בידוד תאים חד-גרעיניים ממוח עכבר: טכניקת צנטריפוגה של שיפוע צפיפות לבידוד תאים חד-גרעיניים שוכני מוח
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:11 דק׳ • April 30th, 2023
תאים חד-גרעיניים במוח, הכוללים לימפוציטים ומונוציטים, ממלאים תפקידים מכריעים בשמירה על תפקוד המוח והומאוסטזיס.
כדי לבודד את התאים החד-גרעיניים הללו, ראשית, קחו מוח עכבר טרי שנקטף עם מי מלח.
הזלוף מאפשר הוצאת דם ומרכיביו מכלי הדם, ומאפשר בידוד של תאי חיסון השוכנים במוח בשלבים הבאים.
כעת, שטפו את המוח במדיה מתאימה להסרת כדוריות דם אדומות דביקות. עקוב אחר השטיפה עם טחינה כדי להשיג חתיכות רקמה קטנות.
הומוגניזציה של חלקי הרקמה כדי לקבל השעיה של תאים בודדים ושברי תאים.
למתלה זה, הוסף מדיה מקוררת ומדיום שיפוע צפיפות מתאים בנפחים מתאימים ליצירת מדיום שיפוע בצפיפות נמוכה.
לאחר מכן, הוסיפו נפח מסוים של מדרג צבע בצפיפות גבוהה. מדיית מעבר הצבע בצפיפות גבוהה יוצרת שכבה נפרדת בתחתית, ויוצרת מעבר צבע לא רציף.
צנטריפוגה את המתלים במהירות גבוהה ובתנאי טמפרטורה נמוכה. תאים חד-גרעיניים תופסים את הממשק בין שתי שכבות המדיה של שיפוע הצפיפות.
השליכו את השכבה העליונה המכילה פסולת תאית ומיאלין - מעטפת רקמת השומן המקיפה את אקסוני תאי העצב.
העבר את שכבת הממשק לצינור טרי המכיל מדיה וצנטריפוגה מתאימה.
תאים חד-גרעיניים מטוהרים משקעים כגלולה וניתן להשעות אותם מחדש במאגר לניתוח נוסף.
חותכים את הגולגולת בזהירות מהאף לצוואר ומעבירים את המוח של כל בעל חיים מקופסת הגולגולת לצינורות בודדים של 50 מיליליטר המכילים 10 מי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים