Name: Electrophysiology של העקרב פג Sensilla (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: חקור את הפיזיולוגיה הכימית-חישתית של סנסילי עקרבים בודדים באמצעות טכניקת tip-recording בתוך שמן מינרלי. שיטה זו מאפשרת בידוד גירוי לסנסילום אחד ומספקת כלי יקר ערך לחקר הביולוגיה החישתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לקרן החיים, אוניברסיטת אוקלהומה תוכנית הזדמנויות מחקר לתואר ראשון, ואת המחלקה לזואולוגיה למימון עבודה זו. כמו כן, אנו מבקשים להודות לד&quot;ר Hoefnagels מריאל לעזרה העריכה.

1. טרום הקלטה, בעלי חיים הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העקרב מהצנצנת הבית שלה יש להניח אותו במיכל מקורר מראש כוס; הבא, במקום את הצנצנת המכילה את העקרב לסביבה הקפאה (-5 מעלות צלזיוס) למשך תקופה מינימלית של שתי דקות. זמן זה עשוי להשתנות על פי גיל, גודל, מינים, וכו &#39;של העקרב ספציפי תחת מחקר. אבל בדרך כלל, שלב הסביבה הקפאת השלמת פעם החיה היא תנועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שתי דקות, להסיר את העקרב משותקת ממכל זכוכית קר, למקם אותו בצד הגחון על שקופיות מיקרוסקופ. אבטח את העוקץ, זנב, רגליים, pedipalps עם חימר moldable (על בסיס שמן, ואן Aken Plastalina). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את פלטפורמה שעליה לשים pectines של עקרב. התאם את אורך ורוחב של הפלטפורמה לפי גודל של pecten. בדרך כלל, הפלטפורמות שלנו בנויים מתוך מכסה זכוכית מיקרוסקופ ו - כ 10 (L) X 18 (W) מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציית פעמיים צדדי דבק לפלטפורמת pecten, זמירה את הקלטת (במידת הצורך) כדי להתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפוך את חדר pectinal, לשים שלוש או ארבע של הפלטפורמה הצדדים בשעווה מראש נמס (אנו משתמשים שבבי שעוות דבורים 100%) עד לעומק של 3-4 מ&quot;מ. אנחנו ממיסים את השעווה על ידי הנחת אסימונים בתוך צלחת פטרי זכוכית, הממוקם על פלטה חשמלית. לאחר שעווה בשולי החדר pectinal הוא מקורר לטמפרטורת החדר, זה אמור ליצור קירות של שעווה על 1 מ&quot;מ גבוה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על החיה, לאתר את נקודת הכניסה pectinal, והמקום קצה בלתי שעווה של הפלטפורמה (קלטת בצד-up) האחוריים רק אליו. לאחר מכן, לייצב את הפלטפורמה (כך שלא יעברו בהמשך) על ידי לחיצה בעדינות את זכותה וקצוות היקפי שמאל נגד חימר השתמשו לרסן את הרגליים של החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קנס שקצהו מלקחיים בזהירות המקום pecten או pectines בתוך החדר. באופן ספציפי, באמצעות מלקחיים, להחזיק את pecten לאורך עמוד השדרה pectinal, ובעדינות להביא את pecten החוצה מתחת לזכוכית לכסות ומוריד אותה אל הרצפה פלטפורמה דבק. הקמת האג&quot;ח pecten על קלטת בקפידה על ידי הפעלת לחץ על עמוד השדרה pectinal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו להחיל שעווה מותכת (אנו משתמשים מרית מתכת מחומם מראש) עד לקצה בלתי שעווה של הרציף. המטרה היא כפולה, כדי לאבטח את pecten באופן מלא לתחום את חדר המבוא שמן מינרלי בעתיד. היזהר בעת החלת שעווה מעל pecten של בעל החיים, כפי שאפשר הנזק pecten בשעווה כי הוא חם מדי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניית תא pecten תושלם. בשלב הבא, ליצור חיבור אלקטרודות אדיש עם hemolymph של החיה ידי הוספת חוט כסף בין שני פלחי הזנב. </li></ol> 2. הקלטה תאיים סימולטני גירוי כימי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו מכינים את חיה 24 שעות לפני ביצוע תאית, קצה ההקלטות, אשר, בין היתר (כלומר התאמה חיה למצב קבוע), מאפשר זמן אישית לעשות pipettes ממריץ של ספציפי (sensillum תלויי) בקוטר-קצה. אנו משתמשים חולץ micropipette להשגת מפרטים כאלה. באופן אידיאלי, בקוטר של pipettes הוא ≈ 2 מיקרומטר גדול יותר מאשר קוטר הנקבוביות sensillar. אנו להתאים את מפרט micropipette שלנו בהתאם עבור כל חיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 שעות לפני ההקלטה, נוסיף 5 μl של שמן מינרלי לחדר pectinal, השריית pecten תחת שמן. לאחר מכן, אנו בעמדה חיה מתחת מיקרוסקופ רב עוצמה, אשר מזה זמן עבודה מטרות המרחק עלית תאורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לעורר כימית יתד sensilla, אנחנו מציגים tastants מימית (כלומר חומצת לימון ומלח) דרך המדיום שמן. ראשית, אנו משתמשים מילוי micropipette להזריק את החומר מהגוף לתוך פיפטה ממריץ. הערה: כל הפתרונות ממריץ אמור להכיל אלקטרוליט עבור המוליכות החשמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, לאחר מיצוב פיפטה ממריץ על micromanipulator (במתקן ההקלטה), הכנס את האלקטרודה הקלטה לתוך בסופו של דבר, לפתוח בוטה של ​​פיפטה ממריץ. חשוב להבטיח מגע בין האלקטרודה מתכת פתרון ממריץ אלקטרוליטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הכנת מעוגנת חשמלית (דרך האלקטרודה אדיש), פשוט להוריד את פיפטה דרך המדיום שמן על נקבוביות sensillar. משך גירוי כימי לכל sensillum pectinal יכול להשתנות ככל שלושים דקות לשנייה קטנה כמו אחד. באופן כללי, אנו יכולים מדגם יתדות מרובים (&gt; 30) לכל טפטפת. במקרה פיפטה ממריץ הופך סתום בפסולת דקה, פשוט להחליף את פיפטה סתומים עבור פיפטה חדשה בשימוש. </li></ol> 3. הכנת בעלי חיים במשך ימים מרובים של ניסויים בבעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם החיה היא לשמש במשך זמן ממושך, אנו ממליצים על שימוש חוזר לחדר pectinal והחלפת טיפה של שמן מינרלי עבור כל מפגש הקלטה. אחרי הקלטה של ​​יום נתון היא מוחלטת, הסר את ההקלטה החיה של הגדרת ולבצע לשטוף שמן מינרלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Specifically, להוסיף עוד טיפה (5 μl) של שמן מינרלי אל החדר, וכן להסיר את כל הנפט. זה עוזר לצמצם את נוכחותם של ממריץ שיורית, אשר ייתכן דלפו של פיפטה במהלך הפגישה ההקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הפגישה הבאה, להוסיף טיפה אחת של שמן כפי שתואר לעיל. </li></ol> 4. נציג תוצאות: בהתאם לציוד הקלטה בשימוש (למשל מגבר מסוים, digitizing חומרה וכו &#39;), תוצאה נציג היא הקלטה תאיים עם S: N יחס של לפחות 3:1. בנייה מוצלחת של החדר שמן מינרלי הכרחי לבודד גירוי כימי sensilla הפרט, כפי שהוא מספק מדיום להעברת tastants כימיים קוטבי (על בסיס מים) 8. אם יש מעט שמן מדי או בכלל, הפתרון ממריץ יתפשט מ sensillum רשמה אל sensilla השכנות, אשר עלולים לגרום התקף ממושך, בלתי מבוקרת של גירוי כימי 8.

<ol><li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+a+Primary+Chemoreceptor+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Physiology of a Primary Chemoreceptor unit.</a> Science. 12, 417-418 (1955).</li>
<li>Newland, P. L. Taste processing in the insect nervous system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNewland%2C+PL+%22Methods+in+Insect+Sensory+Neuroscience%22">Methods in Insect Sensory Neuroscience</a>. Christensen, T. A. , CRC Press. Boca Raton. 289-318 (2005).</li>
<li>Foelix, R. F., Müller-Vorholt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fine+structure+of+scorpion+sensory+organs+II.+Pecten+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Br.+Arachnol.+Soc%22%5BJournal%5D)">The fine structure of scorpion sensory organs II. Pecten sensilla.</a> Bull. Br. Arachnol. Soc. 6, 68-74 (1983).</li>
<li>Carthy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+structure+and+function+of+the+sensory+pegs+on+the+scorpion+pecten%5BTitle%5D)+AND+%22Experientia%22%5BJournal%5D)">Fine structure and function of the sensory pegs on the scorpion pecten.</a> Experientia. 22, 89-91 (1966).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+properties+of+chemosensory+peg+sensilla+on+the+pectines+of+scorpions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Response properties of chemosensory peg sensilla on the pectines of scorpions.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 291-300 (1997).</li>
<li>Wolf, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pectine+organs+of+the+scorpion%2C+Vaejovis+spinigerus%3A+Structure+and+%28glomerular%29+central+projections%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The pectine organs of the scorpion, Vaejovis spinigerus: Structure and (glomerular) central projections.</a> Arthropod Struct. Dev. 37, 67-80 (2008).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+evidence+of+synaptic+interactions+within+chemosensory+sensilla+of+scorpion+pectines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological evidence of synaptic interactions within chemosensory sensilla of scorpion pectines.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 301-307 (1997).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+examining+scorpion+peg+sensilla%3A+the+mineral+oil+flood+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Arachnol%22%5BJournal%5D)">A new approach to examining scorpion peg sensilla: the mineral oil flood technique.</a> J. Arachnol. 37, 379-382 (2009).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+tip-recording+method+to+test+scorpion+pecten+chemoresponses+to+water-soluble+stimulants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new tip-recording method to test scorpion pecten chemoresponses to water-soluble stimulants.</a> J. Neurosci Methods. , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Haupt, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antennal+sucrose+perception+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera+L.%29%3A+behaviour+and+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Antennal sucrose perception in the honey bee (Apis mellifera L.): behaviour and electrophysiology.</a> J. Comp. Physiol. A. 190, 735-745 (2004).</li>
<li>Bland, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensilla+on+the+antennae%2C+mouthparts%2C+and+body+of+the+larva+of+the+alfalfa+weevil%2C+hypera+postica+%28gyllenhal%29+%28Coleoptera+%3A+Curculionidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Insect+Morphol.+Embryol%22%5BJournal%5D)">Sensilla on the antennae, mouthparts, and body of the larva of the alfalfa weevil, hypera postica (gyllenhal) (Coleoptera : Curculionidae).</a> Int. J. Insect Morphol. Embryol. 12, 261-272 (1983).</li>
<li>Cate, H. S., Derby, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooded+Sensilla+Homologues%3A+Structural+Variations+of+a+Widely+Distributed+Bimodal+Chemomechanosensillum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Hooded Sensilla Homologues: Structural Variations of a Widely Distributed Bimodal Chemomechanosensillum.</a> J. Comp. Neurol. 444, 345-357 (2002).</li>
</ol>

פרסמנו בעבר בשיטות אלה בשני כתבי עת, נולטון ו Gaffin (2009) ו נולטון ו Gaffin (in press).

הפרוטוקול הנ&quot;ל מתאר כיצד להכין גראסלאנד במדבר עקרב (Paruroctonus utahensis) למחקר אלקטרו. באופן ספציפי, אנחנו מראים איך לבנות חדר על תאי מבוקר קצה הקלטות של נוירונים chemosensory pectinal תחת שמן. מכיוון שמן ומים לא מתערבבים, זה אפשרי לבודד גירוי כימי (עם בסיס מים ממריצים) כדי sensilla יחיד. יודגש כי פ utahensis, הוא חיה קטנה יחסית (≈ 2.5-5 ס&quot;מ) החלת פרוטוקול לבעלי חיים גדולים יותר עשויים לדרוש התאמות גודל רבים, כגון גודל של הפלטפורמה של חיה, קאמרית, וכמות השמן מיושם. אנו ממליצים על עריכת מחקרים הפיילוט לבדוק את הכמות המינימלית של שמן הכרחי במסירה מבוקרת של מים מבוססי ממריצים כימיים. יתר על כן, לא מצאנו השפעה של שמן על פעילות הבסיס העצבי בתוך pectinal sensilla 8. זה צריך להיות אישר מודל עבור מערכות אחרות, לפני הערכת chemoresponsiveness. שיטה זו עשויה לשמש בשילוב עם שיטה אחרת לבדיקת ההשפעות chemoresponse האינטראקציה בין sensilla בתחום חושית. לדוגמה, ניתן שיא קצה (תחת שמן) מבית sensillum אחד כמו שאנחנו בסיס שיא (באמצעות אלקטרודה טונגסטן) מ sensillum שכנה 9. תצורה מעין הקלטה ניתן להשתמש כדי להעריך אם כימית או לא מעוררים זה sensillum משפיע על הפעילות העצבית של sensillum בסיס מוקלט. עד כה, אף אחד לא בדקה את זה עקרב pectinal sensilla, והיא נותרת פתוחה עבור מערכות chemosensory אחרים גם כן. לסיכום, אנחנו חושבים שיטת טיפ הקלטה תחת ההתקדמות שמן היקף החקירות אלקטרו לתוך הבסיס העצבי של gustation arthropod. בכתב היד הזה, אנו מספקים פרוטוקול להכנת חיות בשיטה זו, ואנו מקווים שהיא מספקת בסיס מוצק מחקר נוסף של מערכת העצבים ההיקפית חושית.

<table><tbody><tr><td>לשונית Lift-N-Press</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>16082</td><td>דבק דו-צדדי</td></tr><tr><td>MicroFil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MF34G</td><td>מילוי לפיפט מיקרו</td></tr><tr><td>קפילריות זכוכית סטנדרטיות</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>1B100F-6</td><td>פיפטות זכוכית</td></tr><tr><td>מחזיק מיקרו&amp;#8211;אלקטרודה</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MEH3SBW10</td><td></td></tr></tbody></table>

electrophysiology של העקרב פג sensilla

Electrophysiology of Scorpion Peg Sensilla

אנו מתארים שינוי של 1,2 טיפ הקלטה קיימת טכניקה electrophysiologically חוקרת קצר, דמוי יתד sensilla חושית 3,4. על פני השטח אמצע הגחון של עקרבים כל שני איברים בשם pectines, אשר יש שדות צפופה של mechano ו chemosensory יתד sensilla 5,6. אחת השיטות להערכת chemoresponsiveness של sensilla אלה משתמשת אלקטרודה טונגסטן עבור extracellularly הקלטה פעילות עצבית בתוך sensillum כמו odorant נדיפים הוא הציג לתחום חושי 5,7. המגבלות של שיטה זו כוללת איסוף נתונים איטי מבוא ממריץ מבוקרת, והסרה מ, השדה יתד. כדי להתגבר על המגבלות האלה, פיתחנו טכניקה חדשה קצה הקלטה המשתמשת שמן מינרלי פולרי כמדיום שדרכו כדי לספק בסיס מים tastants לפרט יתד sensilla 8,9. יש לנו מיושם בהצלחה בשיטה זו כדי להשיג chemoresponses sensillar לחומצה אתנול לימון, ומלח. כאן אנו מתארים את פרוטוקול הניסוי למחקר כזה 9. אנחנו חושבים זה השיטה החדשה עשוי להיות שימושי עבור הלומדים את מאפייני התגובה של מערכות אחרות chemosensory arthropod, כולל אלה של 10 חרקים, 11 וסרטנים 12.

מאמר זה מתאר שיטה לבידוד אלקטרו גירוי כימי sensilla הפרט באמצעות תאית, קצה הקלטות תחת שמן מינרלי.

Electrophysiology של העקרב פג Sensilla

אנו מתארים שינוי של טכניקת הקלטה באמצעות מישפ (tip-recording) קיימת1,2, לצורך חקירה אלקטרופיזיולוגית של סנסילה (sensilla) תחושתיות קצרות ודמויות-פין3,4. על ה...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא ללמוד את הפיזיולוגיה של החישה הכימית של פפילות (peg illa) בודדות ב pectin של עקרב. זאת מושג תחילה על ידי קיבוע של עקרב מורדם, כאשר צדו הגחוני פונה כלפי מעלה, על גבי זכוכית של מיקרוסקופ. השלב המקדימה לביצוע, המשתמש בחימר פיסולי, דורש השקעה של ה-pectins בתוך תא מלא שמן שהוכן במיוחד, והכנה של אלקטרודות הממולאות במעורר כימי.תגובות חושיות כימיות נרשמות ב-illa בודדים על ה-pectin, אשר בסופו של דבר מפיקים פרופילי תגובה דומים למעוררים כימיים מימיים. השתמשנו ברישום מבסיס ה-illa תוךما נשיפת מעוררים נדיפים על פני הנקבים. היתרון המרכזי של טכניקת הרישום מהקצה הוא שהיא מאפשרת לבודד את הגירוי ל-pig centum אחד מבלי להשפיע על הפעילות של שכניו.שיטה זו יכולה לסייע לנו להשיב על שאלות מרכזיות בתחום הביולוגיה של החושים הכימיים, לדוגמה, מדוע בעלי חיים משתמשים במספר רב של cilia חוזרים בזיהוי ותפיסה כימיים? נראה כי עקרבים אינם בעלי החיים הבטוחים ביותר למחקר, עם זאת, לא כל המינים מסוכנים או קשים לטיפול. לדוגמה, עקרבי ערבות המדבר, שאורכם ארבעה עד חמישה סנטימטרים בלבד, קלים לתחזוקה במעבדה וכמעט ואינם עוקצים אם מטפלים בהם כראוי.במקרה של עקיצה, הרעל מפעיל באופן מלאכותי את הנוירונים החושיים שלך, שחלקם מעבירים מידע על כאב. התחושה בדרך כלל שוככת תוך כ-15 דקות. עקרבים הם סובייקטים עמידים ויכולים לשרוד מספר ימי ניסויים, ולעתים קרובות מוחזרים לסביבתם הטבעית.בסיום הניסוי, כדי לקבע את העקרב, מקמו אותו בתוך כלי זכוכית שקולל מראש. לאחר מכן, מקמו את הצנצנת המכילה את העקרב בסביבת הקפאה למשך שתי דקות לפחות, והוציאו אותה מהמקפיא כאשר בעל החיים אינו זז. כעת, מקמו את העקרב המקובע על זכוכית מיקרוסקופ כאשר הצד הבטני פונה כלפי מעלה.קבעו את רגלי הזנב של העקיץ ואת ה-pedi pals באמצעות חימר שניתן לעיצוב. ה-pectins של העקרב הם מבנים זוגיים דמויי מסרק הנמצאים סמוך לאיברי המין והם ייחודיים לבעלי חיים אלו. יש ליצור תא שיכיל pectin בודד מבלי להסיר אותו מהחיה.ראשית, הכינו פלטפורמה עבור הפקטין באמצעות כיסוי זכוכית (cover slip) שנגזר לגודל של כ-5 מילימטרים על 18 מילימטרים. בדרך כלל זה מספיק. שנית, הדביקו סרט דביק דו-צדדי לפלטפורמה וגזרו את הסרט בהתאם במידת הצורך.שלישית, המסו שבבי שעוות דבורים 100% בכלי זכוכית באמצעות פלטה מחממת. כעת, טבלו שלושה מתוך ארבעת קצוות הפלטפורמה בשעוות הדבורים המומסת לעומק של 3 עד 4 מילימטרים. השעווה שהתקררה משמשת כדופן ליצירת תא.כעת, מקמו את הקצה שאינו מודבק של הפלטפורמה מיד מאחור לנקודת ההחדרה של ה-pectal בבעל החיים. ייצבו את הפלטפורמה על ידי לחיצה עדינה של השוליים ההיקפיים הימניים והשמאליים כנגד החימר ששימש לקיבוע רגלי בעל החיים, באמצעות פינצטה בעלת קצה דק. אחזו בזהירות באחד ה-pectins לאורך ה-pectal spine, הוציאו אותו בעדינות ממתחת לזכוכית הכיסוי והורידו אותו אל רצפת הפלטפורמה הדביקה.הדביקו את הפקטין על ידי הפעלת לחץ זהירה על קוץ הפקטין. השלימו את התא באמצעות מרית מתכת שחוממה מראש כדי למרוח שעווה מומסת על השפה הבלתי מחוברת של הפלטפורמה. בעל החיים כעת כמעט מוכן לביצוע הקלטות אלקטרופיזיולוגיות.כעת זהו זמן נוח לביצוע חיבור של אלקטרודה ניטרלית. הכניסו תיל כסף בין שני מקטעי הזנב אל תוך ההמולימפה של העקרב. לחצו חלק מהתיל היוצא מהחיה אל תוך החימר כדי לקבע אותו, והשאירו אורך מספיק כדי להגיע למגבר.כעת הניחו לדגימה בצד למשך שעה אחת לפחות לפני ביצוע ההקלטות, כדי לאפשר לדגימה להתייצב. השתמשו בשובב פיפטות (micro pipette puller) כדי להכין פיפטות בעלות קוטר פנימי הגדול בכ-שני מיקרון מקוטר הנקב של החיישן, המשתנה בין בעלי חיים שונים. שעה לפני ההקלטה, מלאו את תא הפקטין ב-5 µL של שמן מינרלי.לאחר מכן, מקמו את בעל החיים מתחת למיקרוסקופ בעל הגדלה גבוהה עם עדשות למרחק עבודה גדול ותאורת epi כדי לגרות כימית את ה-peg illa. מלאו את פיפט הגירוי בטעמים מימיים המעורבבים בתמיסה אלקטרוליטית. השתמשו במילוי מיקרו-פיפט, ולאחר מכן חברו את פיפט הגירוי המלא למיקרו-מניפולטור.כעת הכניסו את אלקטרודת ההקלטה אל הקצה הפתוח של פיפטת המע극. חשוב להבטיח מגע בין אלקטרודת המתכת לבין תמיסת המע극 האלקטרוליטית. חברו את המוליכים של אלקטרודת ההקלטה והאלקטרודה הניטרלית למגבר דיפרנציאלי.המגבר מחובר לאוסילוסקופ להדמיה של הפעילות החשמלית ולרמקול כדי לזהות באופן שמיעתי שינויים חשמליים. המערך מוכן כעת לביצוע הקלטות. בעזרת המיקרו-מניפולטור, הורד בזהירות את הפפטה על נקב של חיישן.שינוי לתדרים גבוהים יותר יישמע כאשר נוצר מגע חשמלי בין האלקטרוליט של הפ pipette לבין הנוזל בתוך ה-peg sens. בנקודה זו ניתן לשמוע גם את הפקיעות המובחנת של פוטנציאלי פעולה עצביים. משך הגירוי הכימי עבור כל perpetual sens יכול להשתנות מ-30 דקות ועד לשנייה אחת בלבד.בדרך כלל, פיפט אחת יכולה לדגום יותר מ-30 פינים. יש להחליף פיפטים סתומים בפיפטים נקיים. הכנת הפיפטים היא פשוטה וסתימות אינן נדירות, לכן תמיד יש להחזיק פיפטים רזרביים מוכנים לשימוש.ניתן להקליט מבעל חי בעל חיך בודד למשך מספר שעות במפגש הקלטה אחד לפני שיהיה צורך להחליף את השמן המינרלי. ניתן להשאיר בעל חיך בודד במקומו במערך ההקלטה למספר מפגשי הקלטה לאורך מספר ימים רצופים. במפגשים הבאים, השתמשו שוב בתא הפקטורלי, אך החליפו את השמן המינרלי.הסירו את כל השמן הישן בעזרת פיפטה והוסיפו טיפה רעננה. פעולה זו מסייעת לצמצם את נוכחותו של ממריץ שיורי, שייתכן ודלף מהפיפטה של הממריץ במהלך סשן ההקלטה. להלן הקלטות לדגמי קצוות (tips) עבור ממריצים שונים.עקבה זו מראה תגובה עקבית יחסית ל-0.01 molar potassium chloride. תגובה זו ל-0.1 molar citric acid מתחילה בעוצמה רבה בהרבה ולאחר מכן העוצמה פוחתת בתוך שבריר שנייה, ולאחריה ירידה מסוימת בתדירות. בתגובה טיפוסית ל-30%ethanol, העקבה מראה פרצי פעילות עם מספר קפיצות בין פערים קצרים של חוסר פעילות, כאשר משווים הקלטות קצה של תגובות חיישנים שונות לאותו גירוי, כגון 0.1 molar citric acid.התגובות דומות מאוד. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור למלא את הפ pipette במעורר על בסיס מים, אשר אינו מתערבב עם מצע השמן ומאפשר לעורר כימית lum אחד בכל פעם. לאחר צפייה בסרטון זה, צריכה להיות לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לעורר באופן מבוקר CIN בודדים ב-pectin של עקרב תוך שימוש בשמן מינרלי כמצע.

electrophysiology-of-scorpion-peg-sensilla

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

התגובות של אלקטרו עצב סנסורי חוש הריח כדי odorants ניתן למדוד חרקים באמצעות הקלטות sensillum יחיד. במאמר זה הווידאו נדגים כיצד לבצע הקלטות sensillum אחת האנטנות של זבוב החומץ...

Sensillum הקלטות סינגל חרקים תסיסנית melanogaster ו אנופלס gambiae</em

מערכות חוש הריח חרקים לספק הזדמנויות ייחודיות עבור odorant-Induced התגובות הקלטה בצורות של electroantennograms (EAG) והקלטות sensillum יחיד (SSR), אשר סיכם תגובות מכל קולטן נוירונים odorant (ORNs) הממוקם על האנטנה ועל מאלה שוכנו הפרט sensilla, בהתאמה.

מדידות אלקטרו ממערכת עש חוש הריח

אנו מתארים את הנתיחה של מערכת העצבים של ים הארנבת...

בידוד של נוירונים חושיים של<em&gt; Aplysia californica</em&gt; להקלטות מהדק תיקון של זרמי glutamatergic

מאמר זה מתאר את נתיחת מקק הגחון עצב בחוט והקלטות תאית מן העצב וconnectives cercal. עוררו תגובות מופקות על ידי גירוי חשמלי של עצב cercal או הגירוי מכאני ישיר של cerci.

עצבית במעגל הקלטה ממערכת עצבים מקק שלמה

מאמר זה מתאר שלוש הכנות מערכת עצבים באמצעות עלוקות: הקלטה תאית מהנוירונים בגרעיני הגחון, culturing נוירונים מגרעיני הגחון, והקלטה מתיקון של עור מעוצבבים למפה שדות חושיים.

תאית הקלטה, חושי שדה מיפוי, ונוירונים שזוהו Culturing בעלוקה, Medicinalis Hirudo</i

פרוטוקול זה מתאר הקלטה תאית מתגובות פוטנציאל הפעולה שנורו על ידי נוירונים טעם labellar בדרוזופילה.

הקלטת אלקטרו מ<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Labellar טעם Sensilla

פשפשי מיטה מסתמכים על נוירונים של קולטני ריח השוכנים ברגישות הריח של האנטנות שלהם כדי לזהות סמיוכימיקלים בסביבה. תוך שימוש בהקלטת סנסילום יחידה, אנו מדגימים שיטה להערכת תגובת פשפש המיטה לסמיוכימיקלים ולחקור את תהליך הקידוד הכרוך בכך.

שימוש יחיד Sensillum הקלטה לזיהוי תגובות חוש הריח Neuron של באגס במיטה לSemiochemicals

מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט ויעיל עבור הקלטות יחיד sensillum basiconica sensilla קאלאמרי של חרקים mouthparts.

Sensillum אחת ההקלטות של ארבה משוש Sensilla Basiconica

כדי להתבונן במבנה האולטרסאונד של מבנה החרקים, סריקה והעברה של מיקרוסקופ אלקטרונים (SEM ו-TEM, בהתאמה) פרוטוקול הכנה לדוגמה הוצגו במחקר. יצירת רצף 20 נוספה לתוך התיקונים כדי למנוע דפורמציה לדוגמה ב-SEM. מיקרוסקופ פלואורסצנטית היה מועיל לשיפור דיוק חיתוך ב TEM.

הכנה לדוגמה שיטת סריקה ומיקרוסקופ אלקטרון שידור לתוספות של החיפושית המשעממת

שיטה נדירה של הקלטה אלקטרופיזיולוגית, הקלטת בסיס, מאפשרת ניתוח של תכונות של קידוד טעם שלא ניתן לבחון בשיטות הקלטה קונבנציונליות. הקלטה בסיסית מאפשרת גם ניתוח תגובות טעם לגירויים הידרופוביים שלא ניתן לחקור בשיטות אלקטרופיזיולוגיות מסורתיות.

הקלטת בסיס: טכניקה לניתוח תגובות של נוירוני טעם בדרוזופילה

מחקר זה מציג מניפולציה כירורגית לחשיפת ה-T-DRG בעכברים מורדמים לצורך הדמיית סידן in vivo , יחד עם הקלטות א.ק.ג סינכרוניות. שיטה זו מייצגת כלי חדשני לחקר גירוי עצבי חשמלי היקפי וכניסות של איברי קרביים של בית החזה, כמו גם האינטראקציות ביניהם ברמה החושית הראשונית.

In vivo Thoracic Horsal Root Ganglia (DRG) הדמיית סידן והקלטת א.ק.ג לחקר גירוי עצבי היקפי

חקור את הפיזיולוגיה הכימית-חישתית של סנסילי עקרבים בודדים באמצעות טכניקת tip-recording בתוך שמן מינרלי. שיטה זו מאפשרת בידוד גירוי לסנסילום אחד ומספקת כלי יקר ערך לחקר הביולוגיה החישתית.

Electrophysiology של העקרב פג Sensilla

גלה סרטונים נוספים