Name: בידוד ותרבות של תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: למדו פרוטוקול מפורט לבידוד ותרבית תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים באמצעות מיון זרימה ומיקרוסקופיה. שיטה זו מאפשרת מחקר מתקדם ברפואה רגנרטיבית ומדעי העצב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מענק NIH R01AR054593 וR01AR054593-S1 לשו.

1. הכנת צלחות תרבית רקמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעייל אחד גם עם מספיק פולי-D-ליזין (PDL) כדי לכסות את תחתית הבאר. לאפשר את הצלחות לייבוש במכסת המנוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהבארות יבשות, לשטוף עם מים סטריליים, ולשאוב. לאפשר את הצלחות לייבוש במכסת המנוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר, מעייל יבש עם פיברונקטין (שהומס במי biowhittaker לילה על 37 מעלות צלזיוס בריכוז של 1 מ"ג ב6 מ"ל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף בינוני NCSC [95 מ"ל DMEM/F12, 1 המ"ל פן / דלקת (P / S), 1 המ"ל N2, 2 B27 מ"ל, mercaptoethanol μl 100 (2ME; 50 מניות מ"מ), bFGF (20 בינוני ng / ml), IGF -1 (20 ng / ml של מדיום) וEGF (20 ng / ml של מדיום)] לפני פיברונקטין היבש בצלחות, </li></ol> 2. לחלץ תאי זקיק שיער מקרקפת אנושית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שתתחיל בהליך של NCSCs המבודד, צריך להכין את מדיות ומגיב בהתאמה (ראה טבלה 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור רענן מבוגר אנושי קרקפת מנהלים מתיחים פנים או פהרקמת קרקפת טל היא נאספה, נשטפה עם PBS המכיל פניצילין-סטרפטומיצין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אז העור מועבר לתוך צינורות 50 מ"ל וטופח DMEM עם Dispase (10 מ"ג / מ"ל) הלילה ב 4 ° C. ° C דגירה של 2-4 שעות ב 37 היא גם יעילה. חתיכות עור צריכות להיות רוחב מרבי של 1 סנטימטר כדי לאפשר לאנזים לחדור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את העור לתוך צלחת פטרי לעקר; למשוך את כל שיער מעור על ידי אחיזת השערה הקרובה לפני שטח העור ומושך בחוזקה וחלקה. זקיקי השיער להראות מורפולוגיה של שתי anagen (איור 1 א) או טלוגן (1B איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת ברי הזקיק הבודד ב0.05% טריפסין-EDTA (Invitrogen) במשך 15-20 דקות בטמפרטורת חדר עם הרעד מהעת לעת, להוסיף 4 המ"ל DMEM עם 10% FBS לעצור תגובה. אפיתל הזקיקים הוא trypsinized ומסונן דרך 40 מיקרומטר סינון כדי לקבל השעית תא בודד המכילה תאים של גודל וצורה שונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטוותב 200 XG למשך 5 דקות, להשליך supernatant זהירות, מחדש להשעות ב1 המ"ל PBS המכיל 2% סרום (FBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, זקיקי שיער מרוט יכולים להיות ממוקמים בתרבות ללא עיכול טריפסין לגדול תחומי שיער באתר. </li></ol> 3. בידוד של NCSCs זקיק השיער באמצעות מיון תא זרימת Cytometric <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השעית זקיק שיער תא בודד התקבלה על ידי עיכול טריפסין ומתויגת עם נוגדנים נגד CD271 (APC מצומדות) / HNK1 (FITC מצומדות) או CD271 / alpha4 integrin (PE-מצומדות) עבור 40 דקות על קרח בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 200 XG בטמפרטורת חדר ולשאוב supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי resuspend ב PBS המכיל 2% סרום (FBS), ולפני המיון, PI מתווסף לשער את התאים המתים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע מיון תא על ידי cytometry זרימה (FACS). איסוף CD271 +, HNK1 + תאים חיוביים כפולים או CD271 +, alpha4 integrin + תאים חיוביים כפולים (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיוןing, CD271 +, HNK1 + תאים חיוביים כפולים או CD271 +, alpha4 integrin + תאים חיוביים כפולים מתורבתים בצלחות התקשרות נמוכות במיוחד במדיום NCSC </li></ol> 4. תרבות של NCSCs הראשוני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות תאי זקיקי המנותקים או FACS מיון תאים בצלחות התקשרות נמוכות במיוחד במדיום NCSC, לשנות בינוני כל יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו תרבית תאים בכל יום תחת מיקרוסקופ. NCSCs יתחיל ליצור אגרגטים קטנים צפים לאחר מספר ימים ותחומים בנויים היטב ב2-5 שבועות בתרבות, בהתאם לגילם של התורמים (איור 3 א). התולדה תופיע בכמה ימים באזור הבליטה וספירות בנויות היטב בהאתר בכמה שבועות (איור 3 ב '), כאשר זקיקי שיער כולו הם בתרבית במדיום NCSC. </li></ol> 5. הרחבת NCSCs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף תאים עם PBS פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסיפו מחומם מראש (עד 37 מעלות צלזיוס, ביקורתי) accutase ולדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 5-10דקות עם הרעד מהעת לעת כדי להפוך את תחומי תאי גזע עצביים בטוחים ניתקו לתוך תא בודד (לNCSC המצורף תרבותי, תאי אינקובטורים עם accutase על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות כדי להפוך לתאי גזע זקיק שיער בטוחים מנותקים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף וסרכזת תאים פעמים למשך 5 דקות ב 200 XG בטמפרטורת החדר בDMEM/F12 בינוני כדי להסיר כל פתרון accutase נותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re-להשעות תאים עם מדיום התרבות NCSC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתרבות הצפה, לשים את התאים בצלחות התקשרות נמוכות במיוחד. לתרבות מצורפת, לשים את התאים בתרבית רקמת pretreated צלחות. </li></ol> 6. נציג תוצאות מדיום תרבות NCSC הוא מספיק כדי לשמור hNCSCs במדינה מובחנת ללא צורך בתאים מזינים. הקרטינוציטים לא יתרבו ומתו בהדרגה במדיום. תאים קטנים ועגולים מסוימים להתרבות וליצור אגרגטים קטנים בהשעיה לאחר 3 עד 5 ימים. אגרגטים צפים אלה הגדילו לאטגודל n, מבנים שנוצרו בשלושת ממדי מרחב דמוי, שאנו נקראים תחומי שיער (איור 3 א). אם בתרבית בצלחות מצופות, את NCSCs יהיה לצרף אל פני השטח ולא בצורה כל תחומים. את NCSCs המצורף לגדול מהר יותר מאשר בהשעיה. תאי גזע יוצרי כדור או מצורפים להביע סמני NCSCs. כאשר זקיקי שיער כל תרבויות, ספירות נוצרות באזור המקביל לאזור הבליטה (איור 3 ב '). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> איור 1. קטף אנגן () וטלוגן (B) זקיקי שיער. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. תמונות מייצגות של ניתוח FACS של NCSCs פנל שמאלי.: תאים מגודרות באמצעות 4 נוגדני integrin אנטי CD271 ואנטי alphe. לוח ימני: תאים מגודרים באמצעות נוגדנים אנטי CD271 ואנטי HNK1. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3194/3194fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3. מורפולוגיה של תחומי שיער () מורפולוגיה של תחומים צפים שיער, פנל שמאלי:. צריכת חשמל נמוכה, פנל ימני:. הספק גבוה (B) מורפולוגיה של תחום שיער באתר באזור הבליטה, הפנל שמאלי: תחום שיער בבליטת telogen, לוח ימני: תחום שיער באזור הבליטה של ​​זקיק שיער anagen.

<ol><li>Cotsarelis, G., Cheng, S. Z., Dong, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+slow-cycling+limbal+epithelial+basal+cells+that+can+be+preferentially+stimulated+to+proliferate%3A+implications+on+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Existence of slow-cycling limbal epithelial basal cells that can be preferentially stimulated to proliferate: implications on epithelial stem cells.</a> Cell. 57, 201-209 (1989).</li>
<li>Cotsarelis, G., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-retaining+cells+reside+in+the+bulge+area+of+pilosebaceous+unit%3A+implications+for+follicular+stem+cells%2C+hair+cycle%2C+and+skin+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Label-retaining cells reside in the bulge area of pilosebaceous unit: implications for follicular stem cells, hair cycle, and skin carcinogenesis.</a> Cell. 61, 1329-1337 (1990).</li>
<li>Tanimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+follicle+stem+cells+provide+a+functional+niche+for+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Hair follicle stem cells provide a functional niche for melanocyte stem cells.</a> Cell Stem Cell. 8, 177-187 (2011).</li>
<li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+novel+population+of+multipotent+adult+stem+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a novel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles.</a> Am. J. Pathol. 168, 1879-1888 (2006).</li>
<li>Yu, H., Kumar, S. M., Kossenkov, A. V., Showe, L., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+with+neural+crest+characteristics+derived+from+the+bulge+region+of+cultured+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Stem cells with neural crest characteristics derived from the bulge region of cultured human hair follicles.</a> J. Invest. Dermatol. 130, 1227-1236 (2010).</li>
<li>Wong, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest-derived+cells+with+stem+cell+features+can+be+traced+back+to+multiple+lineages+in+the+adult+skin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neural crest-derived cells with stem cell features can be traced back to multiple lineages in the adult skin.</a> J. Cell Biol. 175, 1005-1015 (2006).</li>
<li>Sieber-Blum, M., Grim, M., Hu, Y. F., Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li>
<li>Amoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implanted+hair+follicle+stem+cells+form+Schwann+cells+that+support+repair+of+severed+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Implanted hair follicle stem cells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 17734-17738 (2005).</li>
<li>Koliatsos, V. E., Xu, L., Yan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+stem+cell+grafts+as+therapies+for+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Biol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Human stem cell grafts as therapies for motor neuron disease.</a> Expert Opin. Biol. Ther. 8, 137-141 (2008).</li>
<li>McKenzie, I. A., Biernaskie, J., Toma, J. G., Midha, R., Miller, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin-derived+precursors+generate+myelinating+Schwann+cells+for+the+injured+and+dysmyelinated+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Skin-derived precursors generate myelinating Schwann cells for the injured and dysmyelinated nervous system.</a> J. Neurosci. 26, 6651-6660 (2006).</li>
<li>LeDouarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeDouarin%2C+NM+%22The+Neural+Crest%22">The Neural Crest</a>. , Cambridge University Press. Cambridge. (1999).</li>
<li>Tumbar, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+epithelial+stem+cell+niche+in+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Defining the epithelial stem cell niche in skin.</a> Science. 303, 359-363 (2004).</li>
<li>Roh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-potentiality+of+a+new+immortalized+epithelial+stem+cell+line+derived+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol.+Anim%22%5BJournal%5D)">Multi-potentiality of a new immortalized epithelial stem cell line derived from human hair follicles.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 44, 236-244 (2008).</li>
</ol>

אין לנו מה למסור.

שיטות הבידוד ותרבות התאים שתוארו הן לשעתק ויציבות. לנו שנוצרנו NCSCs מעשרות אנשים ברחבי טווח גילים רחב. למרות זאת הוא הכי טוב לעבד את הרקמה מייד לאחר קציר רקמה, מצא כי רקמות קרקפת יכולות להיות מאוחסנות בבטחה בתקשורת על קרח לתחבורת לילה עם השפעה מינימאלית על כדאיויות תא. חשוב לטיפול ברקמת הקרקפת באנטיביוטיקה ולהשתמש בטכניקת aseptic במהלך בידוד זקיק שיער כדי למנוע זיהום מיקרואורגניזם פוטנציאלי. עור הושלך מתיחת פנים...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Invitrogen</td><td>11330-32</td><td></td></tr><tr><td>FBS שעבר אינאקטיבציה תרמית</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>תוסף B27</td><td>Invitrogen</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>תוסף N2</td><td>Invitrogen</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Invitrogen</td><td>PHG0026</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>R&amp;מערכת amp;D</td><td>236-EG-01M</td><td></td></tr><tr><td>IGF-I</td><td>R&amp;מערכת amp;D</td><td>291-G1-050</td><td></td></tr><tr><td>0.05% Trypsin/EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>דיספז (Dispase)</td><td>Invitrogen</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומייצין</td><td>Invitrogen</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;נא לספק את התוכן של jove_content לתרגום.&quot;&gt;&lt;חזק&gt;טבלה 1.&lt;/strong&gt;&lt;/p&gt;</td></tr></tbody></table>

בידוד ותרבות של תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

זקיקי שיער עוברים צמיחה לכל חיים ומחזור השיער הוא תהליך מבוקר היטב מעורב שגשוג ורגיעה לתאי גזע. בליטת שיער היא נישה מאופיינת היטב לתאי גזע בוגרי 1. זה קטע של נדן השורש החיצוני מכיל מספר סוגים שונים של תאי גזע, כוללים תאי אפיתל גזע 2, בתאי גזע מלנוציט 3 ו רכס עצבי כמו תאי גזע 4-7. זקיקי שיער מייצגים מקור נגיש ועשיר לסוגים שונים של תאי גזע אנושיים. אנחנו ואחרים מבודדים תאי גזע עצביים לפסגה (NCSCs) מזקיקים עובריים ובוגרים שיער אדם 4,5. תאי גזע אנושיים אלו הנם תווית ייצוב תאים ומסוגלים התחדשות עצמית באמצעות חלוקת תאים סימטריות במבחנה. הם מבטאים סמנים בשלים עצביים רכס סלולריים אך לא סמני בידול. מחקר פרופיל הביטוי שלנו הראה שהם חולקים דפוסי ביטוי גנטי דומים עם העור העכברי העצבי cre לא בוגרתאי רחוב. הם מפגינים multipotency המשובט שיכול להצמיח שושלות תאים myogenic, melanocytic, ולאחר עצביות בתרבות תא הבודדה המשובטת מבחנה. תאים מובחנים לא ירכשו רק סמני שושלת ספציפיים אלא גם להדגים פונקציות מתאימות בתנאי vivo לשעבר. בנוסף, NCSCs אלו מראים פוטנציאל התמיינות לכיוון שושלות mesenchymal. תאים עצביים מובחנים יכולים להתמיד במוח עכבר ולשמר סמני בידול עצביים. הוכח כי שיער הזקיק נגזר NCSCs יכול לעזור לצמיחה מחודשת עצב, והם משפרים את התפקוד מוטורי בעכברים מושתלים עם תאי הגזע האלה לאחר פגיעה בחוט שדרת transecting 8. יתר על כן, עצבים היקפיים תוקנו עם שתלים של תאי גזע 9, והשתלה של תאים מבשרים עור הנגזרים סמוכים לעצבי sciatic מרוסקים הביא לחידוש יצירת המיאלין 10. לכן, NCSCs הזקיק / עור השיער נגזר כבר הראה תוצאות מבטיחות עבור rטיפול egenerative במודלים פרה. תא סומטי תכנות מחדש לתאי גזע pluripotent מושרים (IPS) הראה פוטנציאל עצום לרפואת רגנרטיבית. עם זאת, עדיין קיימות בעיות רבות עם תאי iPS, ובמיוחד על ההשפעה ארוכת הטווח של אינטגרצית אונקוגן / וירוס וtumorigenicity פוטנציאל של תאי גזע pluripotent לא טופל כראוי. יש עדיין מכשולים רבים כדי להתגבר עליהם לפני שניתן יהיו להשתמש בתאי iPS לרפואת רגנרטיבית. ואילו תאי גזע הבוגרים ידועים כדי להיות בטוח והם כבר בשימוש קליני במשך שנים רבות, כגון השתלת מח עצם. חולים רבים כבר נהנו מהטיפול. תאי גזע בוגרי autologous עדיין תאים מועדפים להשתלה. לכן, תאי גזע הבוגרים הנגישים וניתן להרחבה בזקיקי עור אדם / שיער הם מקור חשוב לרפואת רגנרטיבית.

מאמר זה מציג פרוטוקול חזק לבידוד ולתרבות של תאי גזע רכס עצביים מן זקיקי שיער אדם.

זקיקי שיער עוברים תהליכי צמיחה לאורך כל החיים, ומחזור השערה הוא תהליך מבוקר היטב הכולל פרוליפרציה של תאי גזע ומצב של רדימה (quiescence). הבליטה של זקיק השערה (hair bulge) היא...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבודד ולתרבת תאי גזע ראשוניים של הרכס העצבי, או N CSCs, מרקמות קרקפת אנושיות. הדבר מושג תחילה על ידי חיתוך עור קרקפת אנושי לרצועות ברוחב של one centimeter והדגרה במצע המכיל dis bays. לאחר מכן, העור מסדר במצע רענן וזקיקי השיער נשמרים.השלב השני של הפרוצדורה הוא טיפול בנקביות השערה באמצעות trypsin כדי להשיג תרחיפים של תאים בודדים. השלב הסופי של הפרוצדורה הוא מיון של ncsc כפולי-חיוביים ל-CD 2 71 HNK one באמצעות ציטומטריה של זרימה (flow cytometry) והעברתם לצלחות גידול. לבסוף, נעשה שימוש במיקרוסקופיית ניגוד כדי לבחון את היווצרות וצמיחת ה-neuros sphere, שכן הדגמת שיטות אלו היא קריטית מכיוון ששלבי השליפה והבידוד של השערות קשים ללמידה, בשל הקושי הרב בביצוע נשף של העור וחלקיקי השערה תחת מיקרוסקופ.כדי להיערך לתרבית תאי גזע, צפו את תחתית כל באר בלוח בעל שש בארות ב-poly-D-lysine והניחו ללוחות להתייבש בתוך המabilis. לאחר שהבארות יבשו, שטפו במים סטריליים ושאבו את הנוזל, ולאחר מכן הניחו לבארות להתייבש שוב. צפו את הלוחות בתמיסת fibronectin בריכוז 0.17 milligram per milliliter.לאחר מכן, לפני שהפיברונקטין מתייבש בצלחת במצע תרבית NCSC, הכין והשג את המצעים והריאגנטים הבאים: 97% D-M-E-M-F 12, 2% B 27 supplement, 1% ושני תוספי B-F-G-F-E-G-F IGF one ו-diss. אסוף עור קרקפת א

isolation-culture-neural-crest-stem-cells-from-human-hair

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כאן אנחנו מראים השיטה שלנו לבודד אפידרמיס עכבר לתאי גזע עצביים לפסגה (EPI-NCSC). טכניקה מערבת מיקרו לנתח זקיקי השערה, בידוד בליטה ו placeing אותו בתרבית רקמה. EPI-NCSC להתחיל להגר explants בליטה על גבי תשתית בתוך 3-4 ימים.

עכבר עוריות עצבית קרסט לתאי גזע (EPI-NCSC) תרבויות

כדי לטפח גזע עצביים לפסגה תאים (NCSC) במבחנה, בינוני מיוחד (NCSCM) נדרשת. חלק חיוני של NCSCM הוא עובר אפרוח לחלץ (CEE). כאן אנו מתארים טכניקות מדויקות כדי לייצר כמות מוגדל של איכות CEE טהור גבוהה, כולל פרטים כמו בידוד, מסמוס, צנטריפוגה, תהליכי סינון.

הפקה של חילוץ העובר צ&#39;יק לגידול Murine בתאי גזע עצביים קרסט

הדרך המהירה, החזקה של בידוד קיימא גזע בוגרים לתאי האפיתל של העור האנושי הוא תיאר. השיטה משתמשת עיכול אנזימטי של מטריקס הקולגן בעור, ואחריו מריטת זקיקי השיער ובידוד של המתלים תא בודד או שברי רקמה תרבית תאים.

בידוד תרבות למבוגרים גזע תאים אפיתל של העור האנושי

שיטה פשוטה ואמינה על בידוד תרבות בתאי גזע עצביים של רקמה אנושית מושלכים קליפת המוח העוברי מתואר. תרבויות שמקורם ידוע הפרעות נוירולוגיות האדם יכול לשמש אפיון של תהליכים פתולוגיים תאית ומולקולרית, כמו גם לספק פלטפורמה כדי להעריך את יעילות תרופתי.

הדור של בתאי גזע עצביים מן רקמה אנושית זרוקות קליפתיים עוברית

הבידוד של הרכס העצבי העובר מן הצינור העצבי מאפשרת את...

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

סרטון זה מדגים פרוטוקול לבידוד וטיפוח תאי Schwann מרקמות דרמיס אנושיות. הדרמיס האנושי מכיל סוגי תאים שונים, כולל פיברובלסטים ותאי שוואן. לאחר הבידוד, התאים מטופלים עם סוכן antimitotic כדי לחסל פיברובלסטים מתרבים, וכתוצאה מכך תרבית טהורה של תאי Schwann.

בידוד ותרבית של תאי שוואן ראשוניים מדרמיס אנושי

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד קפלים עצביים גולגולתיים מאזור המוח התיכון של עוברי אפרוחים. הוא מציג תהליך דיסקציה מפורט של הקפלים העצביים, מיקומם וחיבורם על כיסויים מצופים פיברונקטין ואחריו תצפית על נדידת תאי הפסגה העצבית מהקפלים העצביים.

בידוד קפלים עצביים גולגולתיים מעובר אפרוח לצורך תרבית תאי קרסט עצבית

אנו מדווחים על שיטה לבודד מבשר עור נגזרות נאיביים multipotent (SKP) תאים פיברובלסטים מתרבויות האנושיות העיקריות. אנו מראים כי SKPs אלה נגזרים מתרבויות פיברובלסטים חולקים מאפיינים של תאי גזע דומים לאלה שנגזרים ישירות מביופסיות עור אדם. תאים אלה מבטאים את סמן הרכס העצבי, nestin, בנוסף לסמני multipotent כגון Oct4 וNanog.

בידוד תאי גזע בוגרים נאיבי מתרבויות פיברובלסטים אנושיות הראשוניות

יש תאי רכס עצבי (NC) שמקורם בתאים אנושיים גזע pluripotent (hPSC) פוטנציאל גדול לפיתוח מודלים ומחלות של בני אדם ועבור טיפולי החלפת תא. הנה, הסתגלות מזין ללא ממשמש כיום באופן...

גזירה ללא מזין של תאים עצביים קרסט אב קדמון מפלוריפוטנטיים אדם בתאי גזע

פרוטוקול זה מתאר את הניתוח והתרבות של תאי ציצה עצביים הגולגולת מדגמי העכבר, בעיקר למחקר של הגירה תא. אנו מתארים את טכניקות ההדמיה החי בשימוש וניתוח של מהירות וצורה תא שינויים.

חיתוך, תרבות וניתוח של הגולגולת הראשי ציצה עצביים תאים מעכבר לחקר של ציצה של תא העצבים העצבי והגירה

אנו מציגים פרוטוקול התמיינות תלת מימדי (תלת מימדי) במבחנה המייצר נוירוספירות בגודל הניתן לשחזור כדי לייצר תאי פסגה עצבית גולגולתית מתאי גזע עובריים של עכברים. אנו מראים כי מתודולוגיה זו מפחיתה את השונות בהשוואה לפרוטוקולים קודמים וכיצד ניתן להשתמש בה לבדיקה מרובה לחקר התפתחות תאי פסגה עצבית גולגולתית.

תאי פסגה עצבית גולגולתית פרוטוקול התמיינות תלת מימדי במבחנה לבדיקה מרובבת

למדו פרוטוקול מפורט לבידוד ותרבית תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים באמצעות מיון זרימה ומיקרוסקופיה. שיטה זו מאפשרת מחקר מתקדם ברפואה רגנרטיבית ומדעי העצב.

בידוד ותרבות של תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים

גלה סרטונים נוספים