנהגויות רבות ושונות בחרקים, ולעתים קרובות הם תערובות מורכבות מורכבות מעשרות עד מאה תרכובות נדיפות. שימוש בגז כרומטוגרפיה עם הקלטה רבה ערוצית באונת מחושי החרקים, אנו מתארים שיטה לזיהוי של תרכובות ביו.

זיהוי נדיפים חוש ריח באמצעות קלטות כרומטוגרפיה-Multi-יחידת גז (GCMR) באונת מחושי החרקים

פרופיל מטבוליט לא ממוקד על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד בשילוב עם ספקטרומטריית מסה (UPLC-MS) היא טכניקה רבת עוצמה לחקירת חילוף החומרים.  מאמר זה מתאר זרימת עבודה טיפוסית המשמשת לפרופיל מטבוליט לא ממוקד של סרום, כולל ארגון והכנת דגימות, רכישת נתונים, ניתוח נתונים, בקרת איכות וזיהוי מטבוליטים.

בקנה מידה גדול Profiling metabolomic ללא ממוקד של סרום על ידי כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים-Mass ספקטרומטריית Ultra (UPLC-MS)

לא ממוקד metabolomics מספק השערת יצירת תמונת מצב של פרופיל מטבולי. פרוטוקול זה יהיה להדגים את המיצוי והניתוח של מטבוליטים מתאי, סרום, או רקמות. מגוון המטבוליטים סקר באמצעות מיצוי שלב נוזלי נוזלי, microflow ultraperformance כרומטוגרפיה נוזלית / רזולוציה גבוהה ספקטרומטריית מסה (UPLC-HRMS) מצמידים את תוכנת ניתוח ההפרש.

Metabolomics לא ממוקדים ממקורות ביולוגיים באמצעות Ultraperformance כרומטוגרפיה נוזלית-רזולוציה גבוהה ספקטרומטריית מסה (UPLC-HRMS)

למד את העקרונות הבסיסיים של טיהור באמצעות כרומטוגרפיה לנוזל סופר-קריטי. גלה כיצד קצב זרימה, ממסי התמסה וסלקטיביות עמודות משפיעים על בידוד תרכובות ומאפשרים מעבר יעיל מניתוח אנליטי לטיהור פרסומתי.

העקרונות הבסיסיים של טיהור באמצעות כרומטוגרפיה לנוזל סופר - פרסומת

גלה סרטונים נוספים