הדגמת שימושים של ספקטרומטר הכבידה רומן כוח כדי למתוח מדוד חלבונים סיביים

מערך כוח הכבידה מורכב ממעמד epi, מיקרוסקופ אור רגיל, מצלמה דיגיטלית ומחשב. אנו משתמשים במערך זה לצורך ביצוע acid של מולקולות בודדות. ניתן להקליט שיווי משקל של כוחות או לספק כוח מדורג באמצעות טיפה.

כדי להתחיל, עלינו להכין מיקרו-זכוכית כך שניתן יהיה לבצע בה סוג זה של תהליך. למדידה של כ-10 מיליגרם מהפולים שבהם נשתמש, אני מכין בדרך כלל 2K. כאן יש לנו חמישה מיליליטר של we're gonna three triology.

שם נכין את דגימת הביקורת הראשונה. ערבבו את התערובת היטב בעזרת פיפטה, ולאחר מכן העבירו 2 mL מהתערובת אל מעל ה-bead cake. השאירו את ה-bead cakes למשך 2 דקות, ולאחר מכן בצעו ערבוב ב-vortex באופן יסודי במשך 2 שניות.

המיסו את השניים הרטובים. יש להוסיף purine אחד במים מזוקקים פעמיים. צימוד ב-pH 6.

בפשטות, הוסיפו חמישה מיליליטר של באפר הצימוד (coupling buffer) לכל חרוז, וצימוד זה גורם לחרוז להתחבר. לאחר מכן, הנוגדנים נקשרים בצימוד שוב; ערבבו ב-vortex למשך דקה. צנטריפוגו למשך חמש דקות, ואם אתם משתמשים במקפיא כדי להשיג את הגלייד (glide), עליכם לדלל אותו מכל ריכוז שיהיה ל-5% באמצעות באפר הצימוד.

לאחר מכן, קחו שני מיליליטרים מתמיסה זו והוסיפו אותם, ופעולה זו תאפשר את הצימוד של ה-TER עם הקצוות שכבר נמצאים על הוורטקס שלנו. ביצעו זאת עבור שניים, סובבו למשך שלושה. הליך באפר הצימוד.

הוסף שוב חמישה מיליליטרים של בופר צימוד (coupling buffer) אל העוגה (cake). שוב, ערבב, סבב במערבל (spin) ושאב. בפעם הרביעית, נשאר נוזל על גבי העוגה, כדי לאפשר לנוגדן לנוע בחופשיות.

זהו הנוגדן שלנו. מדוד את הנפח במיקרו. את הנוגדנים המומסים, בערך 1 mol, מדללים במים מזוקקים כפליים, והתערובת מסובבת במשך 30 דקות, למשך הזמן המתאים.

כדי לנטרל את כל הדבק שאינו פעיל, עין אל עין. נסובב את התערובת בצנטריפוגה כדי להיפטר מה-S. לאחר מכן, יש להכין את התכולה שמהווה את הפרוטוקול. קחו חמישה מיליליטר של החרוזים, הנה החרוזים, והכניסו אותם פנימה.

חזרו על השלב שלוש פעמים, ואותו הדבר לגבי כל בדיקה שתבצעו. כדי להתחיל בהכנה, עלינו ראשית להוציא את החלבון שלנו. במקרה זה, פנו למקפיא ה-70- שבו מאוחסן החלבון; חשוב להוציא חלבון זה ולהפשיר אותו.

כעת, זה יהיה הרבה יותר מרוכז ממה שנרצה להשתמש בבדיקה שלנו. לכן, נוריד את הנפח לכ-15 ואוציא חלק ממנו לקצה הטיפ. לאחר מכן, כדי להגיע לנפח מדויק, נוריד את כמות הנפח לכ-5 µL. עבור החרוצים הגדולים, ניקח נפח גדול יותר, של 10 µL מדגימה זו של החרוצים.

וכך נקבל תוצאה טובה; כאן אנו מוסיפים כ-350 µL נוספים של תמיסת באפר לבדיקה (assay buffer) לתוך פלסורת המיקרוצנטריפוגה כדי להגיע לריכוז סופי. כעת נעשה זאת באופן דומה ל-aex your will A; כאן נסובב את המכשיר בצורה אנכית ונבצע זאת. כעת הגיע הזמן להכין בפועל את הזרימה שבה ימוקמו החששבים שלנו.

אני מניח את תית הַמִּקְרוֹסְקוֹפּ הסטנדרטית הזו לתוך 1% ואז היא תיחתך עם דבק עבור העיגונים שייצמדו לפני השטח של, של חיתוך הזכוכית והכיסוי ותיתי המיקרוסקופ. כבר טיפלתי בקצוות עם ה-, ואני אחיל את פיסת הזכוכית הדקה יותר הזו על תית מיקרוסקופית עבה יותר. תא זה יהיה קטן יחסית.

הנה חלק קטן כאן, והוא נמצא במצב פגום. עוד אחד מאותם מקרים שקורים מדי יום. הסוכן גורם לי להשתפר, להיות טוב יותר.

כעת נעביר את שתי הדגימות האחרונות בנות ה-25 שנה לטעימה לפני שנתחיל להוסיף את הקרקרים והגבינה. ופספסת את השמש. רק למעטות יש טעם, רק לאחרונות.

וכאן, אם תסתכלו מקרוב, ניתן למעשה לראות את החרוץ. לגבי הטיפ, מה שאני עושה הוא שמתחיל פשוט בהקשה על האזור שבו נמצא החרוץ, ולאחר מכן אני מבצע זאת לאורך כל שאר פני השטח של הפס这里, בערך 40 מעלות, כדי שנוכל להניח את הפס הזה במקלטים שונים ולא לדאוג מכך שהדגימות ינדדו למטה. אינכם זקוקים לבורג קיבוע כדי לדגום את הבוקה עבור חלק מהיין שלי, בחלק האחורי של הקו ואולי אקבע את הפס ואשתמש בתפס נוסף כדי לשמור על יציבות רבה יותר, ואז נוכל להציב את העדשה.

זהו השלט הרחוק המשמש אותנו למיקום השريחה, וכל המכשירים דולקים, כולל המצלמה. אנו יכולים להתחיל בניטור אחר חרוז פוטנציאלי, פשוט על ידי מעקב במסך הווידאו. בזה שמימינו משמאל יש חרוז קטן יותר, והוא נראה בערך כמו שאר החרוזים הקטנים שפשוט מונחים שם על פני השטח של הלופה.

עם זאת, זוג החרוצים נמצא כך שישנו חרוץ שנכנס למבט ממוקד (in focus) כאשר פני השטח של החרוץ הרחוק מה-LOP נמצאים במצב זה, מה שמעיד על כך שהחרוץ נמצא במישור מיקוד שונה מהחרוץ השני על השקופית. זוג החרוצים בצד ימין של A מדגים כיצד זוגות עשויים לפעול על שקופית. לכן, אנו מניחים את השקופית ועוברים סיבוב בזוויות שונות המעניקות לנו אורכים שונים, ולאחר מכן אנו משתמשים בסיבוב. אנו רואים הדמיה של כיצד זוג חרוצים עשוי להיראות בשימוש במחשב.

מצאנו את שניהם. במקרה זה חישבנו שניתן להשמיט את המדד המסופק, וכאן השמטנו את F וכן השמטנו גם את השאר. תודה שצפיתם.

בהצלחה עם ההפרעה שלך. זהו זמן לרקוד. חוץ מזה, אל תחשוב שמישהו לא ינצח את שלי.

חבריי עסוקים בניסיון להשיג את זה. הכל נשאר מאחוריי. איפה הבחורה שהגעתי איתה?

היא הולכת לעזוב עם חבר שלי. היא באמת חושבת שהיא כזו. היא לא מכירה גבר אמיתי.

רכב שוב, ימינה שוב, שור מכני. תן לו להשתחרר. ימינה, ימינה, ממש שם במקסיקו.

אני אוהב את הדרך בסבבים המזוינים הלילה. שור מכני. אל תאט.

תן לי 5 שניות להתיישב כשתסיים עם יד שמאל שלי. רק כדי להשתמש בימין. כן, עם יד שמאל אני פשוט אשתמש בימין.