אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:29 דק׳ • July 8th, 2025
קחו תלוש כיסוי המכיל תרבית עצבית בדוגמת 1D.
הנוירונים טעונים בצבע אינדיקטור סידן, אשר זוהר עם קשירת סידן.
העבר את הכיסוי לתא הדמיה במיקרוסקופ פלואורסצנטי המכיל תמיסת הקלטה חוץ-תאית.
הרכיבו מחזיק עם שתי אלקטרודות תיל מקבילות המופרדות במרחק.
הפוך את המחזיק ומקם אותו מעל התרבית העצבית כשהאלקטרודות שקועות בתמיסת ההקלטה.
חבר את האלקטרודות למגבר. החל גל מרובע דו-קוטבי פועם שאינו DC כדי ליצור שדה חשמלי חד-כיווני אחיד על פני הנוירונים מבלי לגרום לפציעה.
השדה החשמלי שנוצר מעורר את הנוירונים, ומפעיל פוטנציאל פעולה.
פוטנציאל הפעולה נע לאורך האקסון, מפעיל את תעלות הסידן עם שער המתח וגורם לזרם סידן לתוך מסוף הנוירונים. יתר על כן, נוירוטרנסמיטורים משתחררים לתוך הסינפסה, מה שמקל על העברה סינפטית.
בעקבות זרם יוני הסידן, יונים אלה נקשרים לצבע התוך-תאי ולפלואורסצה, מה שמעיד על פעילות עצבית בתגובה לגירוי חשמלי.
לפני גירוי חשמלי, הנח את הכיסוי היושב בתא הדמיה. כדי לעורר את התאים עם שדה חשמלי בכיוון קבוע, השתמש בשתי אלקטרודות מקבילות המופרדות על ידי 11 מילימטרים וממוקמות בצדדים מנוגדים של התרבית המצופה על גלישות הכיסוי של 13 מילימטר. לאחר מכן, הרכיבו את תא הדמיית התרבות ומחזיק האלקטרודות התואם כך שאלקטרודות החוט טובלות במדיה החוץ-תאית וממוקמות מילימטר אחד מעל התרבית.
לאחר מכן, חבר את זוג האלקטרודות הבודדות למגבר התפעולי המגביר את האות מהגנרטור. החל פולס יחיד של גל מרובע דו-קוטבי עם מחזור עבודה של 50% ומשרעת של 22 וולט. השתמש בגל דו קוטבי ללא רכיב DC כדי למנוע אלקטרוליזה שעלולה להתרחש באלקטרודות. הפעל את הדופק שנמשך בין 10 מיקרו-שניות לארבע אלפיות השנייה כדי להבטיח גירוי יעיל, אך למנוע פגיעה בתאים.