אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:46 דק׳ • July 8th, 2025
זרע תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם, או iPSCs, בביו-ריאקטור. תאי ה-iPSC מושעים מחדש במדיה המכילה מעכב אפופטוזיס תאי.
תחת שדה מגנטי, הגלגל האנכי של הביוריאקטור מסתובב במהירות מבוקרת, מה שמקל על מגע תא-תא ויצירת אגרגטים. הסר את רוב המדיה והוסף מדיה חדשה ללא המעכב.
המשך לתרבת. ברגע שהאגרגטים מגיעים לגודל אופטימלי, אפשר להם להתיישב על ידי כוח הכבידה. הסר את המדיום.
הוסף אמצעי בידול המכילים גורמי גדילה ותרבית עם מהירות גלגל ביו-ריאקטור מופחתת. גורמי הגדילה מקדמים התמיינות עצבית בתוך האגרגטים.
לאחר מכן, הוסף מדיום טרי בתוספת גורמי גדילה וכימוקינים הגורמים להתפתחות אבות המוח הקטן.
בהדרגה, אבות המוח הקטן מתארגנים לשכבות נפרדות בתוך האגרגטים, ויוצרים אורגנואידים מוקדמים של המוח הקטן.
לבסוף, הוסף מדיום עצבי המכיל גורמים נוירוטרופיים ספציפיים.
גורמים אלה גורמים להבשלת אב המוח הקטן לנוירונים תפקודיים פעילים במוח הקטן, ויוצרים אורגנואידים בוגרים.
ביום הראשון, כאשר יום 0 הוא יום זריעת הביוריאקטור, הנח את הביוריאקטור ואת יחידת הבסיס במכסה זרימה סטרילי. לאחר מכן, השתמש בפיפטה סרולוגית כדי לאסוף דגימה של 1 מיליליטר של תרחיף התא. צלח את מתלה התא בצלחת חיבור נמוכה במיוחד עם 24 בארות. השתמש במיקרוסקופ כדי לאשר שנוצרו אגרגטים שמקורם ב-iPSC. אם כן, צלם תמונות של הצבירה ב-40x או 100x.
המשיכו לתרבת את ה-iPSCs בביו-ריאקטור עד שהקוטר הממוצע של האגרגטים הוא 100 מיקרומטר. לאחר מכן, החלף 80% מהמדיום ב-mTesR1 טרי ללא מעכב ROCK. כאשר האגרגטים מגיעים לקוטר של 200 עד 250 מיקרומטר, תנו לכל האורגנואידים להתיישב בתחתית הביוריאקטור. לאחר מכן, החלף את כל המדיום המושקע במדיום התמיינות gfCDM.
הנח את יחידת הבסיס ואת הביוריאקטור בחממה והפחית את התסיסה ל-25 סל"ד.