הערכת טיפול בפלזמה בלחץ אטמוספרי בתאי נוירובלסטומה חסרי גלוקוז

קח תרבית של תאי נוירובלסטומה בצלחת מרובת בארות עם מדיה.

החלף את המדיה בבארות במדיה עצבית נטולת גלוקוז כדי לגרום לעקה חמצונית.

מקם את הצלחת מתחת לפיית סילון הפלזמה במרחק אופטימלי לחשיפה אחידה.

טפל בבארות נבחרות במינון נמוך של סילון פלזמה בלחץ אטמוספרי מבוסס הליום (APPJ), המייצר רמות מבוקרות של מיני חמצן וחנקן תגובתיים.

דגירה על התאים כדי לאפשר הפעלה של מסלולי תגובת עקה וויסות מוגבר של אנזימים נוגדי חמצון בבארות שטופלו ב-APPJ.

תאים בבארות לא מטופלות תחת חסך גלוקוז עוברים נזק תאי חמצוני נוסף.

הוסף מגיב בדיקת כדאיות תאים ודגירה. תאים ברי קיימא מפחיתים את המגיב למוצר צבעוני.

מדוד את עוצמת הצבע באמצעות קורא מיקרו-פלטות.

בארות שטופלו ב-APPJ מציגות עוצמת צבע מוגברת עקב כדאיות תאים גבוהה יותר, בעוד שבארות לא מטופלות מראות עוצמה נמוכה יותר, מה שמאשר את ההשפעה הנוירו-פרוטקטיבית של APPJ תחת חסך גלוקוז.

התאם את המרחק בין הזרבובית של צינור הקוורץ לפלטפורמה שבה תוצב צלחת 96 הבאר לשלושה סנטימטרים כדי להבטיח שהקרן תוכל לגעת במשטח מדיום התרבות. לפני הטיפול, שנה את מדיום התרבית בכל באר ל-RPMI 1640 ללא מדיום גלוקוז. כעת, הנח את הצלחת מתחת לזרבובית סילון הפלזמה בלחץ האטמוספרי. לאחר מכן טפל בתאים בבארות נפרדות למשך 0, 1, 2, 4, 8 ו-12 שניות.

לאחר הטיפול יש לדגור את התאים למשך שעה בחממת תאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, לאחר הדגירה ב-10 מיקרוליטר של תמיסת ערכת ספירת תאים 8 לכל באר. לאחר מכן, דגרו על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך ארבע שעות. לבסוף, מדוד את הספיגה ב-450 ננומטר עם קורא מיקרו-פלטות.