Name: מסלולי לימוד Cell רולינג על דפוסי קולטן אסימטרית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-13T16:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 24 s
Description: למדו לנתח מסלולי גלגול תאים על דפוסי קולטן אסימטריים באמצעות HL-60 ו-MATLAB. שיטה זו מאפשרת הפרדת תאים ללא תיוג ומספקת תובנות לגבי דינמיקת תנועת תאים בזרימה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרויקט זה מומן על ידי מרכז Deshpande עבור חדשנות טכנולוגית ב-MIT (ר.ק. ו JMK) ואת אות הקריירה NSF 0952493 עד ר.ק. דרך כימי וביולוגי תוכנית הפרדות. אנו מודים המכון ננוטכנולוגיות חייל (ISN) לבין טכנולוגיה Microsystems מעבדה (MTL) ב-MIT עבור שימוש במתקנים שלהם.

1. HL60 תא מתגלגל 1.1. המצאה של Patterned מצעים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הדפסה microcontact (μCP) 4-7 לבצע לסירוגין עצמית התאספו monolayers (Sams) של מולקולות PEG על מצופה זהב שקופיות הזכוכית: לפברק הדפסה microcontact polydimethylsiloxane (PDMS) חותמות אשר הגדיר את דפוסי קולטן עם זווית הנטייה של α = 10 ° על ידי תהליך SU 8 דפוס. נקו את משטח זהב עם פתרון פיראניה (03:01 תערובת של חומצה גופרתית על חמצן ומימן 30%) למשך 20 דקות ולאחר מכן לשטוף את המשטח עם מים די שופע ב 24.5 מעלות לפני השימוש. דיו חותמת PDMS עם פתרון PEG 5mm באתנול. יבש חותמת באוויר במשך 20 דקות. בעדינות לשים את החותמת על פני השטח זהב עבור 40 שניות ולוודא שיש מגע טוב בין משטח זהב חותמת. אין לחץ עודף נדרשת. יש לשטוף את המשטח עם אתנול לייבש אותו תחת זרם של N 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה המצע בתוך פתרון P-selectin (15 מיקרוגרם / מ"ל ​​ב DPBS) באמצעות תא זלוף (מדעי מיקרוסקופית אלקטרונים) במשך 3 שעות ב 24.5 ° C לדפוס אזורים שנותרו עם selectin-P. יש לשטוף את המשטח עם DPBS שופע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למילוי השטח עם ארגון ה-BSA (1 מ"ג / מ"ל ​​ב DPBS) עבור h 1 לחסום הלא ספציפית אינטראקציות. יש לשטוף את המשטח עם DPBS שופע. </li></ol> 1.2. תא רולינג ניסויים בחדר זרימה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תזרים השעיה של HL60 תאים (~ 10 5 תאים / מ"ל) על משטחים בדוגמת בתא תזרים מלבני (Glycotech, Inc; רוחב w = 1.0 ס"מ, אורך = 6 ס"מ, גובה h = 0.0127 ס"מ) על 24.5 ° C. השתמש משאבת מזרק (Precision Instruments העולם, SP230IW) כדי לייצר קצב הזרימה של μL 75 / דקה, עם הלחץ גזירה המקביל סביב 0.5 dyn / 2 ס"מ (~ 0.05 אבא). חישוב מתח גזירה τ באמצעות מטוס תזרים Poiseuille המשוואה τ = 6μQ/wh 2, שם μ הוא צמיגות kinematic (0.001002 אבא ים), Q הוא קצב הזרימה volumetric, W הוא רוחב של תא הזרימה, h הוא גובה תא זרימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במיקרוסקופ הפוכה (ניקון TE2000-U) עם מצלמה רכוב (אנדור iXon 885) כדי להקליט HL60 תאים המתגלגל אינטראקציות עם P-selectin מצעים דבק באמצעות 4 × אובייקטיבי, בדרך כלל בשיעור של 1 מסגרת לשנייה עבור משכי זמן של 300 s. בצעו שלושה ניסויים עצמאיים, עבור כל גודל הלחץ גזירה ונטייה זווית דפוס. מוצגים נתונים כמו סטייה ממוצעת ורמת הערכים הממוצע המתקבל כל ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח נתונים. נתח את התמונה sequences על ידי תוכנית אישית (Mathworks, Inc) Matlab כי נוצלו חלקיק מעקב 8 freeware ליצור מסלולים בשולי קו בדוגמת. שירים להאריך עד סוף הלהקה P-selectin נבחרו מצויד בשני מגזרים קו ישר - אחד מיושר עם הזרם, השני מיושר עם קצה דפוס. שני אלה משמשים מגזרים אז כדי לחשב את אורך מעקב קצה, מהירות גלגול על הקצה, וגלגול מהירות על האזור רגיל. </li></ol> 2. נציג תוצאות: <img src="/files/ftp_upload/2640/2640fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> איור (א) מראה אחד של תמונות מיקרוסקופ המרה וידאו של HL60 אינטראקציות מתגלגל עם P-selectin מצעים דבק באמצעות אובייקטיבי 4 ×. אזורים בהירים וכהים מתאימות קולטן P-selectin ואזורים PEG, בהתאמה. איור (ב) מציג את המסלולים מתקבל באמצעות תוכנית אישית Matlab. זווית הנטייה קצה היה 10 ° ואת הלחץ גזירה היה 0.5 dyn / 2 ס"מ. מעקב קצה אורך, אני הדואר, עקירה, d, ואת מהירויות מתגלגל על קצה ובתוך להקות, V ו-V e p, בהתאמה, מתוארים באיור (C-1). איור (C-2) מראה את הפצה (מספר תאים מוקלט) אורך מעקב קצה. ריבועי להראות את הערך הממוצע של l דואר ואת מהירות מתגלגל על קצה (V ה) ובתוך להקות (V p) בזווית הנטייה α = 10 ° ואת גודל נוזל מתח גזירה סביב 0.5 dyn / 2 ס"מ. ברים שגיאה מייצגים סטיית תקן אחת, כאשר n = 3 ניסויים לשכפל (3 משטחים לשכפל) עבור כל תנאי.

<ol><li>Karnik, R., Hong, S., Zhang, H., Mei, Y., Anderson, D. G., Karp, J. M., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanomechanical+control+of+cell+rolling+in+two+dimensions+through+surface+Patterning+of+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Nanomechanical control of cell rolling in two dimensions through surface Patterning of receptors.</a> Nano Lett. 8 (4), 1153-1158 (2008).</li>
<li>Lee, C. H., Bose, S., Van Vliet, K. J., Karp, J. M., Karnik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examining+Lateral+Displacement+of+HL60+Cells+Rolling+on+Asymmetric+P-selectin+Patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Examining Lateral Displacement of HL60 Cells Rolling on Asymmetric P-selectin Patterns.</a> Langmuir. 27 (1), 240-249 (2011).</li>
<li>Norman, K. E., Moore, K. L., McEver, R. P., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+rolling+in-vivo+is+mediated+by+p-selectin+glycoprotein+ligand-1%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukocyte rolling in-vivo is mediated by p-selectin glycoprotein ligand-1.</a> Blood. 86 (12), 4417-4421 (1995).</li>
<li>Bernard, A., Delamarche, E., Schmid, H., Michel, B., Bosshard, H. R., Biebuyck, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Printing+patterns+of+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Printing patterns of proteins.</a> Langmuir. 14 (9), 2225-2229 (1998).</li>
<li>James, C. D., Davis, R. C., Kam, L., Craighead, H. G., Isaacson, M., Turner, J. N., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterned+protein+layers+on+solid+substrates+by+thin+stamp+microcontact+printing%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Patterned protein layers on solid substrates by thin stamp microcontact printing.</a> Langmuir. 14 (4), 741-744 (1998).</li>
<li>Mrksich, M., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+self-assembled+monolayers+to+understand+the+interactions+of+man-made+surfaces+with+proteins+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biophysics+and+Biomolecular+Structure%22%5BJournal%5D)">Using self-assembled monolayers to understand the interactions of man-made surfaces with proteins and cells.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 25, 55-78 (1996).</li>
<li>Tan, J. L., Tien, J., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcontact+printing+of+proteins+on+mixed+self-assembled+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Microcontact printing of proteins on mixed self-assembled monolayers.</a> Langmuir. 18 (2), 519-523 (2002).</li>
<li>Matlab Particle Tracking. , Avaliable from: 
	
 <a target="_blank" href="http://physics.georgetown.edu/matlab/">http://physics.georgetown.edu/matlab/</a> Forthcoming.</li>
<li>Lee, D., King, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcontact+Printing+of+P-Selectin+Increases+the+Rate+of+Neutrophil+Recruitment+Under+Shear+Flow%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Microcontact Printing of P-Selectin Increases the Rate of Neutrophil Recruitment Under Shear Flow.</a> Biotechnology Progress. 24 (5), 1052-1059 Forthcoming.</li>
<li>Greenberg, A. W., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+separation+mediated+by+differential+rolling+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Cell separation mediated by differential rolling adhesion.</a> Biotechnol. Bioeng. 73 (2), 111-124 (2001).</li>
<li>Higuchi, A., Tsukamoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+separation+of+hepatocytes+and+fibroblasts+through+surface-modified+polyurethane+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Cell separation of hepatocytes and fibroblasts through surface-modified polyurethane membranes.</a> J. Biomed. Mater. Res. Part A. 71A (3), 470-479 (2004).</li>
<li>Alexeev, A., Verberg, R., Balazs, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterned+surfaces+segregate+compliant+microcapsules%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Patterned surfaces segregate compliant microcapsules.</a> Langmuir. 23 (3), 983-987 (2007).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

תיארנו פרוטוקול לבחון מסלולים מתגלגל על קולטן תא בדוגמת משטחים סימטריים מפוברק באמצעות הדפסה microcontact 2. התמונות מיקרוסקופ אופטי של פני השטח בדוגמת מראה בניגוד ברור בין PEG ו-P-selectin אזורים ניתן להשתמש כדי לאשר הטבעה מוצלחת. שארפ, ישרות ניתן לראות כאשר ביול מבוצע היטב. קשה הקשה של הבול עלול לגרום לעיוות חותמת אשר מגביל את הדיוק של דפוסים. קצוות גלית ניתן לקבל כאשר ריכוז דיו גבוה מדי או זמן ביול ארוכה מדי. קשר רע בין הבול לבין המשטח מוביל לא אחידה דפוסי PEG כאשר ב...

<table><tbody><tr><td>תאי לוקמיה פרומיאלוציטית אנושיים</td><td>ATCC</td><td>CCL-240</td><td>תאי HL60</td></tr><tr><td>שקופיות זכוכית מצופות זהב</td><td>EMF</td><td>TA134</td><td>שקופיות זהב</td></tr><tr><td>(1-Mercaptoundec-11-yl)tetra(ethylene glycol)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>674508</td><td>PEG</td></tr><tr><td>P-selectin אנושי רקומביננטי</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>ADP3-050</td><td>P-selectin</td></tr><tr><td>אלבומין מסרום בקר</td><td>Rockland Immunochemicals</td><td>BSA-50</td><td>BSA</td></tr><tr><td>תמיסת סליין חוצבת פוספטים של Dulbecco&amp;rsquo;</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>21-030</td><td>DPBS</td></tr><tr><td>חומצה גופרתית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>339741</td><td></td></tr><tr><td>מי חמצן</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>316989</td><td></td></tr></tbody></table>

מסלולי לימוד cell רולינג על דפוסי קולטן אסימטרית

Studying Cell Rolling Trajectories on Asymmetric Receptor Patterns

תזוזה רוחבית של תאים אורתוגונליים כדי להזרים זרם על ידי גלגול על דפוסי קולטן אסימטרית מהווה הזדמנות לפיתוח של מכשירים חדשים ההפרדה תווית חינם ניתוח של תאים 1. מכשירים כאלה עשויים להשתמש תזוזה לרוחב הפרדה רצוף זרימה, או דפוסי קולטן כי לווסת הידבקות להבחין בין פנוטיפים תאים שונים או רמות של ביטוי הקולטן. הבנת טבעה של מסלולי מתגלגל על ​​קולטן תא בדוגמת מצעים הכרחי ההנדסה של מצעים ועיצוב של מכשירים כאלה. הנה, אנחנו מדגימים פרוטוקול לחקר מסלולי התא מתגלגל על דפוסי קולטן אסימטרית התומכים הידבקות התא מתגלגל 2. מוגדרים היטב, מיקרומטר בקנה מידה דפוסי P-selectin רצפטורים היו מפוברקות באמצעות הדפסה microcontact על מצופה זהב שקופיות שולבו בחדר זרימה. HL60 תאים המבטאים את ליגנד PSGL-1 3 היו זרמו על פני השדה של קווים בדוגמת ו דמיינו על הפוך מיקרוסקופ שדה בהיר. התאים התגלגל מסומנים בשולי נוטה דפוסים, וכתוצאה מכך סטיה לרוחב 1. כל תא התגלגל בדרך כלל במרחק מסוים לאורך שולי התבנית (כהגדרתו אורך מעקב קצה), מנותקת מן הקצה, והעלה שוב לדפוס במורד הזרם. למרות ניתוק זה מקשה לעקוב אחר מסלול שלם של תא מהכניסה ליציאה בחדר זרימה, חלקיק מעקב התוכנה שימשה לנתח התשואה מסלולי גלגול של התאים בתקופה שבה הם נעים על קולטן אחד בדוגמת קו. מסלולי נבדקו ואז לקבל הפצות של גלגול מהירויות התא אורכי קצה מעקב עבור כל תא של דפוסים שונים. פרוטוקול זה שימושי לכימות מסלולים תא מתגלגל על ​​דפוסי הקולטן הקשור אלה פרמטרים הנדסיים כגון זווית דפוס מתח גזירה. נתונים אלה יהיה שימושי עבור העיצוב של התקנים microfluidic להפרדת-תווית חינם התא ניתוח.

אנו מתארים פרוטוקול להתבונן ולנתח מסלולי מתגלגל תאים על מצעים בדוגמת אסימטרית הקולטן. את הנתונים המתקבלים שימושיים ההנדסה של הקולטן בדוגמת מצעים להפרדה-תווית חינם התא ניתוח.

מסלולי לימוד Cell רולינג על דפוסי קולטן אסימטרית

העתקה צידית של תאים בניצב לזרם זרימה על ידי גלגול על תבניות רצפטורים אסימטריות מציגה הזדמנות לפיתוח של...

פרוטוקול זה בוחן ומנתח מסלולי גלגול של תאים על תבניות רצפטורים אסימטריות, כדי להקל על הנדסת תסני תבניות רצפטורים להפרדה ולניתוח תאים ללא סימון. התהליך מתחיל בהדפסה במיקרו-מגע (micro contact printing) של מולקולות PEG על תסנית זהב כדי ליצור תבניות לסירוגין של שכבות מונחים בעצמן (self-assembled monolayers), ולאחר מכן מילוי של שאריות התסנית ברצפטורים של P select. לאחר מכן, שולבים את התסנית בתא זרימה. מזרימים את תאי ה-HL 60 אל תוך התא.הקליטו רצף תמונות של אינטראקציית הגלגול של תאי HL 60 על דפוסי P selectin ונתחו את התמונות שהומרו מהווידאו. ניתן לקבל את מסלולי התאים הגולגלים, אורך מעקב של קצה התא ומהירויות גלגול על פני המישור, האזור והקצה באמצעות תוכנת MATLAB. שיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי האופן שבו תאי HL 60 נעים על דפוסי קולטנים אסימטריים בזרימה גזית.ניתן ליישם זאת לכימות של אינטראקציות אחרות על פני שטח תאים, לניתוח ישיר של התאים באמצעות תצפית על מסלוליהם על גבי תבניות קולטנים, ולתכנון של התקני מיקרו-הנחיה (micro footing) להפרדת תאים. הדפסת מגע מיקרוסקופית (Micro contact printing) משמשת ליצירת תבניות לסירוגין של שכבות מונומולקולריות בהרכבה עצמית של מולקולות peg על מצע הזהב.ראשית, יש לדייג את חותמת ה-PDMS עם תמיסת PEG בריכוז חמישה מילימולר באתנול. ייבשו את הפני השטח למשך 20 דקות. הניחו בעדינות את החותמת על פני השטח של הזהב למשך 40 שניות וודאו שיש מגע טוב בין פני השטח של הזהב לחותמת.אין צורך בלחץ עודף. שטפו את הפני השטח באתנול וייבשו תחת זרם של חנקן. כעת, באמצעות תא פרפוזיה, דגרו את התשמיות עם תמיסת P selectin בריכוז 15 micrograms per milliliter למשך שלוש שעות בטמפרטורת החדר כדי לדגמן את השטחים הנותרים ב-P selectin, שטפו את התא, ולאחר מכן מלאו מחדש את הפני השטח ב-BSA בריכוז one milligram per milliliter למשך שעה אחת כדי לחסום אינטראקציות לא ספציפיות.שטפו את הפני השטח עם תמיסת DPBS לפני ביצוע ניסוי גלגול התאים. הרכיבו את תא הזרימה ולאחר מכן הזרימו תרחיף של 10⁵ תאי HL 60 למילליטר מעל תבניות הפני השטח, בתוך תא זרימה מלבני עם זוויות נטייה של 10 מעלות עבור תבנית הרספטורים.בטמפרטורת חדר של 24.5 °C. כוון את משאבת המזרקים ליצירת קצב זרימה של 75 µL לדקה, עם מאמץ גזירה למינרי תואם של 0.5 dines/cm². כעת, בעזרת מיקרוסקופ הפוך ומצלמה מותקנת, הקלט את גלגול תאי HL 60.אינטראקציות עם דבקים, p-selectin ותשתיות. השתמש בעדשה עם הגדלה של 4x בקצב של פריים אחד לשנייה למשך 300 שניות. בצע שלושה ניסויים עצמאיים.הציגו את הנתונים כממוצע וסטיית תקן של ערכי הממוצע שהתקבלו מכל ניסוי. תמונות מיקרוסקופיות שהומרו מהווידאו של HL 60.Rolling. אינטראקציות עם דבק p-selectin ומצעים מראות אזורים בהירים וכהים המתאימים למסעפי p-selectin ולאזורי PEG, בהתאמה.מסלולים מתוחמים כאן באמצעות תוכנית MATLAB מותאמת אישית. זווית נטיית השפה הייתה 10 מעלות ומאמץ הגזירה היה 0.5 dines לסנטימטר רבוע. ניתוחים נוספים בוצעו על התפלגות אורך מעקב השפה, הערך הממוצע של אורך מעקב השפה, וכן VE ו-VP, מהירויות הגלגול על השפה ובתוך הרצועות.לאחר צפייה בסרטון זה, תבואו לידי הבנה טובה של האופן שבו בוחנים מסלולי תאים על דפוסי קולטנים אסימטריים.

studying-cell-rolling-trajectories-on-asymmetric-receptor-patterns

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

דוח זה מספק תיאור ויזואלי של ניתוח מקבילות צלחת קאמרית תזרים לחקר אינטראקציות אנדותל ליקוציט תחת לחץ גזירה פיזיולוגי. שיטה זו שימושית במיוחד עבור חוקרים את התפקיד של E-selectin ligands האנדותל (E) ו-selectin ליקוציט כי ליקוציט ההדק מתגלגל על ​​משטחים תא האנדותל.

ניתוח של הרולינג E-selectin בתיווך פיזיולוגי ליקוציט על כלי הדם האנדותל

פרוטוקול זה מתאר את הפיתוח של המכשיר microfluidic לחקירת chemotaxis חיידקים הדרגתיים ריכוז יציב של chemoeffectors.

מכשיר microfluidic לכימות Chemotaxis חיידקים Gradients ריכוז אורווה

מחקר זה השתמש במערכת microfluidic צלחת רב גם, להגדיל באופן משמעותי את התפוקה של מחקרים מתגלגלים תא תחת זרימת גזירה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית. לאור החשיבות של מתגלגל תא בתא רב שלבי ביות מפל ואת החשיבות של ביות התא הבאה משלוח מערכתי של אוכלוסיות אקסוגניים של תאים בחולים, מערכת זו מציעה פוטנציאל כפלטפורמת הקרנה כדי לשפר את הטיפול המבוסס על תאים.

ניתוח שיטתי של במבחנה תא רולינג באמצעות מערכת microfluidic צלחת רב גם

פרוטוקול זה מתאר כיצד להשתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי של השתקפות פנימית כוללת כדי לדמיין ולעקוב אחר קולטנים בודדים על פני תאים חיים ובכך לנתח את הניידות הרוחבית של הקולטן, גודל קומפלקסי הקולטנים וכן לדמיין אינטראקציות קולטן-קולטן חולפות. ניתן להרחיב פרוטוקול זה לחלבוני ממברנה אחרים.

רזולוציה גבוהה ניתוח Spatiotemporal של קולטן Dynamics ידי המולקולה בודדת מיקרוסקופ פלואורסצנטי

מבחני chemotaxis חזותיים חיוניים להבנה טובה יותר של איך איקריוטיים תאים לשלוט נדידת תאים כיוונית בתיווך chemoattractant. כאן אנו מתארים שיטות מפורטות: 1) בזמן אמת, ניטור ברזולוציה גבוהה של מבחני chemotaxis מרובים, ו -2) בו זמנית לדמיין את שיפוע chemoattractant ואת דינמיקת spatiotemporal של איתות אירועים בתאי HL60 דמוי נויטרופילים.

G הדמית חלבון בשילוב קולטן בתיווך Chemotaxis ואירועי האיתות שלה בתאי HL60 נויטרופילים דמויים

כאן, אנו מציגים עבור חלקיק יחיד מעקב וניתוח תמונות המאפשר הערכה כמותית של דיפוזיה מקדמים, סוגי תנועה וגדלי אשכול של חלקיקים אחד שזוהה על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ פרוטוקול.

עיבוד פרוטוקול עבור הניתוח של פעפוע וגודל האשכול של קולטני ממברנה על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ תמונה

המטרה של פרוטוקול זה היא להראות כיצד להשתמש במיקרוסקופיה של יריעות האור כדי להמחיש באופן זמני את הדינמיקה של קולטן פני השטח בתאים חיים. כאן קולטני תא T על CD4+ תאי t הראשי מוצגים.

דמיין את הדינמיקה של משטח הפני-תא באמצעות מיקרוסקופ גיליון אור של סריג

כוחות מכניים חשובים לשליטה בהעברת תאים. פרוטוקול זה מדגים את השימוש של הידרוג'לים אלסטיים שיכולים להיות מעוותים באמצעות מיקרופיפטה זכוכית מיקרומניפולציה כדי לגרות תאים עם מעבר קשיות מקומי כדי לעורר שינויים במבנה התא והגירה.

מערכת בודדת של תא להערכת בקרה מכנית של התנועה הסלולרית ואירועי איתות קשורים

בפרוטוקול זה, אנו מציגים את ההליכים הניסיוניים של בדיקה מתפשטת של תא המבוססת על מיקרוסקופיה של תאים חיים. אנו מספקים כלי חישובי קוד פתוח עבור פילוח משוחד של תאים בעלי תווית פלואורסצנטית וניתוח כמותי של דינמיקת lamellipodia במהלך התפשטות התא.

ניתוח כמותי של דינמיקת קצה התא במהלך הפצת תאים

פרוטוקול זה מציג את ההליכים הניסיוניים לביצוע טביעת הרגל של הידבקות כדי לדמיין את אירועי ההדבקה במהלך הידבקות מהירה של תאים.

הדמיה הידבקות מולקולרית בתא מתגלגל על ידי הידבקות טביעת רגל אסאי

פרוטוקול זה נועד למדוד את הפרמטרים הדינמיים (בליטות, נסיגה, קפלים) של בליטות בקצה של תאים מתפשטים.

מדידת דינמיקת בליטה בקצה התא במהלך ההתפשטות באמצעות מיקרוסקופיה של תאים חיים

למדו לנתח מסלולי גלגול תאים על דפוסי קולטן אסימטריים באמצעות HL-60 ו-MATLAB. שיטה זו מאפשרת הפרדת תאים ללא תיוג ומספקת תובנות לגבי דינמיקת תנועת תאים בזרימה.

מסלולי לימוד Cell רולינג על דפוסי קולטן אסימטרית

גלה סרטונים נוספים