בידוד מיקרוגליה מנגעי דה-מיאלינציה במוח עכבר באמצעות מיון תאים מופעל מגנטי

לנתח נגעים מוכתמים של דמיאלין מהקורפוס קלוסום של מוח עכבר.

נגעים אלה מכילים מיקרוגליה השוכנת במוח המבטאת את האינטגרין CD11b על פני התא.

אוספים את הרקמה ומוסיפים תמיסה המכילה אנזים פרוטאוליטי ו- DNase.

האנזים משפיל את המטריצה החוץ-תאית, בעוד ש-DNase משפיל את ה-DNA החופשי.

הוסף חיץ קר וסנן את המתלה דרך מסננת כדי להסיר גושים תאיים.

צנטריפוגה, השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים הגלולים בתווך שיפוע צפיפות.

כיסוי עם חיץ וצנטריפוגה לאיסוף הפסולת שנותרה בשכבות העליונות; תאים שלמים מתיישבים בתחתית.

הסר את הפסולת והשהה מחדש את התאים במאגר.

הוסף חרוזים מגנטיים נגד CD11b כדי לסמן את המיקרוגליה.

טען את התאים על עמודה המכילה כדורים פרומגנטיים הממוקמים בשדה המגנטי של המפריד המגנטי.

תחת השדה המגנטי החיצוני, המיקרוגליה הקשורה לחרוזים נשמרת בעמודה בעוד תאים לא קשורים זורמים דרכה.

הסר את העמוד מהשדה המגנטי. הוסף חוצץ כדי לסלק את המיקרוגליה.

התחל בניתוח מיקרו של הנגעים המסומנים בצבע ניטרלי סביב הקורפוס קלוסום תחת סטריאומיקרוסקופ. צנטריפוגה של הרקמה המנותחת ב-300 x גרם למשך 30 שניות כדי לאסוף את הדגימה בתחתית הצינור. מחממים מראש תערובת אנזים 1 ותערובת אנזימים 2 עד 37 מעלות צלזיוס בחממה. לאחר מכן, הוסיפו 1,950 מיקרוליטר של תערובת אנזימים מחוממת מראש לדגימה אחת ועכלו באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות