הכנת אורגנואידים מגידולים: מודל גידול תלת מבחנה תלת ממדי

טוחנים את רקמת הגידול לחתיכות קטנות. העבירו את החלקים לצינור עם מאגר עיכול. סיבי קולגן המקיפים את התאים מתפרקים, ופוגעים במטריצת הרקמה. לאחר מכן, גלו את החתיכות המעוכלות והשליכו את רוב מאגר העיכול. החלק את הצינור כדי לפרק את הגלולה.

הפתרון מורכב כעת מגושי תאים בגדלים שונים. השעו מחדש את גושי התאים בתמיסה של טריפסין ומעכב ROCK. הטריפסין ממשיך לפרק את הגידול והמעכב מונע מוות של תאים. במרווחי זמן קבועים, פיפטה את התמיסה כדי לפרק את הגושים ולפזר את התאים. לאחר מכן, השעו מחדש את התאים בתמיסת מטריצה בריכוז המתאים.

מניחים טיפות מהתמיסה בצלחת תרבות ליצירת כיפות מטריצה. הניחו את הצלחות הפוכות בחממה ואפשרו למטריצה להתמצק לחלוטין. לאחר מכן, הוסף אמצעי תרבית תאים ודגירה, צד ימין כלפי מעלה. המטריצה מספקת פיגום לתמיכה בצמיחה תלת מימדית של האורגנואיד.

לאחר הטחינה, הנח את חתיכות הגידול בצינור של 15 מיליליטר של מאגר עיכול לעיכול של 1.5 עד שעתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. בסוף העיכול, משקעים את הרקמה המעוכלת על ידי צנטריפוגה ומשליכים את הסופרנטנט.

החלק את הצינור כדי לשחרר את גלולת התא. השעו מחדש את התאים ב-1 מיליליטר של טריפסין שחומם מראש בתוספת מעכב Y-27632 ROCK מיקרו-מולרי למשך 5 דקות ב-37 מעלות צלזיוס.

בתום הדגירה, יש לשלש את תמיסת הרקמה חמש פעמים עם קצה הפיפטה הסטנדרטי P1000. החזירו את הצינור לאמבט המים למשך 5 דקות נוספות של דגירה וטריטורציה.

לציפוי כיפת מטריצה, יש לשטוף את התאים המעוכלים ב -9 מיליליטר של מדיום קר, ואז לאסוף את התאים באמצעות צנטריפוגה. השעו מחדש את התאים במיליליטר אחד של מדיום טרי לספירה, ולאחר הספירה, אספו את התאים שוב על ידי צנטריפוגה. לדלל את תאי הגידול בנפח המטריצה המתאים.

זרוק בזהירות 200 מיקרוליטר של תמיסת תאי מטריצה לכל באר של צלחת מחוממת של 55 מעלות צלזיוס עם 6 בארות. הניחו לכיפות להתמצק בטמפרטורת החדר למשך 2 דקות לפני שמניחים את הצלחת הפוכה באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.

כאשר הכיפות התמצקו במלואן, הוסף 2 מיליליטר של מדיום אורגנואיד ערמונית בתוספת אנדרוגן R1881 ומעכב ROCK לכל באר. החזר את הצלחת לחממת תרבית התאים.

• In vitro tumor models - Methods for studying tumor behavior in lab-controlled conditions.
• PeproTech Noggin - A protein used to regulate cellular processes in tissue culture.
• Tumor model - A method or process used to replicate tumor environment and behavior for scientific studies.
• Cell pellet - Cluster of cells collected at the bottom of a tube after centrifugation.
• ROCK inhibitor organoids - Compounds that prevent cell apoptosis during organoid creation.
• Noggin conditioned media - Media enriched with Noggin protein, used in cellular culture and experiments.
• Cell pellet in tube - Term refers to cells that have been concentrated by centrifugation in a sample tube.

• Introduce In vitro tumor models by defining this as a replicate of tumor behavior (e.g., in vitro tumor models).
• Key Concepts by summarizing principles involved in cell pellet creation (e.g., cell pellet).
• Underlying Mechanisms through visualizing the process of using ROCK inhibitor in organoid creation.
• Connect the process of tumor tissue mincing to the creation of a cell pellet and suspension in a matrix solution.

• What are in vitro tumor models and how to create a cell pellet in lab conditions?
• What role does the PeproTech Noggin play in the tumor model creation?
• How does the ROCK inhibitor assist in the creation of organoids?

• Practical Applications - Tumor models help study cancer growth and potential cures (e.g., in vitro tumor models).
• Industry Impact - Lab studies benefit the healthcare industry and the field of oncology (e.g., ROCK inhibitor organoids).
• Societal Importance - The research contributes to advancements in cancer treatment options (e.g., Noggin conditioned media).
• Link to Scientific Advancements - Understanding tumor behavior facilitates innovative treatment approaches.