אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:48 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לבצע את העברת הגנים ההידרודינמית, התחל בלקיחת מזרק מלא בתמיסה מבוססת מלח המכילה פלסמידים רקומביננטיים הנושאים את הגן המעניין. לאחר מכן, קח מודל עכבר והזריק במהירות נפח גדול של תמיסת פלסמיד בבסיס הזנב, והבטיח שתמיסת הפלסמיד מוזרקת תוך ורידי לווריד הזנב.
הזרקה בלחץ של נפח גבוה של פלסמידים מייצרת כוח מכני הנקרא הכוח ההידרודינמי, המגביר את הלחץ התוך וסקולרי בווריד הנבוב התחתון - וריד המוביל דם לא מחומצן ללב.
נפח נוזל גדול גורם לגודש בחדר הימני של הלב ומאלץ את ההיפוך בכיוון הדם. שלב זה מאלץ את תמיסת הפלסמיד להיכנס לווריד הכבד, הנושא אותו לכבד.
הפלסמידים נעים בתוך הסינוסואידים בכבד - החללים בכבד המרופדים על ידי תאי האנדותל. נפח דם מוגבר עוזר לפלסמידים לחלחל לשכבת האנדותל ועוזר להם להגיע ליד הפטוציטים שמסביב - תאי הכבד.
הזרימה המהירה של תמיסת הפלסמיד גורמת ללחץ על קרום תאי ההפטוציטים ויוצרת נקבוביות חולפות. נקבוביות אלו מקלות על ספיגת התאים של ה-DNA של הפלסמיד. מאוחר יותר, נקבוביות הממברנה נסגרות, ולוכדות את הפלסמידים בתוך הפטוציטים.
הביטוי המוצלח של הגן המעניין בהפטוציטים מאשר את הטרנספקציה.
התחילו בשקילת העכברים, ולאחר מכן, הכינו תמיסת מלח סטרילית המכילה 15 מיקרוגרם למיליליטר של מבנה וקטור היפהפייה הנרדמת נטול אנדוטוקסין נטול אנדוטוקסין ומיקרוגרם אחד למיליליטר pc-HSB5 נטול אנדוטוקסין. הכינו מספיק תמיסה כדי להזריק לכל עכבר נפח שהוא 10% ממשקל גופו. מלאו מזרק סטרילי של 3 מיליליטר בנפח הנדרש לעכבר אחד, והצמידו מחט בגודל 27.
לאחר הוספת כמות מתאימה של נייר טישו כדי להשאיר מקום מינימלי לתנועה, אך מספיק מקום לנשימה, הכנס את העכבר לריסון מתאים עם חורי נשימה. מחממים את הזנב באמצעות מנורת אינפרא אדום למשך 30 עד 60 שניות, תוך התבוננות בזהירות בסימני התחממות יתר, כגון תנועה מהירה של הזנב או סימני תסיסה אחרים, ולאחר מכן, נקו את הזנב בעזרת ספוגית אלכוהול.
הכנס את המחט כמעט אופקית לאחד משני ורידי הזנב הצדדיים הקרובים לבסיס הזנב. אם יונח בהצלחה, כמות קטנה של דם עשויה לזרום בחזרה לתוך חרוט המחט. הזרקו את הנפח הכולל לווריד הזנב תוך 8 עד 10 שניות. לאחר ההזרקה, הסר מיד את העכבר מהמסנן. דחסו את פצע ההזרקה עם גזה סטרילית למשך 30 שניות לפחות או עד שהדימום שוכך.
הזרקת וריד זנב הידרודינמית מוצלחת היא חיונית לטרנספקציה, ותלויה במיוחד במהירות ההזרקה, בנפח ובזמן ההזרקה. כדי להקל על הזרקה תוך ורידית, ודא שהעכברים אינם לחוצים או מיובשים ביום ההזרקה.
לאחר 30 עד 60 דקות של שהייה סולו בכלוב התאוששות, העבירו את העכבר בחזרה לכלוב המקורי שלו.