בדיקת נקודה לכימות גנום נגיפי

כדי לכמת DNA ויראלי באמצעות בדיקת כתם הנקודות, התחל עם תרחיף DNA ויראלי מבודד. טפל בתמיסה אלקליין כדי לנטרל את הדנ"א הדו-גדילי לגדילים בודדים לצורך הכלאה לאחר מכן.

הרכיבו את מנגנון כתם הנקודות עם קרום ניילון רטוב מראש. טען DNA ויראלי מפורק ותמיסות DNA פלסמיד סטנדרטיות ליניאריות לבארות. החל ואקום מתאים, המאפשר העברת DNA חד-גדילית ויראלית יעילה בעלת מטען שלילי וקשירה על פני הממברנה הטעונה חיובית באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות, ויוצרות דפוסי נקודות.

לאחר הריצה, שטפו את הממברנה עם מאגר נתרן ציטראט, מה שעוזר לשפר את רגישות הבדיקה. לאחר הייבוש, חשפו את הממברנה לאור אולטרה סגול, וקשרו את ה- DNA המוכתם לקרום.

הוסף לממברנה שבר DNA מפורק בחום, לא הטרולוגי ותרחיף בדיקת DNA רדיואקטיבי ספציפי לגנום הנגיפי עם תווית זרחן במאגר הכלאה. דגירה, הקלה על הכלאה.

שברי ה-DNA פועלים כסוכנים חוסמים, נקשרים לאזורי הממברנה הנותרים, וממזערים את קשירת הבדיקה הלא ספציפית. הגשושית הרדיואקטיבית מתכלאת עם הרצף המשלים על ה-DNA החד-גדילי הנגיפי.

יש לשטוף עם מאגר כביסה כדי להסיר בדיקות לא היברידיות. באמצעות מערכת סריקת תמונת הזרחן, כמת את האותות הרדיואקטיביים הנפלטים מהבדיקות הרדיואקטיביות המוכלאות לגנום הנגיפי על הממברנה, כדי לקבל אותות כתמי נקודות.

מהעקומה הסטנדרטית, ניתן להשתמש בעוצמת האות של כל נקודה על הממברנה