בידוד ותרבית של נוירוני דופמין עובריים ראשוניים במוח התיכון

קח רקמת רצפת מוח אמצעית מבודדת מאזור הגחון של המוח התיכון של עוברי עכברים.

הרקמה עשירה בפיתוח נוירונים דופמין, המשחררים את המוליך העצבי דופמין.

הוסף תמיסת אנזים כדי לפרק את מטריצת הרקמות, ובכך לשחרר את התאים.

הוסף תמיסת סרום המכילה DNase I ונתקע מכנית את הרקמה המעוכלת כדי ליצור תרחיף תאים. חלבוני הסרום מעכבים את האנזימים, בעוד ש-DNase I מפרק DNA חוץ-תאי המשתחרר במהלך ליזיס התאים, ומונע היווצרות תאים.

תנו לפסולת הרקמות להתיישב והעבירו את התאים התלויים לצינור חדש.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט, ואז השהה מחדש את התאים בתווך נוירון דופמין, או DPM.

קח מיקרופלייט מצופה במצע תרבית תאים במרכז הבארות, ויוצר מיקרו-איים.

העבירו את התאים לאמצע המיקרו-איי כדי לתרבית אותם בצפיפות גבוהה.

דגירה, מה שמאפשר לתאים להיצמד למיקרו-איים.

מלאו את הבארות ב- DPM ודגרו, מה שמקל על צמיחת נוירוני הדופמין.

כדי להקים תרביות ראשוניות של המוח התיכון העוברי מעוברי עכברים ביום 13.5 של עכברים, אסוף את כל רצפות המוח התיכון שנקטפו לאותו צינור של 1.5 מיליליטר, ושטוף את הדגימות שלוש פעמים, עם 500 מיקרוליטר של סידן ו-HBSS ללא מגנזיום בכל שטיפה. לאחר הכביסה האחרונה, החלף את ה-HBSS ב-0.5% טריפסין לדגירה של 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס.

בתום הדגירה, הוסף 500 מיקרוליטר של DNase I טרי בתמיסת FBS לרקמה המעוכלת חלקית והשתמש בפיפטת זכ