העברת גנים הידרודינמיים: טכניקה לטרנספקציה In vivo של DNA אקסוגני בהפטוציטים של מורין באמצעות הזרקת ורידי זנב
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:48 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לבצע את העברת הגנים ההידרודינמית, התחל בלקיחת מזרק מלא בתמיסה מבוססת מלח המכילה פלסמידים רקומביננטיים הנושאים את הגן המעניין. לאחר מכן, קח מודל עכבר והזריק במהירות נפח גדול של תמיסת פלסמיד בבסיס הזנב, והבטיח שתמיסת הפלסמיד מוזרקת תוך ורידי לווריד הזנב.
הזרקה בלחץ של נפח גבוה של פלסמידים מייצרת כוח מכני הנקרא הכוח ההידרודינמי, המגביר את הלחץ התוך וסקולרי בווריד הנבוב התחתון - וריד המוביל דם לא מחומצן ללב.
נפח נוזל גדול גורם לגודש בחדר הימני של הלב ומאלץ את ההיפוך בכיוון הדם. שלב זה מאלץ את תמיסת הפלסמיד להיכנס לווריד הכבד, הנושא אותו לכבד.
הפלסמידים נעים בתוך הסינוסואידים בכבד - החללים בכבד המרופדים על ידי תאי האנדותל. נפח דם מוגבר עוזר לפלסמידים לחלחל לשכבת האנדותל ועוזר להם להגיע ליד הפטוציטים שמסביב - תאי הכבד.
הזרימה המהירה של תמיסת הפלסמיד גורמת ללחץ על קרום תאי ההפטוציטים ויוצרת נקבוביות חולפות. נקבוביות אלו מקלות על ספיגת התאים של ה-DNA של הפלסמיד. מאוחר יותר, נקבוביות הממברנה נסגרות, ולוכדות את הפלסמידים בתוך הפטוציטים.
הביטוי המוצלח של הגן המעניין בהפטוציטים מאשר את הטרנספקציה.
התחילו בשקילת העכברים, ולאחר מכן, הכינו תמיסת מלח סטרילית המכילה 15 מיקרוגרם למיליליטר של מבנה וקטור היפהפייה הנרדמת נטול אנדוטוקסין נטול אנדוטוקסין ומיקרוגרם אחד למיליליטר pc-HSB5 נטול אנדוטוקסי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים