Name: Cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר Submandibular Duct של וורטון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: למדו את שיטת הקנולציה של בלוטת הרוק התת-לסתית בעכברים דרך צינור וורטון. טכניקה זו מאפשרת הזרקת תאי גזע לשיקום הבלוטה ומציעה פוטנציאל ליישומים קליניים ברפואה רגנרטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לד&quot;ר אנה Cotrim להתייעצות טכניים ד&quot;ר Monzur מורשד לציוד. עבודה זו הייתה חלק ממומן על ידי המכון הקנדי לחקר בריאות.

1. תיאור פרוצדורלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תת עורי להזריק μl 1 / משקל הגוף גרם monohydrate אטרופין 0.5 מ"ג / מ"ל ​​סולפט (Cat # 11330, Fluka, ארה"ב) לעכבר כדי למנוע את כל הפרשות הרוק מן לשבש את התנועה של חליטות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי כל עכבר עם משקל גוף μl 1 / g של קטמין מ"ג / מ"ל ו - 100 20 מ"ג / מ"ל xylazine (פיניקס מדעי, AR, ארה"ב) פתרון מוזרק התוך צפקי (IP) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על פלטפורמה מחוייט פלסטיק במצב הגחון: החותכות לסתי נעולים על חוט מתכת, החותכות mandibular מחוברות על חוט אלסטי על מנת להחזיק את הפה פתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מזרק אינסולין עם מחט 29-מד (Cat # 600145, Tyco Healthcare, מסצ'וסטס, ארה"ב) ממוקמים בתוך צינור פוליאתילן בקוטר 0.58 מ"מ (Cat # 427410, בקטון דיקינסון, MD, ארה"ב; איור 2). צינור פוליאתילן מוכנס 5mm על קצה מחט 29-מד. מחט משמש כמדריך נוקשה להזיז את הצינור לתוך צינור פוליאתילן של וורטון. צינור פוליאתילן מוכנס 3-5 מ"מ בתוך צינור. שים לב, רק צינור פוליאתילן נכנס צינור בלוטת הרוק בעוד המחט נותרת מחוץ בצינור. הזרק 50ul מסונן של פתרון 0.4% trypan כתם כחול (Cat # 15250, Gibco, ארה"ב) לתוך בלוטת submandibular דרך צינור של וורטון, הנמצא ממש מתחת ללשון. עירוי מועבר בהתמדה עם לחץ חיובי על הבוכנה מזרק; אצבע נשארת על הבוכנה גם אחרי כל העירוי נמסרה בלוטת, על מנת למנוע backflow של העירוי התוך דרך הפה. הפתרון כחול trypan משמש וידאו כמו צבע כדי להדגים את הטכניקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חרי את הזריקה של הפתרון trypan כחול, העכבר היה מורדמים לקראת לנתיחה. בלוטת הרוק נחשף בניתוח על מנת לקבוע כמה חליטות נותרו למעשה בבלוטת. </li></ol> 2. נציג תוצאות: לאחר חליטות הוזרקו, העכבר היה גזור כדי לחשוף את הבלוטה בניתוח שלאחר cannulated הרוק. כפי שמוצג על תמונה-2, צבע כהה של צינור של וורטון מספק ראיות כי הפתרון כחול trypan היה חדור בהצלחה. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="איור 1"> באיור 1. Cannulation של בלוטת submandibular העכבר. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="איור 2"> איור 2. פוליאתילן צינור עטוף סביב קצה מחט 29-מד. מחט המזרק משמש כמדריך נוקשה להזיז את הצינור לתוך צינור פוליאתילן של וורטון. צינור פוליאתילן מוכנס (cannulated) 3-5 מ"מ בתוך צינור. שים לב, רק צינור פוליאתילן נכנס צינור בלוטת הרוק בעוד המחט נותרת מחוץ בצינור.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

כל הניסויים אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת היו בהתאם להנחיות המועצה הקנדית על בריאות בעלי חיים.

הקושי בשיטה זו cannulation היא למנוע backflow הפתרון מוזרק. גם אם הפתרון trypan כחול העביר זמנית לתוך בלוטת הרוק בהצלחה, הפרשת רוק עלולים להפריע לתהליך חליטות ולגרום backflow הפתרון trypan כחול מתוך בלוטת. כאמצעי זהירות, בנוסף לשימוש אטרופין כדי לדכא את הפרשת הרוק, את הצינורית פוליאתילן צריך להישאר דביק של וורטון את הבוכנה של המזרק שנערך במשך 60 שניות לאחר חליטות הופקדו. זה יאפשר ביותר של הפתרון חדורים להישאר בתוך הבלוטה. <p class="jove_content" style=";text-align:right;direct...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> אטרופין </td><td> תרופה </td><td> Fluka </td><td> 11330 </td><td> כדי לדכא את הפרשת הרוק </td></tr><tr><td> קטמין </td><td> תרופה </td><td> הפניקס מדעי </td><td></td><td> הרגעה </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> תרופה </td><td> הפניקס מדעי </td><td></td><td></td></tr><tr><td> צינורות פוליאתילן (בקוטר 0.58 מ&quot;מ) </td><td> שפופרת </td><td> Intramedic PE-10, בקטון דיקינסון ניתוח מערכות </td><td> 427410 </td><td> כדי להוסיף על קצה המחט, כדי למנוע פגיעה ברקמה במהלך הכניסה לתוך צינור של וורטון. </td></tr><tr><td> נוחות Ultra מזרק אינסולין (עם מחט 29G) </td><td> מזרק </td><td> Tyco Healthcare </td><td> 600145 </td><td></td></tr><tr><td> 4% trypan כחול </td><td> כתם </td><td> Gibco </td><td> 15250 </td><td></td></tr></tbody></table>

cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר submandibular duct של וורטון

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

בלוטת הרוק חמור hypofunction נמצא לעתים קרובות בחולים עם תסמונת סיוגרן ואלה שקיבלו טיפולי הקרנה בראש שלהם ואזורים הצוואר לטיפול בסרטן. שתי קבוצות של סימפטומים מהמטופלים חווים כגון xerostomia (יובש בפה), הבליעה (לקויי בלעיסה ובבליעה), עששת חמורה, טעם שונה, oro-בלוע זיהומים (קנדידה), mucositis כאב ואי נוחות. גישה אחת חדשני של רפואה רגנרטיבית לטיפול בלוטת הרוק תת פונקציה משערים של RS רדמן, E Mezey et al 2009:. בתאי גזע ניתן להפקיד ישירות לתוך בלוטת ידי cannulation כשיטה עוצמה להחיות את הפונקציות של לקויי איברים. יש להניח, התאים נדדו גזע זר יהיה להתמיין לתאי הבלוטות לתפקד כחלק של בלוטת הרוק המארח. כמו כן, טכניקה זו cannulation היא שיטה המסירה רצוי ויעיל ליישום קליני גן ההעברה. כאן אנו מדגימים את השלבים הכרוכים בביצוע ההליך cannulation על בלוטת הרוק עכבר submandibular דרך צינור של וורטון (איור 1). C3H עכברים (צ&#39;ארלס ריבר, מונטריאול, QC, קנדה) משמשים עבור ניסוי זה, אשר נשמרו בתנאים רגילים נקיים במרכז אוניברסיטת מקגיל משאב בעל חיים. כל הניסויים אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת היו בהתאם להנחיות המועצה הקנדית על בריאות בעלי חיים. לצורך ניסוי זה, פתרון trypan הכחול הוא החדיר לתוך בלוטת באמצעות פתיחת צינור של וורטון באמצעות מזרק אינסולין עם מחט 29-מד עטוף בתוך צינור פוליאתילן. לאחר מכן, העכבר הוא גזור להראות כי חליטות היגרו לתוך בלוטת בהצלחה.

פרוטוקול עבור cannulation של בלוטת הרוק עכבר submandibular דרך צינור של וורטון מתואר. לצורך ניסוי זה, הפתרון כחול trypan משמש הצבעים כדי להדגים כיצד טכניקה זו יעילה מספק חליטות לתוך בלוטת ממוקד, ולהציע את האמינות של הגישה החדשה הזו כמו טיפול פוטנציאלי סמים / תא קליניות לגבי רגנרצית של בלוטות הרוק.

Cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר Submandibular Duct של וורטון

תת-תפקוד חמור של בלוטות הרוק נמצא לעיתים קרובות בקרב חולים עם תסמונת שג्रेन ובקרב אלו המקבלים הקרנה טיפולית באזור ה-...

כל הניסויים אושרו על ידי ועדת רعاية החיות של אוניברסיטת מקגיל, והם בוצעו בהתאם להנחיות של המועצה הקנדית לרعاية בעלי חיים. מטרת ניסוי זה היא להחדיר תאי אב או תאי גזע לבלוטה הרוק המנדיבולרית של עכבר באמצעות קניולציה של תעלת וורטון (Wharton's duct). בסרטון זה, נעשה שימוש בתמיסת tripan blue כצבע כדי להמחיש את עירוי התאים.תת-תפקוד של בלוטות הרוק הוא אחת התופעות הלוואי השכיחות ביותר של תסמונת שגרן והקרנה טיפולית לסרטן באזורי הראש והצוואר. תפקוד לקוי של בלוטות הרוק עלול להוביל לעיתים קרובות למחלות שיניים, כגון זיהום של הרירית הפה ועששת. גישה חדשנית אחת של רפואה רגנרטיבית לטיפול בבלוטות רוק פגועות היא הבאה.ניתן להחדיר תאי גזע ישירות לבלוטה באמצעות קניולציה דרך נישני בלוטת הרוק כשיטה יעילה להחייאת תפקודי בלוטה פגועה; ככל הנראה, תאי הגזע הזרים שנדלקו יתמיינו לתאים בלוטיים ויפעלו כחלק מבלוטת הרוק. כאן אנו מדגימים את השלבים המעורבים בביצוע הליך הקניולציה בבלוטת הרוק התת-לסתי של עכבר דרך צינור וורטון (Wharton duct). בניסוי זה, תמיסת trypan blue מוזרקת לבלוטה דרך פתח צינור וורטון באמצעות מזרק ומחט במידה 29 gauze ultra comfort.לאחר מכן, העכבר מנותח כדי להראות כי החומרים המוזרקים הגיעו בהצלחה אל תוך הבלוטה. שלב ראשון, מזריקים לכל עכבר באופן תת-עורי 1 µL לגרם ממשקל הגוף של אתרופין סולפט מונוהידראט בריכוז 0.5 mg/mL, כדי למנוע מהפרשות הרוק להפריע לתנועת החומרים המוזרקים. שלב שני, מזריקים לכל עכבר באופן תוך-בטני 1 µL לגרם ממשקל הגוף של תמיסה המכילה קטמין בריכוז 100 mg/mL וקסילזין בריכוז 20 mg/mL לצורך הרדמת העכבר.שלב שלוש. לאחר תהליך הסדציה, העכבר מונח על פלטפורמה. במצב גחוני, שן החותכת העליונה ננעלת על תיל מתכת ושן החותכת התחתונה נתפסת על גומי אלסטי כדי להחזיק את הפה פתוח.שלב ארבע, באמצעות מחט ultra comfort 29 Gau ומזרק, מוחדר תמיסת Trian blue בריכוז 0.4% שעברה סינון אל בלוטת הרוק התת-לסתרית דרך תעלת וורטון (Wharton duct), הממוקמת ממש מתחת ללשון. המחט מכוונת כעת לעבר פתח תעלת וורטון, וכעת היא חודרת לתעלה כדי להחדיר את התמיסה. שלב חמישה.מיד לאחר הליך הקנולציה, בולטת בלוטת הרוק בניתוח כדי לקבוע כמה מהעירויים נשארו בפועל בבלוטה. לאחר הזרקת העירויים, העכבר נשחט כדי לחשוף בניתוח את בלוטת הרוק לאחר הקנולציה. כפי שניתן לראות בתמונה זו, הצבע הכהה של תעלת וורטון מהווה עדות חזקה לכך שתמיסת ה-tripan blue הוזרקה בהצלחה במקרה של תת-תפקוד של בלוטת הרוק.היישום המקומי, ובייחוד הזרקת תרופות ותאים באמצעות הליך הקניולציה זה, עשוי להיתפס כדרך ישירה ואפקטיבית יותר להחייאת התפקודים של בלוטות הרוק הפארוטיד, הסבמנדיבולרית והסובלינגוואלית. כפי שעולה מהתוצאות המייצגות, החומרים שהוזרקו, שבמקרה זה היו תמיסת Trian blue, הופקדו בהצלחה לבלוטת הרוק הסבמנדיבולרית של העכבר דרך צינור וורטון (Wharton's duct). לפיכך, ניתן להשתמש בטכניקת קניולציה זו כמודל מהימן לרפואה רגנרטיבית של בלוטות הרוק בעכברים.כסיכום של כיוונים עתידיים, הליך זה עשוי להוות שיטה יעילה ליישומים קליניים של העברה גנטית. נשמח אם מאמר ויזואלי זה ישמש ככלי יעיל עבור סטודנטים וחוקרים המעוניינים במחקרים נוספים בתחום הרפואה הרגנרטיבית של בלוטות הרוק.

cannulation-mouse-submandibular-salivary-gland-via-wharton-s

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים טכניקה לצינור צינור הלימפה המזנטרי בחולדות. שיטה זו מאפשרת גישה ישירה לכל נפח הרכיבים הקיימים בנוזל הלימפה.

קנולציה של צינור לימפה מזנטרי במודל חולדה לקצירת נוזל לימפה

מיקרוסקופיה Intravital היא כלי רב עוצמה המאפשר הדמיה של תהליכים ביולוגיים שונים בבעלי חיים. במאמר זה, אנו מציגים שיטה מפורטת להדמית הדינמיקה של מבני subcellular, כגון גרגרי ההפרשה, בבלוטות הרוק של עכברים חיים.

מיקרוסקופית Intravital למבני ההדמיה subcellular בעכברים חיים לבטא חלבוני פלורסנט

תת תפקוד בלוטות הרוק, תופעת לוואי משמעותית של רדיותרפיה בראש ובצוואר מפחיתה את איכות החיים של המטופל. הוכחת היעילות של טיפולים חדשים במודלים של בעלי חיים היא תנאי מוקדם לפני המעבר הקליני. פרוטוקול זה מתאר מתן רטרודוקטי והקרנה מקומית של בלוטות תת-לסתות של חולדות.

Retroductal submandibular בלוטת החדרה ונקודות מופרדות הקרנה במודל עכברים של הרוק hypofunction

אנו מתארים פרוטוקול בניתוח לחשוף ולייצב את בלוטת הרוק submandibular מאתר עבור הדמיה intravital באמצעות מיקרוסקופ intravital זקוף. פרוטוקול זה ניתנת להתאמה בקלות אחרים בלוטות אקסוקרינית של הראש, באזור הצוואר של עכברים ומכרסמים קטנים אחרים.

הכנה של בלוטת הרוק Submandibular מאתר מיקרוסקופ Intravital זקופה

משלוח סמים מקומי נקראות בלוטות הוא עניין בביולוגיה בלוטת הרוק ההבנה ועל ההתפתחות של הריפוי. אנו מציגים פרוטוקול הזרקת retroductal מעודכן ומפורט, שנועדו לשפר את המסירה ודיוק הפארמצבטית ניסיוני. היישום שהוצגו במסמך זה הוא המסירה של חלקיקים פולימרים.

ננו-חלקיק Retroductal הזרקה אל בלוטת Submandibular מאתר

אנו מציגים גישה מפורטת לביצוע אוסף רוק, כולל מיכשור וציוד מאתר את ניתוקה של שלושה בלוטות הרוק הגדולות.

מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה

מטרתו של כתב יד זה היא לתאר את הצעדים המיקרו-כירורגיים הנדרשים לביצוע השתלת גרון הטרוטופית בעכברים. היתרונות של מודל עכבר זה בהשוואה למודלים אחרים של בעלי חיים של השתלת גרון הם עלות-תועלת שלו ואת הזמינות של בדיקות אימונולוגיות ונתונים.

מודל עכבר הטרוטופי לחקר השתלת גרון

בפרוטוקול הנוכחי, פונקציית מחסום האנדותל של הבלוטה התת-מנדיבולרית (SMG) הוערכה על ידי הזרקת עוקבים פלואורסצנטיים משוקללים מולקולריים שונים לוורידים הזוויתיים של מודלים של חיות ניסוי in vivo תחת מיקרוסקופ סריקת לייזר של שני פוטונים.

אין ויוו זיהוי חדירות כלי דם בבלוטה תת-מנדיבולרית של עכבר

הדמיה אימונופלואורסצנטית מוגבלת על ידי היכולת לצפות בתהליכים ביולוגיים מורכבים ותלויי זמן בתמונת מצב אחת בלבד בזמן. מחקר זה מתאר גישת הדמיה חיה שנערכה על פרוסות בלוטות תת-לסתיות של עכברים שנחתכו בחיתוך מדויק. גישה זו מאפשרת תצפית בזמן אמת על אינטראקציות תא-תא במהלך הומאוסטזיס ותהליכי התחדשות ותיקון.

חקירת אינטראקציות תאים-תאים בבלוטת הרוק באמצעות Ex Vivo Live Cell Imaging

תיקון עורק התרדמה במודל עכברי לאחר הזרקה מחזיר את זרימת הדם לעורק מבלי להשפיע לרעה על פיזור החומר המוזרק. תיקון אתר ההזרקה מאפשר זריקות עוקבות דרך אותו עורק ומונע איסכמיה מוחית בזני עכברים חסרי מעגל שלם של וויליס.

הקלה על הזרקות חוזרות תוך קרוטיד במודלים של עכברים על ידי טכניקת תיקון אתר הזרקה חדשנית

פרוטוקול ניסויי זה מדגים מודל עכברוש מחובר לצינור לימפה צווארי עמוק, המאפשר הערכה ישירה וכמותית של ניקוז לימפה מאזור הראש. המודל מאפשר ניתוח מפורט של מומסים שמקורם במערכת העצבים המרכזית (CNS), אוכלוסיות תאי חיסון, והפצה וניקוי של טיפולים ממוקדים במערכת העצבים המרכזית.

מודל עכברוש בצינור הלימפה הצווארי להערכת הובלה לימפה מהראש ומהמוח

למדו את שיטת הקנולציה של בלוטת הרוק התת-לסתית בעכברים דרך צינור וורטון. טכניקה זו מאפשרת הזרקת תאי גזע לשיקום הבלוטה ומציעה פוטנציאל ליישומים קליניים ברפואה רגנרטיבית.

Cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר Submandibular Duct של וורטון

גלה סרטונים נוספים