נוהל 1.5 שעה עבור זיהוי אנטרוקוקוס מינים ישירות מתרבויות דם

המטרה הכוללת של הליך זה היא לזהות במהירות מיני אנטרוקוקוס מבקבוקי תרבית דם חיוביים באמצעות חומצת גרעין פלואורסצנטית פפטידית והכלאה של C שתיים. לאחר הכנת תרביות דם ובדיקת גרם כדי לאשר את קיומה של תרבית אנטרוקוקים, הדגימות מקובעות על שקופיות מיקרוסקופ דגי PNA. לאחר מכן המגלשות מודגרות עם בדיקות PNA ספציפיות לאורגניזמים המעניינים.

לאחר שהבדיקות היברידיות, בוצעה שטיפות קפדניות להסרת עודפי בדיקה לא היברידית. מדיית הרכבה מתווספת לשקופיות, אשר נאטמות לאחר מכן עם פתקי כיסוי. ניתן לזהות את מיני האנטרוקוקוס הקיימים בדגימה על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

פרוטוקול זיהוי דגי PNA זה ייחודי בכך שהוא מספק שיטה מהירה וספציפית לזיהוי אנטרוקוקוס משיתוק. דגימות תרבית דם למטופלים דגירה של שני בקבוקי תרבית דם, אחד אירובי ואחד אנאירובי המכילים דם ורידי מחולה החשוד באלח דם במכשיר תרבית דם אוטומטי בטמפרטורה של 35 מעלות צלזיוס. לאחר שהמכשיר מציין שהוא זיהה צמיחה חיידקית, הסר את הבקבוק, סובב בעדינות את בקבוקי תרבית הדם כדי להשעות מחדש את החיידקים באופן שווה.

לאחר מכן, באמצעות מזרק סטרילי ומחט, העבירו באופן אספטי כחמישה מיליליטר דם מכל בקבוק לצינור פקק בורג נפרד. לאחר הקצאת כל הדגימות, השתמש בפיפטה סטרילית כדי להעביר טיפת דם מכל צינור לשקופית מיקרוסקופ זכוכית נפרדת. הניחו לשקופית להתייבש באוויר למשך כ-15 דקות.

לאחר מכן, לאחר שהמגלשה יבשה לחלוטין, טבלו את השקופית במתנול כדי לתקן את הדגימה. לאחר תיקון השקופיות, שטפו אותן ובצעו כתם גרם סטנדרטי כדי לקבוע את המורפולוגיה של האורגניזמים הקיימים בכל תרבית דם. בחן את שקופיות הכתמים באמצעות מיקרוסקופ עם מטרת טבילה בשמן.

הזן יופיע כקוקי גרם חיובי המורכב בדרך כלל בזוגות או בשרשראות קצרות. הניחו טיפה אחת של תמיסת קיבוע בבאר של שקופית מיקרוסקופ דגים. מערבבים בעדינות את צינור תרבית הדם לבדיקה.

לאחר מכן העבירו 10 מיקרוליטר תרבית על טיפת תמיסת הקיבוע וצנרת אותה למעלה ולמטה כדי לחלב את הדגימה. הניחו את השקופיות על צלחת חימום בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות כדי לתקן את המריחות בכל בדיקה. הקפד לכלול שקופיות בקרה חיוביות ושליליות להערכת איכות הבדיקה.

אם e ניתן לרכוש שקופיות בקרה קשות מוואן DX או להכין אותן באמצעות תרביות ייחוס. לאחר שהמריחה מוכנה, הניחו טיפה אחת של O-E-P-N-A על הבאר המכילה את דגימת תרבית הדם, וגם על בארות הבקרה החיוביות והשליליות. כדי למנוע זיהום של תמיסת מלאי הבדיקה, הקפד לא לאפשר לקצה בקבוק הטפטפת לגעת במריחת הדם.

הנח החלקת כיסוי על גבי הדגימה, הקפד לא ליצור בועות אוויר. לאחר מכן דגרו את המגלשה על גוש חימום בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. כדי לאפשר ל-PNA להכלאה לאחר הדגירה, הנח את השקופיות במנשא שקופיות.

טבלו את מנשא השקופיות הטעון בכלי מכתים המכיל תמיסת כביסה חמה מראש של 55 מעלות צלזיוס. כדי להסיר את ה-PNA העודף מהדגימה ולהחליק בעדינות את החלקת הכיסוי על ידי ערבוב השקופית במאגר או באמצעות מלקחיים. דגרו את השקופית בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס בתמיסת כביסה למשך 30 דקות.

לאחר מכן הסר את השקופית מכלי הצביעה ואפשר לה להתייבש באוויר. לאחר שהמגלשה יבשה, הוסף טיפה אחת של מדיום הרכבה בטמפרטורת החדר לשקופית והנח בזהירות פתק כיסוי על הדגימה. בחן את השקופיות במיקרוסקופ פלורסנט באמצעות מסנן כפול תוך שעתיים לאחר ההכנה.

בשיטה זו ניתן להבחין בין איפי, קשה, המוצג בירוק משמאל לבין eum באדום. בפאנל האמצעי בקצה הימני יש תוצאה שלילית. שלושה דברים שכדאי לזכור להשגת תוצאות מוצלחות הם שיש לשמור על טמפרטורות המכשיר בטמפרטורות שנקבעו.

עליך לעקוב מקרוב אחר הליך הכתם כמתואר בתוספת האריזה. ולבסוף, אתה צריך שיהיה לך קורא מנוסה שעושה קריאה יסודית של השקופית. פרוטוקול זה שימושי בקבלת החלטות טיפוליות לטיפול באלח דם הנגרם על ידי אנטרוקוקוס.

תודה על הצפייה ובהצלחה בניסויים שלך.