Name: בתחום ההדמיה vivo של חוט השדרה בעזרת עכבר דו פוטון מיקרוסקופית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: למדו הדמיה יציבה של חוט השדרה בעכבר באמצעות מיקרוסקופיית שני פוטונים. שיטה זו מצמצמת תנועות נשימה ומאפשרת מעקב תאי בזמן אמת במחלות נוירודגנרטיביות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי טרשת נפוצה החברה הלאומית מענק RG4595A1 / T ל DD ו-NIH / NINDS מענקים NS051470, NS052189 ו NS066361 נתוני KA וסרטים מותאם ו / או נדפס מ Davalos et al. J שיטות Neurosci. 2008 מרס 30, 169 (1) :1-7 זכויות יוצרים 2008, באישור Elsevier.

1. מבנה המכשיר ייצוב עמוד השדרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצו STS-Narishige Clamps קומפקטי חוט השדרה MA-6N Narishige מחזיק מתאם ראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיצוב מותאם אישית ולעשות צלחת נירוסטה בסיס פלדה להחזיק את שני חלקי Narishige יישור כך שהראש של החיה נתמכת תוך עמוד השדרה שלו וזנבו הם הידק. זכור כי המכשיר כולו צריך להתאים תחת עדשת המיקרוסקופ בדרך כלל על הבמה מיקרוסקופ הוריד. </li></ol> 2. בעלי חיים ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את החדר מיקרוסקופ עם מכשיר חימום אוויר ולתחזק אותו ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את החיה לעשות את לערבב חומר הרדמה באמצעות 100 מ"ג קטמין, 15 מ"ג ו xylazine acepromazine 2.5 מ"ג לכל ק"ג ממשקל הגוף, בדילול מלא בתמיסה NaCl 0.9% בתנאים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיה על ידי הזרקת חומר הרדמה תמהיל (KXA) intraperitoneally. צובט הבוהן רגיל יש לבצע על מנת להבטיח הרדמה עמוקה בכלאת הניסוי. מוסף עם מינון חצי שעה המקורי או לפי הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש פנקס קטן לחימום החיה כדי לספק תמיכה תרמית תוך ביצוע הליך כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מלאכותי משחה דמעות על העיניים על מנת למנוע התייבשות נזק הקרנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את החלק האחורי של החיה הראשונה עם מכשיר חיתוך ואז עם סכין חדה כדי להסיר לחלוטין את השיער מאזור סביב החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת שיער מגולח לחטא את פני העור מגולח עם כרית אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך קטן (~ 1.5 ס"מ) האורך של העור מעל לרמה הרצויה השדרה (חוליות החזה המוצג כאן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את שרירי הגב על ידי retracting בעיון את רקמת חיבור תת עורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להפריד את השרירים paravertebral מ עמוד השדרה ברמה הרצויה. ביצוע חתכים ספורות ביותר לנתק את השרירים משני הצדדים של כל תהליך spinous ואז לגרד את השרירים מנותקיםהדרך מפני השטח למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את lamina כי יוסרו ולהכין את האתרים של כניסה עבור מהדק השדרה משני צדי עמוד השדרה, מקורי מיד הזנב כדי laminectomy. בזהירות את מקומו של רקמת השריר לבצע ארבעה כיסים שבהם מלחציים יתווסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את עמוד השדרה עם קצה שיניים, מלקחיים ישר, כדי לאפשר הכנסה בטוחה של קצה קהה מספריים מעוקל תחת lamina בלי לגעת בחוט השדרה. בצע את laminectomy ידי לאט חיתוך העצם בצד אחד ולאחר מכן בצד השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מטלית כותנה או להכניס שנחתך מראש פוזרו חתיכות קטנות gelfoam נספגים ספוג הג'לטין לצד חתכים להגביל דימום מינורי. השתמש cauterizer כלי קטן כדי לשלוט דימום נוסף במידת הצורך. השתמש שחומם מראש נוזל סטרילי מלאכותי השדרה (ACSF) לשטוף רקמות. </li></ol> 3. ייצוב של עמוד השדרה הכנה עבור הדמיה in vivo <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Plac דואר החיה על כרית הגבהה על צלחת הבסיס של המכשיר ייצוב השדרה לאבטח את ראש מתאם ראש מחזיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את מהדק השדרה של המכשיר STS-A בציר הקדמי, האחורי של החיה בתוך מוכנה מראש כיסים משני צדי laminectomy (איור 1). שני מלחציים צריך להיות ממוקם בזווית של 45 ° ~ יחסית לציר של החיה rostro-הזנב כדי לאפשר מספיק מקום להורדת עדשה טבילה במים על חוט השדרה חשוף (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את מהדק השלישי של המכשיר STS-A בבסיס הזנב כך הגוף של בעל החיים יכול להיות תלוי באוויר לאחר הסרת כרית הגבהה למשך הניסויים הדמיה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנה גם קטן Gelseal (Amersham Biosciences קורפ) סביב חוט השדרה חשוף כדי להקל על התחזוקה של חוט השדרה ב ACSF ואת טבילה של עדשת מיקרוסקופ בפתרון זה עבור הדמיה vivo. </li></ol>jove_title "&gt; 4. הדמיה vivo של חוט השדרה עם העכבר מיקרוסקופיה שני הפוטונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את החיה על המכשיר ייצוב עמוד השדרה בתוך החדר שחומם מראש המכסה את המיקרוסקופ לאבטח אותו על הבמה מיקרוסקופ הוריד הצבת laminectomy ישר תחת העדשה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחתון עדשת מים טבילה בזהירות לתוך הפתרון ACSF לוודא שזה לא לגעת מלחציים השדרה או Gelseal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש epifluorescence לזהות את שטח של עניין ולהתמקד בו. מעבר למצב סריקת לייזר ולבצע הדמיה vivo באמצעות עירור מתאים שני פוטונים באורך גל לייזר, dichroics ו bandpass מסננים עבור fluorophores הנוכחי ברקמת הדמיה. </li></ol> 5. הדמיה חוזרות לאחר הניתוח טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף ניסויים הדמיה, להסיר את העכבר מהמכשיר ייצוב עמוד השדרה ובזהירות לנגב את Gelseal מאזור סביב laminectomy.נקו היטב את האזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחזור תפר את שרירי הגב על laminectomy. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחזור תפר את העור מעל laminectomy, ספוגית זה בבטאדין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספקו 1 Lactated מ"ל האצבעות פתרון (Baxter Healthcare) כתוסף תזונה ועל לחות, כמו גם טיפול משכך כאבים תת עורי (0.1 מ"ג / ק"ג עצירות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניהול intraperitoneally טיפול חיטוי (0.03 מ"ל לכל עכבר, 2.27% פתרון להזרקה enrofloxacin אנטיבקטריאלי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום חיה על כרית חימום עד להחלמה מלאה מן ההרדמה ולאחר מכן בבית זה בנפרד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הממשל חיטוי יומיומי של 3-5 הימים הראשונים לאחר הניתוח טיפול משכך כאבים כל 8-12 שעות במשך 2-3 ימים לאחר הניתוח. צג בעל חיים יומיומי, כדי להבטיח התנהגות נורמלית להחלמה מלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הדמיה מחדש באמצעות laminectomy זאת, מחדש את העור והשרירים sutured וחזור על הפעולות המתוארות בסעיפים 2 - 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחדש לאתר את previצילמו מבישה שטח באמצעות vasculature דם כמפה כפי שתואר לעיל 10. </li></ol> 6. נציג תוצאות הנהלים כל חיה בוצעו לפי הנחיות שנקבעו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים וועדות השתמש באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו והם בהתאם לתקנות הפדרלי. תמונה של המכשיר ייצוב השדרה סכמטית המראה את המיקום של העכבר על המכשיר תחת עדשת המיקרוסקופ מוצג באיור 1. מתן מקום הולם תנועות נשימה מתחת לגוף של חיה מבטיח יציבות בתחום ההדמיה vivo בחוט השדרה. איור 2 מראה את הקשר ההדוק בין microglia ואת vasculature כפי שהיה הדמיה in vivo בחוט השדרה של Cx3cr1 GFP / + העכברים הטרנסגניים 18, שבו microglia מסומנים endogenously עם GFP. איור 3 מציג דוגמאות חוזרותבתחום ההדמיה vivo כפי שהיא בוצעה על אותם אזורים בחוט השדרה אצל עכברים לבטא חלבון פלואורסצנטי ב אקסונים השדרה (YFP-H שורה 3) ו microglia (ב Cx3cr1 GFP / + העכברים). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/2760/2760fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. ייצוב עמוד השדרה של העכבר בתחום ההדמיה vivo באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ. (א) מחוייט בסיס פלדה משמשת תמיכה ליישר את STS-מהדק קומפקטי Narishige חוט השדרה ואת MA-6N Narishige ראש מחזיק מתאם כפי שמוצג כאן. (ב) מיצוב נכון של העכברים הטרנסגניים מבוגר הרדים עם הרדמה KXA במכשיר ייצוב עמוד השדרה. הכנס מציג את המיקום של מלחציים השדרה מיד rostrally ו caudally כדי laminectomy לבין רקמת חוט השדרה חשוף. &lt;img alt = "איור 2" src = "/ files/ftp_upload/2760/2760fig2.jpg" /&gt; באיור 2. הדמיה vivo של תאים צפיפות גבוהה microglial וכלי דם בחוט השדרה של עכברים בהרדמה. תחזית אך הבלתי מזדהות Z-ערימות של (A) צפופה מאוד GFP חיובי microglia (ירוק) בחוט השדרה של עכבר-GFP CX3CR1 + / בסמיכות עם כלי הדם (אדום, בתווית עם הזרקה iv של rhodamine dextran). (ב) התמונה בהגדלה גבוהה שכותרתו כמו (A) של תא microglial יחיד המחובר לקיר של כלי דם עם תהליכים המורחבת סביב כלי וכלפי parenchyma חוט השדרה. סולם ברים, 10μm. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/2760/2760fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> באיור 3. חוזרות בתחום ההדמיה vivo של מגזרים axonal אותו microglia כפי שהם הועברו ו reimaged בחוט השדרה של עכברים הרדים בימים שונים. (א) YFP-במעבדה אקסונים eled בימים 0 ו 5. (B). המבנים בכלי הדם והתאים אותו microglial סביבם הדמיה in vivo בחוט השדרה של Cx3cr1 GFP / עכברים + בימים 0 ו -1. סולם ברים, 10μm. 1. סרט נציג רצף timelapse רכשה in vivo מחוט השדרה העכבר. רצף זה מראה בסדר פרט דינמיקה תהליך microglial (ירוק) ואת האינטראקציות שלהם עם כלי הדם (אדום, בתווית עם iv הזרקת rhodamine dextran) לאורך זמן בתוך הרקמה מאוכלס בצפיפות עם מבנים ניאון. התמונות גלם תוקנו רק רעש הבהירות, הניגודיות הרקע הסרט timelapse נבנה על ידי Z-ערימות מקרין תמונה רכשה ברצף, ללא יישור התמונה, ממוצע או Z-מבחר של מטוסים בודדים. כלי דם עוברים מגוון דומה של מטוסים z כמו תמונות של microglia. Z עומק המטוס: 38 מיקרומטר.oad/2760/Davalos_Movie_1.mov "&gt; לחץ כאן כדי לראות את הסרט. 2. סרט רצף Timelapse הוכחת יציבות הגלם של שיטת הדמיה ברמה של מטוס-z אחת. רכישה מהירה של המטוס-z אותו יחיד בחוט השדרה של עכברים CX3CR1 GFP / + דגש על המכשיר ייצוב עמוד השדרה בהרדמה KXA, ממחיש תזוזה מינימלית בין מסגרות תמונה ברציפות בקצב סריקה של 1 מסגרת / s זה מהר יותר קצב הנשימה של העכבר. עקירה שיורית קטין כנראה בשל פעימות הלב. <a alt="Movie 2" href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/2760/Davalos_Movie_2.mov">לחץ כאן כדי לראות את הסרט.</a>

<ol><li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248, 73-76 (1990).</li>
<li>Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Biochem%22%5BJournal%5D)">The green fluorescent protein.</a> Annu. Rev. Biochem. 67, 509-544 (1998).</li>
<li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li>
<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+tissue+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat. Methods. 2, 932-940 (2005).</li>
<li>Germain, R. N., Miller, M. J., Dustin, M. L., Nussenzweig, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+imaging+of+the+immune+system%3A+progress%2C+pitfalls+and+promise%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dynamic imaging of the immune system: progress, pitfalls and promise.</a> Nat. Rev. Immunol. 6, 497-507 (2006).</li>
<li>Misgeld, T., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+the+diseased+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of the diseased nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 449-463 (2006).</li>
<li>Svoboda, K., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+two-photon+excitation+microscopy+and+its+applications+to+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience.</a> Neuron. 50, 823-839 (2006).</li>
<li>Davalos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nat. Neurosci. 8, 752-758 (2005).</li>
<li>Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Helmchen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+microglial+cells+are+highly+dynamic+surveillants+of+brain+parenchyma+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resting microglial cells are highly dynamic surveillants of brain parenchyma in vivo.</a> Science. 308, 1314-1318 (2005).</li>
<li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420, 812-816 (2002).</li>
<li>Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+dendritic+calcium+dynamics+in+neocortical+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons.</a> Nature. 385, 161-165 (1997).</li>
<li>Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+imaging+of+experience-dependent+synaptic+plasticity+in+adult+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo imaging of experience-dependent synaptic plasticity in adult cortex.</a> Nature. 420, 788-794 (2002).</li>
<li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+Ca2%2B+signaling+evoked+by+sensory+stimulation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocytic Ca2+ signaling evoked by sensory stimulation in vivo.</a> Nat. Neurosci. 9, 816-823 (2006).</li>
<li>Christie, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+arrest+of+individual+senile+plaques+in+a+model+of+Alzheimer%27s+disease+observed+by+in+vivo+multiphoton+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Growth arrest of individual senile plaques in a model of Alzheimer's disease observed by in vivo multiphoton microscopy.</a> J. Neurosci. 21, 858-864 (2001).</li>
<li>Tsai, J., Grutzendler, J., Duff, K., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrillar+amyloid+deposition+leads+to+local+synaptic+abnormalities+and+breakage+of+neuronal+branches%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fibrillar amyloid deposition leads to local synaptic abnormalities and breakage of neuronal branches.</a> Nat. Neurosci. 7, 1181-1183 (2004).</li>
<li>Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+synaptic+plasticity+and+pathology+in+the+living+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of synaptic plasticity and pathology in the living mouse brain.</a> NeuroRx. 3, 489-496 (2006).</li>
<li>Takano, T., Han, X., Deane, R., Zlokovic, B., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+astrocytic+Ca2%2B+signaling+and+the+microvasculature+in+experimental+mice+models+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of astrocytic Ca2+ signaling and the microvasculature in experimental mice models of Alzheimer's disease.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1097, 40-50 (2007).</li>
<li>Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Fractalkine+Receptor+CX3CR1+Function+by+Targeted+Deletion+and+Green+Fluorescent+Protein+Reporter+Gene+Insertion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of Fractalkine Receptor CX3CR1 Function by Targeted Deletion and Green Fluorescent Protein Reporter Gene Insertion.</a> Mol. Cell. Biol. 20, 4106-4114 (2000).</li>
<li>Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+axonal+degeneration+and+regeneration+in+the+injured+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord.</a> Nat. Med. 11, 572-577 (2005).</li>
<li>Kim, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+microscopy+imaging+of+intact+spinal+cord+and+cerebral+cortex+reveals+requirement+for+CXCR6+and+neuroinflammation+in+immune+cell+infiltration+of+cortical+injury+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning microscopy imaging of intact spinal cord and cerebral cortex reveals requirement for CXCR6 and neuroinflammation in immune cell infiltration of cortical injury sites.</a> J. Immunol. Methods. 352, 89-100 (2010).</li>
<li>Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+T+cell-dendritic+cell+interactions+precede+the+development+of+both+tolerance+and+immunity+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stable T cell-dendritic cell interactions precede the development of both tolerance and immunity in vivo.</a> Nat. Immunol. 6, 707-714 (2005).</li>
<li>Tadokoro, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+inhibit+stable+contacts+between+CD4%2B+T+cells+and+dendritic+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells inhibit stable contacts between CD4+ T cells and dendritic cells in vivo.</a> J Exp Med. 203, 505-511 (2006).</li>
<li>Lindquist, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+dendritic+cell+networks+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Visualizing dendritic cell networks in vivo.</a> Nat. Immunol. 5, 1243-1250 (2004).</li>
<li>Schwickert, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((vivo+imaging+of+germinal+centres+reveals+a+dynamic+open+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">vivo imaging of germinal centres reveals a dynamic open structure.</a> Nature. 446, 83-87 (2007).</li>
</ol>

אין לנו שום דבר לגלות.

השיטה המתוארת כאן מאפשר יציבה חוזרות בתחום ההדמיה vivo של מבנים מאוכלסים בצפיפות הסלולר פלורסנט בחוט השדרה של עכברים הרדים באמצעות שני פוטונים במיקרוסקופ. היציבות הושגה היא תוצאה של התקן מחוייט ייצוב השדרה משטר ההרדמה המפחיתה הנשימה הנגרמת חפץ בתנועה. המכשיר ייצוב עמוד השדרה מאפשרת מרחב נשימה מתחת בגוף העכבר ניתן לבנות בעזרת מלחציים השדרה זמינים מסחרית חתיכת ראש הרכבה (איור 1). השיטה היא מאוד לשחזור, פולשנית ובעקביות מייצר נתונים גולמיים, שניתן להשתמש בהם עבור ני...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Rhodamine B dextran </td><td> Invitrogen </td><td> D1841 </td><td> 70 kDa, בדילול מלא ACSF (3% w / v) </td></tr><tr><td> קטמין HCl </td><td> Bionichepharma </td><td> NDC לא: 67457-001-10 </td><td> בזריקות, 50mg/ml </td></tr><tr><td> Anased </td><td> לויד Labs </td><td> נדא לא: 139-236 </td><td> Xylazine להזרקה, 20mg/ml </td></tr><tr><td> Acepromazine </td><td> Vedco </td><td> נדא לא: 117-531 </td><td> בזריקות, 10mg/ml </td></tr><tr><td> דמעות מלאכותיות משחה </td><td> פניקס התרופות </td><td> NDC לא: 57319-760 - 25 </td><td> חומר סיכה </td></tr><tr><td> בבטאדין </td><td> דיג </td><td> 19-061617 </td><td></td></tr><tr><td> מקפרסון, ווסטקוט מספרים </td><td> העולם Precision מכשירים </td><td> 555500S </td><td> עקום, קצה קהה מספרים </td></tr><tr><td> סטרייט מלקחיים </td><td> העולם Precision מכשירים </td><td> 555047FT </td><td> טיפ מלקחיים שיניים </td></tr><tr><td> כלי שיט קטנים לצרוב </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 18000-00 </td><td></td></tr><tr><td> Gelfoam </td><td> Pharmacia, פייזר </td><td> מיקסר מיל MM400 </td><td></td></tr><tr><td> חוט השדרה קומפקט מלחציים </td><td> Narishige </td><td> STS- </td><td></td></tr><tr><td> ראש מחזיק מתאם </td><td> Narishige </td><td> MA-6N </td><td></td></tr><tr><td> Gelseal </td><td> Amersham Biosciences קורפ </td><td> 80-6421-43 </td><td></td></tr><tr><td> Lactated האצבעות </td><td> בקסטר בריאות &lt;/ Td&gt; <td> 2B8609 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenex </td><td> Reckit בנקיזר פרמצבטיקה בע&quot;מ </td><td> NDC לא: 12496 - 6757-1 </td><td> עצירות, להזרקה </td></tr><tr><td> Baytril </td><td> באייר </td><td> נדא 140-913 </td><td> Enrofloxacin, אנטיבקטריאלי להזרקה 2.27% (20ml) </td></tr><tr><td> כרית חימום - גדול </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 21060-10 </td><td></td></tr></tbody></table>

בתחום ההדמיה vivo של חוט השדרה בעזרת עכבר דו פוטון מיקרוסקופית

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

בשנת vivo הדמיה באמצעות שני פוטונים מיקרוסקופיה 1 בעכברים שעברו הנדסה גנטית כדי לבטא חלבונים ניאון 2-3 סוגים מסוימים תא הרחיבה באופן משמעותי את הידע שלנו על תהליכים פיזיולוגיים ופתולוגיים ברקמות רבים in vivo 4-7. במחקרים של מערכת העצבים המרכזית (CNS), יש כבר יישום נרחב בתחום ההדמיה vivo במוח, אשר יצר שפע של הרומן ממצאים בלתי צפויים לעתים קרובות על התנהגותם של תאים כגון נוירונים, האסטרוציטים, microglia, תחת מצבים פיזיולוגיים או פתולוגיים 8-17. עם זאת, סיבוכים טכניים בעיקר מוגבל ליישום בתחום ההדמיה vivo במחקרים של חוט השדרה עכבר חי. בפרט, הקרבה האנטומית של חוט השדרה אל הריאות והלב חפץ מייצר תנועה משמעותי שעושה הדמיה חוט השדרה חי משימה מאתגרת. </p&gt; פיתחנו שיטה חדשה אשר מתגבר על מגבלות מובנות של הדמיה בעמוד השדרה על ידי מייצב את עמוד השדרה, הפחתת הנשימה הנגרמת תנועות ובכך להקל את השימוש במיקרוסקופ שני הפוטונים לתמונה חוט השדרה עכבר in vivo. זו מושגת על ידי שילוב של מכשיר מותאם אישית ייצוב עמוד השדרה בשיטה של ​​הרדמה עמוקה, וכתוצאה מכך לירידה משמעותית של דרכי הנשימה הנגרמת תנועות. זה פרוטוקול הוידאו מראה כיצד לחשוף אזור קטן של חוט השדרה החיים שאפשר לקיים בתנאים פיסיולוגיים יציבה לאורך פרקי זמן ארוכים על ידי שמירה על פגיעה ברקמות ודימום למינימום. תמונות גולמיות נציג רכשה בפירוט vivo ברזולוציה גבוהה את הקשר ההדוק בין microglia ואת כלי הדם. רצף timelapse מראה את התנהגות דינמית של תהליכים microglial בחוט השדרה עכבר חי. יתר על כן, סריקה רציפה של אותו z מסגרת להפגיןשל יציבות יוצאת דופן, כי בשיטה זו ניתן להשיג לייצר ערימות של תמונות ו / או סרטים timelapse שאינן דורשות יישור התמונה שלאחר הרכישה. לבסוף, אנו מראים כיצד בשיטה זו ניתן להשתמש כדי לבקר ו Reimage באותו אזור של עמוד השדרה בבית timepoints מאוחר יותר, ומאפשר מחקרים ארוכי טווח של תהליכים פיזיולוגיים או פתולוגי מתמשך in vivo.

פרוטוקול פולשנית כדי לייצב את עמוד השדרה העכבר ולבצע חוזרות<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה בעמוד השדרה באמצעות שני פוטונים מיקרוסקופיה מתואר. שיטה זו משלבת מכשיר ייצוב השדרה משטר ההרדמה כדי למזער את הנשימה הנגרמת תנועות להפיק נתונים הדמיה גלם הדורשים אין יישור או אחרים שלאחר עיבוד.

דימוי בחי (in vivo) באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית 1 בעכברים שהונדסו גנטית להביע חלבונים פלואורסצנטיים בסוגי תאים ספציפיים 2-3 הוביל ל...

מטרת פרוצדורה זו היא לבצע דימות יציב in vivo של חוט השדרה בעכבר באמצעות מיקרוסקופיית פוטונים כפולים. הדבר מושג תחילה על ידי הרדמת בעל החיים בתערובת הרדמה המביאה לקצב נשימה יציב אך רגוע. השלב השני של הפרוצדורה הוא חשיפת עמוד השדרה בגובה הרצוי, ולאחר מכן ביצוע למינקטומיה (laminectomy) כדי לחשוף את חוט השדרה שמתחתיה, כך שניתן יהיה לדמיינו in vivo.השלב השלישי הוא הנחת בעל החיים על התקן לייצוב עמוד השדרה. השלב האחרון הוא בידודו של מקטע חוט השדרה החשוף. כהכנה לדימות in vivo, ניתן להשיג בסופו של דבר תוצאות המפרטות את ההתנהגות הדינמית של תאים ואת האינטראקציות שלהם עם סוגי תאים או מבנים אחרים בחוט השדרה החי, באמצעות דימות in vivo בשיטת time-lapse בעזרת מיקרוסקופיה דו-פוטונית.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני ניסיונות קודמים להדמיית חוט השדרה in vivo הוא שהיא מייצרת נתוני הדמיה in vivo שאינם דורשים עיבוד לאחר צילום ויש להם אפשרות להערכה מיידית ולשימוש בניתוחים נוספים. ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול בעקבות פגיעה בחוט השדרה או מחלה, שכן היא מאפשרת, למשל, ללמוד על התקדמות של ניוון או התחדשות אקסונלית בזמן אמת לאחר פגיעה בחוט השדרה. ניתן להשתמש בטכניקה זו כדי לחקור את התקדמותם של תהליכים דלקתיים או ניווניים של מערכת העצבים במודלים חייים של מחלות, כגון טרשת נפוצה או סקלרוזה לצרלית נבטית (ALS), שבהן הפתולוגיה של המחלה בולטת בחוט השדרה.התחילו את הפרוצדורה בשקילת בעל החיים. לאחר מכן, הרדימו את בעל החיים על ידי הזרקה תוך-בטנית (intraperitoneal) של תערובת ההרדמה. בצעו צביטה קבועה של בהונות כדי לוודא הרדמה עמוקה של בעל החיים לאורך כל הניסוי, והוסיפו מחצית מהמינון המקורי של חומר ההרדמה מדי שעה, או לפי הצורך.לאחר מכן, מרחו משחת דמעות מלאכותיות על העיניים כדי למנוע התייבשות ונזק לקרנית. קצצרו את הפרווה על גב בעל החיים באמצעות מכשיר קיצוץ וגלחו את הפרווה הנותרת בעזרת להב חד. לאחר חיטוי האזור הגלוח, הניחו את בעל החיים תחת מיקרוסקופ והתחילו את הפרוצדורה על ידי ביצוע חתך אורכי קטן של כ-1.5 סנטימטר מעל גובה עמוד השדרה הרצוי.חשוף את שרירי הגב על ידי הרחקה זהירה של רקמת החיבור התת-עורית. לאחר מכן, הפר בעדינות את השרירים הפרה-ורטברליים (paravertebral muscles) מעמוד השדרה בגובה הרצוי. בצע מספר מינימלי של חתכים כדי לנתק את השרירים משני צדדיו של כל זקיר ספייני (spinous process).לאחר מכן, גרדו את השרירים שהופרדו מהמשטח הלמינרי. השתמשו במכשיר כתיבה (cauterizer) קטן לכלי דם כדי לשלוט בדימומים קלים במידת הצורך. המשיכו בגירוד השרירים עד לחשיפה מספקת של הלמינציה שמתחתיהם, כך שתוכלו לזהות בבירור את השכבה שאתם עומדים להסיר.כדי להכין את נקודות הכניסה עבור התפסני העמוד השדרה בכל צד של עמוד השדרה, הכניסו את קצותיהן של מספריים מעוקלים בין השרירים הפאראורטליים (paravertebral) והסיטו בזהירות את הרקמה השרירית כדי ליצור ארבעה כיסים שבהם יוכנסו התפסנים. הרימו את עמוד השדרה באמצעות פינצטה עם קצה בעלת שיניים ישרות כדי לאפשר הכנסה בטוחה של מספריים בעלי קצה קהה ומעוקל מתחת ללמינה (lamina) ללא מגע עם חוט השדרה. לאחר מכן בצעו למינקטומיה (laminectomy) על ידי חיתוך איטי של העצם בצד אחד ולאחר מכן בצד השני; השתמשו במקלון צמר גפן או הכניסו פיסה קטנה וחתומה מראש של ספוג ג'לטין סופג (gel foam) לצד החתך כדי להגביל דימומים קלים.לאחר מכן, השתמש בנוזל חוט ששוני מלאכותי סטרילי שחומם מראש כדי לשטוף את הרקמה. התקן לייצוב עמוד השדרה תוכנן בהתאמה אישית עם הרכיבים העיקריים של ת clamps של Nagate STSA למערכת השדרה, ומתאם החזקת ראש Nagate MA six N. פלטת בסיס מפלדת אל-חלד יוצרה כדי להחזיק שני חלקי naga בקו אחד, כך שראש החיה נתמך בזמן שעמוד השדרה וזנבה מקובעים.יש לזכור כי המכשיר כולו צריך להיכנס תחת עדשת המיקרוסקופ על במה מונמכת של המיקרוסקופ כדי לייצב את החיה. ראשית, הנח אותה על רפידת הגבהה בלוח הבסיס של מכשיר ייצוב עמוד השדרה. לאחר קיבוע הראש במתאם החזקת הראש, מקם את תסביץ עמוד השדרה של מכשיר ה-SDSA לאורך הציר הקדמי-אחורי של החיה בכיסים שהוכנו מראש, משני צדי הלאמיקטומיה.מקם את שני התפסנים בזווית של כ-45 מעלות ביחס לציר השדרה של החיה, כדי לאפשר מספיק מקום להורדת עדשת הטבילה במים מעל חוט השדרה החשוף. לאחר מכן, מקם את התפסן השלישי בבסיס הזנב, כך שניתן יהיה לתלות את גוף החיה לאחר הסרת רפידת ההגבהה בניסוי הדימות. לאחר מכן, בנה תעלה קטנה מחומר איטום ג'ל סביב חוט השדרה החשוף כדי להקל על שמירת חוט השדרה ב-A CSF.לאחר מכן, הסר את רפידת ההגבהה כאשר תהיה מוכן להתחיל בבדימות (In vivo imaging). הבא את מכשיר הייצוב לתא המיקרוסקופ שחומם מראש והנח אותו על במה המיקרוסקופ לאחר שהורדה. ודא שביצעת יישור של הלמיניקטומיה עם העדשה. הורד בעדינות את עדשת הטבילה במים אל תוך תמיסת ה-A CSF, וודא שהיא אינה נוגעת בתפסני עמוד השדרה או באטום הג'ל.השתמשו במיקרוסקופיית פלואורסצנציה אפיפוסקופית (epi fluorescence) כדי לזהות את אזור העניין ולאחר מכן התמקדו בו. עברו למצב סריקת לייזר ובצעו דימות in vivo תוך שימוש בעירור לייזר דו-פוטוני, באורך גל, במראות דיכרואיות ובמסנני Band-pass המתאימים לפלואורופורים הנמצאים ברקמת הדגימה. בסיום ניסויי הדימות, הוציאו את החיה ממכשיר ייצוב עמוד השדרה.נגב בזהירות את חותם הג'ל מהאזור שסביב הלמינקטומיה ונקה אותו. תפר היטב את שרירי הגב מעל הלמינקטומיה. לאחר מכן, תפר את החתך בעור והעבר עליו Betadine, כפי שמוצג כאן כהקרנה של תמונות Zack כפי שנדרשו in vivo ולאחר מכן הוקרנו לאורך ציר Z ללא יישור תמונות.התמונה מראה תאי מיקרוגליה צפופים מאוד חיוביים ל-GFP בירוק, בסמיכות צמודה לכלי דם באדום בחוט השדרה. כאן מופיעה תמונה בהגדלה גבוהה של תא מיקרוגליה בודד הצמוד לדופן של כלי דם, המראה בפירוט חלק מהבלתיים שלו המשתרעים סביב כלי הדם וחלקם לעבר פהרינכימה של חוט השדרה. כאן מוצגת דוגמה לדימות חוזר in vivo של אותם מקטעי אקסונים המסומנים ב-YFP, בעודם ממוקמים מחדש ומדוימים שוב בחוט השדרה של עכבר מאותו קו YFPH, בשני סשנים שונים במרווח של חמישה ימים. זוהי דוגמה נוספת לדימות חוזר המראה את אותם מבני כלי דם ותאי מיקרוגליה שדוימו in vivo בחוט השדרה בשני ימים רצופים.להלן רצף של צילומי Time-lapse מייצגים שנרכשו in vivo מחוט השדרה. רצף זה מציג בפירוט את ההתנהגות הדינמית של שלוחותיהן העדינות של תאי מיקרוגליה בירוק ואת האינטראקציות שלהם עם כלי הדם באדום. לאורך זמן, התמונות הגולמיות עברו תיקון לרעשי רקע, בהירות וניגודיות בלבד, וסרט ה-time-lapse הוקם על ידי סינון רצופי תמונות ללא יישור תמונות.בממוצע של בחירת מישורי Z בודדים, כלי דם עוברים דרך טווח דומה של מישורי Z כמו התמונות של המיקרוגליה. עומק נפח התמונה הוא 38 microns. זוהי רצף time-lapse המראה את יציבות שיטת ההדמיה ברמה של מישור Z בודד.רכישה מהירה של אותו מישור Z בודד בחוט השדרה של עכבר CX3CR1-GFP הטרוזיגוט, שהורדם באמצעות תערובת KXA והונח על מכשיר לייצוב עמוד השדרה, מדגימה תזוזה מינימלית של התמונה בין פרמים עוקבים. ראוי לציין כי קצב רצף זה היה פרם אחד לשנייה, קצב המהיר מקצב הנשימה של העכבר. התזוזה השאריתית המזערית נובעת ככל הנראה מפעימות הלב של בעל החיים.במהלך ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להגביל את מספר החתכים למינימום ולנסות לעצור כל דימום קל מיד עם הופעתו. כעת, לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה כיצד לבצע דימות in vivo יציב בחוט הששם של עכבר באמצעות מיקרוסקופיה פוטונית דו-פוטונית.

in-vivo-imaging-of-the-mouse-spinal-cord-using-two-photon-microscopy

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

Source: Nishimura, C. et al. כימות של ארכיטקטורת כלי דם מוחיים באמצעות מיקרוסקופיה דו-פוטונית במודל עכבר של דלקת עצבית הנגרמת על ידי HIV. J. Vis. Exp. (2016). סרטון זה מדגים את ההדמיה in vivo של נימים בקליפת המוח במוח העכבר באמצעות מיקרוסקופ דו-פוטוני. הוא מתאר את השלבים להזרקת צבע פלואורסצנטי לעכבר מורדם עם חלון קליפת המוח דק הגולגולת, הכנת ההתקנה להדמיה ורכישת תמונות מפורטות של מבנים מיקרו-וסקולריים במוח לניתוח.

 מיקרוסקופיה דו-פוטונית להדמיה In Vivo של מיקרו-כלי דם במוח העכבר 

שינויים מולקולריים חוויה תלויה בתאי עצב חיוניים ליכולתו של המוח להסתגל בתגובה לאתגרים התנהגותיים.

In vivo שני פוטוני הדמיה של שינויים מולקולריים ניסיון תלוי בנוירונים בקליפת מוח

הדמיית זמן-lapse בבעל חיים חי מספקת מידע רב ערך על ארגון מחדש מבני במוח השלם. כאן, אנו מציגים תכשיר גולגולת דק המאפשר הדמיה טרנס-גולגולתית של מבנים סינפטיים בעלי תווית פלואורסצנטית בקליפת העכבר החי על ידי מיקרוסקופ דו-פוטוני.

שני פוטונים<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של קוצים הדנדריטים בCortex העכבר באמצעות דלילה, גולגולת הכנה

בסרטון הזה, אנו מתארים הליך להשתלת חדר הדמיה אופטי כרוני על חוט השדרה הגבי של עכבר חי. קאמרי, ההליך כירורגי, וההדמיה כרונית נבדקים והפגינו.

נוהל השתלה קאמרי בעמוד השדרה לאורך In vivo הדמיה של כבל עכבר השדרה

ניתן להשתמש בהדמיה תוך-חיונית של שני פוטונים כדי לחקור אינטראקציות בין סוגי תאים שונים בחוט השדרה בסביבת הרקמה הטבעית שלהם בחיה כימרית של מח עצם עם פגיעת ריסוק טראומטית של חוט השדרה בעמוד הגב.

ההדמיה Intravital של axonal אינטראקציות עם Microglia והמקרופאגים בפגיעת Crush טור העכבר הגבי

הכנה חדשה vivo לשעבר הדמיה חוט השדרה העכבר. פרוטוקול זה מאפשר לשני פוטונים הדמיה של אינטראקציות הסלולר בשידור חי בכל רחבי חוט השדרה.

הדמיה שני פוטונים של Dynamics הסלולרי בחוט השדרה העכבר

סרטון זה מציג את הליך הגולגולת המאפשר הדמיה כרונית של נוירונים בקליפת המוח הרטרו-טחולית של העכבר באמצעות מיקרוסקופ פוטונים שני פוטונים in vivo בקו טרנסגני Thy1-GFP. גישה זו משולבת עם הזרקת נגיף הקשור לאדנו המבטא mCherry לתוך ההיפוקמפוס הגבי. טכניקות אלו מאפשרות ניטור ארוך טווח של פלסטיות מבנית תלוית ניסיון ב-RSC.

שני פוטונים סימולטני<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של תשומות Synaptic ויעדי Postsynaptic בקליפת עכבר Retrosplenial

אנחנו מציגים של ויוו הדמיה השיטה באמצעות שני צבעי פלורסנט שונים כדי לעקוב אחר שינויים דינמיים בעמוד השדרה כלי הדם בעקבות פגיעה בחוט השדרה contusive בחולדות ספראג-Dawley למבוגרים.

Vivo דואו-צבע שיטת הדמיה Dynamics כלי הדם בעקבות פגיעה בחוט השדרה Contusive

פרוטוקול זה מתאר השרשה של חלון זכוכית אל חוט השדרה של העכבר כדי להקל על ההדמיה על ידי המיקרוסקופיה.

כריתת למינציה ואת חוט השדרה חלון השרשה בעכבר

מיקרוסקופיית פיזור ראמאן מגורה (SRS) מאפשרת הדמיה ללא תוויות של ביומולקולות המבוססות על הרטט הפנימי שלהם של קשרים כימיים ספציפיים. בפרוטוקול זה, ההתקנה האינסטרומנטלית של מיקרוסקופ פלואורסצנטי משולב של SRS ושני פוטונים מתוארת כדי לדמיין מבנים תאיים בחוט השדרה של עכברים חיים.

In vivo הדמיה של רקמות ביולוגיות עם פלואורסצנטיות דו-פוטונית משולבת ומיקרוסקופיה פיזור ראמאן מגורה

פרוטוקול זה מכיל תיאור מקיף של גישה שלב אחר שלב למודל עכבר חלון גולגולתי כרוני ותסחיף מיקרווסקולרי מותאם להדמיה מיקרוסקופית דו-פוטונית בתוך ה-vivo באמצעות מיקרוספירות פוליסטירן פלואורסצנטיות.

מודל עכבר של תסחיף מיקרווסקולרי למיקרוסקופיה דו-פוטונית בחיים באמצעות מיקרוספירות פוליסטירן פלואורסצנטיות

למדו הדמיה יציבה של חוט השדרה בעכבר באמצעות מיקרוסקופיית שני פוטונים. שיטה זו מצמצמת תנועות נשימה ומאפשרת מעקב תאי בזמן אמת במחלות נוירודגנרטיביות.

בתחום ההדמיה vivo של חוט השדרה בעזרת עכבר דו פוטון מיקרוסקופית

גלה סרטונים נוספים