יצירת אורגנואידים צרבלריים בוגרים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים באמצעות ביוריאקטורים חד-פעמיים

זרע תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם, או iPSCs, בביו-ריאקטור. תאי ה-iPSC מושעים מחדש במדיה המכילה מעכב אפופטוזיס תאי.

תחת שדה מגנטי, הגלגל האנכי של הביוריאקטור מסתובב במהירות מבוקרת, מה שמקל על מגע תא-תא ויצירת אגרגטים. הסר את רוב המדיה והוסף מדיה חדשה ללא המעכב.

המשך לתרבת. ברגע שהאגרגטים מגיעים לגודל אופטימלי, אפשר להם להתיישב על ידי כוח הכבידה. הסר את המדיום.

הוסף אמצעי בידול המכילים גורמי גדילה ותרבית עם מהירות גלגל ביו-ריאקטור מופחתת. גורמי הגדילה מקדמים התמיינות עצבית בתוך האגרגטים.

לאחר מכן, הוסף מדיום טרי בתוספת גורמי גדילה וכימוקינים הגורמים להתפתחות אבות המוח הקטן.

בהדרגה, אבות המוח הקטן מתארגנים לשכבות נפרדות בתוך האגרגטים, ויוצרים אורגנואידים מוקדמים של המוח הקטן.

לבסוף, הוסף מדיום עצבי המכיל גורמים נוירוטרופיים ספציפיים.

גורמים אלה גורמים להבשלת אב המוח הקטן לנוירונים תפקודיים פעילים במוח הקטן, ויוצרים אורגנואידים בוגרים.

ביום הראשון, כאשר יום 0 הוא יום זריעת הביוריאקטור, הנח את הביוריאקטור ואת יחידת הבסיס במכסה זרימה סטרילי. לאחר מכן, השתמש בפיפטה סרולוגית כדי לאסוף דגימה של 1 מיליליטר של תרחיף התא. צלח את מתלה התא בצלחת חיבור נמוכה במיוחד עם 24 בארות. השתמש במיקרוסקופ כדי לאשר שנוצרו אגרגטים שמקורם ב-iPSC. אם כן, צלם תמונות של הצבירה ב-40x או 100x.

המשיכו