Name: מדריך פשוט בורג שיטה ללימודי xenograft תוך גולגולתי של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: למדו שיטת בורג מדריך להקמת מודלים של גליומה תוך גולגולתיים בעכברים באמצעות השתלת בורג וזריקת תאי U87MG. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות של סוכני טיפול חדשניים במחקר סרטן המוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות Verlene הנרי הולמס לינדזי לסיוע בפיתוח המודל הזה. עבודה זו מומנה בחלקה על ידי ג&#39;יימס ס &#39;מקדונל קרן (# 220020173).

1. שורות תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> U87MG glioma הם תאים בתרבית רקמה גדול תרבות צלוחיות עם DMEM-F12 בתוספת 5% נסיוב עוברי שור (FBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים נקצרים על ידי שטיפה צלוחיות פעמיים עם בופר פוספט חם (PBS) וכן דוגרים אותם 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות עם 10 מ"ל של PBS המכילה טריפסין 0.25% ו 0.05% EDTA. לאחר התאים הרים, הם ממוקמים לתוך צינור 50 מ"ל המכיל 10 מ"ל של התקשורת בתרבות centrifuged (300 גרם X דקות 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות לשטוף, תאים resuspended בריכוז של 10 x 10 6 / ml בתקשורת תרבות, שאיפשר הרכבה של 50,000 תאים / 5 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים הם שמרו על הקרח עד הזרקה תוך גולגולתי. </li></ol> 2. מדריך בורג נעילה תוך גולגולתי הליך זה יכול להתבצע מספר ימים לפני הזרקה של תאים. הנהלים כל המתואר כאן בוצעו בתנאים סטריליים קפדניים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים (BALB / c נו / נו נקבה, 5-6 שבועות, כ 18g) ממוספרים למטרות זיהוי, שקלו anesthetised עם זריקה (IP) intraperitoneal מתערובת של קטמין (100 מ"ג / ק"ג) ו xylazine (5 מ"ג / ק"ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העור הוא ניגב את פתרון יוד חתך קטן (2-3 מ"מ) נעשית בצד הימני של קו האמצע ו קדמית לקו interaural. זה חושף את התפרים העטרה ועל sagittal הגולגולת. גבחת ממוקמת בצומת של שני התפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בורג המדריך נקודת כניסה ואז מסומן בנקודה 2.5 מ"מ לרוחב ו - 1 מ"מ הקדמי כדי גבחת. נקודה זו ממוקמת ישירות מעל גרעין caudate 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 x 1 מ"מ חור עמוק הוא קדח ביד סטרילי נערך תרגיל טוויסט דרך הגולגולת אל דורא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בורג מדריך מעוקרים כי ירחיבו 1.6 מ"מ מתחת לפני השטח גולגולות לתוך הדורה הוא מוברג אז עם נהג בורג לתוך החור עד מיושר עם הגולגולת (איור 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Stylet סטרילי או דמה הבורג ממוקם מכן לתוך חור הבורג המרכזי של המדריך כדי לסגור את הפתח (איור 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפצע נסגר עם דבק רקמות Vetbond (n-בוטיל cyanoacrylate) ואת העכברים מקבלים זריקה intraperitoneal של reversine (חיות קטנות) (0.1 מ"ל / ק"ג) ו carprofen (5 mg/kg/100 μl) על כאבים. עכברים מותר אז כדי להתאושש על מחצלת התחממות (36 ° C), אשר עשוי להימשך עד 20 דקות. עכברים מנוטרים בתדירות גבוהה נצפתה בתקופה זו התאוששות עד שהם בהכרה מלאה. </li></ol> 3. Engraftment הסלולר תוך גולגולתי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק סטרילי אזוקות המילטון מוכן ידי החלת טבעת פלסטיק קטנה עד קצה המחט ומאפשר רק 2 מ"מ של המחט להאריך מתחת לשקע את הבורג מדריך (איור 1B). נקודת הרכבה הסופי ולכן הוא 3.5 מ"מ מתחת לפני השטח את הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארבעה ימים לאחר הניתוח את הבורג מדריך, עכברים הם שוב הרדים לעיל (2.1) ו חתך קטן הוא עשה מעל הבורג מדריך להסרת stylet. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק אזוקות המילטון הוא מלא אז עם 5 μl של תאים מעורבים גם לקחת אמצעי זהירות כדי לא ליצור או לערוך כל בועות האוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק הוא מאובטח המשאבה זלוף ואת המחט מוחדרת לתוך בורג את המדריך (תרשים 1C). התאים הם חדורים אז בשיעור של 30 μl לשעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המנגנון האוטומטי (איור 1D) אפשרה לנו להזריק עד 10 חיות בכל פעם בקצב זרימה מתמדת. תאים יכולים גם להיות מוזרק באופן ידני באמצעות מזרק אזוקות המילטון או לחילופין המזרק ניתן אזיקים על ידי טיפ 200 פיפטה μl כי כבר גזוז של 3 מ"מ על מנת לאפשר את קצה מחט להרחיב מעבר לדפוק את המדריך של 2 מ"מ. הזריקה חייבת אז להתבצע בקצב קבוע קבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר עירוי תושלם, המזרק הוא הוציא בזהירות את stylet מוחלף לתוך בורג את המדריך. הפצע מודבק סגור העכברים ניתנות תרופות התאוששות כמו קודם (2.7) ואיפשר להתאושש על מחצלת ההתחממות. </li></ol> 4. טיפולית אתגר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארבעה ימים לאחר חיסון התא U87MG, עכברים הם שקלו וחילקו באקראי לתוך מלאה קבוצות הטיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקבוצת הביקורת ניתן התוך צפקי (IP) הזרקה של PBS (100 μl), ואילו בקבוצת הטיפול ניתנת זריקה IP של AMG102 (100 מיקרוגרם ב 100 μl של PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זריקות חוזרות מדי יום שני במשך 14 ימים, סך של 6 זריקות (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזריקה האחרונה, עכברים מנוטרים יומי שקל כל יום שני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר העכברים החלו להציג משמעותי בתפקוד הנוירולוגי (הפרעה באיזון, שיתוק), התייבשות, או ירידה במשקל של יותר מ 10% או גוסס, הם היו euthanised אנושי. אנושי אלה נקודת הסיום ימים נרשמו אז על עקומת Kaplan-Meier ההישרדות. </li></ol> 5. הערכת יעילות טיפולית <li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקומת Kaplan-Meier הישרדות נוצר באמצעות GraphPad פריזמה 4.03 עבור Windows, תוכנה GraphPad, סן דייגו קליפורניה, ארה"ב, <a href="http://www.graphpad.com">www.graphpad.com</a> 3. פטירות או euthanizations סומנו כמטרה נקודות אירועים הבקיע כמו 1. בעלי חיים שנותרו בחיים בתום הניסוי נרשמו אירועים שאינם ציונים כמו 0. </li> 6. נציג התוצאות: חיות בקרת החלה להראות סימנים של הפרעה נוירולוגית וירידה במשקל 23 ימים לאחר חיסון ראשוני של תאים. זו התעכבה באופן משמעותי בקבוצה שטופלה AMG102 עד 35 ימים. ואכן ביום 35, 77% (n = 09/07) של קבוצת הביקורת היו מורדמים. עקומת Kaplan-Meier הישרדות מדגים בבירור את הגידול המשמעותי הישרדות התגובה לטיפול AMG102 (איור 3). ביום 70, 88% של עכברים שליטה היו מורדמים (n = 09/08) לעומת 37% (n = 3 / 8) של קבוצת AMG102 טיפול. ניתוח היסטולוגית של המוח אישר כי כל בעלי חיים 9 בקבוצת הביקורת פיתחו גידולים לעומת 3 בלבד של 8 AMG102 העכברים שטופלו (איור 4). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> איור 1: תמונה (A) מראה בורג מדריך תוך גולגולתי ממוקם באזור ממוקם ישירות מעל גרעין caudate. אזוקות המילטון מזרק (טעון מראש עם תאים) ממוקמת ואז בתוך בורג מדריך כך 2 מ"מ של מחט חורג מדריך לבין התאים מוזרקים 3.5 מ"מ בתוך גרעין caudate. המזרק הוסר מאוחר יותר הוחלף על ידי stylet (B). מכשיר העירוי האוטומטי (ג) ניתן להזריק עד 10 בעלי חיים בכל פעם. המוצג כאן חמש זריקות סימולטני (ד '). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2: סכמטי של פרוטוקול המחקר. הוזרקו תאים ביום 0 עם הטיפול החל ביום 4. חיות בקרת קיבלה זריקה של PBS (100 μl) IP ואילו קבוצת הטיפול קיבלה זריקה של AMG102 (100 μg/100 μl) IP. זריקות אלו ניתנו כל היום השני במשך 10 ימים. סך של 6 זריקות ניתנו. בעלי חיים היו במעקב במשך 70 ימים ואז סימנים של הפרעות נוירולוגיות פיזית. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3: Kaplan-Meier עקומת ההישרדות השוואה מלאה AMG102 העכברים שטופלו. הישרדות משמעותי הושג לאחר טיפול עם AMG102 (p = 0.005). <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 4"> איור 4: Microphotographs סעיפים המוח העטרה הוכחת התפתחות הגידול של חיות מלאה (א) ולא התפתחות המוח הגידול של בעלי חיים שטופלו AMG102 (B). בר סולם הוא 1 מ"מ.

<ol><li>Lal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+implantable+guide-screw+system+for+brain+tumor+studies+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">An implantable guide-screw system for brain tumor studies in small animals.</a> J Neurosurg. 92, 326-333 (2000).</li>
<li>Jun, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMG+102%2C+a+fully+human+anti-hepatocyte+growth+factor%2Fscatter+factor+neutralizing+antibody%2C+enhances+the+efficacy+of+temozolomide+or+docetaxel+in+U-87+MG+cells+and+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">AMG 102, a fully human anti-hepatocyte growth factor/scatter factor neutralizing antibody, enhances the efficacy of temozolomide or docetaxel in U-87 MG cells and xenografts.</a> Clin Cancer Res. 13, 6735-6742 (2007).</li>
<li>Pillay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plasticity+of+oncogene+addiction%3A+implications+for+targeted+therapies+directed+to+receptor+tyrosine+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The plasticity of oncogene addiction: implications for targeted therapies directed to receptor tyrosine kinases.</a> Neoplasia. 11, 448-458 (2009).</li>
<li>Buchanan, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosensitization+of+glioma+cells+by+modulation+of+Met+signaling+with+the+hepatocyte+growth+factor+neutralizing+antibody.+AMG102%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Radiosensitization of glioma cells by modulation of Met signaling with the hepatocyte growth factor neutralizing antibody. AMG102.</a> J Cell Mol Med. 15, 1999-2006 (2011).</li>
<li>Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+II+study+evaluating+the+efficacy+and+safety+of+AMG+102+%28rilotumumab%29+in+patients+with+recurrent+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">A phase II study evaluating the efficacy and safety of AMG 102 (rilotumumab) in patients with recurrent glioblastoma.</a> Neuro Oncol. 13, 437-446 (2011).</li>
<li>Caretti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+Tumor+Growth+and+Post-Irradiation+Recurrence+in+a+Diffuse+Intrinsic+Pontine+Glioma+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monitoring of Tumor Growth and Post-Irradiation Recurrence in a Diffuse Intrinsic Pontine Glioma Mouse Model.</a> Brain Pathol. 4, 441-451 (2011).</li>
<li>Jallo, G. I., Volkov, A., Wong, C., Carson, B. S., Penno, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+brainstem+tumor+model%3A+functional+and+histopathological+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Childs+Nerv.+Syst%22%5BJournal%5D)">A novel brainstem tumor model: functional and histopathological characterization.</a> Childs Nerv. Syst. 22, 1519-1525 (2006).</li>
<li>Johns, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+epidermal+growth+factor+receptor-specific+antibodies+against+gliomaxenografts+is+influenced+by+receptor+levels%2C+activation+status%2C+and+heterodimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The efficacy of epidermal growth factor receptor-specific antibodies against gliomaxenografts is influenced by receptor levels, activation status, and heterodimerization.</a> Clin Cancer Res. 13, 1911-1925 (2007).</li>
<li>Scott, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I+clinical+trial+with+monoclonal+antibody+ch806+targeting+transitional+state+and+mutant+epidermal+growth+factor+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">A phase I clinical trial with monoclonal antibody ch806 targeting transitional state and mutant epidermal growth factor receptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 4071-4076 (2007).</li>
<li>Niyazi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+options+for+recurrent+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Radiother.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic options for recurrent malignant glioma.</a> Radiother. Oncol. 98, 1-14 (2011).</li>
</ol>

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מחקר של חברת Amgen

המדריך תוך גולגולתי בורג השיטה המוצגת כאן מאפשרת הקמת לשחזור מהיר של xenografts תוך גולגולתי וכן בידי טכנאי מיומן בעל חיים, הליך זה מתבצע בקלות רבה ללא צורך בהתקן stereotactic. השיטה שלנו משלבת את השימוש של בורג מדריך, כדי לאתר במדויק את האזור של המוח המתאים ביותר בהתפתחות הגידול vivo, ואת משאבת עירוי אוטומטי המאפשר חיסון בו זמנית של עד 10 בעלי חיים בכל פעם. בורג מדריך הליך הגדלת לוקח פחות מ 5 דקות לבצע. עירוי של תאים אוטומטיות ב 30 μl / שעה לוקח רק 10 דקות עבור נפח של 5 μl. זה מבטיח מינון מדויק בקצב קבוע מפחיתה את הסיכון של גירוש תא לאזור נוסף גולגולתי עקב לחץ תוך גולגולתי מוגבר. יש לנו גם ביצע הליך זה עם 10 כרכים μl ולא נצפו כל צמיחה נוספת גולגולתי גידול עקב ריפלוקס הסלולר. כמו משאבת אינפוזיה אוטומטיות מאפשר גם מספר חיות לקבל חיסונים בו זמנית אנו יכולים להזריק עד 60 חיות לשעה לעומת הליך stereotactic אשר מוגבל כ 15 חיות לשעה. השלב הקריטי ביותר בהליך זה הוא המיקום של בורג מדריך בגולגולת כמו מעמדה קובעת את המיקום הסופי של עיקר הגידול. אם בורג מדריך מרכזי מדי, התאים יהיה מוזרק באזור בין שתי האונות במוח ואילו אם מדריך מושם על הרבה קדימה, התאים לא יהיה שהוזרקו למוח בכלל. לכן חיוני כדי להיות מדויקת ככל האפשר באיתור 2.5 מדריך מ&quot;מ לרוחב ו - 1 מ&quot;מ הקדמי של גבחת 1. במחקר זה השתמשנו בורג מדריך פלדה, למרות ברגים מדריך פלסטיק זמינים גם עבור אלו שדורשים מחקרים הדמיה מוחית כגון MRI או PET 6. אפילו אם משאבת אינפוזיה אוטומטיות היא עלות אוסרני עבור קבוצות מסוימות, התאים עדיין יכול להיות מוזרק ידנית במהירות רבה יותר מאשר גישות stereotactic. באופן כללי, שיטה זו מהירה, מדויקת לשעתקו יכול לשמש כדי ללמוד, glioma מדולובלסטומה ו גזע גידולים במוח 7. פרוצדורה זו שבוצעה על מעל 500 עכברים בין שתי מעבדות עם מקרי מוות עקב תגובות בלתי צפויות הרדמה (&lt;1%). עכברים שהיו מוברג עם בורג את המדריך חדורים לאחר מכן עם תאים לא למות או לסבול סיבוכים נוירולוגיים כתוצאה של ההליך. בעלי חיים שרדו בעבר 100 ימים ללא סיבוכים כלשהם. למרות שאנו מעדיפים להשתמש בעכבר שיער, עכבר חיסונית פגיעה בשיער כמו SCID יהיה בדיוק כמו המתאימה בתנאי שיער הגולגולת שהוסר לפני הניתוח כדי לשמור על האתר נקי כדי למנוע שיער להפריע בורג מדריך. ישנם כיום מספר הרפוי הרומן שמפתחת לטיפול glioma 8-10. לאחרונה הראינו כי תת עורית U87MG xenografts glioma יכול להיות מעוכבים על ידי טיפול AMG102 3; נוגדן אנושי להפנות HGF כעת בתהליך הערכה קלינית glioma 5. השתמשנו בשיטת לתאר כאן כדי להקים גידולים תוך גולגולתי U87MG במוחם של עכברים בעירום. המחקר שלנו מראה בבירור את התועלת של השיטה ומדגים כי AMG102 משמעותית מעכב את צמיחת xenografts U87MG orthotopic. אנו נמשיך להשתמש במודל זה כדי לקבוע מה ותרופות אחרות ניתן להשתמש בשילוב עם AMG102 להשיג עיכוב יעיל יותר של הגידול.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 12634010 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> Bovogen </td><td> SFBS </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין </td><td> Invitrogen </td><td> 15050065 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> סיגמא </td><td> E6758 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / c נו / נו עכברים </td><td> ARC פרת&#39; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> בורג מחזיק </td><td> פלסטיקה אחת </td><td> SD-1 </td><td></td></tr><tr><td> מחזיק מקדחה </td><td> פלסטיקה אחת </td><td> DH-1 </td><td></td></tr><tr><td> Drill Bit </td><td> פלסטיקה אחת </td><td> D # 60 </td><td></td></tr><tr><td> בורג מדריך (מתכת) </td><td> פלסטיקה אחת </td><td> C212SG </td><td></td></tr><tr><td> בורג Dummy (חרט) </td><td> פלסטיקה אחת </td><td> C212SD </td><td></td></tr><tr><td> המילטון מזרק (10 μl מחט ביצרו 26g) </td><td> גרייס חטיבת Discovery Science </td><td> 80075 </td><td></td></tr><tr><td> PHD 22/2000 משאבת עירוי </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 70-2003 </td><td> אופציונלי </td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> 3M </td><td> 1469SB </td><td></td></tr><tr><td> Thermo כרית </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 340390 </td><td></td></tr></tbody></table>

מדריך פשוט בורג שיטה ללימודי xenograft תוך גולגולתי של עכברים

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

השתלת תאים סרטניים של אדם לתוך המוח של עכברים immunosuppressed היא שיטה שהוקם לחקר סרטן המוח כולל גליובלסטומה (גליומה) ו מדולובלסטומה. הגישה stereotactic בשימוש נרחב רק מאפשר הזרקה של חיה אחת בכל פעם, הוא עבודה אינטנסיבית ודורשת ציוד מיוחד מאוד. בורג המדריך השיטה, שפותחה לראשונה על ידי לאל et al., 1 פותחה כדי למנוע הליכים stereotactic מסורבלת. כעת אנו מתארים בורג שונה מדריך גישה מהירה ובטוחה באופן יוצא דופן, הן אלו שיקולים אתיים קריטי. יש לציין, נוהל שלנו עכשיו משלבת משאבת עירוי המאפשר עד 10 חיות להיות מוזרק בד בבד עם תאים סרטניים. כדי להדגים את התועלת של הליך זה, הקמנו האדם תאים glioma U87MG כמו xenografts תוך גולגולתי בעכברים אשר טופלו אז עם AMG102; נוגדן אנושי מלא להפנות HGF / גורם פיזור כעת בתהליך 2-5 הערכה קלינית. הזרקת מערכתית של AMG102 ממושך משמעותית את ההישרדות של כל העכברים עם xenografts U87MG תוך גולגולתי וגרם למספר מרפא להשלים. מחקר זה מוכיח כי שיטת בורג מדריך היא גישה זולה, לשחזור במיוחד להקמת xenografts תוך גולגולתי. יתר על כן, הוא מספק מודל פיזיולוגיים רלוונטיים אימות אסטרטגיות טיפולית חדשנית לטיפול בסרטן המוח.

כדי להעריך פרדיגמות טיפולית חדשנית לטיפול glioma, מודלים פיזיולוגיים חיוניים הרלוונטיים. אנו מנצלים הליך מושתלת בורג מדריך להקמת מודלים xenograft תוך גולגולתי כי הוא מהיר יותר ובטוח יותר מאשר גישות stereotactic.

השתלה של תאי גידול אנושיים לתוך מוחם של עכברים עם דיכוי מערכת חיסונית היא שיטה מבוססת לחקר סרטני מוח, כולל גליובלסטומה...

מטרת פרוצדורה זו היא ליצור השתלה תוך-גולגולית של סרטן מוח כדי להעריך את יעילותו של חומר טיפולי חדש. פעולה זו מבוצעת תחילה על ידי הברגת בורג מנחה למקומו בגולגולת, ולאחר מכן על ידי הזרקת תאים אל המוח דרך הבורג המנחה. השלב הבא הוא תחילת טיפול ניסויי המכוון לתאי הגידול שהתבססו במוח.לאחר מכן, בעלי החיים נמצאים במעקב לבחינת תגובות טיפוליות באמצעות הערכת תוצאות הישרדות. בסופו של דבר, חומרים טיפוליים עשויים להשפיע על צמיחת הגידול ועל ההישרדות בקבוצות הטיפול בהשוואה לקבוצות הביקורת. ניתן לבצע הליך זה מספר ימים לפני הזרקת התאים.התחילו בשקילת העכברים ובהרדמתם באמצעות תערובת של ketamine ו-xylazine בהזרקה תוך-peritoneal. ברגע שהעכברים אינם מגיבים לצביטה בבהו, הכינו את קרקפתם באמצעות יוד, ולאחר מכן בצעו חתך של שני עד שלושה מילימטרים לאורך הצד הימני של קו האמצע ומקדימה לקו ה-interoral. חתך זה חושף את התפרים ה-coronal וה-sagittal של הגולגולת.ה-bgma ממוקם בצומת של שני התפרים הללו. סמן את נקודת הכניסה של בורג ההנחיה 0.2 0.5 מילימטרים לטרלית ל-bgma ומילימטר אחד אנטריורית ל-bgma. נקודה זו ממוקמת ישירות מעל גרעין ה-CAU eight.כעת, בנקודת הסימון, השתמשו במקדח ידני וקדחו חור בעומק של one millimeter לתוך בורג הדורה. הבריגו בורג מוליך סטרילי לתוך החור עד שיהיה בקו אחד עם פני הגולגולת. הקפידו להפסיק את קידום הבורג ברגע שהוא נוגע במשטח הגולגולת.אם הבורג יוצר שקע בגולגולת, הגולגולת עלולה להיסדק. בורג המדריך תומך במחט במידה 26 ואורך 1.6 millimeter. כדי לסגור את פתח בורג המדריך, הכניסו אטם או בורג דמי למדריך.הברג כעת. סגור את הפצע על ידי החזקת העור הגזור יחד באמצעות פינצטה והדבקת העור בעזרת טיפה של vet bond ומריחתה לאורך קצה העור הגזור; החזק את העור למשך מספר שניות עד שיידבק. לבסוף, תן משככי כאבים מסוג reversing ו-carprofen בהזרקה אינטריפריתונית, ואפשר לעכברים להתאושש על משטח חימום.ההתאוששות עשויה להימשך עד 20 דקות. עבור ניסוי הדוגמה, תאי גליומה מסוג U 87 גודלו בבקבוקי תרבית רקמה גדולים עם D-M-E-M-F 12 מועשר ב-5% fetal bovine serum. סעיף זה מתאר כיצד להכין תאים אלו להזרקה ביום ההזרקה.קצרו את התאים על ידי שטיפת הבקבוק פעמיים ב-PBS חם. לאחר מכן, הוסיפו 10 milliliters של PBS המכיל 0.25%trypsin ו-0.05%EDTA והדגירו את התאים בטמפרטורה של 37 degrees Celsius למשך חמש דקות או עד להסרתם מהמשטח. לאחר מכן, אספו את התאים לתוך 10 milliliters של מצע גידול.העבירו את התאים למספר תאים (hemocytometer), וספרו אותם תחת מיקרוסקופ בהתאם להנחיות. צנטריפוגו את המבחנה הקונית בנפח 50 מיליליטר, המכילה 10 מיליליטר של מצע גידול ותאים, במהירות של 300 ×g למשך ארבע דקות. לאחר הסבוב, השהו מחדש את התאים במצע גידול בריכוז של 10 מיליון תאים למיליליטר. בריכוז זה, כל 5 µL של תרחיף תאים יכילו 50,000 תאים, כמות זו משמשת לכל הזרקה תוך-גולגולתית.יש לשמור את תרחיף התאים להזרקה על קרח. נדרש כאן נפח בודד של תאים בתרחיף, שכן נפחים של 5 µL מתאדים בקלות ועלולים להרוס את התאים. התחילו בהכנת מזרק Hamilton עם שרוול (cuffed).חבּרו טבעת פלסטיק קטנה לקצה המחט כך שרק שני מילימטרים מהמחט יבלטו מתחת לפתח בורג ההנחיה. פעולה זו מבטיחה כי נקודת ההזרקה תהיה בעומק של 3.5 מילימטרים. הרדימו עכבר שעבר הרחבה מוקדמת ובצעו חתך קטן מעל בורג ההנחיה והסירו את המנדרין.לאחר מכן, מלאו את המזרק בחמישה µL של התאים שערבבו היטב ונשמרו על קרח. היזהרו להימנע מבועות אוויר במזרק, שכן הן עלולות לגרום לאמבולה או לדליפת תאים חזרה מאתר ההזרקה. חבקו את המזרק למשאבת הפרפוזיה ולאחר מכן הכניסו את המחט למדריך.התחילו את עירוי התאים בקצב של 30 µL לשעה. באמצעות המערכת האוטומטית, ניתן להזריק לעד 10 בעלי חיים בו-זמנית בקצב זרימה קבוע. הזרקה ידנית היא אפשרית גם היא, בתנאי שהיא מבוצעת בקצב קבוע ויציב.כאשר העירוי מסתיים, הוצא את המזרק בזהירות, ולאחר מכן החזר את המנדרין (stylet) אל בורג ההנחיה כפי שנעשה קודם לכן. סגור את הפצע באמצעות דבק וטרינרי (vet bond), ספק משככי כאבים ואפשר לעכברים להתאושש. ההתאוששות עשויה להימשך עד 20 דקות.ארבעה ימים לאחר ההזרקה של תאי U 87 mg, נשקלו העכברים וחולקו באופן אקראי לקבוצת ביקורת ולקבוצת טיפול. לקבוצת הביקורת הוזרקו 100 µL של PBS באופן תוך-פריטוני (intraperitoneal) ולקבוצת הטיפול הוזרקו 100 µg ל-100 µL של MG 1 0 2 באופן תוך-פריטוני. ההזרקה חזרה על עצמה מדי יומיים במשך 14 ימים, לסך הכל שש הזרקות.לאחר ההזרקה האחרונה, העכברים נוטרו מדי יום ונשקלו מדי יומיים. נקודת הסיום של בעל החיים הוגדרה כהופעת תקלות נוירולוגיות משמעותיות כגון בעיות בשיווי המשקל או שיתוק, התייבשות, ירידה במשקל של מעל 10% או מוות. ימי נקודת הסיום תועדו כעקומות הישרדות של Kaplan-Meier.מקרי מוות, או קריאות שסומנו כנקודות סיום, נרשמו כאירועים וקיבלו ניקוד של אחד. בעלי חיים שנותרו בחיים בסוף הניסוי נרשמו כאירועים שלא התרחשו וקיבלו ניקוד של אפס כביקורת. בעלי החיים החלו להראות סימנים של הפרעה נוירולוגית וירידה במשקל 23 ימים לאחר ההזרקה הראשונית של התאים.דבר זה עוכב באופן משמעותי בקבוצה שטופלה ב-A MG 1 0 2. עד היום ה-35, שבעה מתשעת חיות הבקרה הומתו. עד היום ה-78, תשע חיות בקרה הומתו, לעומת שלוש בלבד מתוך 8:00 AM g 1 0 2 מהחיות שטופלו.ניתוח היסטולוגי של המוחות אישש כי בכל תשעת בעלי החיים בקבוצת הביקורת התפתחו גידולים, בהשוואה לשלושה בלבד מבין העכברים שטופלו ב-g 1 0 2 בשעה 8:00 AM.

a-simple-guide-screw-method-for-intracranial-xenograft-studies-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בלוציפראז, שונה אדם xenografts גידול במוח ניתן לקבוע intracranially בעכברים athymic, עם ניטור הבאים של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור. בשילוב עם ניתוח הישרדות, ניטור פליטת אור הוא כלי מחקר הכרחי לצורך בדיקות טרום קליניים של טיפולים נשקלת לטיפול בגידולים במוח.

הקמת גידול תוך גולגולתי xenografts המוח עם ניתוח בדיעבד של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור

אנו מתארים שיטה משולבת להשתלה המדויקת, stereotactic של תאי multiforme glioblastoma אדם לתוך המוח של עכברים בעירום וסידורי...

השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em&gt; בחי</em&gt; הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma

סרטון זה מציג הליך להשתלת צינורית תוך גולגולתית במודל עכבר גידול במוח, כדי להקל על מתן סוכן אימונותרפי. אספקת תאי T של קולטן אנטיגן כימרי ספציפי לגליפיקן-2 במיקרו-סביבה של הגידול מעוררת הפעלת תאי T, וכתוצאה מכך ליזה של הגידול ורגרסיה של הגידול.

השתלת צינורית תוך גולגולתית בעכבר כדי לספק חומרים טיפוליים לגידולי מוח

מקור: Liou, C. et al. אספקה תוך מוחית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים בעכברים הנעים בחופשיות. J. Vis. Exp. (2022).סרטון זה מדגים את ההזרקה התוך-גולגולתית של חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA) בעכבר הנע בחופשיות כדי לחקור את השפעותיהן על התנהגות בתיווך המוח. צינורית מזרק מוחדרת לתוך צינורית מנחה המושתלת במוח העכבר. לאחר ההחלמה, העכבר מתאקלם בכלוב חדש. לאחר מכן ניתנים SCFAs, והתנהגות תנועתית נרשמת.

הזרקה תוך גולגולתית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים במודל עכבר

גליומות ממאירות מהוות קבוצה הטרוגנית של ניאופלסמות גליה מסתננות מאוד עם תכונות קליניות ומולקולריות מובהקות. קסנוגרפטים אורתוטופיים ראשוניים מסכמים מחדש את התכונות ההיסטופתולוגיות והמולקולריות של תת-סוגים ממאירים של גליומה במודלים פרה-קוליניים של בעלי חיים.

גליומה אורתוטופית ראשונית קסנוגרפטים recapitulate צמיחה הסתננות איזוציטראט דהידרוגנאז אני מוטציה

המוח הוא אתר ייחודי עם איכויות שאינם מיוצגות היטב על ידי במבחנה או ניתוחים מחוץ לרחם. מודלים עכבר orthotopic עם מאפייני מיקום וצמיחה לשחזור ניתן ליצור באופן אמין עם זריקות תוך גולגולתי באמצעות מכשיר קיבוע stereotaxic ומשאבת מזרק בלחץ נמוך.

יצירה אנטומית מדויק והשחזור תוך גולגולת xenografts של גידולים במוח אדם

תאי גזע הם מבטיחים לספקים טיפוליים לטיפול בגידולים במוח בשל הטרופיזם של הגידול הפנימי שלהם. לא פולשני אינטראנסלי תא גזע המסירה עוקף את מחסום דם מוח ומראה פוטנציאל חזק לתרגום קליני. מאמר זה מסכם את העקרונות הבסיסיים של אספקת תאי גזע אינראנסאלי במודל עכבר של גליומה.

אספקה ​​אינטראנסלית של תאים בתאי גזע כדי גליובלסטומה במודל עכבר

למטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים יש השפעות רבות פנים המובילות להתנהגות מורכבת אצל בעלי חיים. אנו שואפים לספק שיטה שלב אחר שלב כדי להגדיר את ההשפעות של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים במוח באמצעות העברה תוך-חדרית באמצעות צינורית מנחה.

העברה תוך-מוחית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים בעכברים הנעים בחופשיות

גידולים במערכת העצבים המרכזית (CNS) הם הגורם המוביל למוות הקשור לסרטן בקרב ילדים, וטיפולים מבוססי מערכת החיסון נבדקים יותר ויותר עבור חולים בניסויים קליניים. פרוטוקול זה מתאר שיטות להשתלת צינורית לוקו-אזורית בעכברים לצורך הערכה פרה-קלינית של עירויים אימונותרפיים המכוונים לגידולים במערכת העצבים המרכזית.

השתלת צינורית תוך גולגולתית עבור קולטן אנטיגן כימרי טורי (CAR) עירוי תאי T בעכברים

פיתוח מודלים אורתוטופיים של גידולי מוח בילדים דורש דיוק קפדני, תוך שימוש במכשיר סטריאוטקסי להשתלת תאים סרטניים בצורה מדויקת. המתודולוגיה המוצגת כאן מתארת את השלבים הכרוכים בהכנת תאי גידול במוח, ביצוע זריקות תוך גולגולתיות ויישום מערכת ניטור לאחר ניתוח להערכת השתלת גידול מוח.

הקמת מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה לגידולי מוח באמצעות מכשיר סטריאוטקסי

מטרת פרוטוקול זה היא לספק לחוקרים טכניקה שניתנת לשחזור גבוה להשתלות תוך-גולגולתיות.

השתלה תוך-גולגולתית סטריאוטקטית של גליובלסטומה קווי תאי זנוגרפט שמקורם בחולה בעכברים

למדו שיטת בורג מדריך להקמת מודלים של גליומה תוך גולגולתיים בעכברים באמצעות השתלת בורג וזריקת תאי U87MG. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות של סוכני טיפול חדשניים במחקר סרטן המוח.

מדריך פשוט בורג שיטה ללימודי xenograft תוך גולגולתי של עכברים

גלה סרטונים נוספים